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单核细胞增生李斯特菌核糖核酸酶RNaseⅢ RncS的表达及其生物学活性研究 被引量:1
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作者 王立霞 孟庆玲 +6 位作者 蔡扩军 王登峰 伍晔晖 王熙凤 郭晶 乔军 才学鹏 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2018年第7期581-585,共5页
为了解单增李斯特菌(LM)核糖核酸酶RNaseⅢRncS的生物学活性,本研究通过PCR方法对该菌LM-SB5野毒株中编码RNaseⅢ的rncS基因进行扩增、克隆及测序并对其进行生物信息学分析;将rncS基因克隆至表达载体p ET-32a(+),转化至大肠杆菌中进行... 为了解单增李斯特菌(LM)核糖核酸酶RNaseⅢRncS的生物学活性,本研究通过PCR方法对该菌LM-SB5野毒株中编码RNaseⅢ的rncS基因进行扩增、克隆及测序并对其进行生物信息学分析;将rncS基因克隆至表达载体p ET-32a(+),转化至大肠杆菌中进行诱导表达。通过体外酶活实验研究目的蛋白对RNA的降解活性。序列分析结果显示,rncS基因全长690 bp,编码229个氨基酸;生物信息学分析结果显示,该基因编码的蛋白含有由9个保守氨基酸(ERLEFLGDA)组成的基序,2个N-酰基化位点、3个酪蛋白激酶Ⅱ磷酸化位点、2个蛋白激酶C磷酸化位点,提示该酶蛋白活性受磷酸化的调控。同源性分析显示,LM-SB5 rncS基因编码的蛋白氨基酸序列与LM标准株CAC99883.1的同源性为99.13%。SDS-PAGE检测结果显示,表达的RncS蛋白相对分子量约为42.5 ku,与理论值相符;western blot分析表明重组RncS蛋白具有较强的反应原性。体外酶活实验表明,RncS是一种依赖于二价金属离子的核酸酶,且二价金属离子浓度不同其RNaseⅢ的切割活性则不同。本研究为进一步研究RncS在LM中调控ncRNAs的分子机制奠定前期基础。 展开更多
关键词 单核细胞增生李斯特菌 核糖核酸酶rnaseⅲ rncS基因 原核表达 生物学活性
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单增李斯特菌核糖核酸酶Rnase Ⅲ RncS氨基酸突变对其降解RNA活性的影响 被引量:1
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作者 王立霞 孟庆玲 +5 位作者 乔军 蔡扩军 王登峰 伍晔晖 郭晶 才学鹏 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第3期110-116,共7页
为研究单增李斯特菌(LM)核糖核酸酶Rnase Ⅲ RncS氨基酸突变对RNA降解活性的影响。利用生物信息学软件分析单核细胞增生李斯特菌(LM)野毒株SB5中rncS基因编码的Rnase Ⅲ的结构域,并选择关键氨基酸利用基因重叠延伸PCR(SOE-PCR)技术对其... 为研究单增李斯特菌(LM)核糖核酸酶Rnase Ⅲ RncS氨基酸突变对RNA降解活性的影响。利用生物信息学软件分析单核细胞增生李斯特菌(LM)野毒株SB5中rncS基因编码的Rnase Ⅲ的结构域,并选择关键氨基酸利用基因重叠延伸PCR(SOE-PCR)技术对其进行了基因突变;然后将rncS突变基因片段D50A、E122A克隆至表达载体pET-32a(+),在大肠杆菌中利用IPTG进行诱导表达;应用SDS-PAGE和Western Blot鉴定重组蛋白的表达情况及其抗原特异性;通过体外酶活试验研究其对RNA降解活性的影响。结构域分析结果显示,LM-Rnase Ⅲ氨基酸序列含有1个双链RNA结合结构域(DSRM)和1个核酸酶结构域(RIBOc),其中结构域RIBOc含有5个活性位点。SDS-PAGE检测结果显示,表达的重组突变型Rnase Ⅲ -D50A和Rnase Ⅲ -E122 A蛋白相对分子质量均为42.5 kD,与理论值相符;Western blot分析表明重组突变型Rnase Ⅲ -D50A和Rnase Ⅲ -E122A蛋白可与LM阳性血清发生免疫学反应。体外酶活实验表明,Rnase Ⅲ发挥降解活性依赖于Mn2+或Mg2+,将其第50位天冬氨酸突变后,Rnase Ⅲ RncS的降解活性有所降低(P<0.001);第122位谷氨酸突变后,Rnase Ⅲ RncS降解活性极显著下降(P<0.0001),提示第122位谷氨酸是维持LM Rnase Ⅲ RncS酶活性的关键位点。 展开更多
关键词 单核细胞增生李斯特菌 核糖核酸rnase rncS基因 降解活性
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干旱胁迫对小麦叶片核糖核酸酶活力及合成的影响 被引量:6
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作者 郭蔼光 张慧 +1 位作者 王保莉 冯献忠 《核农学报》 CAS CSCD 1994年第2期75-79,共5页
