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水稻锌指蛋白OsRZ3基因克隆及融合蛋白的原核表达、纯化: 1; 作者孙宇王金麟《植物研究》 CAS CSCD 北大核心 2014年第4期492-497,共6页; 根据NCBI登录的水稻锌指蛋白基因(NO.AK062094,OsRZ3 gene)设计特异引物,通过RT-PCR克隆该基因cDNA全长序列,核苷酸测序并比对氨基酸同源性表明具有C2HC-锌指结构域、分析预测蛋白质分子量为34kD和等电点为9.05;拟南芥原生质体亚细胞定... 展开更多; 关键词水稻锌指蛋白原核蛋白表达与纯化; 在线阅读下载PDF 职称材料

病原诱导的小麦ERF转录因子TaERF1b的原核表达及纯化被引量：7: 2; 作者董娜张增艳辛志勇《植物遗传资源学报》 CAS CSCD 2008年第3期283-287,共5页; 为了得到纯化的TaERF1b活性蛋白,将TaERF1 b基因含有AP2/ERF结构域的片段插入原核表达载体pGEX-4T-1的多克隆位点中,构建GST-TaERF1b融合蛋白表达载体,并转化到大肠杆菌BL21(DE3)中。0.1mmol/L IPTG即能诱导融合蛋白表达,37℃诱导4h或3... 展开更多; 关键词 ERF(ethylene-responsive factor) TaERFlb 原核蛋白表达包涵体; 在线阅读下载PDF 职称材料

番茄乙烯信号转录因子LeERF2在大肠杆菌中的表达和纯化: 3; 作者张红星朱本忠 +5 位作者谢远宏张文杨祥龙尹胜李欣罗云波《高技术通讯》 CAS CSCD 北大核心 2007年第5期546-550,共5页; 从破色期番茄果实中提取了总RNA,用RT-PCR方法从中克隆到了627bp全长LeERF2基因。测序结果分析表明,该LeERF2基因序列与已发表序列的同源性为100%。将LeERF2基因亚克隆至载体pET-30a上,构建了原核表达载体pET-LeERF2,将其转化到大肠杆菌... 展开更多; 关键词番茄乙烯 LeERF2 原核蛋白表达凝胶阻滞实验; 在线阅读下载PDF 职称材料

组蛋白的制备及其对巨噬细胞的影响: 4; 作者付晓霞叶萍 +6 位作者李雪钟玙沄崔航陈小欢蔡军伟姜勇刘靖华《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2013年第5期883-888,共6页; 目的:用不同方法制备组蛋白并观察组蛋白在体外对巨噬细胞活力及细胞因子释放的影响。方法:用基因克隆的方法构建组蛋白H3和H4的原核表达质粒,分别表达和纯化带谷胱甘肽S-转移酶(GST)和组氨酸(His)标签的组蛋白(GST-H3、GST-H4、His-H3... 展开更多; 关键词原核蛋白表达组蛋白类巨噬细胞; 在线阅读下载PDF 职称材料

小鼠视黄酸刺激基因8(Stra8)的原核表达及兔多克隆抗体的制备与鉴定: 5; 作者蔡玥马仕昆 +4 位作者董樾张薇夏蒙蒙牛长敏郑英《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2020年第9期826-832,共7页; 目的原核表达小鼠视黄酸刺激基因8(Stra8)蛋白并制备兔抗小鼠Stra8多克隆抗体。方法应用分子克隆法构建pET28a-Stra8原核表达重组质粒,将该重组质粒转化入大肠杆菌BL21(DE3),异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导Stra8蛋白表达,采用组氨... 展开更多; 关键词小鼠视黄酸刺激基因8(Stra8) 原核蛋白表达多克隆抗体制备; 在线阅读下载PDF 职称材料

