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溶葡萄球菌素基因乳腺特异表达载体的构建与检测及转基因核供体细胞的制备
1
作者
上官陶
张勃伟
+2 位作者
孙薇薇
黄欣
张涌
《畜牧兽医学报》
CAS
CSCD
北大核心
2011年第10期1374-1379,共6页
本研究旨在构建溶葡萄球菌素基因牛乳腺特异表达载体(pEPB),转染牛胎儿成纤维细胞,为制备溶葡萄球菌素基因的转基因克隆牛提供核供体细胞。本研究以pEGFP-C1为载体骨架,通过PCR扩增牛2.6kb的β-酪蛋白5′调控区及0.6kb的3′侧翼区(poly...
本研究旨在构建溶葡萄球菌素基因牛乳腺特异表达载体(pEPB),转染牛胎儿成纤维细胞,为制备溶葡萄球菌素基因的转基因克隆牛提供核供体细胞。本研究以pEGFP-C1为载体骨架,通过PCR扩增牛2.6kb的β-酪蛋白5′调控区及0.6kb的3′侧翼区(poly A)序列作为调控序列,制备成含有绿色荧光和新霉素筛选标记的牛乳腺特异表达载体,经PCR和酶切鉴定正确后,用转染试剂FuGene HD反复转染牛pEPB乳腺上皮细胞3～5次,用催乳素诱导后,经免疫荧光分析,检测目的蛋白的表达。然后,用电转染法转染牛胎儿成纤维细胞,经G418筛选得到阳性细胞后,把阳性细胞扩大培养并提取其基因组,因为溶葡萄球菌素基因是外源基因,经PCR及Southern blot检测来确定目的基因是否已经整合到细胞的基因组上。结果表明,溶葡萄球菌素基因在牛乳腺细胞中得到了表达,并整合到牛胎儿成纤维细胞的基因组中,得到了转溶葡萄球菌素基因的核供体细胞。结果显示,本研究所获得的转基因牛胎儿成纤维细胞可作为体细胞核移植的供体细胞进行转基因克隆牛研究。
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关键词
溶葡萄球菌素
基因
乳腺特异表达
牛乳腺上皮细胞
牛胎儿成纤维细胞
转基因
核
供体细胞
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职称材料
叶绿体基因工程在农业中的应用
被引量：
1
2
作者
罗昌
黄丛林
+1 位作者
张秀海
吴忠义
《安徽农业科学》
CAS
2012年第24期11968-11971,共4页
叶绿体转基因工程与核转基因相比具有明显的优越性,包括:外源基因的高效表达,基因的原核表达形式,无位置效应和基因沉默现象,环境安全性好。目前已经有许多作物品种通过叶绿体基因工程获得了抗除草剂、抗虫、抗病、耐盐耐旱的特性。叶...
叶绿体转基因工程与核转基因相比具有明显的优越性,包括:外源基因的高效表达,基因的原核表达形式,无位置效应和基因沉默现象,环境安全性好。目前已经有许多作物品种通过叶绿体基因工程获得了抗除草剂、抗虫、抗病、耐盐耐旱的特性。叶绿体转基因植物是作为生物反应器的理想系统。但是叶绿体转基因也面临着许多挑战,如转化效率低、单子叶植物再生系统的确立与筛选以及叶绿体基因组序列的获得。
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关键词
叶绿体
质体
转基因
核转基因
生物反应器
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职称材料
题名
溶葡萄球菌素基因乳腺特异表达载体的构建与检测及转基因核供体细胞的制备
1
作者
上官陶
张勃伟
孙薇薇
黄欣
张涌
机构
西北农林科技大学生物工程研究所
西北农林科技大学动医学院
出处
《畜牧兽医学报》
CAS
CSCD
北大核心
2011年第10期1374-1379,共6页
基金
国家转基因生物新品种培育重大专项"抗病转基因新品种培育"(2008ZX08007)
文摘
本研究旨在构建溶葡萄球菌素基因牛乳腺特异表达载体(pEPB),转染牛胎儿成纤维细胞,为制备溶葡萄球菌素基因的转基因克隆牛提供核供体细胞。本研究以pEGFP-C1为载体骨架,通过PCR扩增牛2.6kb的β-酪蛋白5′调控区及0.6kb的3′侧翼区(poly A)序列作为调控序列,制备成含有绿色荧光和新霉素筛选标记的牛乳腺特异表达载体,经PCR和酶切鉴定正确后,用转染试剂FuGene HD反复转染牛pEPB乳腺上皮细胞3～5次,用催乳素诱导后,经免疫荧光分析,检测目的蛋白的表达。然后,用电转染法转染牛胎儿成纤维细胞,经G418筛选得到阳性细胞后,把阳性细胞扩大培养并提取其基因组,因为溶葡萄球菌素基因是外源基因,经PCR及Southern blot检测来确定目的基因是否已经整合到细胞的基因组上。结果表明,溶葡萄球菌素基因在牛乳腺细胞中得到了表达,并整合到牛胎儿成纤维细胞的基因组中,得到了转溶葡萄球菌素基因的核供体细胞。结果显示,本研究所获得的转基因牛胎儿成纤维细胞可作为体细胞核移植的供体细胞进行转基因克隆牛研究。
关键词
溶葡萄球菌素
基因
乳腺特异表达
牛乳腺上皮细胞
牛胎儿成纤维细胞
转基因
核
供体细胞
Keywords
lysostaphin gene
mammary-specific expression
bovine mammary epithelial cells
bovine fetal fibroblasts
transgenic nuclear donor cells
分类号
S813.3 [农业科学—畜牧学]
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职称材料
题名
叶绿体基因工程在农业中的应用
被引量：
1
2
作者
罗昌
黄丛林
张秀海
吴忠义
机构
首都师范大学生命科学学院
北京市农林科学院
出处
《安徽农业科学》
CAS
2012年第24期11968-11971,共4页
文摘
叶绿体转基因工程与核转基因相比具有明显的优越性,包括:外源基因的高效表达,基因的原核表达形式,无位置效应和基因沉默现象,环境安全性好。目前已经有许多作物品种通过叶绿体基因工程获得了抗除草剂、抗虫、抗病、耐盐耐旱的特性。叶绿体转基因植物是作为生物反应器的理想系统。但是叶绿体转基因也面临着许多挑战,如转化效率低、单子叶植物再生系统的确立与筛选以及叶绿体基因组序列的获得。
关键词
叶绿体
质体
转基因
核转基因
生物反应器
Keywords
Chloroplast
Transplastid
Nuclear transgene
Bioreactor
分类号
S188 [农业科学—农业基础科学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
溶葡萄球菌素基因乳腺特异表达载体的构建与检测及转基因核供体细胞的制备
上官陶
张勃伟
孙薇薇
黄欣
张涌
《畜牧兽医学报》
CAS
CSCD
北大核心
2011
0
在线阅读
下载PDF
职称材料
2
叶绿体基因工程在农业中的应用
罗昌
黄丛林
张秀海
吴忠义
《安徽农业科学》
CAS
2012
1
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职称材料
已选择
0
条
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参考文献
引证文献
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