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潘生丁抑制平衡型核苷转运蛋白对5氟尿嘧啶在胰腺癌细胞内浓聚的影响 被引量:6
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作者 刘胜利 王晶敏 +5 位作者 鞠煌先 朱广华 杜丹 朱春富 徐皓 黄海 《中国药科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2003年第6期544-548,共5页
目的 :研究阻断平衡型核苷转运蛋白 (ENTs)后对胰腺癌细胞膜转运 5氟尿嘧啶 (5 FU)能力的影响。方法 :培养的PANC 1细胞分为ENTs阻断组和ENTs非阻断组 ,阻断组用潘生丁将ENTs阻断 ,非阻断组则未用潘生丁。两组培养基中均加入 5 FU 10 0 ... 目的 :研究阻断平衡型核苷转运蛋白 (ENTs)后对胰腺癌细胞膜转运 5氟尿嘧啶 (5 FU)能力的影响。方法 :培养的PANC 1细胞分为ENTs阻断组和ENTs非阻断组 ,阻断组用潘生丁将ENTs阻断 ,非阻断组则未用潘生丁。两组培养基中均加入 5 FU 10 0 μg/ml。温育 15,3 0min ,1,2 ,4h后细胞用橡皮刮取收集。取等量细胞刮取液 2份各 10 0 μl ,一份用毛细管区带电泳测定细胞内 5 FU总量、另一份用作平行样本测定总蛋白含量。根据平行样本细胞总蛋白来确定细胞数 ,再依细胞体积计算单细胞内药物浓度。结果 :ENTs非阻断组细胞内 5 FU浓度在 15min内上升较快 ,达 66 99± 10 16pg/nl,为培养基中 5 FU浓度的 67% ,3 0min为 83 75± 5 3 3 3pg/nl,1h达高峰 (92 86± 1 60 4pg/nl) ,为培养基中 5 FU浓度的 93 % ,以后处于平台。ENTs阻断组细胞内 5 FU浓度上升较慢 ,15min仅为ENTs非阻断组浓度的 68 65% ;3 0min为ENTs非阻断组浓度的 70 66% ;1h达ENTs非阻断组的最高浓度 ;但此后ENTs阻断组细胞内 5 FU浓度仍继续升高 ,2h达 13 8 3± 9 769pg/nl,为ENTs非阻断组的1 64倍 (P <0 0 1)。结果提示 ,完全阻断ENTs后早期细胞内 5 FU浓度上升较慢 ,但随着细胞在 5 FU内暴露时间延长 ,5 FU在细胞内浓聚作用明显。结论 :阻断胰腺? 展开更多
关键词 胰腺癌 核苷转运蛋白 5-氟尿嘧啶 潘生丁 毛细管区带电泳
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核苷转运蛋白基因ENT3单核苷酸多态性与肺癌易感性的关系
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作者 李雪飞 张颉 +1 位作者 张增利 周彩存 《中国肺癌杂志》 CAS 2010年第5期458-463,共6页
背景与目的核苷转运蛋白介导的核苷跨膜转运在调节细胞功能中发挥重要作用,可能是某些肿瘤的候选易感基因。本研究旨在探讨核苷转运蛋白基因ENT3单核苷酸多态性与肺癌易感性的关系。方法采用病例对照研究,收集2008年5月-2009年5月于上... 背景与目的核苷转运蛋白介导的核苷跨膜转运在调节细胞功能中发挥重要作用,可能是某些肿瘤的候选易感基因。本研究旨在探讨核苷转运蛋白基因ENT3单核苷酸多态性与肺癌易感性的关系。方法采用病例对照研究,收集2008年5月-2009年5月于上海市肺科医院就诊的原发性肺癌患者351例和同期住院的非肿瘤患者207例,应用AllGloTM探针结合实时荧光PCR方法分析肺癌组和对照组ENT3基因rs10999776多态位点的基因型分布情况,比较不同基因型与肺癌易感性的关系以及不同基因型联合吸烟对肺癌易感性的影响。肺癌组与对照组基因型和等位基因分布比较用χ2检验,以调整比值比及95%CI表示相对危险度,所有统计检验均为双侧概率检验,所有资料均用SPSS软件进行统计。结果肺癌患者rs10999776多态位点的CC、TC、TT基因型和C、T等位基因频率分布与对照组比较无统计学差异(P>0.05)。与非吸烟的野生型纯合子个体比较,携带突变等位基因T(TC+TT)的吸烟个体罹患肺癌的风险性明显增加,且吸烟≥30包/年者风险性更高,调整OR值分别为2.848(95%CI:1.536-4.879,P=0.005)、3.076(95%CI:2.308-6.741,P=0.001)。而对肺癌不同组织类型的分析发现,三种基因型的吸烟个体罹患肺鳞癌的风险性均增加,且携带突变等位基因T的个体风险性更高,调整OR值为6.066(95%CI:2.884-12.758,P<0.001)。而rs10999776(C>T)多态性联合吸烟对肺腺癌则无显著影响。结论核苷转运蛋白基因ENT3rs10999776多态性可能与肺鳞癌的发病风险相关,且与吸烟环境暴露存在一定的相互作用。 展开更多
