麦角硫因激活核因子E2相关因子2/血红素加氧酶1信号通路改善血管性痴呆大鼠认知功能障碍研究

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作者 刘青芳 韦有仕 +4 位作者 肖斐 周春香 刘群 袁慧 曹天然 《中国全科医学》 北大核心 2025年第17期2156-2162,共7页

背景麦角硫因与阿尔茨海默病患者认知功能障碍的严重程度有关,并具有神经保护的作用。但其是否能改善血管性痴呆(VD)大鼠认知功能障碍暂不明晰,且其具体作用机制尚不清楚。目的探讨麦角硫因通过激活核因子E2相关因子2/血红素加氧酶1(NRF... 背景麦角硫因与阿尔茨海默病患者认知功能障碍的严重程度有关,并具有神经保护的作用。但其是否能改善血管性痴呆(VD)大鼠认知功能障碍暂不明晰,且其具体作用机制尚不清楚。目的探讨麦角硫因通过激活核因子E2相关因子2/血红素加氧酶1(NRF2/HO-1)信号通路改善VD大鼠认知功能障碍的作用机制。方法于2021年8月—2023年9月,选取成年雄性SD大鼠48只,随机分为对照组、模型组、麦角硫因组、麦角硫因+NRF2抑制剂(ML385)组,每组12只。除对照组外,其他各组采用双侧颈总动脉永久性结扎法建立VD大鼠模型,麦角硫因组于造模前2周开始每天腹腔注射麦角硫因2 mg/kg,持续4周;麦角硫因+ML385组在造模前2周开始每天腹腔注射麦角硫因2 mg/kg和ML38530 mg/kg,持续4周。通过Morris水迷宫测试、HE染色以及TUNEL染色检测麦角硫因对VD大鼠认知功能障碍的影响;Western blotting法检测各蛋白质表达水平,ELISA法检测氧化应激因子及炎症因子水平。结果本研究成功建立了VD大鼠模型。与对照组比较,模型组大鼠的逃避潜伏期延长,目标象限停留时间百分比降低(P<0.05),大鼠海马组织中神经元数量减少,细胞萎缩,形态异常,细胞核深度染色,脑组织神经元凋亡率增加(P<0.05),海马组织中NRF2、HO-1和醌氧化还原酶1(NQO1)蛋白表达水平降低(P<0.05),超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)水平降低,丙二醛(MDA)水平增加(P<0.05),白介素(IL)-1β、IL-6和肿瘤坏死因子(TNF)-α水平增加(P<0.05);与模型组比较,麦角硫因组大鼠逃避潜伏期缩短,目标象限停留时间百分比升高(P<0.05),海马组织病理程度减轻,脑组织神经元凋亡率降低(P<0.05),海马组织NRF2、HO-1和NQO1蛋白表达水平升高(P<0.05),SOD、GSH-Px水平升高,MDA水平降低(P<0.05),IL-1β、TNF-α和IL-6水平降低(P<0.05);与麦角硫因组比较,麦角硫因+ML385组大鼠逃避潜伏期延长,目标象限停留时间百分比降低(P<0.05),海马组织损伤严重,脑组织神经元凋亡率增加(P<0.05),海马组织NRF2、HO-1和NQO1蛋白表达水平降低(P<0.05),SOD、GSH-Px水平降低,MDA水平升高(P<0.05),IL-1β、TNF-α和IL-6水平升高(P<0.05)。结论麦角硫因通过激活NRF2/HO-1信号通路改善VD大鼠认知功能障碍。 展开更多

关键词 血管性痴呆 核因子e2相关因子2/血红素加氧酶1信号通路 氧化应激反应 炎症损伤 麦角硫因

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黄芩苷对糖尿病小鼠皮肤创口愈合及Nrf2/HO-1信号通路的影响 被引量：1

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作者 刘冬恋 赵玉玺 +4 位作者 秦星宇 张倩 龙莞茜 甘星灵 王嘉雨 《中成药》 CAS CSCD 北大核心 2024年第12期4157-4163,共7页

目的 探讨黄芩苷对链脲佐菌素(STZ)诱导的糖尿病(DM)小鼠皮肤创口愈合及Nrf2/HO-1氧化应激信号通路的影响。方法 雄性KM小鼠经注射STZ和背部全皮层圆形切除构建DM创口模型,然后随机分为模型组、二甲双胍组(110 mg/kg)和黄芩苷低、高剂量... 目的 探讨黄芩苷对链脲佐菌素(STZ)诱导的糖尿病(DM)小鼠皮肤创口愈合及Nrf2/HO-1氧化应激信号通路的影响。方法 雄性KM小鼠经注射STZ和背部全皮层圆形切除构建DM创口模型,然后随机分为模型组、二甲双胍组(110 mg/kg)和黄芩苷低、高剂量组(50、 150 mg/kg),每组10只,同时将10只仅做了背部全皮层圆形切除的小鼠设为正常组,每天给药1次,连续12 d。每4 d测量各组小鼠体质量、创面大小和空腹血糖值(FBG)。实验结束后,检测小鼠血清中丙二醛(MDA)水平和超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、过氧化氢酶(CAT)活性;HE和Masson染色观察小鼠皮肤创面形态;免疫荧光方法观察小鼠皮肤创面组织核因子E2相关因子2 (Nrf2)、血红素氧合酶-1 (HO-1)和8-氧鸟嘌呤脱氧核苷(8-oxo-dG)蛋白表达。结果 与模型组比较,黄芩苷高剂量组小鼠第4、 8、 12天FBG值降低(P<0.01);第12天创口面积缩小(P<0.01);血清MDA水平降低(P<0.05),GSH-Px、 CAT活性升高(P<0.05,P<0.01);皮肤创面组织表皮层增厚,真皮层胶原纤维增生,且排列相对有序;皮肤创面组织Nrf2、 HO-1蛋白荧光阳性表达升高(P<0.01)。结论 黄芩苷可促进DM小鼠创面愈合,其机制可能与激活Nrf2/HO-1通路有关。 展开更多

关键词 黄芩苷 糖尿病 创面愈合 氧化应激 核因子e2相关因子2(Nrf2) 血红素氧合酶-1(HO-1) 8-氧鸟嘌呤脱氧核苷(8-oxo-dG)

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积雪草酸通过Nrf2/HO-1信号通路对脂多糖诱导大鼠海马神经元损伤的改善作用

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作者 白燕燕 周禹彤 +1 位作者 隋海娟 刘卓 《吉林大学学报(医学版)》 北大核心 2025年第1期85-95,共11页

目的:探讨积雪草酸(AA)对脂多糖(LPS)诱导大鼠原代海马神经元炎症和氧化应激损伤的作用,并阐明其作用机制。方法:原代培养大鼠海马神经元(免疫荧光染色法鉴定细胞纯度)分为对照组、LPS组(10 mg·L^(-1)LPS)、LPS+AA组(10 mg·L^... 目的:探讨积雪草酸(AA)对脂多糖(LPS)诱导大鼠原代海马神经元炎症和氧化应激损伤的作用,并阐明其作用机制。方法:原代培养大鼠海马神经元(免疫荧光染色法鉴定细胞纯度)分为对照组、LPS组(10 mg·L^(-1)LPS)、LPS+AA组(10 mg·L^(-1)LPS+10、20和40μmol·L^(-1)AA)、AA组(20μmol·L^(-1)AA)、ML385组[10μmol·L^(-1)核因子E2相关因子2(Nrf2)抑制剂]和LPS+ML385+AA组(10mg·L^(-1)LPS+10μmol·L^(-1)ML385+20μmol·L^(-1)AA);给药处理后,噻唑蓝(MTT)法检测各组大鼠海马神经元的存活率,乳酸脱氢酶(LDH)试剂盒检测各组大鼠海马神经元LDH漏出率,酶联免疫吸附试验(ELISA)试剂盒检测各组大鼠海马神经元上清液中炎症因子[白细胞介素(IL)-1β和肿瘤坏死因子(TNF)-α]水平以及各组大鼠海马神经元中超氧化物歧化酶(SOD)活性和丙二醛(MDA)水平,Griess法测定各组大鼠海马神经元上清液中一氧化氮(NO)水平,免疫荧光法检测各组大鼠海马神经元中Nrf2和血红素氧合酶1(HO-1)蛋白表达情况;Western blotting法检测各组大鼠海马神经元中Nrf2、HO-1、核因子κB(NF-κB)和B细胞淋巴瘤2(Bcl-2)蛋白表达水平。结果:与对照组比较,LPS组大鼠海马神经元中的海马神经元存活率、SOD活性和Bcl-2表达水平明显降低(P<0.01),LDH漏出率、IL^(-1)β和TNF-α水平、MDA水平、NO水平以及NF-κB蛋白表达水平均明显升高(P<0.01),Nrf2和HO-1的荧光强度明显减弱,Nrf2和HO-1蛋白表达水平明显降低(P<0.01);与LPS组比较,LPS+10μmol?L^(-1)AA组和LPS+20μmol?L^(-1)AA组大鼠海马神经元存活率、SOD活性和Bcl-2表达水平明显升高(P<0.01),LDH漏出率、IL^(-1)β和TNF-α水平、MDA水平、NO水平以及NF-κB蛋白表达水平明显降低(P<0.05或P<0.01),Nrf2和HO-1的荧光强度明显升高(P<0.01),Nrf2和HO-1蛋白表达水平明显升高(P<0.01);与LPS+20μmol?L^(-1)AA组比较,LPS+ML385+AA组海马神经元中Nrf2和HO-1荧光强度明显减弱(P<0.01),细胞核和细胞质中Nrf2、细胞中HO-1和Bcl-2蛋白表达水平明显降低(P<0.01),NF-κB蛋白表达水平明显升高(P<0.01)。结论:AA可改善LPS诱导的原代培养大鼠海马神经元炎症和氧化应激损伤,其机制可能与激活Nrf2/HO-1信号通路有关。 展开更多