干旱协迫下,抗旱(陕合6号)与干旱敏感(郑引1号)小麦品种叶片中的核糖核酸酶活性均有所增加,增加幅度与其相对含水量变化呈显著负相关。14C-Leu掺入后,样品粗提液经PAGE分离并染色,发现干旱处理叶片的两个低分子女... 干旱协迫下,抗旱(陕合6号)与干旱敏感(郑引1号)小麦品种叶片中的核糖核酸酶活性均有所增加,增加幅度与其相对含水量变化呈显著负相关。14C-Leu掺入后,样品粗提液经PAGE分离并染色,发现干旱处理叶片的两个低分子女(12kD、17kD)具RNase活性的蛋白质的放射性掺入总量低于对照,但占总蛋白的放射性比例高子对照,证明干旱胁迫下存在RNase的从头合成(denovosynthsis)。讨论了胁迫下RNase活性增加的原因。 展开更多
关键词 干旱 小麦 rnase 核糖核酸
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水稻核糖核酸酶T2蛋白质在叶片生长和盐胁迫过程中的表达研究 被引量:4
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作者 曾祥然 魏健 +6 位作者 贾霖 关明俐 刘钊 兰金苹 刘丽娟 李莉云 刘国振 《核农学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第6期743-749,共7页
核糖核酸酶(Ribonucleases,RNase,RNS)T2普遍存在于各种生物中,其保守性提示了功能的重要性。在水稻基因组中有8个RNase T2成员,本试验采用基于抗体的蛋白质组学策略,用免疫印迹(Western Blotting,WB)技术检测了它们在叶片生长及盐胁迫... 核糖核酸酶(Ribonucleases,RNase,RNS)T2普遍存在于各种生物中,其保守性提示了功能的重要性。在水稻基因组中有8个RNase T2成员,本试验采用基于抗体的蛋白质组学策略,用免疫印迹(Western Blotting,WB)技术检测了它们在叶片生长及盐胁迫条件下的表达,发现OsRNS1-OsRNS7蛋白质在叶片中有表达,其中OsRNS4主要在苗期表达,提示其在苗期发挥作用,其它蛋白质主要在成株期表达,但没有检测到OsRNS8的表达;水稻OsRNS4在盐胁迫条件下表达上调,提示其可能在盐胁迫应答过程中发挥作用,其它RNase T2蛋白质的表达大多随盐胁迫时间的延长而下降。将RNase T2蛋白质的表达与转录信号进行比较,发现二者在部分基因中有一定的相关性。本试验获得的数据为揭示水稻RNase T2基因的功能提供了线索。 展开更多
关键词 水稻 核糖核酸(rnase)蛋白质 免疫印迹 基于抗体的蛋白质组学
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RNaseⅢ RncS对单核细胞增生李斯特菌毒力的调控作用研究 被引量:2
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作者 王立霞 孟庆玲 +5 位作者 乔军 蔡扩军 王登峰 郭晶 伍晔晖 才学鹏 《中国动物传染病学报》 CAS 北大核心 2020年第1期1-7,共7页
核糖核酸酶RnaseⅢ是一种调控nc RNA水平的重要酶系。为了解核糖核酸酶RnaseⅢRncS在单核细胞增生李斯特菌(LM)毒力中的调控作用,本研究在构建LM-ΔrncS基因缺失突变株的基础上,通过动物感染试验检测强毒株LM-SB5与缺失株LM-Δrnc S对... 核糖核酸酶RnaseⅢ是一种调控nc RNA水平的重要酶系。为了解核糖核酸酶RnaseⅢRncS在单核细胞增生李斯特菌(LM)毒力中的调控作用,本研究在构建LM-ΔrncS基因缺失突变株的基础上,通过动物感染试验检测强毒株LM-SB5与缺失株LM-Δrnc S对昆明系小鼠的LD50、存活能力、脏器载菌量及病理组织学产生的影响;利用细胞侵染试验检测强毒株与缺失株对小鼠巨噬细胞RAW264.7的粘附率、侵袭率及其在胞内生存繁殖能力的影响,分析RnaseⅢRncS对LM毒力的影响。结果显示,LM-SB5强毒株和LM-Δrnc S缺失株对昆明系小鼠的LD50分别为105.60 CFU、106.90 CFU;与LM-SB5强毒株相比,LM-Δrnc S的LD50升高了1.30个对数数量级,小鼠的存活时间明显延长,表明毒力显著降低;第3~5 d肝脏、脾脏载菌量显著减少(P<0.05),其中第4 d差异极显著(P<0.01);LM-Δrnc S缺失株对肝脏、脾脏、肾脏的病理损伤降低;LM-Δrnc S缺失株对RAW264.7细胞的粘附率和侵袭率均显著低于LM-SB5强毒株(P<0.01),在2~6 h之间,LM-Δrnc S缺失株在细胞内的细菌量显著低于LM-SB5强毒株(P<0.05),证实LM-Δrnc S在细胞内的生存增殖能力显著降低,提示rnc S基因对LM毒力发挥有一定的调控作用。本研究为进一步揭示RnaseⅢ在LM毒力中的分子调控机制提供了科学依据。 展开更多
关键词 单核细胞增生李斯特菌 核糖核酸酶rnaseⅲ rncS基因 毒力
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古细菌RNase HⅡ与金属离子结合的热力学研究 被引量:2