关键词 核苷转运蛋白 核苷酸多态性 探针 肺肿瘤 遗传易感性
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人类平衡型核苷转运蛋白3的功能及与疾病的研究进展
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作者 覃培芳 闫建国 +2 位作者 张玉婷 田琳琳 周亚莉 《生理科学进展》 2022年第3期190-194,共5页
平衡型核苷转运蛋白(equilibrative nucleoside transporter,ENT或SLC29)作为非浓度依赖型的核苷和核碱基转运体,以低亲和性结合核苷及其类似物跨膜向相对浓度较低的一方扩散;作为真核生物体内核苷、核碱基、抗肿瘤和抗病毒感染的核苷... 平衡型核苷转运蛋白(equilibrative nucleoside transporter,ENT或SLC29)作为非浓度依赖型的核苷和核碱基转运体,以低亲和性结合核苷及其类似物跨膜向相对浓度较低的一方扩散;作为真核生物体内核苷、核碱基、抗肿瘤和抗病毒感染的核苷类似物转运体,在遗传物质的合成、抗肿瘤和抗病毒感染发挥着重要的作用。人类平衡型核苷转运体3(human balanced nucleoside transporter 3,hENT3)是溶质载体29(SLC29)基因家族中主要的细胞内转运体,该蛋白具有非常长的亲水性N-末端区域,内含溶质体、双亮氨基酸,强烈依赖于pH值。hENT3蛋白主要存在于细胞内溶酶体和线粒体中,对胞内核苷、核碱基及核苷类似物转运有重要的研究意义。但目前对于hENT3的研究还处于探索阶段,其转运模式及其与疾病发生发展的关系需要进一步研究。本文将对hENT3及其与疾病的研究进展进行论述,期待对hENT3有一个全面的了解,有助于后期的进一步研究。 展开更多
关键词 人类平衡型核苷转运蛋白3 PHID综合征 H综合征 肿瘤
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转运蛋白NupC与NupG微生物胞内核苷分泌的作用研究进展 被引量:2
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作者 王梦娇 方海田 +3 位作者 刘慧燕 贺晓光 吴庆 赵贝贝 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第2期24-29,共6页
核苷用途广泛,微生物发酵法是其主要的生产方法之一。微生物细胞内核苷的分泌对于高产核苷有重要的作用,其细胞膜上存在多种起运输作用的转运蛋白参与代谢产物的分泌。主要阐述核苷转运蛋白NupC和NupG在微生物细胞内核苷分泌过程中的作... 核苷用途广泛,微生物发酵法是其主要的生产方法之一。微生物细胞内核苷的分泌对于高产核苷有重要的作用,其细胞膜上存在多种起运输作用的转运蛋白参与代谢产物的分泌。主要阐述核苷转运蛋白NupC和NupG在微生物细胞内核苷分泌过程中的作用。此外,介绍了转运蛋白的修饰改造对于核苷生物合成的影响,旨在为构建高产菌株的育种策略提供依据。 展开更多
关键词 微生物 核苷转运蛋白 NupC NupG
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MiR-26b靶向hENT1通过RhoA/ROCK-1通路调控肺癌细胞的侵袭和迁移 被引量:2
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作者 高阳 杨帆 《中南大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2017年第7期755-761,共7页