关键词 阿尔茨海默病 积雪草酸 海马神经元 炎症 氧化应激 核因子e2相关因子2 血红素氧合酶1

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基于SIRT1/NRF2/HO-1信号通路探讨黄芪甲苷对大鼠肝星状细胞氧化损伤的作用机制 被引量：2

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作者 田萌媛 张铭 +1 位作者 张秋菊 陈光顺 《世界科学技术-中医药现代化》 CSCD 北大核心 2024年第9期2492-2499,共8页

目的探讨黄芪甲苷治疗肝纤维化(HF)的作用机制。方法HSC-T6分为空白组、模型组、黄芪甲苷组、抑制剂组(采用Sirt1抑制剂EX527)、黄芪甲苷加抑制剂组,除空白组外均采用100μmol·L^(-1)的H_(2)O_(2)制造HSC-T6氧化应激的模型,模型组... 目的探讨黄芪甲苷治疗肝纤维化(HF)的作用机制。方法HSC-T6分为空白组、模型组、黄芪甲苷组、抑制剂组(采用Sirt1抑制剂EX527)、黄芪甲苷加抑制剂组,除空白组外均采用100μmol·L^(-1)的H_(2)O_(2)制造HSC-T6氧化应激的模型,模型组干预4 h,除模型组外干预24 h。ELISA法测定细胞上清中α-SMA、Collagen1水平;生化试剂盒法测定细胞中氧化应激相关指标;流式细胞术检测细胞中ROS的含量;免疫荧光法检测细胞中α-SMA的含量;实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time qPCR)和蛋白免疫印迹法(Western blot)检测各组细胞中Sirt1、Nrf2、HO-1、α-SMA、Collagen1 mRNA和蛋白表达水平。结果与空白组比较,经H_(2)O_(2)处理的HSC-T6上清中α-SMA、Collagen1及细胞中MDA、ROS的含量明显增加,而细胞中CAT含量及SOD活性明显降低,细胞中Sirt1、Nrf2、HO-1 mRNA和蛋白表达水平降低,α-SMA、Collagen1mRNA表达水平升高(P<0.05);与模型组比较,各给药组细胞中MDA、ROS的含量明显降低,CAT含量及SOD活性明显增加,黄芪甲苷组、黄芪甲苷加抑制剂组上清中α-SMA、Collagen1表达量降低,Sirt1、Nrf2、HO-1 mRNA和蛋白表达水平增加,α-SMA、Collagen1 mRNA表达水平降低(P<0.05)。结论黄芪甲苷可以减轻因H_(2)O_(2)刺激造成的HSC-T6氧化应激反应,减少氧化应激产物产生及胶原纤维沉积,从而达到抗HF的目的,其作用机制可能与调节Sirt1/Nrf2/HO-1信号通路有关。 展开更多

关键词 肝纤维化 黄芪甲苷 大鼠肝星状细胞 氧化损伤 Sirtuin1/核因子红系2相关因子2(Nrf2)/血红素氧合酶1(HO-1)

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雷公藤多苷调节SIRT1/Nrf2/HO-1通路改善IgA肾病大鼠肾损伤的机制

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作者 方虹 宋纯东 +7 位作者 张守琳 王旭 樊艳敏 季晗舒 卜继常 宋珂 陈晨晨 丁樱 《医药导报》 北大核心 2025年第6期847-853,共7页

目的 探讨雷公藤多苷(GTW)通过调节沉默信息调节因子1(SIRT1)/核转录因子E2相关因子2(Nrf2)/抗氧化酶血红素氧合酶1(HO-1)信号通路改善IgA肾病(IgAN)模型大鼠肾损伤的机制。方法 雄性SD大鼠45只,适应性饲养1周后随机分为2组:空白组(n=9... 目的 探讨雷公藤多苷(GTW)通过调节沉默信息调节因子1(SIRT1)/核转录因子E2相关因子2(Nrf2)/抗氧化酶血红素氧合酶1(HO-1)信号通路改善IgA肾病(IgAN)模型大鼠肾损伤的机制。方法 雄性SD大鼠45只,适应性饲养1周后随机分为2组:空白组(n=9)、造模组(n=36)。造模组采用血清白蛋白+四氯化碳+脂多糖建立IgAN大鼠模型,第12周灌胃结束时随机选取2只造模组大鼠留取标本验证,造模成功;将造模组34只大鼠随机分为3组:模型组(n=10)、泼尼松组(n=12)、GTW组(n=12);从第13周起灌胃给药,给药4周后留取大鼠24 h尿液、血液、肾组织。检测各组大鼠尿红细胞数、24 h尿蛋白定量(24 h-UTP)、丙氨酸氨基转移酶(ALT)、血清白蛋白(ALB)、尿素氮(BUN)、血肌酐(SCr);蛋白免疫印迹法(Western blotting)检测大鼠肾组织SIRT1、Nrf2、HO-1、PINK1蛋白表达;实时荧光定量聚合酶链式反应(RT-PCR)检测大鼠肾组织SIRT1、Nrf2、HO-1、PINK1 mRNA表达;免疫荧光观察肾小球系膜区IgA沉积情况;苏木精-伊红(HE)染色观察各组大鼠肾组织病理学变化。结果 与空白组比较,模型组大鼠尿红细胞计数、24h-UTP、ALT、BUN、SCr水平均明显升高(P<0.01),ALB水平显著降低(P<0.01),肾组织SIRT1、Nrf2、HO-1、PINK1蛋白及mRNA表达显著降低(P<0.01),系膜区IgA沉积明显,肾脏病理损伤严重,差异有统计学意义(P<0.01)。与模型组比较,泼尼松组、GTW组尿红细胞计数、24 h-UTP、ALT、BUN、SCr水平均显著降低(P<0.01),ALB水平明显升高(P<0.01),肾组织SIRT1、Nrf2、HO-1、PINK1蛋白及mRNA表达显著升高(P<0.01),系膜区IgA沉积减少,肾脏病理得到改善,差异有统计学意义。结论 GTW可能通过激活SIRT1/Nrf2/HO-1信号通路,减轻氧化应激损伤,保护肾功能,改善肾损伤。 展开更多

关键词 雷公藤多苷 IGA肾病 沉默信息调节因子1 核转录因子e2相关因子2 血红素氧合酶1 氧化应激

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铁皮石斛多糖通过激活Nrf2/HO-1通路改善新生小鼠坏死性小肠结肠炎的肠道损伤

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作者 王静 吴铭 王军 《安徽医科大学学报》 北大核心 2025年第6期984-991,共8页

