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硫化氢通过NCOA4介导的铁自噬调控铁死亡而减轻CSE诱导的肺泡上皮细胞损伤 被引量：7
1
作者 王莹 廖莎 +4 位作者 潘子涵 蒋思敏 樊静 陈亚红 张静 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2022年第1期33-39,共7页
目的:探究硫化氢(hydrogen sulfide,H2S)对烟草烟雾提取物(cigarette smoke extract,CSE)诱导的肺泡上皮细胞损伤的作用及其机制。方法:使用肺泡上皮BEAS-2B细胞进行实验,细胞经不同浓度(0、1%、3%、5%、7%和9%)的CSE处理24 h,通过Weste... 目的:探究硫化氢(hydrogen sulfide,H2S)对烟草烟雾提取物(cigarette smoke extract,CSE)诱导的肺泡上皮细胞损伤的作用及其机制。方法:使用肺泡上皮BEAS-2B细胞进行实验,细胞经不同浓度(0、1%、3%、5%、7%和9%)的CSE处理24 h,通过Western blot法检测环加氧酶2(cyclooxygenase 2,COX2)和谷胱甘肽过氧化物酶4(glutathione peroxidase 4,GPX4)的表达量,CCK-8法检测细胞活力,以确定CSE的最适浓度。按照不同干预因素将细胞分为对照组、CSE组、CSE+NaHS(100μmol/L)组、CSE+NaHS(200μmol/L)组、CSE+NaHS(400μmol/L)组及单纯NaHS(400μmol/L)组进行后续实验。H2S供体NaHS预处理30 min后加入CSE,CCK-8法检测细胞活力的变化,铁离子检测试剂盒测定活性铁含量,共聚焦荧光显微镜采集脂质活性氧(lipid reactive oxygen species,Lip ROS)图片,流式细胞术测定细胞内总活性氧(reactive oxygen species,ROS)及Lip ROS含量,谷胱甘肽过氧化物酶(glutathione peroxidase,GSH-Px)及丙二醛(malondialdehyde,MDA)检测试剂盒测定各自含量,Western blot检测核受体辅激活因子4(nuclear receptor coactivator 4,NCOA4)、铁蛋白重链1(ferritin heavy chain 1,FTH1)、COX2和GPX4的表达情况。结果:Western blot检测结果显示,随着CSE浓度的增加,GPX4表达水平逐渐降低,COX2表达水平逐渐升高,细胞活力也逐渐降低但在CSE浓度为5%时显著降低(P<0.01),故选择5%浓度处理24 h作为后续CSE的刺激条件。与单纯CSE刺激组相比,NaHS(尤其是中、高浓度)预处理使细胞活力显著增加(P<0.05),抗氧化酶GSH-Px含量和GPX4表达水平显著增加(P<0.05),NCOA4、FTH1和COX2表达量及Fe2+含量显著降低(P<0.05),ROS和Lip ROS水平及MDA含量显著降低(P<0.05)。结论:H2S可通过抑制NCOA4介导的铁自噬-铁死亡减轻CSE诱导的肺泡上皮细胞损伤。 展开更多
关键词 肺泡上皮细胞 烟草烟雾提取物 硫化氢 核受体辅激活因子4 铁自噬 铁死亡
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土贝母苷乙通过诱导铁自噬抑制非小细胞肺癌细胞增殖 被引量：1
2
作者 杨翘伊 张春云 +6 位作者 孙硕 李文敏 黄鑫 梁艳 张伟伟 李怀永 杨清竹 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2024年第10期1834-1843,共10页