HIV-1 CRF01_AE重组型gp120 V1/V2结构域单克隆抗体的制备与鉴定被引量：4: 6; 作者楚鹰宫祥丹 +5 位作者高建伟苏艾荣陈德燕宋红勇吴喜林吴稚伟《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2017年第4期540-545,共6页; 目的真核表达人类免疫缺陷病毒1型(HIV-1)CRF01_AE重组型gp120蛋白的V1/V2结构域,制备其单克隆抗体并鉴定其抗原反应性。方法构建pTriEx-3-V1/V2CNE55真核表达载体,在HEK293F细胞中表达V1/V2-His融合蛋白,纯化后作为抗原免疫BALB/c小鼠... 展开更多; 关键词人类免疫缺陷病毒1型(HIV-1) gp120可变区1/2 单克隆抗体真核蛋白表达疫苗; 在线阅读下载PDF 职称材料

重组成冰核菌适用于冷冻食品加工: 7; 作者王颖《生物技术通报》 CAS CSCD 1995年第4期30-30,共1页; 为了找到关闭成冰核蛋白表达的方法.以便防止作物霜冻,已经作了大量的工作。一些集群于普通食用作物表面的好气革兰氏阴性细菌在其(菌体)表面表达成冰核蛋白。任何物质结晶都需要一个起始点,水也不例外。这些革兰氏阴性细菌的膜蛋白就... 展开更多; 关键词冷冻食品革兰氏阴性细菌冰核蛋白食用作物丁香假单胞菌核蛋白表达成冰核作物霜冻食品加工核菌; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名水稻锌指蛋白OsRZ3基因克隆及融合蛋白的原核表达、纯化: 1; 作者孙宇王金麟; 机构黑龙江生态工程职业学院生态工程系东北林业大学研究生院; 出处《植物研究》 CAS CSCD 北大核心 2014年第4期492-497,共6页; 基金 <哈尔滨地区治污性湿地景观的营造> 黑龙江省教育厅科研项目(12515219); 文摘根据NCBI登录的水稻锌指蛋白基因(NO.AK062094,OsRZ3 gene)设计特异引物,通过RT-PCR克隆该基因cDNA全长序列,核苷酸测序并比对氨基酸同源性表明具有C2HC-锌指结构域、分析预测蛋白质分子量为34kD和等电点为9.05;拟南芥原生质体亚细胞定位检测表明其在细胞核。构建pGEX6P-3::OsRZ3融合载体,电转化的大肠杆菌BL21(DE3)菌株经1 mmol·L-1IPTG小量诱导表达,SDS-pAGEX蛋白电泳表明60 kD融合蛋白4 h最大;在LB液体培养中0.5 mmol·L-1IPTG过夜大量诱导表达,通过GST吸附柱层析获得大量包涵体纯化蛋白,1L菌液可诱导纯化到浓度1.58 mg·mL-1包涵体融合蛋白。所构建的融合蛋白原核表达系统能有效表达pGEX6P-3::OsRZ3融合蛋白,0.5 mmol·L-1IPTG大量诱导,通过GST柱吸附获得包涵体纯化蛋白,为作进一步的抗体制备和染色质免疫共沉淀等DNA结合的特性研究准备了基础。; 关键词水稻锌指蛋白原核蛋白表达与纯化; Keywords rice zinc finger domain Prokaryotic Protein Expression and Purification; 分类号 S511 [农业科学—作物学]; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名病原诱导的小麦ERF转录因子TaERF1b的原核表达及纯化被引量：7: 2; 作者董娜张增艳辛志勇; 机构中国农业科学院作物科学研究所/农作物基因资源与基因改良国家重大科学工程/农业部作物遗传育种重点开放实验室; 出处《植物遗传资源学报》 CAS CSCD 2008年第3期283-287,共5页; 基金国家自然科学基金(30671292); 文摘为了得到纯化的TaERF1b活性蛋白,将TaERF1 b基因含有AP2/ERF结构域的片段插入原核表达载体pGEX-4T-1的多克隆位点中,构建GST-TaERF1b融合蛋白表达载体,并转化到大肠杆菌BL21(DE3)中。0.1mmol/L IPTG即能诱导融合蛋白表达,37℃诱导4h或30℃诱导8h,融合蛋白均以包涵体的形式表达,16℃诱导12h,融合蛋白不表达。