目的 探究铁皮石斛多糖(DOP)对新生小鼠坏死性小肠结肠炎(NEC)的改善作用并初步分析其可能的分子机制。方法 60只7 d龄C57BL/6J小鼠分为四组:对照(CTRL)组、坏死性小肠结肠炎(NEC)组、DOP低剂量治疗(DOPL+NEC)组以及DOP高剂量治疗(DOPH+... 目的 探究铁皮石斛多糖(DOP)对新生小鼠坏死性小肠结肠炎(NEC)的改善作用并初步分析其可能的分子机制。方法 60只7 d龄C57BL/6J小鼠分为四组:对照(CTRL)组、坏死性小肠结肠炎(NEC)组、DOP低剂量治疗(DOPL+NEC)组以及DOP高剂量治疗(DOPH+NEC)组。采用低氧、冷刺激、高渗喂养以及腹腔注射脂多糖(LPS)法建立NEC模型,实验结束后取小肠组织。观察小鼠一般情况,并整理分析小鼠体质量;苏木精-伊红(HE)染色观察小肠组织病理改变;免疫组化和Western blot检测小肠组织钙黏蛋白E(E-cadherin)、闭锁蛋白(Occludin)和紧密连接蛋白1(Claudin-1)的表达水平;ELISA检测肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素(IL)-1β、IL-6和IL-10的表达水平;试剂盒检测乳酸脱氢酶(LDH)、丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)和还原型谷胱甘肽(GSH)含量;免疫组化和Western blot检测核因子红细胞2相关因子2(Nrf2)和血红素氧合酶1(HO-1)蛋白的表达水平。结果 与CTRL组相比,NEC组小鼠体质量下降、HE病理评分增加(P<0.01或P<0.001);E-cadherin、Occludin和Claudin-1蛋白表达减少(P<0.01或P<0.001);TNF-α、IL-1β、IL-6浓度升高,IL-10浓度降低(P<0.01);MDA、LDH含量升高,GSH、SOD含量减少(P<0.01);Nrf2、HO-1蛋白表达增加(P<0.05或P<0.01)。而DOP干预后,与NEC组相比,小鼠体质量增加、HE评分降低(P<0.05或P<0.01);E-cadherin、Occludin、Claudin-1蛋白表达增加(P<0.05或P<0.01或P<0.001);TNF-α、IL-1β、IL-6浓度降低(P<0.05或P<0.01),IL-10浓度升高(P<0.01);MDA、LDH含量减少,GSH、SOD含量增加(P<0.05或P<0.01);Nrf2、HO-1蛋白表达进一步增加(P<0.05或P<0.01)。结论 DOP可以改善NEC小鼠的肠道病理损伤和肠道黏膜屏障功能,降低NEC小鼠氧化应激损伤和肠道炎症,其作用可能与DOP激活Nrf2/HO-1通路有关。 展开更多

关键词 石斛属 多糖 小肠结肠炎 核因子红细胞2相关因子2 血红素氧合酶1 紧密连接蛋白 氧化应激

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基于Keap1/Nrf2/ARE通路的中医药干预骨关节炎研究进展 被引量：4

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作者 段航 曾凡 卢敏 《中成药》 CAS CSCD 北大核心 2024年第2期517-524,共8页

骨关节炎是临床上常见的一种慢性筋骨疾病,其病程缠绵,反复发作,发病机制复杂,与氧化应激反应相关。Keap1/Nrf2/ARE信号通路是细胞氧化应激反应中的关键通路,其调控的下游抗氧化蛋白/酶在细胞防御保护中发挥重要作用。骨关节炎的病程中N... 骨关节炎是临床上常见的一种慢性筋骨疾病,其病程缠绵,反复发作,发病机制复杂,与氧化应激反应相关。Keap1/Nrf2/ARE信号通路是细胞氧化应激反应中的关键通路,其调控的下游抗氧化蛋白/酶在细胞防御保护中发挥重要作用。骨关节炎的病程中Nrf2、NQO1、HO-1等关键蛋白表达受到抑制,组织抗氧化及抗炎能力减弱,软骨细胞损伤,软骨结构破坏。目前西医的治疗侧重于缓解症状,但不能逆转骨关节炎的进展,急需有效的非手术策略来延缓骨关节炎的病理过程。近年来,大量基础及临床试验表明Keap1/Nrf2/ARE通路是中医药治疗骨关节炎的潜在靶点之一。基于骨关节炎本虚标实的病机,中医药以补虚、化瘀、解毒等法调控Keap1/Nrf2/ARE信号通路,在发挥抗氧化及抗炎作用同时,还能调节软骨细胞外基质的稳态,发挥对骨关节炎的治疗作用。本文总结了中医药靶向干预Keap1/Nrf2/ARE信号通路防治骨关节炎的作用机制,旨在为中医药更合理的运用临床防治骨关节炎提供理论基础。 展开更多

关键词 中医药 骨关节炎 Kelch样环氧氯丙烷相关蛋白-1/核转录因子e2相关因子/血红素加氧-1(Keap1/Nrf2/ARe)信号通路

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双路通脑方调节SIRT1/Nrf2/GPx4信号通路对缺血性脑卒中大鼠神经元铁死亡的影响 被引量：3

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作者 郑光珊 翟阳 +7 位作者 王凯华 马威 梅小平 陈莹 邹敏 庞延 杨鹏 吕艳 《医药导报》 CAS 北大核心 2024年第4期526-534,共9页

目的探讨双路通脑方对缺血性脑卒中大鼠神经元铁死亡的作用以及对沉默信息调节因子2同源物1(SIRT1)/核因子E2相关因子2(Nrf2)/谷胱甘肽过氧化物酶4(GPx4)信号通路的调节机制。方法采用随机数字表法选取20只大鼠作为假手术组,剩余70只大... 目的探讨双路通脑方对缺血性脑卒中大鼠神经元铁死亡的作用以及对沉默信息调节因子2同源物1(SIRT1)/核因子E2相关因子2(Nrf2)/谷胱甘肽过氧化物酶4(GPx4)信号通路的调节机制。方法采用随机数字表法选取20只大鼠作为假手术组,剩余70只大鼠均利用大脑中动脉闭塞法制备缺血性脑卒中大鼠模型,将造模成功的大鼠随机分为模型对照组、双路通脑方组、双路通脑方+SIRT1抑制剂组(双路通脑方+EX527组),每组20只。14 d后,对大鼠进行神经功能损伤评分;TTC染色检测大鼠脑梗死面积;HE染色检测大鼠脑组织病理变化;尼氏染色检测大鼠脑组织神经元数量;试剂盒检测大鼠脑组织中铁离子(Fe^(2+))、超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽(GSH)、丙二醛(MDA)的水平;免疫组化检测大鼠脑组织中酰基-辅酶a合成酶长链家族成员4(ACSL4)、转铁蛋白受体(TFR)、铁蛋白重链多肽1(FTH1)蛋白的阳性表达;Western blotting法检测大鼠脑组织中SIRT1、Nrf2、GPx4及胱氨酸/谷氨酸转运蛋白(SLC7A11)蛋白的表达。结果与假手术组比较,模型对照组大鼠的神经功能缺损评分、脑梗死面积、Fe^(2+)和MDA含量、ACSL4、TFR蛋白表达升高(P<0.05),神经元数量、SOD和GSH含量、FTH1、SIRT1、Nrf2、GPx4及SLC7A11蛋白表达均降低(P<0.05);与模型对照组比较,双路通脑方组大鼠神经功能缺损评分、脑梗死面积、Fe^(2+)和MDA含量、ACSL4、TFR蛋白表达降低(P<0.05),神经元数量、SOD和GSH含量、FTH1、SIRT1、Nrf2、GPx4及SLC7A11蛋白表达均升高(P<0.05);采用SIRT1抑制剂进行回补实验,结果显示SIRT1抑制剂逆转了双路通脑方对神经元铁死亡的抑制作用,同时也抑制了Nrf2和GPx4的表达(P<0.05)。结论双路通脑方可能通过激活SIRT1/Nrf2/GPx4信号通路来抑制缺血性脑卒中大鼠神经元铁死亡。 展开更多

关键词 双路通脑方 缺血性脑卒中 神经元 铁死亡 沉默信息调节因子2同源物1/核因子e2相关因子2/谷胱甘肽过氧化物酶4信号通路

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虫草素对RSL3诱导肝癌HepG2细胞铁死亡的增强作用及其机制

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作者 林涵 杨秋燕 +2 位作者 钟洁月 陈博伦 童汪霞 《吉林大学学报(医学版)》 北大核心 2025年第3期576-589,共14页

