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NR2F2过表达对人卵巢癌SKOV3细胞生物学行为的影响
1
作者 张硕 夏云秀 +6 位作者 陈微微 董洪亮 崔冰洁 刘翠兰 刘志强 王飞 杜静 《吉林大学学报(医学版)》 北大核心 2025年第1期58-67,共10页
目的:探讨核受体亚家族2F组成员2(NR2F2)对人卵巢癌SKOV3细胞生物学行为的影响,并阐明其分子机制,为卵巢癌的临床治疗提供新的思路。方法:采用基因表达谱交互式分析(GEPIA)数据库分析卵巢组织中NR2F2基因表达水平,并分析其与卵巢癌患者... 目的:探讨核受体亚家族2F组成员2(NR2F2)对人卵巢癌SKOV3细胞生物学行为的影响,并阐明其分子机制,为卵巢癌的临床治疗提供新的思路。方法:采用基因表达谱交互式分析(GEPIA)数据库分析卵巢组织中NR2F2基因表达水平,并分析其与卵巢癌患者临床预后的相关性。将人卵巢癌SKOV3细胞分为对照组和NR2F2过表达组(NR2F2 OE组),待细胞密度达到70%时,分别转染mCherry对照病毒和NR2F2 OE过表达病毒,48 h后通过嘌呤霉素(puro)筛选稳定转染的SKOV3细胞系。采用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)法和Western blotting法检测2组细胞转染效率,RT-qPCR法检测2组细胞中NR2F2和性别决定区Y-box 2(SOX2)mRNA表达水平,Western blotting法检测2组细胞中NR2F2、SOX2、三磷酸腺苷结合转运蛋白G超家族成员2(ABCG2)和程序性细胞死亡配体1(PD-L1)蛋白表达水平。CCK-8法检测2组细胞增殖活性,细胞划痕实验检测2组细胞迁移率,Transwell小室实验检测2组穿膜细胞数,成球实验检测2组细胞成球数,外周血单核细胞(PBMCs)杀伤肿瘤细胞活性实验检测2组存活肿瘤细胞的相对密度,CCK-8法检测紫杉醇(PTX)和卡铂(CBP)对2组细胞的半数抑制浓度(IC_(50))。结果:与正常卵巢组织比较,卵巢肿瘤组织中NR2F2 mRNA表达水平降低(P<0.05),并随卵巢肿瘤临床病理分级提高而降低;NR2F2 mRNA表达水平较高的患者临床预后较好。成功构建过表达NR2F2的SKOV3细胞,与对照组比较,NR2F2 OE组细胞中NR2F2 mRNA和蛋白表达水平均明显升高(P<0.001);CCK-8实验,与对照组比较,不同时间点(1、2、3和4 d)NR2F2 OE组细胞增殖活性均降低(P<0.05或P<0.01);细胞划痕实验,与对照组比较,NR2F2 OE组细胞迁移率降低(P<0.001);Transwell小室实验,与对照组比较,NR2F2 OE组穿膜细胞数减少(P<0.01);与对照组比较,NR2F2 OE组细胞成球数减少(P<0.05),SKOV3细胞中SOX2 mRNA(P<0.01)和蛋白(P<0.001)表达水平均降低;与对照组比较,NR2F2 OE组存活肿瘤细胞的相对密度降低,但差异无统计学意义(P>0.05),PD-L1蛋白表达水平降低(P<0.05);与对照组比较,NR2F2 OE组细胞增殖活性减弱(P<0.05),对PTX和CBP的药物敏感性增强,PTX的IC_(50)明显减小,CBP的IC_(50)因其药物浓度过高未能计算;ABCG2蛋白表达水平降低(P<0.05)。结论:NR2F2过表达可抑制人卵巢癌SKOV3细胞的增殖、迁移和侵袭能力,降低SOX2、PD-L1和ABCG2蛋白表达水平,抑制人卵巢癌SKOV3细胞的干性和免疫逃逸能力,增强人卵巢癌SKOV3细胞对PTX和CBP的敏感性。 展开更多
关键词 核受体亚家族2f组成员2 卵巢肿瘤 肿瘤干性 免疫逃逸 耐药
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上调NR2F1诱导卵巢癌细胞休眠并增强其对化疗药物的抵抗力
