三个类核糖核酸酶基因在磷饥饿条件下的表达(英文) 被引量：2

1

作者 常胜合 舒海燕 +2 位作者 童依平 李滨 李振声 《作物学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第9期1115-1119,共5页

核糖核酸酶(RNases)可以将衰老的植物组织中的核糖核酸降解释放出磷元素,使它能够运送到幼嫩部位被重新利用。许多核糖核酸酶基因的表达受磷饥饿的正调控。利用已有的EST序列,从普通小麦“小偃54”中分离了3个核糖核酸酶基因的cDNA序列... 核糖核酸酶(RNases)可以将衰老的植物组织中的核糖核酸降解释放出磷元素,使它能够运送到幼嫩部位被重新利用。许多核糖核酸酶基因的表达受磷饥饿的正调控。利用已有的EST序列,从普通小麦“小偃54”中分离了3个核糖核酸酶基因的cDNA序列。这3个基因预测的氨基酸序列与S-核糖核酸酶和S-like核糖核酸酶(类核糖核酸酶)的氨基酸序列有较高的同源性。WRN1的表达受磷饥饿和衰老的负调控,而WRN2和WRN3受磷饥饿的正调控。 展开更多

关键词 磷饥饿 普通小麦 类核糖核酸酶

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微小核糖核酸-31对大肿瘤抑制因子2及心肌细胞肥大的调控作用 被引量：1

2

作者 曾俊义 张婉 +4 位作者 丁露 魏云峰 郑泽琪 文通 付勇南 《中国循环杂志》 CSCD 北大核心 2017年第2期177-182,共6页

目的:通过下调肥大心肌细胞中微小核糖核酸(miR)-31的表达,观察miR-31对大肿瘤抑制因子2(LATS2)及心肌细胞肥大的调控作用。方法:体外分离大鼠心肌细胞并连续培养10天,按干预条件不同将心肌细胞分为4组:空白对照组、单纯血管紧张素Ⅱ(An... 目的:通过下调肥大心肌细胞中微小核糖核酸(miR)-31的表达,观察miR-31对大肿瘤抑制因子2(LATS2)及心肌细胞肥大的调控作用。方法:体外分离大鼠心肌细胞并连续培养10天,按干预条件不同将心肌细胞分为4组:空白对照组、单纯血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)干预组、miR-31抑制物慢病毒感染组、阴性病毒感染组。培养第8天实时荧光定量逆转录聚合酶链式反应(qRT-PCR)检测各组心肌细胞miR-31、LATS2及肥大基因心房钠尿肽(ANP)、β-肌球蛋白重链(β-MHC)表达。培养第10天心肌细胞荧光探针染色观察心肌细胞形态变化。蛋白免疫印迹(Western blot)检测LATS2蛋白表达变化。双荧光素酶报告基因质粒转染293T细胞并检测荧光素酶活性,鉴定miR-3l对LATS2的靶向作用。结果:与空白对照组相比,单纯AngⅡ干预组miR-31、心肌肥大基因ANP、β-MHC表达水平均显著上升(P<0.05),心肌细胞相对表面积明显增大(P<0.05),而LATS2基因及蛋白表达明显下调(P<0.05);与单纯AngⅡ干预组比较,miR-31抑制物慢病毒感染组miR-31、心肌肥大基因ANP、β-MHC表达明显下调(P<0.05),心肌细胞相对表面积减小(P<0.05),而LATS2在基因水平略有上升,蛋白水平则显著上调(P<0.05)。双荧光素酶报告基因检测显示TRAF6-3'UTR+miR-146b相对荧光素酶活性较TRAF6-3'UTR+miR-NC显著性下降(P<0.01),LATS2-3'UTR+miR-31相对荧光素酶活性较LATS2-3'UTR-NC+miR-31显著性降低(P<0.01),差异均有统计学意义。结论:下调肥大心肌细胞miR-31表达水平可一定程度逆转心肌细胞肥大,miR-31靶向作用LATS2参与调控心肌细胞的肥大。 展开更多

