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三种启动子-shRNA表达框的制备及其在筛选有效SiRNA中的应用
1
作者
倪勤
刘克洲
+2 位作者
羊正纲
姚航平
陈智
《浙江大学学报（工学版）》
EI
CAS
CSCD
北大核心
2005年第7期1086-1090,共5页
为能快速经济地获取小干扰核糖核酸(smallinterferingRNAsiRNA),设计采用特异性延伸引物和上游、下游两条通用引物,通过重叠延伸一步聚合酶链反应(PCR)法一次性快速、简捷地制备包含U6+1、H1或tRNAVal在内的三种人小RNA多聚酶III启动子...
为能快速经济地获取小干扰核糖核酸(smallinterferingRNAsiRNA),设计采用特异性延伸引物和上游、下游两条通用引物,通过重叠延伸一步聚合酶链反应(PCR)法一次性快速、简捷地制备包含U6+1、H1或tRNAVal在内的三种人小RNA多聚酶III启动子-小发夹状RNA(shRNA)表达框.用该方法制备的增强型绿色荧光蛋白(EGFP)特异性三种启动子-shRNA表达框在转染HepG2细胞后有效地抑制了EGFP转基因表达,其中以tRNAVal-shRNA表达框抑制效果最显著,且未检测到干扰素应答基因2'5'OASmRNA的表达,表明该表达框可被有效转染并启动产生特异基因的RNA干扰效应,进而用于快速筛选最佳siRNA位点及其最适搭配启动子.
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关键词
小干扰
核糖核酸
(siRNA)
核糖核酸多聚酶ⅲ启动子
筛选
增强型绿色荧光蛋白(EGFP)
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职称材料
题名
三种启动子-shRNA表达框的制备及其在筛选有效SiRNA中的应用
1
作者
倪勤
刘克洲
羊正纲
姚航平
陈智
机构
浙江大学医学院附属第一医院传染病研究所
出处
《浙江大学学报（工学版）》
EI
CAS
CSCD
北大核心
2005年第7期1086-1090,共5页
基金
国家自然科学基金资助项目(30371270)
浙江省卫生厅重点资助项目(2002ZD007)
浙江省科技厅重大资助项目(2003C13015).
文摘
为能快速经济地获取小干扰核糖核酸(smallinterferingRNAsiRNA),设计采用特异性延伸引物和上游、下游两条通用引物,通过重叠延伸一步聚合酶链反应(PCR)法一次性快速、简捷地制备包含U6+1、H1或tRNAVal在内的三种人小RNA多聚酶III启动子-小发夹状RNA(shRNA)表达框.用该方法制备的增强型绿色荧光蛋白(EGFP)特异性三种启动子-shRNA表达框在转染HepG2细胞后有效地抑制了EGFP转基因表达,其中以tRNAVal-shRNA表达框抑制效果最显著,且未检测到干扰素应答基因2'5'OASmRNA的表达,表明该表达框可被有效转染并启动产生特异基因的RNA干扰效应,进而用于快速筛选最佳siRNA位点及其最适搭配启动子.
关键词
小干扰
核糖核酸
(siRNA)
核糖核酸多聚酶ⅲ启动子
筛选
增强型绿色荧光蛋白(EGFP)
Keywords
small interfering RNA （siRNA） RNA polymerase
ⅲ
（RNA Pol
ⅲ
） promoter screening en hanced green fluorescent protein （EGFP）
分类号
R318.5 [医药卫生—生物医学工程]
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题名
作者
出处
发文年
被引量
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1
三种启动子-shRNA表达框的制备及其在筛选有效SiRNA中的应用
倪勤
刘克洲
羊正纲
姚航平
陈智
《浙江大学学报（工学版）》
EI
CAS
CSCD
北大核心
2005
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