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作者 赖兵 李颖 +1 位作者 曹傲能 来鲁华 《物理化学学报》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2001年第10期865-867,共3页
RNase H是一种专一性水解 RNA:DNA杂合链中 RNA链的核糖核酸酶,它广泛存在于从原核生物到人的生物体中.本文通过等温滴定量热技术研究了Mg2+,Mn2+和 Ca2+与一种古细菌 Methanococcus ja... RNase H是一种专一性水解 RNA:DNA杂合链中 RNA链的核糖核酸酶,它广泛存在于从原核生物到人的生物体中.本文通过等温滴定量热技术研究了Mg2+,Mn2+和 Ca2+与一种古细菌 Methanococcus jannaschii中的Ⅱ型 RNase H结合的热力学.首次用这种方法获得了这一结合过程的热力学参数.并证实了这些金属离子与RNase HII按1:1结合.为RNase HII酶反应机理和折叠研究提供了重要信息. 展开更多
关键词 rnase HⅡ 等温滴定量热 二价金属离子 核糖核酸 结合过程 热力学
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生物组织总RNA的高效提取 被引量:11
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作者 吴艳华 李杰 +2 位作者 高岚 魏巍 刘任 《兰州大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2008年第2期144-146,共3页
RNA分离纯化技术是现代分子生物学技术的基础,Northern Blotting,RACE(rapid amplification of cDNA ends),Real Time PCR,RT-PCR(reverse transcriptase PCR)、蛋白质体外翻泽以及cDNA文库的构建等都需要一定纯度和完整性的RNA.完... RNA分离纯化技术是现代分子生物学技术的基础,Northern Blotting,RACE(rapid amplification of cDNA ends),Real Time PCR,RT-PCR(reverse transcriptase PCR)、蛋白质体外翻泽以及cDNA文库的构建等都需要一定纯度和完整性的RNA.完整和均一是评价RNA质量的两个最关键标准:要获得完整RNA取决于能否最低限度地避免纯化过程中内源及外源RNase(RNA酶,核糖核酸酶)对RNA的降解;要获得均一的RNA取决于能否有效去除RNA提取过程中的DNA和蛋白质等杂质. 展开更多
关键词 现代分子生物学技术 组织总RNA 提取过程 CDNA文库 Northern 分离纯化技术 rnase 核糖核酸
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TA_(29)基因与转基因油菜杂交系 被引量:2
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作者 张焱 官春云 《遗传》 CAS CSCD 北大核心 1995年第S1期39-40,45,共3页
关键词 转基因油菜 核糖核酸(rnase) 蛋白基因 不育系 嵌合基因 花药毡绒层细胞 TA29 基因表达 雄性不育 特异表达
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三种启动子-shRNA表达框的制备及其在筛选有效SiRNA中的应用
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作者 倪勤 刘克洲 +2 位作者 羊正纲 姚航平 陈智 《浙江大学学报(工学版)》 EI CAS CSCD 北大核心 2005年第7期1086-1090,共5页
为能快速经济地获取小干扰核糖核酸(smallinterferingRNAsiRNA),设计采用特异性延伸引物和上游、下游两条通用引物,通过重叠延伸一步聚合酶链反应(PCR)法一次性快速、简捷地制备包含U6+1、H1或tRNAVal在内的三种人小RNA多聚酶III启动子... 为能快速经济地获取小干扰核糖核酸(smallinterferingRNAsiRNA),设计采用特异性延伸引物和上游、下游两条通用引物,通过重叠延伸一步聚合酶链反应(PCR)法一次性快速、简捷地制备包含U6+1、H1或tRNAVal在内的三种人小RNA多聚酶III启动子-小发夹状RNA(shRNA)表达框.用该方法制备的增强型绿色荧光蛋白(EGFP)特异性三种启动子-shRNA表达框在转染HepG2细胞后有效地抑制了EGFP转基因表达,其中以tRNAVal-shRNA表达框抑制效果最显著,且未检测到干扰素应答基因2'5'OASmRNA的表达,表明该表达框可被有效转染并启动产生特异基因的RNA干扰效应,进而用于快速筛选最佳siRNA位点及其最适搭配启动子. 展开更多
关键词 小干扰核糖核酸(siRNA) 核糖核酸多聚启动子 筛选 增强型绿色荧光蛋白(EGFP)
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