关键词 核糖核酸类 肿瘤抑制蛋白质类 肌细胞 心脏

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蚯蚓脱氧核糖核酸酶纯化及酶学性质(英文) 被引量：1

3

作者 张建林 刘志贞 +6 位作者 王晓媛 姚建强 罗佳 王建华 杨利军 杨琦 牛勃 《北京大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2008年第5期519-523,共5页

目的:从蚯蚓组织中纯化得到一种脱氧核糖核酸酶(取名为蚯蚓脱氧核糖核酸酶,简称EDNase)并研究其酶学性质。方法:采用丙酮沉淀、离子交换层析、高效液相层析、SDS-PAGE电泳,毛细管等点聚焦电泳和基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱等方法... 目的:从蚯蚓组织中纯化得到一种脱氧核糖核酸酶(取名为蚯蚓脱氧核糖核酸酶,简称EDNase)并研究其酶学性质。方法:采用丙酮沉淀、离子交换层析、高效液相层析、SDS-PAGE电泳,毛细管等点聚焦电泳和基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱等方法。结果:经证实这种纯化方案的纯化倍数是137,酶得率为45.6%。EDNase的相对分子质量约为63000。Mg2+,Mn2+和Ca2+对酶活性有较强的抑制作用,而Na+则轻微的提高酶的活性。在pH4.4～5.2的范围内EDNase酶活性稳定,其最适pH值为4.8。该酶的最适温度为37℃,在40℃范围内酶具有较高的稳定性。EDNase的等电点为6.20。在以小牛胸腺DNA为底物的条件下,酶的Km为1.52g/L,Vmax为4.89mg/(mL·min)。该酶可有效降解超螺旋质粒DNA,线状λ-噬菌体DNA和细菌染色体DNA,对RNA未见任何降解作用。结论:这种酶具有独特的酶学性质,不同于以往所知的脱氧核糖核酸酶。 展开更多

关键词 脱氧核糖核酸酶类 分离和提纯 寡毛目

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微小核糖核酸调控去乙酰化酶对心肌代谢重构影响的研究进展

4

作者 鲁连菊 李俭强 李为民 《中国循环杂志》 CSCD 北大核心 2017年第7期724-727,共4页

心脏需要糖脂代谢产生大量能量维持其高效运转,三磷酸腺苷(ATP)生成障碍可导致心脏功能受损,反之,心脏疾病时糖脂代谢发生重排,因而调控能量平衡极其重要。微小核糖核酸(miRNA)是调控转录后基因表达水平的一类小的非编码RNA,参与多种心... 心脏需要糖脂代谢产生大量能量维持其高效运转,三磷酸腺苷(ATP)生成障碍可导致心脏功能受损,反之,心脏疾病时糖脂代谢发生重排,因而调控能量平衡极其重要。微小核糖核酸(miRNA)是调控转录后基因表达水平的一类小的非编码RNA,参与多种心血管疾病发生、发展过程,其调控代谢途径的关键环节,参与能量平衡的维持。去乙酰化酶(sirtuin,简称SIRT)利用NAD^+作为底物,能够使细胞感受到亚细胞区域的不同能量变化。而且,SIRT表达也由miRNA调控,涉及miRNA功能、乙酰化/去乙酰化重排和代谢改变等一个复杂的调节轴。本文重点介绍miRNA如何调控心肌代谢及miRNA调控SIRT对心肌代谢重构的意义,探讨miRNA作为心肌代谢生物标志物的潜在价值及利用miRNA治疗心血管疾病的相关研究。 展开更多

关键词 综述 核糖核酸酶类 肌细胞 心脏 代谢

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p62^(dok)蛋白氨基酸和cDNA序列测定和分析 被引量：2

5

作者 汪长华 董峰 +2 位作者 董传仁 郑汉巧 杨海鹭 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2001年第5期407-410,共4页