2
作者 郭宁 居颂文 《中山大学学报(医学科学版)》 北大核心 2025年第5期794-805,共12页
【目的】探讨NR2F1分子介导的休眠卵巢癌(OC)细胞对化疗药物耐药的分子机制。【方法】利用GEPIA数据库分析OC患者中NR2F1分子的表达及其与患者总生存期的关系;采用慢病毒体外转染构建核受体亚家族2组F1(NR2F1)过表达的OC细胞株和对照细... 【目的】探讨NR2F1分子介导的休眠卵巢癌(OC)细胞对化疗药物耐药的分子机制。【方法】利用GEPIA数据库分析OC患者中NR2F1分子的表达及其与患者总生存期的关系;采用慢病毒体外转染构建核受体亚家族2组F1(NR2F1)过表达的OC细胞株和对照细胞;CCK-8试剂盒检测OC细胞的增殖;实时荧光定量PCR(qRT-PCR)分析OC细胞中休眠相关分子基因mRNA的表达水平;蛋白质免疫印迹试验分析相关分子蛋白表达水平;台盼蓝排除法分析不同化疗药物作用下OC细胞的活力;Annexin V-FITC/PI双染法流式细胞术检测不同化疗药物作用下OC细胞的凋亡程度;采用转录组测序技术对NR2F1过表达的SKOV3细胞株进行分析,通过KEGG富集分析,找出差异表达基因在相关信号通路中的富集程度;qRT-PCR验证OC细胞中耐药相关分子mRNA表达水平;GEPIA数据库作基因相关分析进一步验证NR2F1的表达与不同耐药相关基因表达的相关性。【结果】在OC患者中,原发肿瘤组织中的NR2F1分子以较低水平表达,而NR2F1高表达的OC患者总生存期的较短。与对照组相比,NR2F1过表达的OC细胞株增殖能力明显下降,表达更高水平的休眠相关分子细胞周期蛋白依赖性激酶抑制蛋白1B(p27)、分化型胚胎软骨基因-2(DEC2)、转化生长因子-β2(TGF-β2)和抗凋亡分子B淋巴细胞瘤-2基因(BCL-2),同时增殖相关分子肿瘤增殖抗原(KI67)表达下降。NR2F1过表达的OC细胞株对化疗药物的抵抗能力显著增强。转录组测序、KEGG富集分析结果显示,NR2F1介导的休眠OC细胞差异上调基因在磷脂酰肌醇3激酶-蛋白激酶B(PI3K-Akt)信号通路、黏着斑、细胞外基质-受体相互作用和调节干细胞多能性的信号通路中富集,差异下调基因富集在细胞周期等通路中。qRT-PCR验证结果显示,耐药相关分子驱动蛋白家族成员26B(KIF26B)、分泌性蛋白质酸性且富含半胱氨酸(SPARC)、胶原Ⅵ型α1链基因(COL6A1)、胶原Ⅴ型α2链基因(COL5A2)、卷曲同源物1(FZD1)和抑制素β亚基A基因(INHBA)在NR2F1过表达的OC细胞中表达上调。GEPIA数据库基因相关分析结果显示,OC肿瘤组织中NR2F1的表达与耐药相关基因KIF26B、SPARC、COL6A1、COL5A2、FZD1和INHBA的表达与存在正相关关系。【结论】本研究表明,激活NR2F1信号通路可诱导OC细胞休眠,同时调节OC细胞耐药,NR2F1介导的休眠OC细胞的耐药机制可能涉及PI3K-Akt信号通路和调节干细胞多能性的信号通路,并且与这些通路相关分子中耐药相关分子KIF26B、SPARC、COL6A1、COL5A2、FZD1和INHBA表达水平的升高密切相关。 展开更多
关键词 休眠 核受体亚家族2组f1 卵巢癌 化疗药物 耐药
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三种血清指标与冠心病心绞痛患者心功能和心肌损伤指标的关系 被引量：1
3
作者 张春茹 吕健 +2 位作者 周大亮 孙宪彬 郝丹 《中华老年心脑血管病杂志》 北大核心 2025年第1期33-37,共5页