目的:探讨虫草素对铁死亡诱导剂RSL3诱导肝癌HepG2细胞铁死亡的增强作用,并阐明其潜在的作用机制。方法:HepG2细胞分为对照组,RSL3组,低、中和高剂量虫草素组,RSL3组+低、中和高剂量虫草素组,RSL3+虫草素(中剂量)+铁死亡抑制剂Ferrostat... 目的:探讨虫草素对铁死亡诱导剂RSL3诱导肝癌HepG2细胞铁死亡的增强作用,并阐明其潜在的作用机制。方法:HepG2细胞分为对照组,RSL3组,低、中和高剂量虫草素组,RSL3组+低、中和高剂量虫草素组,RSL3+虫草素(中剂量)+铁死亡抑制剂Ferrostatin-1(Fer-1)组和RSL3+虫草素(中剂量)+铁死亡抑制剂Liproxstatin-1 (Lip-1)组。采用0、1、5、10、15和20μmol·L^(-1)RSL3分别干预HepG2、Huh-7及HCCLM3细胞24、48以及72 h,采用细胞计数试剂盒8 (CCK-8)法检测各细胞活性,筛选RSL3最佳作用浓度和作用时间。分别采用0、50、100、200、400、600、800、1 000和1 200μmol·L^(-1)虫草素干预HepG2细胞24、48及72 h,采用CCK-8法检测细胞存活率,计算半数抑制浓度(IC50)值,筛选虫草素最佳作用浓度和作用时间。使用凋亡抑制剂Z-VAD-FMK、细胞自噬抑制剂Chloroquine (CQ)、细胞坏死性凋亡抑制剂Necrostatin-1 (Nec-1)、 Fer-1、 Lip-1、Deferasirox和四甲基哌啶氧化物(TEMPO)分别干预HepG2细胞,计算HepG2细胞存活率。2',7'-二氯荧光素二乙酸酯(DCFH-DA)荧光探针法检测各组HepG2细胞中活性氧(ROS)水平,C11 BODIPY 581/591荧光探针法检测各组HepG2细胞中脂质过氧化(LPO)水平,Fe Rho Nox-1荧光探针法检测各组HepG2细胞中亚铁离子(Fe2+)水平,试剂盒检测HepG2细胞中谷胱甘肽(GSH)和丙二醛(MDA)水平,Western blotting法检测各组HepG2细胞中铁死亡相关蛋白、核转录因子E2相关因子2 (Nrf2)和血红素氧合酶1 (HO-1)蛋白表达水平,透射电镜观察各组HepG2细胞超微结构形态表现。结果:CCK-8法,0.56μmol·L^(-1)RSL3干预细胞时,3种细胞活性差异较明显。与0μmol·L^(-1)RSL3组比较,6.4和12.8μmol·L^(-1)RSL3组3种细胞存活率均明显降低(P<0.05)。HepG2细胞的IC50值最大,因此选择HepG2细胞进行后续实验。与0μmol·L^(-1)虫草素组比较,200、400、600、800、1 000和2 000μmol·L^(-1)虫草素组HepG2细胞存活率均明显降低(P<0.05或P<0.01)。选择0.5倍IC50值(267.9μmol·L^(-1))、1倍IC50值(535.8μmol·L^(-1))和1.5倍IC50值(803.7μmol·L^(-1))分别作为低、中及高剂量虫草素组,干预时间为24 h。与对照组比较,低、中和高剂量虫草素组HepG2细胞存活率均明显降低(P<0.05或P<0.01)。与低、中和高剂量虫草素组比较,Z-VAD-FMK+低、中和高剂量虫草素组HepG2细胞存活率均明显升高(P<0.05或P<0.01),Fer-1+中和高剂量虫草素组及Lip-1+低、中和高剂量虫草素组HepG2细胞存活率均明显升高(P<0.05)。与对照组比较,RSL3组、 RSL3+低、中和高剂量虫草素组、RSL3+虫草素+Fer-1组和RSL3+虫草素+Lip-1组HepG2细胞存活率均明显降低(P<0.05或P<0.01);与RSL3组比较,RSL3+低、中和高剂量虫草素组HepG2细胞存活率均明显降低(P<0.05)。DCFH-DA荧光探针法,与对照组比较,中和高剂量虫草素组、RSL3组和RSL3+低、中和高剂量虫草素组细胞中ROS水平均明显升高(P<0.05或P<0.01);与RLS3组比较,RSL3+低、中和高剂量虫草素组HepG2细胞中ROS水平均明显升高(P<0.05或P<0.01)。C11 BODIPY 581/591荧光探针法,与对照组比较,中和高剂量虫草素组、RSL3组和RSL3+低、中和高剂量虫草素组HepG2细胞中LPO水平均明显升高(P<0.05或P<0.01);与RSL3组比较,RSL3+低、中和高剂量虫草素组HepG2细胞中LPO水平均明显升高(P<0.05或P<0.01)。Fe Rho Nox-1荧光探针法,与对照组比较,中和高剂量虫草素组、 RSL3组和RSL3+低、中和高剂量虫草素组HepG2细胞中Fe2+水平均明显升高(P<0.05或P<0.01);与RSL3组比较,RSL3+低、中和高剂量虫草素组HepG2细胞中Fe2+水平均明显升高(P<0.05或P<0.01)。与对照组比较,高剂量虫草素组、RSL3组和RSL3+低、中和高剂量虫草素组HepG2细胞中MAD水平均明显升高(P<0.05或P<0.01);与RSL3组比较,RSL3+低、中和高剂量虫草素组HepG2细胞中MAD水平均明显升高(P<0.05或P<0.01)。与对照组比较,中和高剂量虫草素组、RSL3组和RSL3+低、中和高剂量虫草素组HepG2细胞中GSH水平均明显降低(P<0.05或P<0.01);与RSL3组比较,RSL3+低、中和高剂量虫草素组HepG2细胞中GSH水平均明显降低(P<0.05)。与对照组比较,低和中剂量虫草素组HepG2细胞超微结构变化不明显,高剂量虫草素组部分细胞线粒体嵴减少,线粒体膜可见轻度肿胀和膜密度增高,线粒体膜中内膜结构轻度扭曲,RSL3组和RSL3+低、中及高剂量虫草素组均表现出铁死亡细胞超微结构变化;与RSL3组比较,RSL3+低、中和高剂量虫草素组表现为细胞线粒体膜破裂并伴有膜密度增高,线粒体膜中的内膜结构异常扭曲或扩张,线粒体嵴减少甚至消失。Western blotting法,与对照组比较,中和高剂量虫草素组HepG2细胞中FTH1和GPX4蛋白表达水平均明显降低(P<0.05或P<0.01),Nrf2和HO-1蛋白表达水平均明显降低(P<0.05或P<0.01),RSL3组和RSL3+虫草素+Fer-1组HepG2细胞中GPX4蛋白表达水平均明显降低(P<0.05或P<0.01);与RSL3组比较,RSL3+低、中和高剂量虫草素组HepG2细胞中GPX4蛋白表达水平均明显降低(P<0.05)。结论:虫草素具有明显增强RSL3诱导肝癌HepG2细胞铁死亡的作用,并能够下调HepG2细胞中Nrf2和HO-1蛋白表达。 展开更多

关键词 肝细胞癌 虫草素 铁死亡 RSL3 核因子e2相关因子2/血红素氧合酶1信号通路

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鹿茸多肽对轻度认知功能障碍大鼠学习记忆能力的改善作用及其调节Keap1/Nrf2/HO-1信号通路的机制 被引量：17

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作者 黄晓巍 刘玥欣 +5 位作者 王晋冀 许佳明 唐秋竹 林贺 任吉祥 兰天野 《吉林大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2021年第5期1215-1220,共6页