目的 :分析p6 2 dok氨基酸和cDNA序列 ,探讨p6 2 dok酪氨酸磷酸化及其与p2 1ras鸟苷三磷酸酶激活蛋白(p2 1rasGAP)的关系。方法 :从过渡表达人类胰岛素受体的中国仓鼠卵巢细胞 (CHO/IR细胞 )中提取、纯化p6 2 dok,进行微肽序列分析 ,设... 目的 :分析p6 2 dok氨基酸和cDNA序列 ,探讨p6 2 dok酪氨酸磷酸化及其与p2 1ras鸟苷三磷酸酶激活蛋白(p2 1rasGAP)的关系。方法 :从过渡表达人类胰岛素受体的中国仓鼠卵巢细胞 (CHO/IR细胞 )中提取、纯化p6 2 dok,进行微肽序列分析 ,设计相应引物PCR、克隆cDNA并测序。利用免疫沉淀和蛋白免疫印迹检测p6 2 dok是否存在酪氨酸磷酸化及与p2 1rasGAP的关系。结果 :p6 2 dokcDNA由 186 3bp组成 ,编码 481个氨基酸 ,含 15个酪氨酸残基 ,富PXXP基序 ,并有一个pleckstrin同源区。当p6 2 dok酪氨酸磷酸化后 ,可与p2 1rasGAP相结合。结论 :p6 2 dok可能是一种新的信息分子 ,并通过p2 1rasGAP参与胰岛素信号转导系统中RAS/MAPK径路的调节。 展开更多

关键词 脱氧核糖核酸类 氨基酸类 序列排列 CTP磷酸水解酶 信号传递 胰岛素抵抗 CDNA p62^dok蛋白

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初治结核病患者肠道菌群变性梯度凝胶电泳指纹图谱分析 被引量：2

6

作者 杨翰 李欢 +2 位作者 郗隽 李爱芳 徐纪茹 《中国防痨杂志》 CAS CSCD 2019年第9期985-992,共8页

目的分析正常人群与初治结核病患者肠道菌群的差异。方法于2017年8月至2018年7月每月固定时间在西电集团医院收集当天符合入组标准的健康体检成年人粪便标本2~3份,收集30份标本后停止纳入,作为对照组;收集2017年8月至2018年7月西安市胸... 目的分析正常人群与初治结核病患者肠道菌群的差异。方法于2017年8月至2018年7月每月固定时间在西电集团医院收集当天符合入组标准的健康体检成年人粪便标本2~3份,收集30份标本后停止纳入,作为对照组;收集2017年8月至2018年7月西安市胸科医院诊断为初治结核病患者的粪便标本,收集30份标本后停止纳入,作为结核组。利用变性梯度凝胶电泳技术分析对照组与结核组肠道菌群的多样性、相似性,以及变性梯度凝胶电泳主要条带测序后各组菌群所占比例。结果对照组的条带数[(13.57±3.37)个]和菌群多样性指数(H'指数;2.55±0.27)均明显高于结核组[(8.60±4.19)个和1.99±0.52],差异均有统计学意义(t=12.55,P<0.001;t=6.75,P<0.001)。组内Dice 相似性系数(Cs)的比较显示,对照组与结核组的中位数(四分位数)[22.90%(16.20%,29.30%)和35.35%(23.73%,44.98%)]间的差异有统计学意义(Z=-73.38,P<0.001)。测序比对结果显示,对照组和结核组的主要肠道菌群均以Bacteroides属为主,分别占73.96%(179/242)和79.40%(158/199)。但结核组中Prevotella菌属构成比(9.04%,18/199)较对照组(24.38%,59/242)有所下降,差异有统计学意义(χ^2=17.82,P<0.001),结核组Uncultured bacterium菌属的构成比(11.56%,23/199)高于对照组(0,0/242),差异有统计学意义(χ^2=29.51,P<0.001)。结论健康人群与结核病患者肠道菌群因机体免疫功能的不同存在差异,结核病的发生可能会造成Prevotella菌属和Uncultured bacterium菌属构成出现变化。 展开更多