包涵体经溶解及稀释复性后,过GST亲和层析柱,获得纯化的融合蛋白,考马斯亮蓝法测得纯化蛋白的浓度约为0.5μg/μl,凝胶阻滞实验表明包涵体复性成功,所得蛋白具有生物活性。; 关键词 ERF(ethylene-responsive factor) TaERFlb 原核蛋白表达包涵体; Keywords ERF （ ethylene-responsive factor） TaERF1 b Prokaryotic protein expression Inclusion body; 分类号 S435.121 [农业科学—农业昆虫与害虫防治]; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名番茄乙烯信号转录因子LeERF2在大肠杆菌中的表达和纯化: 3; 作者张红星朱本忠谢远宏张文杨祥龙尹胜李欣罗云波; 机构北京农学院食品科学系中国农业大学食品科学与营养工程学院; 出处《高技术通讯》 CAS CSCD 北大核心 2007年第5期546-550,共5页; 基金国家自然科学基金（30270934）资助项目.; 文摘从破色期番茄果实中提取了总RNA,用RT-PCR方法从中克隆到了627bp全长LeERF2基因。测序结果分析表明,该LeERF2基因序列与已发表序列的同源性为100%。将LeERF2基因亚克隆至载体pET-30a上,构建了原核表达载体pET-LeERF2,将其转化到大肠杆菌BL21中。蛋白质诱导表达的温度为37℃,诱导剂IPTG浓度为1mmol/L,诱导时间为3h,LeERF2表达蛋白在细菌沉淀中约占菌体总蛋白的58%。应用Ni-NTA亲和层纯化回收的LeERF2表达蛋白的纯度为99%。银染凝胶阻滞实验表明,LeERF2蛋白能与含有GCC盒的逆境相关的几丁质酶启动子基因TLBP1结合。; 关键词番茄乙烯 LeERF2 原核蛋白表达凝胶阻滞实验; Keywords tomato, ethylene, LeERF2, prokaryotic protein expression, electrophoretic mobility shift assay （EMSA）; 分类号 Q78 [生物学—分子生物学]; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名组蛋白的制备及其对巨噬细胞的影响: 4; 作者付晓霞叶萍李雪钟玙沄崔航陈小欢蔡军伟姜勇刘靖华; 机构南方医科大学基础医学院病理生理学教研室、广东省功能蛋白质组学重点实验室; 出处《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2013年第5期883-888,共6页; 基金国家重点基础研究发展计划(973计划)项目(No.2010CB529704) 国家自然科学基金资助项目(No.81272149 No.81072425); 文摘目的:用不同方法制备组蛋白并观察组蛋白在体外对巨噬细胞活力及细胞因子释放的影响。方法:用基因克隆的方法构建组蛋白H3和H4的原核表达质粒,分别表达和纯化带谷胱甘肽S-转移酶(GST)和组氨酸(His)标签的组蛋白(GST-H3、GST-H4、His-H3和His-H4);用高盐法提取真核细胞(RAW264.7和293F细胞)组蛋白;用上述不同来源组蛋白(7.5～50 mg/L)刺激巨噬细胞4 h,利用MTT和流式细胞术检测巨噬细胞活力;用液相芯片方法检测不同来源组蛋白对巨噬细胞释放在培养上清中的细胞因子白细胞介素6(IL-6)和肿瘤坏死因子α(TNF-α)的浓度。结果:His-H3/H4和真核细胞来源的组蛋白明显降低细胞活性,诱导RAW264.7细胞发生晚期凋亡和坏死;不同来源组蛋白对RAW264.7细胞释放IL-6和TNF-α均有不同程度的促进作用。结论:原核表达His-H3、His-H4及真核细胞提取的组蛋白均可抑制巨噬细胞活力,诱导巨噬细胞发生晚期凋亡和坏死。