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核受体NR6A1通过上调RIPK3基因表达诱导血管平滑肌细胞凋亡 被引量：2
1
作者 张亚辉 汪雄 +6 位作者 吴胜英 彭吉霞 武福云 柯镜 张鹏 张秋芳 吕艳霞 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2017年第9期1581-1586,共6页
目的:探讨核受体亚家族6A1(NR6A1)对血管平滑肌细胞凋亡的影响及可能的分子机制。方法:将腺病毒Ad-NR6A1感染大鼠血管平滑肌细胞,分别在感染后0 h、24 h和48 h时进行MTT实验,以时间为横坐标,A570为纵坐标绘制细胞生长曲线,观察NR6A1对... 目的:探讨核受体亚家族6A1(NR6A1)对血管平滑肌细胞凋亡的影响及可能的分子机制。方法:将腺病毒Ad-NR6A1感染大鼠血管平滑肌细胞,分别在感染后0 h、24 h和48 h时进行MTT实验,以时间为横坐标,A570为纵坐标绘制细胞生长曲线,观察NR6A1对细胞生长的影响;进行DAPI染色、TUNEL染色及caspase活性检测,观察细胞凋亡情况;进一步通过基因芯片技术,寻找NR6A1的靶基因;采用siRNA介导的基因沉默技术,观察受体相互作用丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶3(RIPK3)基因沉默对NR6A1诱导的血管平滑肌细胞凋亡的影响。结果:腺病毒Ad-NR6A1感染细胞48 h时,NR6A1过表达组细胞数量较对照组(重组腺病毒载体Ad-Lac Z)明显减少;DAPI染色显示NR6A1过表达诱导血管平滑肌细胞出现核浓缩和核碎裂的凋亡表型,TUNEL染色显示NR6A1过表达引起细胞凋亡,caspase活性检测结果显示NR6A1过表达细胞内caspase-3、caspase-8和caspase-9活性均较对照组高;基因芯片技术检测发现,NR6A1过表达上调血管平滑肌细胞中RIPK3基因表达;RIPK3基因沉默可以显著抑制NR6A1诱导的平滑肌细胞凋亡。结论:NR6A1通过上调RIPK3基因表达诱导血管平滑肌细胞凋亡。 展开更多
关键词 核受体亚家族6A1 受体相互作用丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶3 细胞凋亡
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NR4A1及其拮抗剂在肿瘤免疫中的研究进展
2
作者 甘秋婷(综述) 阳志军(审阅) 《中国肿瘤生物治疗杂志》 北大核心 2025年第5期538-543,共6页
核受体亚家族4A成员1(NR4A1)是一个重要转录因子,在细胞的增殖、凋亡调控、肿瘤发生、炎症、代谢及免疫调节等生命活动中发挥重要作用,其功能受到磷酸化、蛋白质相互作用等多种途径的调控。近年来发现,NR4A1在T细胞增殖分化及耗竭和功... 核受体亚家族4A成员1(NR4A1)是一个重要转录因子,在细胞的增殖、凋亡调控、肿瘤发生、炎症、代谢及免疫调节等生命活动中发挥重要作用,其功能受到磷酸化、蛋白质相互作用等多种途径的调控。近年来发现,NR4A1在T细胞增殖分化及耗竭和功能障碍中发挥关键作用。NR4A1缺失可提高T细胞的增殖和活化效率且对肿瘤发生产生影响。另外,NR4A1还能通过影响其他免疫细胞来影响免疫微环境的炎症反应及抗原提呈效率,从而影响肿瘤的发生、发展。因此,NR4A1抑制剂为肿瘤免疫靶向药物提供新思路,可通过抑制NR4A1表达来活化或增强T细胞的功能,增强其对肿瘤的杀伤力。目前,NR4A1作为肿瘤免疫靶点对肿瘤的作用仍在探索阶段,还需进一步的研究并将研究成果向临床应用转化。未来的研究将进一步探索NR4A1在肿瘤中的调节机制,从而为开发新型免疫疗法提供更多有效信息。 展开更多
关键词 核受体亚家族4A成员1 肿瘤 免疫细胞 免疫治疗
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上调NR2F1诱导卵巢癌细胞休眠并增强其对化疗药物的抵抗力
3
作者 郭宁 居颂文 《中山大学学报(医学科学版)》 北大核心 2025年第5期794-805,共12页