关键词 结核 肠 细菌 聚脱氧核糖核酸类 变性梯度凝胶电泳

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食品中金黄色葡萄球菌的PCR检测 被引量：9

7

作者 王韶 刘桂华 +3 位作者 乔凤 史杰萍 方丽 李波 《吉林大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2006年第5期933-936,共4页

目的:建立检测食品中金黄色葡萄球菌的PCR方法并将PCR方法与传统方法进行比较,评价PCR方法的检测效果。方法:采用PCR方法特异性扩增金黄色葡萄球菌的耐热核酸酶编码基因(nuc基因),分别采用PCR方法和国家标准规定的方法检测180份吉林省... 目的:建立检测食品中金黄色葡萄球菌的PCR方法并将PCR方法与传统方法进行比较,评价PCR方法的检测效果。方法:采用PCR方法特异性扩增金黄色葡萄球菌的耐热核酸酶编码基因(nuc基因),分别采用PCR方法和国家标准规定的方法检测180份吉林省各地区的抽检食品样品。结果:所检金黄色葡萄球菌在422bp处出现nuc基因目的片段;食品样品传统方法检出阳性42份,PCR方法检出45份,PCR检测方法与国标法检出阳性率比较,差异无显著性(P>0·05)。结论:PCR方法检测食品中金黄色葡萄球菌较传统方法更快速和简便,且具有较高的特异性和敏感性,可作为食品中金黄色葡萄球菌快速检测的手段。 展开更多

关键词 食品 葡萄球菌 金黄色 聚合酶链反应/方法 核糖核酸酶类 葡萄球菌感染/诊断

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含轮状病毒NSP3基因病毒样颗粒的构建和表达 被引量：5

8

作者 常乐 张括 +3 位作者 张瑞 谢洁红 李金明 王露楠 《北京大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2012年第5期737-741,共5页

目的:通过改变MS2噬菌体衣壳蛋白RNA包装位点的亲和力,构建并表达含轮状病毒NSP3基因耐RNA酶的病毒样颗粒,并探讨其稳定性。方法:设计含PvuⅠ和KpnⅠ酶切位点的上、下游引物,扩增1 049 bp轮状病毒NSP3基因片段,并将包装位点-5位的U替换... 目的:通过改变MS2噬菌体衣壳蛋白RNA包装位点的亲和力,构建并表达含轮状病毒NSP3基因耐RNA酶的病毒样颗粒,并探讨其稳定性。方法:设计含PvuⅠ和KpnⅠ酶切位点的上、下游引物,扩增1 049 bp轮状病毒NSP3基因片段,并将包装位点-5位的U替换为C,提高与MS2衣壳蛋白作用的亲和力。用PvuⅠ和KpnⅠ双酶切扩增的目的基因和pACYC-MS2表达载体,连接获得重组载体pACYC-MS2-NSP3,转化TOP10感受态细胞后用PCR验证阳性克隆并测序。阳性克隆转化BL21(DE3)细胞后表达含轮状病毒NSP3基因病毒样颗粒,用超声破碎、纯化获得表达产物,鉴定并讨论其稳定性。结果:成功构建pACYC-MS2-NSP3表达载体并获得了含轮状病毒NSP3基因病毒样颗粒,其可耐受DNA酶和RNA酶的降解,并在-20℃、4℃、室温25℃下10 d保持稳定。结论:通过改变MS2噬菌体衣壳蛋白RNA包装位点的亲和力,可以成功构建耐RNA酶的病毒样颗粒,本研究所构建的病毒样颗粒具有耐RNA酶的特性和良好的稳定性,为轮状病毒实时荧光定量逆转录-PCR的标准品和质控品的研究提供了一个可行的方法。 展开更多

关键词 轮状病毒属 基因 NSP3 病毒粒子 核糖核酸酶类

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LncRNA-MIAT在肿瘤坏死因子α介导的血管内皮细胞炎症中的表达及作用 被引量：11