目的:探讨miR-26b在肺癌组织中的表达及miR-26b在肺癌细胞侵袭和迁移过程中的作用及其机制。方法:q PCR检测肺癌和正常肺组织中miR-26b的表达情况;荧光素酶报告基因检测miR-26b与人平衡核苷转运蛋白1(human equilibrative nucleoside tr... 目的:探讨miR-26b在肺癌组织中的表达及miR-26b在肺癌细胞侵袭和迁移过程中的作用及其机制。方法:q PCR检测肺癌和正常肺组织中miR-26b的表达情况;荧光素酶报告基因检测miR-26b与人平衡核苷转运蛋白1(human equilibrative nucleoside transporter 1,hENT1)的相互作用;Transwell侵袭试验检测miR-26b的表达对肺癌细胞侵袭能力的影响;划痕试验检测miR-26b的表达对肺癌细胞迁移能力的影响;Western印迹检测h ENT1,ROCK-1,Rho A蛋白的表达情况;鬼笔环肽染色观察miR-26b-mimic处理后细胞骨架的变化情况;裸鼠皮下成瘤试验检测miR-26b-mimic对肺癌成瘤大小及体积的影响。结果:与正常肺组织相比,肺癌组织中miR-26b表达明显降低;且晚期、低分化和有淋巴结转移的肺癌组织miR-26b表达明显较早期、高分化和无淋巴结转移的肺癌组织低;miR-26b能与h ENT1的3'-UTR特异性结合;miR-26b可以调控肺癌A549细胞的侵袭迁移能力;过表达miR-26b可以抑制h ENT1,ROCK-1,Rho A的表达;miR-26b-mimic处理后,F-actin染色明显减少,细胞膜皱褶形成明显减少,伪足形成明显减少;裸鼠皮下成瘤试验显示:miR-26b-mimic处理后肿瘤体积和质量明显减小。结论:MiR-26b在肺癌中表达明显降低,且跟肺癌分期、分级及淋巴结转移与否密切相关,同时靶向h ENT1通过Rho A/ROCK-1信号通路调控肺癌细胞的侵袭和迁移。 展开更多
关键词 miR-26b 肺癌 人平衡核苷转运蛋白1 ROCK-1 Transwell侵袭试验
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RNAi下调hENT_1可增强5-氟尿嘧啶对胰腺癌细胞的毒性 被引量:4
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作者 陈武强 刘胜利 郑杰 《中国药科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第4期360-364,共5页
目的:运用RNAi技术下调平衡型核苷转运蛋白1(hENT1)的表达,观察hENT1下调后5-氟尿嘧啶(5-FU)对胰腺癌Panc-1细胞的毒性改变情况。方法:设计并合成能表达特异性针对hENT1的shRNA(smallhairpinRNA)的DNA序列,构建pSilence-hENT14.1-CMVne... 目的:运用RNAi技术下调平衡型核苷转运蛋白1(hENT1)的表达,观察hENT1下调后5-氟尿嘧啶(5-FU)对胰腺癌Panc-1细胞的毒性改变情况。方法:设计并合成能表达特异性针对hENT1的shRNA(smallhairpinRNA)的DNA序列,构建pSilence-hENT14.1-CMVneo质粒。用脂质体法将pSilence-hENT14.1-CMVneo质粒转染胰腺癌Panc-1细胞,并以含G418(600μg/mL)的培养液筛选阳性转染细胞(pSilence-hENT14.1-CMVneoPanc-1)。RT-PCR检测下调pSilence-hENT14.1-CMVneoPanc-1细胞hENT1mRNA表达的效果及稳定性。MTT法检测细胞在含5-FU(0~1.56×106nmol/L)的培养液中48h后的生存率,并计算IC50。结果:测序显示重组质粒pSilence-hENT14.1-CMVneo中插入片段序列正确。RT-PCR结果显示,pSilence-hENT14.1-CMVneoPanc-1细胞hENT1mRNA表达水平下调,并在两个月内(共传代15次)保持相对稳定。MTT结果显示,pSilence-hENT14.1-CMVneoPanc-1细胞组氟尿嘧啶的IC50显著下降,为Panc-1细胞组IC50的51.52%(P<0.01)。结论:用RNAi方法下调hENT1mRNA表达可增强5-FU对胰腺癌细胞的毒性。 展开更多