组蛋白可能通过促进炎症细胞因子的释放参与了炎症反应过程。; 关键词原核蛋白表达组蛋白类巨噬细胞; Keywords Prokaryotic protein expression Histones Macrophages; 分类号 Q256 [生物学—细胞生物学]; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名小鼠视黄酸刺激基因8(Stra8)的原核表达及兔多克隆抗体的制备与鉴定: 5; 作者蔡玥马仕昆董樾张薇夏蒙蒙牛长敏郑英; 机构扬州大学医学院组织学与胚胎学教研室; 出处《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2020年第9期826-832,共7页; 基金国家自然科学基金(81871205) 扬州大学大学生创新基金项目(x20180701)。; 文摘目的原核表达小鼠视黄酸刺激基因8(Stra8)蛋白并制备兔抗小鼠Stra8多克隆抗体。方法应用分子克隆法构建pET28a-Stra8原核表达重组质粒,将该重组质粒转化入大肠杆菌BL21(DE3),异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导Stra8蛋白表达,采用组氨酸标签(His-TAG)亲和层析柱纯化原核蛋白。以纯化后的Stra8蛋白为抗原,免疫新西兰大白兔,制备Stra8多克隆抗体。ELISA测定多克隆抗体的效价,Western blot法检测制备的抗体对睾丸组织Stra8蛋白的识别能力以确定其有效性,免疫荧光组织化学染色法检测睾丸组织中Stra8蛋白的表达以确定多克隆抗体的特异性。结果pET28a-Stra8重组质粒经双酶切和测序鉴定正确,经诱导后能高效表达Stra8蛋白,应用His-TAG亲和层析法获得纯度较高的Stra8蛋白。应用纯化的Stra8蛋白连续免疫新西兰大白兔5次后,提取抗血清,经ELISA检测获得的Stra8多克隆抗体效价为1∶106,Western blot法分析显示多克隆抗体可特异性地识别睾丸组织中的内源性Stra8蛋白,免疫荧光染色法显示该多克隆抗体能够特异性的识别小鼠睾丸组织精原细胞表达的Stra8蛋白。结论在大肠杆菌中有效地诱导表达Stra8原核蛋白并制备了特异性的兔抗Stra8多克隆抗体。; 关键词小鼠视黄酸刺激基因8(Stra8) 原核蛋白表达多克隆抗体制备; Keywords mouse stimulated by retinoic acid gene 8(Stra8) prokaryotic expression polyclonal antibody preparation; 分类号 R392-33 [医药卫生—免疫学] R321.1 [医药卫生—人体解剖和组织胚胎学]; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名HIV-1 CRF01_AE重组型gp120 V1/V2结构域单克隆抗体的制备与鉴定被引量：4: 6; 作者楚鹰宫祥丹高建伟苏艾荣陈德燕宋红勇吴喜林吴稚伟; 机构江苏大学附属武进医院中心实验室南京大学医学院公共健康医学中心; 出处《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2017年第4期540-545,共6页; 基金国家重点研发计划(2016YFC1201000) 国家科技重大专项(2016ZX10001005003) +4 种基金江苏省产学研项目(BY2015069-02) 2015年度江苏省"双创博士"计划常州市高层次卫生人才培养计划(2016CZBJ060); 文摘目的真核表达人类免疫缺陷病毒1型(HIV-1)CRF01_AE重组型gp120蛋白的V1/V2结构域,制备其单克隆抗体并鉴定其抗原反应性。