【目的】探讨NR2F1分子介导的休眠卵巢癌(OC)细胞对化疗药物耐药的分子机制。【方法】利用GEPIA数据库分析OC患者中NR2F1分子的表达及其与患者总生存期的关系;采用慢病毒体外转染构建核受体亚家族2组F1(NR2F1)过表达的OC细胞株和对照细... 【目的】探讨NR2F1分子介导的休眠卵巢癌(OC)细胞对化疗药物耐药的分子机制。【方法】利用GEPIA数据库分析OC患者中NR2F1分子的表达及其与患者总生存期的关系;采用慢病毒体外转染构建核受体亚家族2组F1(NR2F1)过表达的OC细胞株和对照细胞;CCK-8试剂盒检测OC细胞的增殖;实时荧光定量PCR(qRT-PCR)分析OC细胞中休眠相关分子基因mRNA的表达水平;蛋白质免疫印迹试验分析相关分子蛋白表达水平;台盼蓝排除法分析不同化疗药物作用下OC细胞的活力;Annexin V-FITC/PI双染法流式细胞术检测不同化疗药物作用下OC细胞的凋亡程度;采用转录组测序技术对NR2F1过表达的SKOV3细胞株进行分析,通过KEGG富集分析,找出差异表达基因在相关信号通路中的富集程度;qRT-PCR验证OC细胞中耐药相关分子mRNA表达水平;GEPIA数据库作基因相关分析进一步验证NR2F1的表达与不同耐药相关基因表达的相关性。【结果】在OC患者中,原发肿瘤组织中的NR2F1分子以较低水平表达,而NR2F1高表达的OC患者总生存期的较短。与对照组相比,NR2F1过表达的OC细胞株增殖能力明显下降,表达更高水平的休眠相关分子细胞周期蛋白依赖性激酶抑制蛋白1B(p27)、分化型胚胎软骨基因-2(DEC2)、转化生长因子-β2(TGF-β2)和抗凋亡分子B淋巴细胞瘤-2基因(BCL-2),同时增殖相关分子肿瘤增殖抗原(KI67)表达下降。NR2F1过表达的OC细胞株对化疗药物的抵抗能力显著增强。转录组测序、KEGG富集分析结果显示,NR2F1介导的休眠OC细胞差异上调基因在磷脂酰肌醇3激酶-蛋白激酶B(PI3K-Akt)信号通路、黏着斑、细胞外基质-受体相互作用和调节干细胞多能性的信号通路中富集,差异下调基因富集在细胞周期等通路中。qRT-PCR验证结果显示,耐药相关分子驱动蛋白家族成员26B(KIF26B)、分泌性蛋白质酸性且富含半胱氨酸(SPARC)、胶原Ⅵ型α1链基因(COL6A1)、胶原Ⅴ型α2链基因(COL5A2)、卷曲同源物1(FZD1)和抑制素β亚基A基因(INHBA)在NR2F1过表达的OC细胞中表达上调。GEPIA数据库基因相关分析结果显示,OC肿瘤组织中NR2F1的表达与耐药相关基因KIF26B、SPARC、COL6A1、COL5A2、FZD1和INHBA的表达与存在正相关关系。【结论】本研究表明,激活NR2F1信号通路可诱导OC细胞休眠,同时调节OC细胞耐药,NR2F1介导的休眠OC细胞的耐药机制可能涉及PI3K-Akt信号通路和调节干细胞多能性的信号通路,并且与这些通路相关分子中耐药相关分子KIF26B、SPARC、COL6A1、COL5A2、FZD1和INHBA表达水平的升高密切相关。 展开更多
关键词 休眠 核受体亚家族2组F1 卵巢癌 化疗药物 耐药
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三种血清指标与冠心病心绞痛患者心功能和心肌损伤指标的关系 被引量：1
4
作者 张春茹 吕健 +2 位作者 周大亮 孙宪彬 郝丹 《中华老年心脑血管病杂志》 北大核心 2025年第1期33-37,共5页
目的分析冠心病心绞痛患者血清GATA结合蛋白3(GATA-binding protein 3,GATA-3)、T细胞免疫球蛋白黏蛋白分子3(T cell immunoglobulin domain and mucin domain protein-3,Tim-3)、视黄酸相关孤儿受体γt(retinoid-related orphan nuclea... 目的分析冠心病心绞痛患者血清GATA结合蛋白3(GATA-binding protein 3,GATA-3)、T细胞免疫球蛋白黏蛋白分子3(T cell immunoglobulin domain and mucin domain protein-3,Tim-3)、视黄酸相关孤儿受体γt(retinoid-related orphan nuclear receptor gamma t,RORγt)水平与心功能、心肌损伤指标的相关性。方法回顾性选取2020年12月至2023年12月哈尔滨市第一医院心内科收治的冠心病心绞痛患者120例作为观察组,根据心电图结果及冠状动脉造影分为稳定性心绞痛患者53例和不稳定性心绞痛患者67例。另外选择同期于本院进行健康体检的健康人群120例作为对照组。