9

作者 任成龙 张璐 +3 位作者 宁险峰 赵青 蔡尚郎 张文忠 《中国循环杂志》 CSCD 北大核心 2017年第6期607-611,共5页

目的:体外观察血管内皮细胞(ECs)在肿瘤坏死因子α(TNF-α)刺激下,细胞内长链非编码核糖核酸(LncR NA)心肌梗死相关转录本(LncR NA-MIAT)的表达变化,并探讨LncR NA-MIAT对ECs炎症的调控作用。方法:以TNF-α诱导ECs表达LncR NA-MIAT,采... 目的:体外观察血管内皮细胞(ECs)在肿瘤坏死因子α(TNF-α)刺激下,细胞内长链非编码核糖核酸(LncR NA)心肌梗死相关转录本(LncR NA-MIAT)的表达变化,并探讨LncR NA-MIAT对ECs炎症的调控作用。方法:以TNF-α诱导ECs表达LncR NA-MIAT,采用蛋白质免疫印迹法(Western Blot)、聚合酶链反应(PCR)及实时荧光定量PCR(qR T-PCR)方法分别检测ECs炎症状态下细胞间黏附分子-1(ICAM-1)和LncR NA-MIAT的表达情况。应用MIAT小干扰核糖核酸(siR NAMIAT)转染ECs细胞,观察LncR NA-MIAT敲低对ICAM-1表达的影响。结果:Lnc RNA-MIAT随着TNF-α刺激时间的延长与浓度的增高呈上升趋势,刺激24 h、48 h分别与刺激0 h、6 h、12 h比较,Lnc RNA-MIAT表达量均增多,差异均具有统计学意义(P<0.05);TNF-α刺激浓度为1.000 ng/ml、10.000 ng/ml分别与刺激浓度为0.000 ng/ml、0.125 ng/ml比较,LncR NA-MIAT表达量增多,差异均具有统计学意义(P均<0.05)。ECs经siR NAMIAT转染后,TNF-α诱导的ICAM-1蛋白表达被显著抑制(P<0.05)。结论:LncR NA-MIAT可能参与血管ECs的炎症反应,并可能起到促炎作用。 展开更多

关键词 核糖核酸酶类 肿瘤坏死因子Α 细胞间黏附分子-1

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空间诱变水稻多蘖矮突变体不同分蘖期蛋白质组研究 被引量：4

10

作者 王巍 魏力军 +2 位作者 王俊敏 徐建龙 孙野青 《核农学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第3期405-415,共11页

JB-1返回式卫星搭载水稻(Oryza sativa L.)丙95-503干种子,地面种植后筛选出多蘖矮杆突变体R955。利用荧光差异显示双向电泳(2-D DIGE)对突变体播种后第14天(未发生分蘖)、第21天(分蘖起始)、第55天(最高分蘖期)3个营养生长期叶片总蛋... JB-1返回式卫星搭载水稻(Oryza sativa L.)丙95-503干种子,地面种植后筛选出多蘖矮杆突变体R955。利用荧光差异显示双向电泳(2-D DIGE)对突变体播种后第14天(未发生分蘖)、第21天(分蘖起始)、第55天(最高分蘖期)3个营养生长期叶片总蛋白进行分离及定量分析(未搭载植株为对照),检测到在各发育时期共有97个蛋白点发生差异表达,经串联质谱鉴定后得到59个独特的蛋白。功能分析发现能量代谢、光合作用、蛋白代谢、氮元素同化、氨基酸代谢以及胁迫应答等过程均参与了突变体的分蘖发育。对差异蛋白在不同时期相对表达量的K-均值聚类分析显示不同功能蛋白表现不同表达模式。两因素差分析(Two-way ANOVA)筛选出S-类核糖核酸酶可能与水稻分蘖性状直接关联。 展开更多

关键词 水稻 多蘖矮 空间诱变 蛋白质组 S-类核糖核酸酶

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Dicer蛋白的晶体结构及其功能

11

作者 张志宏 税青林 《解放军医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2007年第6期648-649,共2页

关键词 RNA干扰 Dicer蛋白 核糖核酸酶类

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