目的:探讨土贝母苷乙(tubeimosideⅡ,TBMSⅡ)诱导非小细胞肺癌细胞铁死亡的作用及潜在的分子机制。方法:体外培养非小细胞肺癌细胞H460,MTT法检测不同TBMSⅡ剂量处理的H460细胞的存活率,根据药物对细胞的抑制率的计算结果,选择细胞存活... 目的:探讨土贝母苷乙(tubeimosideⅡ,TBMSⅡ)诱导非小细胞肺癌细胞铁死亡的作用及潜在的分子机制。方法:体外培养非小细胞肺癌细胞H460,MTT法检测不同TBMSⅡ剂量处理的H460细胞的存活率,根据药物对细胞的抑制率的计算结果,选择细胞存活率50%的TBMSⅡ剂量为参照进行后续实验;Transwell实验检测细胞的迁移能力,克隆形成实验检测TBMSⅡ对H460细胞增殖的影响。流式细胞仪及荧光显微镜检测H460细胞中脂质活性氧(lipid reactive oxygen species,lipid ROS)水平的变化;试剂盒检测细胞中谷胱甘肽(glutathione,GSH)、总抗氧能力(T-AOC)、丙二醛(MDA)和Fe2+水平;Western blot法检测细胞中谷胱甘肽过氧化物酶4(glutathione peroxidase 4,GPX4)、溶质载体家族7成员11(solute carrier family 7 membrane 11,SLC7A11)、铁蛋白重链1(ferritin heavy chain 1,FTH1)、核受体辅激活因子4(nuclear receptor coactivator 4,NCOA4)、自噬蛋白P62和微管相关蛋白1轻链3(microtubule-associated protein 1 light chain 3,LC3)的表达;透射电镜检测细胞中线粒体结构的变化;免疫荧光实验检测细胞中LC3分别与FTH1和NCOA4的共定位,同时检测LC3和NCOA4与溶酶体的共定位。结果:与对照组比较,随着TBMSⅡ药物浓度增大,H460细胞的存活率、迁移能力以及克隆形成数量逐渐降低且细胞内部出现空泡;H460细胞中加入TBMSⅡ作用后,细胞中GSH和T-AOC水平降低而MDA水平升高,并且细胞中抗氧化蛋白SLC7A11和GPX4蛋白表达下降;H460细胞中的lipid ROS水平以及Fe2+随着TBMSⅡ浓度的升高而升高,而TBMSⅡ诱导的细胞死亡能够被铁死亡抑制剂Fer-1所逆转;自噬标志蛋白LC3Ⅱ/LC3 I和P62的水平随着TBMSⅡ浓度的增加而升高,且TBMSⅡ对H460细胞的线粒体形态产生影响,并且随着TBMSⅡ浓度的增加细胞中线粒体荧光强度降低;H460细胞中NCOA4蛋白的表达随着TBMSⅡ浓度增加而增加,但FTH1蛋白表达则随着TBMSⅡ浓度的增加而降低;细胞中LC3Ⅱ/FTH1以及LC3Ⅱ/NCOA4的结合能力随着TBMSⅡ浓度的增加而增强;随着TBMSⅡ浓度的增加细胞中LC3Ⅱ以及FTH1与溶酶体结合能力增强。结论:TBMSⅡ通过诱导铁自噬抑制非小细胞肺癌的增殖。 展开更多
关键词 土贝母苷乙 非小细胞肺癌 核受体辅激活因子4 铁自噬 铁死亡
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铁蛋白自噬在癌症发生发展中作用的研究进展 被引量：6
3
作者 闻照凤 李延莉 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2022年第7期1340-1344,共5页
铁蛋白自噬是细胞内的铁蛋白被核受体辅激活因子4(nuclear receptor coactivator 4,NCOA4)特异性识别后通过自噬体运输至溶酶体中进行降解释放游离Fe^(2+)的过程。铁蛋白自噬通过调节细胞内的铁含量,进而参与细胞生长、增殖、分化、凋... 铁蛋白自噬是细胞内的铁蛋白被核受体辅激活因子4(nuclear receptor coactivator 4,NCOA4)特异性识别后通过自噬体运输至溶酶体中进行降解释放游离Fe^(2+)的过程。铁蛋白自噬通过调节细胞内的铁含量,进而参与细胞生长、增殖、分化、凋亡等多个重要生理过程,因此必须受到严格的调控,以避免在上述生理过程中出现铁稳态失衡。 展开更多
关键词 铁蛋白自噬 铁蛋白 核受体辅激活因子4 癌症
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