目的:观察鹿茸多肽(VAP)对轻度认知功能障碍(MCI)模型大鼠学习和记忆能力及海马组织中KELCH状ECH相关蛋白1(Keap1)/核因子E2相关因子2(Nrf2)/血红素氧合酶1(HO-1)信号通路相关蛋白表达的影响,并探讨其作用机制。方法:50只清洁级Wistar... 目的:观察鹿茸多肽(VAP)对轻度认知功能障碍(MCI)模型大鼠学习和记忆能力及海马组织中KELCH状ECH相关蛋白1(Keap1)/核因子E2相关因子2(Nrf2)/血红素氧合酶1(HO-1)信号通路相关蛋白表达的影响,并探讨其作用机制。方法:50只清洁级Wistar大鼠随机分为正常对照组、MCI组、吡拉西坦组、低剂量VAP组和高剂量VAP组,每组10只,其中吡拉西坦组灌胃500 mg·kg^(-1)吡拉西坦,低剂量VAP组大鼠灌胃200 mg·kg^(-1)VAP,高剂量VAP组大鼠灌胃300 mg·kg^(-1)VAP,灌胃给药共18 d,第18天给药2 h后,采用腹腔中注射东莨菪碱诱导并复制MCI大鼠模型。Morris水迷宫实验观察各组大鼠行为学,HE染色观察活性大鼠海马组织病理形态表现,ELISA法检测各组大鼠血清中超氧化物歧化酶(SOD)活性和丙二醛(MDA)水平,Western blotting法检测各组大鼠海马组织中Keap1、Nrf2和HO-1蛋白表达水平。结果:Morris水迷宫实验,与正常对照组比较,MCI组大鼠逃避潜伏期和行为路径明显延长(P<0.01),穿过平台位置次数和有效区停留时间明显降低(P<0.01);与MCI组比较,吡拉西坦组、低剂量VAP组和高剂量VAP组大鼠逃避潜伏期时间明显降低(P<0.01),吡拉西坦组和高剂量VAP组大鼠行为路径明显缩短(P<0.01),吡拉西坦组、低剂量VAP组和高剂量VAP组大鼠穿过平台位置次数和有效区停留时间明显升高(P<0.05或P<0.01)。HE染色,与正常对照组比较,MCI组大鼠海马组织中细胞数量明显减少,且排列方式由有序变为相对混乱;与MCI组比较,吡拉西坦组和高剂量VAP组大鼠海马组织细胞排列较整齐,形态略规则。ELISA法检测,与正常对照组比较,MCI组大鼠血清中SOD活性明显降低(P<0.01),MDA水平明显升高(P<0.01);与MCI组比较,吡拉西坦组和高剂量VAP组大鼠血清中SOD活性明显升高(P<0.01),MDA水平明显降低(P<0.01)。Western blotting法检测,与正常对照组比较,MCI组大鼠海马组织中Keap1蛋白表达水平明显升高(P<0.01),Nrf2和HO-1蛋白表达水平明显降低(P<0.05或P<0.01);与MCI组比较,吡拉西坦组、低剂量VAP组和高剂量VAP组大鼠海马组织中Keap1蛋白表达水平明显降低(P<0.01),Nrf2和HO-1蛋白表达水平明显升高(P<0.01)。结论:VAP能够改善腹腔注射东莨菪碱诱导并复制的MCI模型大鼠的学习和记忆能力,其机制可能与提高模型大鼠海马组织中Keap1、Nrf2和HO-1蛋白表达水平进而发挥抗氧化应激作用有关。 展开更多

关键词 鹿茸多肽 轻度认知功能障碍 东莨菪碱 KeLCH状eCH相关蛋白1 核因子e2相关因子2 血红素氧合酶1

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二十二碳六烯酸对人视网膜色素上皮细胞中血红素氧合酶-1表达的诱导作用 被引量：1

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作者 刘越峰 罗卫民 +1 位作者 张勇 钟晓东 《中华实验眼科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2016年第8期677-683,共7页

背景 氧化应激是年龄相关性黄斑变性发生的重要机制.研究表明,二十二碳六烯酸（DHA）在视网膜光感受细胞的发育中发挥重要作用,并可上调血红素氧合酶1（HO-1）的表达,从而发挥抗氧化效应,但DHA是否能影响人视网膜色素上皮（RPE）细胞表... 背景 氧化应激是年龄相关性黄斑变性发生的重要机制.研究表明,二十二碳六烯酸（DHA）在视网膜光感受细胞的发育中发挥重要作用,并可上调血红素氧合酶1（HO-1）的表达,从而发挥抗氧化效应,但DHA是否能影响人视网膜色素上皮（RPE）细胞表达HO-1尚未阐明. 目的 观察DHA对体外培养的RPE中HO-1表达的影响及其分子机制. 方法 对人RPE细胞系ARPE-19进行培养,分别用30、50、100和120 μmol/L DHA作用4～24 h,以不含DHA培养的细胞作为对照组.采用乳酸脱氢酶（LDH）法检测DHA对细胞的毒性;分别采用实时荧光定量PCR和Western blot法检测各组细胞中HO-1 mRNA及其蛋白的相对表达;采用比色法分析各组细胞中HO-1酶活性变化情况;采用荧光探针H2DCFDA检测细胞中活性氧簇（ROS）的相对比例,并采用免疫荧光技术检测各组培养细胞中核转录因子-E2相关因子2（Nrf2）的核转位情况;分别采用ROS抑制剂N-乙酰半胱氨酸（NAC）干预法和Nrf2小干扰RNA（siRNA）转染法作用于培养的细胞,采用Western blot法检测细胞中Nrf2蛋白的表达,并观察其对细胞中HO-1蛋白表达量的影响. 结果 0、30、50、100和120 μmol/L DHA作用于ARPE-19细胞后24 h,培养上清液中LDH漏出率的总体比较差异有统计学意义（F=8.14,P＜0.05）,其中120 μmol/L DHA作用后细胞中LDH漏出率明显高于0、30、50、100 μmol/L DHA组,差异均有统计学意义（均P＜0.05）.不同浓度DHA作用ARPE-19细胞后8h,HO-1mRNA及其蛋白的相对表达量以及HO-1的酶活性总体比较差异均有统计学意义（F=16.24,P＜0.05;F=11.34,P＜0.05;F=11.81,P＜0.05）,其中30、50、100 μmol/L DHA组细胞中HO-1 mRNA及其蛋白的相对表达量以及HO-1的酶活性均明显高于0μmol/L DHA组,差异均有统计学意义（均P＜0.05）.不同浓度DHA作用ARPE-19细胞后4h细胞内ROS相对荧光强度、细胞核Nrf2阳性细胞比例的总体比较差异均有统计学意义（F=11.08,P＜0.05;F=16.42,P＜0.05）,其中30、50和100μmol/L DHA组细胞中ROS相对荧光强度、细胞核Nrf2阳性细胞比例均明显高于0μmol/L DHA组,差异均有统计学意义（均P＜0.05）.100 μ.mol/L DHA处理条件下,NAC预处理后细胞中HO-1蛋白的相对表达量和细胞核Nrf2阳性细胞比例均明显低于单纯100μmol/L DHA组,Nrf2 siRNA转染组细胞中HO-1的相对表达量和细胞核Nrf2阳性细胞比例均明显低于空白siRNA转染组,差异均有统计学意义（均P＜0.05）. 结论 低于100 μmol/L的DHA可能通过ROS/Nrf2途径诱导RPE细胞表达HO-1,从而发挥对细胞的保护作用. 展开更多

关键词 抗氧化剂/药理 细胞保护/药物作用 氧化应激 眼色素上皮/药物作用 血红素氧合酶-1 核转录因子-e2相关因子2/代谢 活性氧簇/代谢 二十二碳六烯酸 Heme oxygenase-1

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肺炎支原体LAMPs经PI3K/Nrf2诱导人单核细胞表达HO-1

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作者 刘艳 刘丹 朱翠明 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第4期348-352,共5页

目的探讨肺炎支原体（Mycoplasma pneumoniae，Mp）脂质相关膜蛋白（lipid-associated membrane protein，LAMPs）对人单核细胞表达血红素氧合酶-1（heme oxygenase-1，HO-1）的影响，并探讨可能的调控机制。方法体外培养THP-1细胞，用... 目的探讨肺炎支原体（Mycoplasma pneumoniae，Mp）脂质相关膜蛋白（lipid-associated membrane protein，LAMPs）对人单核细胞表达血红素氧合酶-1（heme oxygenase-1，HO-1）的影响，并探讨可能的调控机制。方法体外培养THP-1细胞，用不同浓度的LAMPs作用后，分别采用realtime-PCR和Western blot检测H0—1mRNA和蛋白的表达。同时采用不同浓度的放线菌素D（ActD）和放线菌酮（CHX）预处理细胞，观察其对H0-1表达的影响，以证实HO-1的表达是否通过转录和翻译水平；提取LAMPs作用前后的核蛋白，凝胶迁移率实验检测Nrf2的核转位、Westernblot检测Akt的磷酸化情况；同时采用P13K抑制剂LY294002处理细胞，观察其对LAMPs诱导Nrig核转位及HO-1表达的影响；最后采用siRNA干扰Nrf2表达，以证实Nrf2是否参与调控H0-1表达。结果（1）0～5μg／mLLAMPs能以剂量依赖性方式诱导THP-1表达HO-1 mRNA和蛋白；（2）5μg／mLLAMPs能诱导THP-1细胞Akt磷酸化，并能增强其DNA结合活性；P13K抑制剂LY294002处理后，可明显抑制LAMPs诱导的HO-1表达和Nrf2核转位；（3）干扰Nrf2表达后，可明显下调LAMPs诱导THP-1细胞表达HO-1。结论LAMPs可诱导THP-1细胞表达HO-1，其机制可能与P13K／Nrf2通路有关。 展开更多

关键词 脂质相关膜蛋白 血红素氧合酶-1 核因子相关因子-2

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白藜芦醇通过Nrf2/HO-1通路对高糖诱导的视网膜神经节细胞损伤的保护作用机制 被引量：4

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作者 胡寅 崔莎 +2 位作者 李卓君 胡琴 邱志方 《世界科学技术-中医药现代化》 CSCD 北大核心 2022年第12期4681-4689,共9页