目的分析冠心病心绞痛患者血清GATA结合蛋白3(GATA-binding protein 3,GATA-3)、T细胞免疫球蛋白黏蛋白分子3(T cell immunoglobulin domain and mucin domain protein-3,Tim-3)、视黄酸相关孤儿受体γt(retinoid-related orphan nuclea... 目的分析冠心病心绞痛患者血清GATA结合蛋白3(GATA-binding protein 3,GATA-3)、T细胞免疫球蛋白黏蛋白分子3(T cell immunoglobulin domain and mucin domain protein-3,Tim-3)、视黄酸相关孤儿受体γt(retinoid-related orphan nuclear receptor gamma t,RORγt)水平与心功能、心肌损伤指标的相关性。方法回顾性选取2020年12月至2023年12月哈尔滨市第一医院心内科收治的冠心病心绞痛患者120例作为观察组,根据心电图结果及冠状动脉造影分为稳定性心绞痛患者53例和不稳定性心绞痛患者67例。另外选择同期于本院进行健康体检的健康人群120例作为对照组。采用酶联免疫吸附测定法检测血清中GATA-3、Tim-3、RORγt水平,采用超声诊断仪检测左心室射血分数(left ventricular ejection fraction,LVEF)、左心室舒张末期内径(left ventricular enddiastolic diameter,LVEDD)、左心室收缩末期内径(left ventricular end-systolic diameter,LVESD)、左心室短轴缩短率(left ventricular fractional shortening,LVFS),采用生化分析仪检测肌酸激酶(creatine kinase,CK)、肌酸激酶同工酶(creatine kinase isoenzyme-MB,CK-MB);采用电化学发光免疫分析仪检测肌钙蛋白I(cardiac troponin I,cTnI)、心型脂肪酸结合蛋白(heart-type fatty acid-binding protein,H-FABP);采用Pearson相关性分析血清GATA-3和Tim-3及RORγt水平与心功能和心肌损伤指标的相关性;采用ROC曲线分析血清GATA-3、Tim-3、RORγt水平对不稳定性心绞痛的预测价值。结果观察组血清Tim-3、RORγt水平显著高于对照组,GATA-3水平显著低于对照组,差异有统计学意义[(397.14±78.42)ng/L vs(246.45±56.81)ng/L,P<0.01;(93.18±19.94)ng/L vs(35.72±7.79)ng/L,P<0.01;(38.21±9.45)ng/L vs(71.62±14.98)ng/L,P<0.01]。观察组LVEDD、LVESD显著高于对照组,LVEF、LVFS显著低于对照组,差异有统计学意义(P<0.01)。观察组cTnI、CK、CK-MB、H-FABP显著高于对照组,差异有统计学意义(P<0.01)。冠心病心绞痛患者血清GATA-3与LVEF、LVFS呈正相关,与LVEDD、LVESD、cTnI、CK、CK-MB、H-FABP呈负相关;Tim-3、RORγt与LVEF、LVFS呈负相关,与LVEDD、LVESD、cTnI、CK、CK-MB、H-FABP呈正相关(P<0.01)。ROC曲线分析显示,GATA-3、Tim-3、RORγt单独及联合预测不稳定性心绞痛的AUC分别为0.859、0.827、0.780、0.921,联合预测的AUC显著优于单独预测(Z=1.993、3.021、4.532,P=0.036、0.007、0.001)。结论随着冠心病心绞痛患者疾病进展,血清Tim-3、RORγt水平升高,GATA-3水平降低,各指标与心功能和心肌损伤指标密切相关。 展开更多
关键词 冠心病 心绞痛 甲型肝炎病毒细胞受体2 核受体亚家族1 f组 成员3 GATA结合蛋白3
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