方法构建pTriEx-3-V1/V2CNE55真核表达载体,在HEK293F细胞中表达V1/V2-His融合蛋白,纯化后作为抗原免疫BALB/c小鼠,取免疫后的小鼠脾细胞与Sp2/0骨髓瘤细胞融合,ELISA筛选分泌抗V1/V2重组蛋白单克隆抗体的阳性杂交瘤,对单克隆抗体的特异性、型别以及效价进行鉴定。结果制备并获得一株稳定分泌抗HIV-1 AE亚型V1/V2结构域单克隆抗体的杂交瘤细胞株,ELISA测定腹水效价高达1∶81 000,单克隆抗体类型属于IgG1/κ型。Western blot结果表明该单克隆抗体同样能够识别不同亚型的HIV gp120蛋白。结论成功制备出抗HIV-1 AE重组型gp120蛋白V1/V2结构域的单克隆抗体。; 关键词人类免疫缺陷病毒1型(HIV-1) gp120可变区1/2 单克隆抗体真核蛋白表达疫苗; Keywords human immunodeficiency virus type 1 （HIV-1） gpl20 variable region 1 and 2 domain monoclonal antibody eukaryotic protein expression system vaccine; 分类号 Q813.2 [生物学—生物工程] R392.11 [医药卫生—免疫学]; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名重组成冰核菌适用于冷冻食品加工: 7; 作者王颖; 出处《生物技术通报》 CAS CSCD 1995年第4期30-30,共1页; 文摘为了找到关闭成冰核蛋白表达的方法.以便防止作物霜冻,已经作了大量的工作。一些集群于普通食用作物表面的好气革兰氏阴性细菌在其(菌体)表面表达成冰核蛋白。任何物质结晶都需要一个起始点,水也不例外。这些革兰氏阴性细菌的膜蛋白就提供了这样的起始点。人们希望关闭细菌的成冰核蛋白的表达,因为冰晶的形成每年都造成食用作物的极大损失。例如,丁香假单胞菌(Pseudomonas syringae)是多种常见作物和果树的病原体,它表达inaZ成冰核基因。; 关键词冷冻食品革兰氏阴性细菌冰核蛋白食用作物丁香假单胞菌核蛋白表达成冰核作物霜冻食品加工核菌; 分类号 TS205.7 [轻工技术与工程—食品科学]; 在线阅读下载PDF 职称材料

	题名	作者	出处	发文年	被引量	操作
1	水稻锌指蛋白OsRZ3基因克隆及融合蛋白的原核表达、纯化	孙宇王金麟	《植物研究》 CAS CSCD 北大核心	2014	0	在线阅读下载PDF 职称材料
2	病原诱导的小麦ERF转录因子TaERF1b的原核表达及纯化	董娜张增艳辛志勇	《植物遗传资源学报》 CAS CSCD	2008	7	在线阅读下载PDF 职称材料
3	番茄乙烯信号转录因子LeERF2在大肠杆菌中的表达和纯化	张红星朱本忠谢远宏张文杨祥龙尹胜李欣罗云波	《高技术通讯》 CAS CSCD 北大核心	2007	0	在线阅读下载PDF 职称材料
4	组蛋白的制备及其对巨噬细胞的影响	付晓霞叶萍李雪钟玙沄崔航陈小欢蔡军伟姜勇刘靖华	《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心	2013	0	在线阅读下载PDF 职称材料
5	小鼠视黄酸刺激基因8(Stra8)的原核表达及兔多克隆抗体的制备与鉴定	蔡玥马仕昆董樾张薇夏蒙蒙牛长敏郑英	《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心	2020	0	在线阅读下载PDF 职称材料
6	HIV-1 CRF01_AE重组型gp120 V1/V2结构域单克隆抗体的制备与鉴定	楚鹰宫祥丹高建伟苏艾荣陈德燕宋红勇吴喜林吴稚伟	《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心	2017	4	在线阅读下载PDF 职称材料
7	重组成冰核菌适用于冷冻食品加工	王颖	《生物技术通报》 CAS CSCD	1995	0	在线阅读下载PDF 职称材料