目的 探讨白藜芦醇通过Nrf2/HO-1通路对高糖诱导的视网膜神经节细胞损伤的影响。方法将野生型C57BL/6小鼠随机分为3组:对照组、高糖组和RES组,每组20只。Nrf2敲除的C57BL/6小鼠为RES+Nrf2敲除组,20只。建立糖尿病视网膜病变小鼠模型,HE... 目的 探讨白藜芦醇通过Nrf2/HO-1通路对高糖诱导的视网膜神经节细胞损伤的影响。方法将野生型C57BL/6小鼠随机分为3组:对照组、高糖组和RES组,每组20只。Nrf2敲除的C57BL/6小鼠为RES+Nrf2敲除组,20只。建立糖尿病视网膜病变小鼠模型,HE染色观察RES对视网膜组织的影响;流式细胞仪检测视网膜神经节细胞凋亡率;ELISA法检测超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)和8-羟基脱氧鸟苷(8-OHdG)的含量;Western blot检测Nrf2和Ho-1蛋白表达。结果 与高糖组相比,RES组可以减轻高糖诱导引起的损伤;而RES+Nrf2敲除组较RES组相比,视网膜神经节细胞层(GCL)、内核层(INL)有所减少,外核层(ONL)厚度有所降低。RES组视网膜厚度显著高于高糖组(P<0.05),RES+Nrf2敲除组视网膜厚度相对低于RES组(P<0.05)。RES组中的神经节数量明显高于高糖组(P<0.05),RES+Nrf2敲除组中的神经节数量显著低于RES组(P<0.05)。RES组中的凋亡率明显低于高糖组(P<0.05),RES+Nrf2敲除组中的凋亡率显著高于RES组(P<0.05)。高糖组中的Bax和Cleaved Caspase3蛋白表达明显高于对照组(P<0.05),RES组中的Bax和Cleaved Caspase3蛋白表达明显低于高糖组(P<0.05),RES+Nrf2敲除组中的Bax和Cleaved Caspase3蛋白表达显著高于RES组(P<0.05);而高糖组中的Bcl2蛋白表达明显低于对照组(P<0.05),RES组中的Bcl2蛋白表达明显高于高糖组(P<0.05),RES+Nrf2敲除组中的Bcl2蛋白表达显著低于RES组(P<0.05)。RES组中的SOD水平明显高于高糖组(P<0.05),RES+Nrf2敲除组中的SOD水平显著低于RES组(P<0.05);而RES组中的MDA和8-OHdG水平明显低于高糖组(P<0.05),RES+Nrf2敲除组中的MDA和8-OHdG水平显著高于RES组(P<0.05)。此外,RES组中Nrf2和Ho-1的蛋白表达明显高于高糖组(P<0.01),RES+Nrf2敲除组Nrf2和Ho-1的蛋白表达显著低于RES组(P<0.05)。结论 白藜芦醇对糖尿病性视网膜病变小鼠视网膜和神经节细胞具有一定的保护作用,白藜芦醇通过激活Nrf2和Ho-1抑制氧化应激,从而抑制神经节细胞的凋亡,保护糖尿病性视网膜病变视网膜的完整性。 展开更多

关键词 白藜芦醇 核因子e2相关因子2 血红素氧合酶1 高糖 视网膜神经节细胞损伤

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S1PR5激动剂减轻H2O2诱导的脑微血管内皮细胞高通透性及氧化应激损伤 被引量：2

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作者 李星阅 任自敬 +2 位作者 王越 樊瑞雪 周佩洋 《医学研究生学报》 CAS 北大核心 2022年第8期820-826,共7页

目的鞘氨醇⁃1⁃磷酸酯受体5(S1PR5)在急性缺血性卒中(AIS)血脑屏障氧化应激损伤中的作用及机制尚不清楚。文章旨在探讨S1PR5在小鼠脑微血管内皮细胞(bEnd.3)氧化应激损伤中的作用及分子机制。方法将bEnd.3细胞分为对照组、H_(2)O_(2)组、... 目的鞘氨醇⁃1⁃磷酸酯受体5(S1PR5)在急性缺血性卒中(AIS)血脑屏障氧化应激损伤中的作用及机制尚不清楚。文章旨在探讨S1PR5在小鼠脑微血管内皮细胞(bEnd.3)氧化应激损伤中的作用及分子机制。方法将bEnd.3细胞分为对照组、H_(2)O_(2)组、H_(2)O_(2)+5μmol/L A971432(S1PR5特异性选择性激动剂)组、H_(2)O_(2)+10μmol/L A971432组、H_(2)O_(2)+20μmol/L A971432组。用CCK⁃8法检测细胞活力改变;FITC⁃Dextran渗透法检测血管内皮细胞通透性;Western Blot检测S1PR5、ZO⁃1、VE⁃Cadherin、Occludin、Bax、Bcl2、Caspase⁃3、p⁃Erk1/2、Erk1/2、Nrf2、HO⁃1、SOD1和SOD2的蛋白表达水平;免疫荧光观察ZO⁃1的荧光强度;光学显微镜下观察细胞形态变化;DCFH⁃DA探针法检测细胞活性氧水平。结果Western blot结果显示,与对照组bEnd.3细胞的S1PR5蛋白表达(1.00±0.01)相比,H_(2)O_(2)组(0.59±0.03)明显降低(P<0.01)。与对照组相比,H_(2)O_(2)显著增加血管内皮细胞通透性,减少ZO⁃1、VE⁃Cadherin、Occludin、Nrf2、HO⁃1、SOD1和SOD2蛋白表达以及ZO⁃1荧光强度,降低细胞活力,增加MMP⁃9、Bax/Bcl2、Caspase⁃3、p⁃Erk1/2/Erk1/2的蛋白表达和细胞内总活性氧(P<0.05)。与H_(2)O_(2)组[(75.33±3.76)%]相比,H_(2)O_(2)+10、20μmol/L A971432组[(93.34±0.49)%,(100.60±7.29)%]可以明显逆转H_(2)O_(2)诱导的细胞活力下降(P<0.05)。与H_(2)O_(2)组相比,H_(2)O_(2)+5、10、20μmol/L A971432组的血管内皮细胞通透性显著降低,ZO⁃1、VE⁃Cadherin、Occludin、Nrf2、HO⁃1、SOD1和SOD2蛋白表达和ZO⁃1荧光强度增加,细胞活力增加,MMP⁃9、Bax/Bcl2、Caspase⁃3、p⁃Erk1/2/Erk1/2蛋白表达和细胞内总活性氧降低(P<0.05)。结论A971432选择性激动S1PR5可减轻H_(2)O_(2)诱导的bEnd.3内皮细胞高通透性及凋亡,并可能通过激活Nrf2/HO⁃1通路发挥抗氧化损伤作用。与H_(2)O_(2)组相比,H_(2)O_(2)+10、20μmol/L A971432组可以明显逆转H_(2)O_(2)诱导的细胞活力下降(P<0.05)。 展开更多

关键词 鞘氨醇-1-磷酸酯受体5 氧化应激 血管内皮通透性 细胞外调节蛋白激酶 核因子e2相关因子2 血红素氧合酶

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虾青素保护PC-3细胞免受H_2O_2氧化应激的作用机制 被引量：7

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作者 倪晓锋 于海宁 +2 位作者 王姗姗 张程程 沈生荣 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2018年第9期154-162,共9页

目的:研究虾青素对过氧化氢诱导PC-3细胞氧化应激的保护作用,探索其信号通路机制。方法:建立H2O2氧化应激模型,采用不同浓度虾青素预处理PC-3细胞,检测细胞存活率、细胞凋亡、活性氧(reactive oxygen species,ROS)水平、B淋巴细胞瘤-2(B... 目的:研究虾青素对过氧化氢诱导PC-3细胞氧化应激的保护作用,探索其信号通路机制。方法:建立H2O2氧化应激模型,采用不同浓度虾青素预处理PC-3细胞,检测细胞存活率、细胞凋亡、活性氧(reactive oxygen species,ROS)水平、B淋巴细胞瘤-2(B-cell lymphoma-2,Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bcl-2-associated X protein,Bax)、活化半胱天冬酶-3表达及丝裂原活化蛋白激酶-核因子E2相关基因2-血红素氧合酶1(mitogen-activated protein kinases nuclear factor erythroid-2-related factor 2-heme oxygenase 1,MAPK-Nrf2-HO-1)通路的变化。结果:20μmol/L虾青素预处理显著提高H2O2所降低的细胞存活率、降低ROS水平(P<0.05),同时通过抑制Bcl-2/Bax比率下降及半胱天冬酶-3的激活,从而使细胞凋亡率从51.4%降低至14.8%,进一步研究发现虾青素能够促进Nrf2磷酸化,并促进HO-1的表达,呈现浓度依赖性。通过细胞外调节蛋白激酶(extracellular regulated protein kinases,ERK)抑制剂(U0126)和Akt抑制剂(LY294002)预处理,发现当ERK和磷脂酰肌醇激酶/蛋白激酶B(phosphoinositide 3-kinase/protein kinase B,PI3K/Akt)通路被抑制后,Nrf2表达降低,表明HO-1上调受上游ERK和胞内PI3K/Akt通路的调控。在对MAPK途径对细胞毒性影响的研究中,ERK通路被抑制后细胞存活率显著下降,而c-Jun氨基末端激酶(c-Jun N-terminal kinase,JNK)和p38 MAPK通路被抑制后并不影响其保护作用,表明虾青素抑制细胞存活率下降是通过MAPK途径中的ERK通路,而不是JNK和p38通路。结论:虾青素预处理PC-3细胞可以减轻H2O2诱导的氧化应激,维持细胞生理活性。 展开更多