关键词 胰腺癌 核苷转运蛋白 RNA干扰 5-氟尿嘧啶 细胞毒性
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大白菜ENT基因家族的鉴定与生物信息学分析 被引量:6
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作者 庞文玉 王安 +1 位作者 杨宝谊 刘振宁 《江苏农业科学》 2019年第12期52-57,共6页
核苷转运蛋白(nucleoside transporter,ENT)是一类具有跨膜运输核苷和核苷类似物的功能蛋白。为深入研究大白菜 ENT 基因家族的功能,利用生物信息学方法对大白菜基因组中的 ENT 基因家族成员进行鉴定,并对其基因组信息、蛋白生理生化特... 核苷转运蛋白(nucleoside transporter,ENT)是一类具有跨膜运输核苷和核苷类似物的功能蛋白。为深入研究大白菜 ENT 基因家族的功能,利用生物信息学方法对大白菜基因组中的 ENT 基因家族成员进行鉴定,并对其基因组信息、蛋白生理生化特征、基因结构、保守结构域、系统进化树等方面进行了研究。结果表明,在大白菜基因组中共鉴定到12个 ENT 基因,通过系统发育树分析,可以将12个 ENT 基因分为2类;对大白菜ENT蛋白氨基酸序列多重比对和蛋白跨膜域的分析表明,BrENT蛋白存在11个跨膜域,为跨膜蛋白;通过MEME软件对大白菜ENT蛋白motif的预测还发现了14个比较保守的motif。染色体分析表明, ENT 基因在大白菜10条染色体上不均匀分布,而且存在明显的串联重复现象,推测串联复制是 ENT 基因家族基因扩增的主要方式,研究结果为在基因组范围内研究 ENT 基因的功能奠定了基础。 展开更多
关键词 大白菜 核苷转运蛋白 基因家族 生物信息学
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骨质疏松慢性疼痛的分类及其与溶酶体-VNUT-ATP的关系 被引量:6
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作者 刘树华 王若琳 +5 位作者 陈桐莹 赵宇 王世浩 张桂鑫 黄宏兴 万雷 《中国骨质疏松杂志》 CAS CSCD 北大核心 2022年第5期713-717,共5页
骨质疏松症(osteoporosis,OP)是中老年人常见的全身代谢性骨病,目前临床医师在OP的治疗中更加关注骨密度的变化,常常忽略OP带来的疼痛,而疼痛是OP最常见、最典型的症状,其长期存在,严重影响患者的生理及心理健康。现阶段,引起OP慢性疼... 骨质疏松症(osteoporosis,OP)是中老年人常见的全身代谢性骨病,目前临床医师在OP的治疗中更加关注骨密度的变化,常常忽略OP带来的疼痛,而疼痛是OP最常见、最典型的症状,其长期存在,严重影响患者的生理及心理健康。现阶段,引起OP慢性疼痛的具体机制仍未被阐明,按照病理学特征分类,疼痛可分为伤害感受性疼痛和神经病理性疼痛,其中神经病理性疼痛在OP慢性疼痛中的研究逐渐被重视,可能成为治疗OP慢性疼痛的一把新钥匙。在骨吸收活跃状态,骨与软组织会释放各种刺激因子,ATP是其中一种,同时ATP可充当神经递质,在神经元之间传导冲动,研究证实ATP的释放会导致疼痛的发生,特别是神经病理性疼痛,抑制ATP的释放可以起到抑制疼痛的作用,ATP带有高度负电荷,其释放需要特定蛋白的参与。氯膦酸盐是第一代不含氮双膦酸盐,除抗骨质疏松外,还有良好的镇痛作用。研究发现,氯膦酸盐是一种对囊泡核苷酸转运蛋白选择性强且有效的抑制剂,可以抑制ATP通过囊泡核苷酸转运蛋白进入溶酶体,进而阻断了ATP的释放,达到止痛效果。因此,溶酶体-VNUT-ATP途径在OP慢性疼痛中发挥重要作用,深入研究该途径可以为OP慢性疼痛的治疗提供新的靶点和实验依据,笔者就骨质疏松症慢性疼痛的疼痛类型及ATP释放的其中一条途径(溶酶体-VNUT-ATP)作一简要综述。 展开更多
关键词 骨质疏松 慢性疼痛 神经病理性疼痛 疼痛类型 囊泡核苷转运蛋白 三磷酸腺苷
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