关键词 虾青素 氧化应激 PC-3细胞 丝裂原活化蛋白激酶途径 核因子e2相关基因2 血红素氧合酶1

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N-乙酰半胱氨酸对慢性肝损伤大鼠Nrf2及HO-1和γ-GCS表达的影响 被引量：4

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作者 蔡兆斌 庄让笑 +6 位作者 潘旭旺 方红英 黄玮玮 邵益丹 张建康 史婷婷 刘寿荣 《中国药理学与毒理学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2016年第11期1136-1141,共6页

目的观察小剂量N-乙酰半胱氨酸(NAC)注射液对慢性肝损伤大鼠核因子相关因子2(Nrf2)及下游分子血红素氧合酶1(HO-1)和γ谷氨酸-半胱氨酸合成酶(γ-GCS)的影响。方法雄性SD大鼠sc给予25%CCl4橄榄油溶液(1 m L·kg^(-1)),每周3次,连续... 目的观察小剂量N-乙酰半胱氨酸(NAC)注射液对慢性肝损伤大鼠核因子相关因子2(Nrf2)及下游分子血红素氧合酶1(HO-1)和γ谷氨酸-半胱氨酸合成酶(γ-GCS)的影响。方法雄性SD大鼠sc给予25%CCl4橄榄油溶液(1 m L·kg^(-1)),每周3次,连续4周。4周末,将造模成功的大鼠分别ip给予NAC 45,90和180 mg·kg^(-1)及阳性对照谷胱甘肽(GSH)54 mg·kg^(-1),每日1次连续4周。检测血清中谷丙转氨酶(GPT)、谷草转氨酶(GOT)活性及肝组织中超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、GSH、羟脯氨酸(Hyp)含量或活性;HE染色法观察肝组织病理变化;免疫组化检测肝组织Nrf2,HO-1和γ-GCS蛋白表达。结果与正常对照组相比,模型组大鼠血清GPT,GOT,MDA和Hyp明显升高(P<0.01),Nrf2,HO-1和γ-GCS蛋白表达及SOD活性和GSH含量无明显变化;模型组肝细胞广泛脂肪变性,肝组织可见许多大小不等的圆形空泡,部分肝细胞水肿,汇管区伴炎症细胞灶性浸润;与模型组相比,NAC各治疗组大鼠血清GPT和GOT活性明显降低(P<0.01),肝组织SOD活性、GSH和Hyp含量下降(P<0.01,P<0.05),Nrf2,HO-1和γ-GCS蛋白表达增加(P<0.01,P<0.05)。与阳性对照组比较,NAC 45,90和180 mg·kg^(-1)组肝组织Hyp明显降低(P<0.01),NAC 45 mg·kg^(-1)组肝组织Nrf2蛋白表达明显升高(P<0.01)。与NAC 45 mg·kg^(-1)组比较,90和180 mg·kg^(-1)组Nrf2蛋白表达较低(P<0.01)。结论小剂量NAC可能通过调节Nrf2及下游因子HO-1和γ-GCS的表达发挥抗氧化应激作用进而发挥防治慢性肝损伤进展的目的。 展开更多

关键词 乙酰半胱氨酸 慢性肝损伤 核因子NF-e2相关因子2 血红素氧合酶1 γ谷氨酸-半胱氨酸合成酶

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基于铁死亡途径探讨针刺联合凉血散瘀汤对脑卒中大鼠的治疗作用

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作者 江娜 曹奕 +4 位作者 周婷 贾泽坤 杨娅 蒋雷雷 谭辉 《世界中医药》 北大核心 2025年第10期1734-1740,共7页

目的:探讨针刺联合凉血化瘀汤对缺血性脑卒中大鼠的协同治疗作用及相关机制。方法:将SD大鼠按照简单随机法分为假手术组、模型组(构建缺血性脑卒中模型)、针刺组(在模型的基础上给予针刺治疗)、药物组(在模型的基础上给予凉血散瘀汤治疗... 目的:探讨针刺联合凉血化瘀汤对缺血性脑卒中大鼠的协同治疗作用及相关机制。方法:将SD大鼠按照简单随机法分为假手术组、模型组(构建缺血性脑卒中模型)、针刺组(在模型的基础上给予针刺治疗)、药物组(在模型的基础上给予凉血散瘀汤治疗)、联合组(在模型的基础上给予针刺联合凉血散瘀汤治疗),对大鼠进行神经功能缺损评分和神经行为学评分,并检测脑梗死体积,缺血皮质区铁含量、氧化指标水平、铁死亡相关指标表达。结果:治疗后,与假手术组比较,模型组大鼠神经学评分、脑梗死体积、铁水平、丙二醛(MDA)表达均显著升高,谷胱甘肽过氧化酶4(GPX4)、核因子E2相关因子2(Nrf2)、血红素氧合酶1(HO-1)表达均显著降低(均P<0.05);与模型组比较,针刺组、药物组、联合组大鼠神经学评分、脑梗死体积、铁水平、MDA表达均显著降低,GPX4、Nrf2、HO-1表达均显著升高(均P<0.05);分别与针刺组、药物组比较,联合组大鼠神经学评分、脑梗死体积、铁水平、MDA表达均显著降低,GPX4、Nrf2、HO-1表达均显著升高(均P<0.05)。结论:针刺联合凉血散瘀汤可能介导Nrf2/HO-1通路抑制铁死亡改善缺血性脑卒中大鼠症状。 展开更多

关键词 针刺 凉血散瘀汤 缺血性脑卒中 铁死亡 氧化应激 协同作用 核因子e2相关因子2/血红素氧合酶1通路

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活化Nrf2缓解热应激致肉鸡心肌细胞氧化损伤的研究 被引量：1

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作者 武亚南 石玉祥 +4 位作者 张永英 刘冠慧 宋伟光 钟翠红 王永霞 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2022年第9期3343-3352,共10页

【目的】探究活化核因子红系2相关因子2(nuclear factor erythroid 2-related factor 2,Nrf2)对热应激肉鸡心肌细胞氧化损伤的缓解作用及其机制。【方法】利用差速贴壁法结合化学纯化法制备肉鸡原代心肌细胞。将心肌细胞随机分为对照组(... 【目的】探究活化核因子红系2相关因子2(nuclear factor erythroid 2-related factor 2,Nrf2)对热应激肉鸡心肌细胞氧化损伤的缓解作用及其机制。【方法】利用差速贴壁法结合化学纯化法制备肉鸡原代心肌细胞。将心肌细胞随机分为对照组(Control组)、热应激组(HS组)和Nrf2激活剂叔丁基对苯二酚(tert-butylhydroquinone, TBHQ)预处理热应激组(TBHQ+HS组)。对照组心肌细胞正常培养不做任何处理,HS组心肌细胞置于高温(43℃)培养箱处理2 h, TBHQ+HS组心肌细胞用50μmol/L TBHQ预处理12 h,再进行热应激处理。采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法测定各组心肌细胞相对活力;用比色法测定超氧化物歧化酶(SOD)活性、丙二醛(MDA)含量和细胞培养液中乳酸脱氢酶(LDH)活性;用实时荧光定量PCR检测Nrf2、血红素氧合酶-1(heme oxygenase 1,HO-1)、谷氨酰半胱氨酸连接酶(glutamate cysteine ligase catalytic, GCLC)和NAD(P)H∶醌氧化还原酶1(NAD(P)H∶quinone oxidoreductase 1,NQO1) mRNA表达水平;用蛋白质免疫印迹法(Western blotting)检测Nrf2总蛋白和HO-1蛋白表达量。【结果】与对照组相比,热应激组肉鸡原代心肌细胞形态发生改变,出现空泡网状结构,心肌细胞的相对活力和SOD活性极显著降低(P<0.01),MDA含量极显著升高(P<0.01),细胞培养液中LDH活性极显著升高(P<0.01),Nrf2/抗氧化反应原件(ARE)信号通路下游NQO1和GCLC mRNA表达升高,但差异不显著(P>0.05),Nrf2和HO-1 mRNA表达显著增加(P<0.05),但Nrf2总蛋白和HO-1蛋白表达量增加不显著(P>0.05);与热应激组相比,TBHQ预处理热应激组心肌细胞内空泡网状结构减少,心肌细胞的相对活力显著升高(P<0.05),SOD活性极显著升高(P<0.01),MDA含量显著降低(P<0.05),细胞培养液中LDH活性极显著降低(P<0.01),Nrf2/ARE信号通路下游NQO1和GCLC基因的表达水平显著上调(P<0.05),Nrf2基因和总蛋白表达量显著增加(P<0.05),HO-1基因和蛋白表达量极显著增加(P<0.01)。【结论】活化Nrf2可以上调Nrf2/ARE信号通路下游相关抗氧化基因和蛋白表达,提高热应激肉鸡心肌细胞的抗氧化能力,缓解热应激诱导的氧化损伤,提示Nrf2可能是肉鸡心肌细胞抗热应激氧化损伤的有效分子靶点。 展开更多

关键词 热应激 肉鸡 心肌细胞 核因子红系2相关因子2(Nrf2) 血红素氧合酶-1(HO-1)

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叶酸对铅诱导的大鼠肺脏中氧化应激相关蛋白和内质网应激相关蛋白表达的影响 被引量：2

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作者 李宁 赵雅丽 +8 位作者 程永霞 沈玥 宋莲军 黄现青 乔明武 曹帅 张迪 赵紫薇 台佳佳 《动物营养学报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第9期4318-4326,共9页

本试验旨在研究叶酸对铅诱导的大鼠肺脏中氧化应激相关蛋白核因子E2相关因子2(Nrf2)、血红素氧合酶-1(HO-1)与内质网应激相关蛋白C/EBP同源蛋白(CHOP)、葡萄糖调节蛋白78(GRP78)表达的影响,探讨叶酸对铅暴露导致的肺脏损伤的干预作用。... 本试验旨在研究叶酸对铅诱导的大鼠肺脏中氧化应激相关蛋白核因子E2相关因子2(Nrf2)、血红素氧合酶-1(HO-1)与内质网应激相关蛋白C/EBP同源蛋白(CHOP)、葡萄糖调节蛋白78(GRP78)表达的影响,探讨叶酸对铅暴露导致的肺脏损伤的干预作用。将32只成年无特定病原体(SPF)级雄性SD大鼠按体重一致原则平均分成4组(n=8):对照组(C组,自由饮水+1 mL去离子水灌胃)、染铅组(L组,自由饮0.2%的醋酸铅溶液+1 mL去离子水灌胃)、干预组(I组,自由饮0.2%的醋酸铅溶液+1 mL叶酸悬浊液灌胃)、叶酸组(F组,自由饮水+1 mL叶酸悬浊液灌胃)。叶酸悬浊液按照0.4 mg/kg BW的灌胃剂量配制,各组大鼠每天灌胃1次,连续灌胃14 d后取肺脏组织,用免疫荧光法测定Nrf2、HO-1、CHOP、GRP78这4种蛋白的表达水平。结果表明:与C组相比,L组、I组和F组的初体重、末体重、日增重、净增重、肺脏指数无显著变化(P>0.05);L组、I组和F组肺脏中CHOP和GRP78蛋白的表达水平显著升高(P<0.05);L组和I组肺脏中HO-1蛋白的表达水平显著升高(P<0.05),Nrf2蛋白表达水平无显著变化(P>0.05);F组肺脏中HO-1蛋白的表达水平显著降低(P<0.05),Nrf2蛋白表达水平无显著变化(P>0.05)。与L组相比,I组和F组的初体重、末体重、日增重、净增重、肺脏指数差异不显著(P>0.05);I组、F组肺脏中HO-1和CHOP蛋白的表达水平显著降低(P<0.05),Nrf2和GRP78蛋白的表达水平均无显著变化(P>0.05)。由以上结果可知:1)铅暴露使大鼠肺脏中HO-1、CHOP蛋白的表达水平升高,而叶酸干预后降低了HO-1、CHOP蛋白的表达水平;2)铅暴露引起的大鼠肺脏氧化应激、内质网应激分别与Nrf2/HO-1、GRP78/CHOP通路密切相关,叶酸对HO-1、CHOP蛋白的表达有直接影响;3)0.4 mg/kg BW的叶酸对0.2%醋酸铅暴露引起的氧化应激和内质网应激而造成的大鼠肺脏损伤具有一定的拮抗作用。 展开更多

关键词 叶酸 铅 大鼠 肺脏 核因子e2相关因子2 血红素氧合酶-1 C/eBP同源蛋白 葡萄糖调节蛋白78

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柴胡皂苷d对H2O2诱导的肝细胞损伤的保护作用及其机制 被引量：7

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作者 黄小凤 刘泽干 +3 位作者 雷攀 孟忠吉 王莉博 杜士明 《中国药理学与毒理学杂志》 CAS 北大核心 2021年第3期169-175,共7页

目的探讨柴胡皂苷d(SSd)对H_(2)O_(2)诱导L02细胞保护作用及机制。方法①L02细胞分别用SSd 0.5,1和2μmol·L^(-1)预处理6 h,加H_(2)O_(2)800μmol·L^(-1)处理24 h,同时设细胞对照和H_(2)O_(2)800μmol·L^(-1)(模型)组;MT... 目的探讨柴胡皂苷d(SSd)对H_(2)O_(2)诱导L02细胞保护作用及机制。方法①L02细胞分别用SSd 0.5,1和2μmol·L^(-1)预处理6 h,加H_(2)O_(2)800μmol·L^(-1)处理24 h,同时设细胞对照和H_(2)O_(2)800μmol·L^(-1)(模型)组;MTT法检测细胞存活率,生化检测法检测细胞上清液中谷草转氨酶(GOT)和谷丙转氨酶(GPT)活性及丙二醛(MDA)和乳酸脱氢酶(LDH)含量。②L02细胞分别用SSd 2μmol·L^(-1)和特丁基对苯二酚(tBHO)50μmol·L^(-1)预处理6 h,加H_(2)O_(2)800μmol·L^(-1)处理24 h,同时设细胞对照、模型和单独SSd 2μmol·L^(-1)组;荧光探针分析法检测细胞内活性氧(ROS)积累,免疫荧光法检测核因子E2相关因子2(Nrf2)核转位水平,Western印迹法检测Nrf2和血红素氧合酶1(HO-1)蛋白表达水平。结果①MTT结果显示,与细胞对照组相比,模型组细胞存活率显著下降(P<0.05),与模型组相比,模型+SSd 1和2μmol·L^(-1)组细胞存活率显著升高(P<0.05);生化检测结果显示,与细胞对照组相比,模型组GPT和GOT活性及MDA和LDH含量均显著升高(P<0.05);与模型组相比,模型+SSd 2μmol·L^(-1)组GPT和GOT活性及MDA和LDH含量均显著降低(P<0.05)。②ROS检测结果显示,与细胞对照组相比,模型组ROS显著升高(P<0.05);与模型组相比,模型+SSd 2μmol·L^(-1)组显著降低(P<0.05);免疫荧光结果显示,模型+SSd 2μmol·L^(-1)组Nrf2主要定位于细胞核中;Western印迹结果显示,模型组细胞核及细胞质中的Nrf2蛋白及HO-1蛋白表达水平没有显著提升;与模型组相比,模型+SSd 2μmol·L^(-1)组以及模型+tBHQ 50μmol·L^(-1)组Nrf2和HO-1蛋白表达水平显著增强(均P<0.05);与细胞对照组及模型组相比,单独SSd 2μmol·L^(-1)组可以显著提高L02细胞中Nrf2和HO-1蛋白表达(P<0.05)。结论SSd能有效保护H_(2)O_(2)诱导的L02细胞损伤,其机制与降低细胞内ROS含量,上调Nrf2和HO-1蛋白表达有关。 展开更多

关键词 柴胡皂苷-D 非酒精性脂肪性肝病 核因子e2相关因子2 血红素氧合酶1 氧化应激

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