采用酶联免疫吸附测定法检测血清中GATA-3、Tim-3、RORγt水平,采用超声诊断仪检测左心室射血分数(left ventricular ejection fraction,LVEF)、左心室舒张末期内径(left ventricular enddiastolic diameter,LVEDD)、左心室收缩末期内径(left ventricular end-systolic diameter,LVESD)、左心室短轴缩短率(left ventricular fractional shortening,LVFS),采用生化分析仪检测肌酸激酶(creatine kinase,CK)、肌酸激酶同工酶(creatine kinase isoenzyme-MB,CK-MB);采用电化学发光免疫分析仪检测肌钙蛋白I(cardiac troponin I,cTnI)、心型脂肪酸结合蛋白(heart-type fatty acid-binding protein,H-FABP);采用Pearson相关性分析血清GATA-3和Tim-3及RORγt水平与心功能和心肌损伤指标的相关性;采用ROC曲线分析血清GATA-3、Tim-3、RORγt水平对不稳定性心绞痛的预测价值。结果观察组血清Tim-3、RORγt水平显著高于对照组,GATA-3水平显著低于对照组,差异有统计学意义[(397.14±78.42)ng/L vs(246.45±56.81)ng/L,P<0.01;(93.18±19.94)ng/L vs(35.72±7.79)ng/L,P<0.01;(38.21±9.45)ng/L vs(71.62±14.98)ng/L,P<0.01]。观察组LVEDD、LVESD显著高于对照组,LVEF、LVFS显著低于对照组,差异有统计学意义(P<0.01)。观察组cTnI、CK、CK-MB、H-FABP显著高于对照组,差异有统计学意义(P<0.01)。冠心病心绞痛患者血清GATA-3与LVEF、LVFS呈正相关,与LVEDD、LVESD、cTnI、CK、CK-MB、H-FABP呈负相关;Tim-3、RORγt与LVEF、LVFS呈负相关,与LVEDD、LVESD、cTnI、CK、CK-MB、H-FABP呈正相关(P<0.01)。ROC曲线分析显示,GATA-3、Tim-3、RORγt单独及联合预测不稳定性心绞痛的AUC分别为0.859、0.827、0.780、0.921,联合预测的AUC显著优于单独预测(Z=1.993、3.021、4.532,P=0.036、0.007、0.001)。结论随着冠心病心绞痛患者疾病进展,血清Tim-3、RORγt水平升高,GATA-3水平降低,各指标与心功能和心肌损伤指标密切相关。 展开更多
关键词 冠心病 心绞痛 甲型肝炎病毒细胞受体2 核受体亚家族1 F组 成员3 GATA结合蛋白3
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小鼠NR1D1基因过表达载体的构建及其生物信息学分析 被引量：2
5
作者 董浩 江海圳 +3 位作者 李超 高登科 靳亚平 陈华涛 《吉林大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2022年第1期94-103,共10页
目的:构建小鼠核受体亚家族1组D成员1(NR1D1)基因的过表达载体,分析小鼠NR1D1蛋白的基本特征。方法:从小鼠肝脏组织中提取总RNA,反转录后获得cDNA,采用PCR技术扩增得到小鼠NR1D1基因的编码区片段,经同源重组与pcDNA3.1载体相连接,将酶... 目的:构建小鼠核受体亚家族1组D成员1(NR1D1)基因的过表达载体,分析小鼠NR1D1蛋白的基本特征。方法:从小鼠肝脏组织中提取总RNA,反转录后获得cDNA,采用PCR技术扩增得到小鼠NR1D1基因的编码区片段,经同源重组与pcDNA3.1载体相连接,将酶切鉴定和测序正确的重组质粒命名为pcDNA3.1-NR1D1。将pcDNA3.1空质粒和pcDNA3.1-NR1D1重组质粒分别转染至HEK293T细胞中,分别为对照组和pcDNA3.1-NR1D1转染组,48 h后提取总RNA和总蛋白样品,通过实时荧光定量PCR(RT-qPCR)和Westernblotting法检测2组细胞中NR1D1 mRNA和蛋白表达水平。使用DNAStar和MEGA7软件对小鼠与其他物种的NR1D1基因编码区序列(CDS)进行相似性分析,并构建系统进化树;利用ExPASy、ProtScale、SingalP5.0、TMHMM-2.0、PhosphoSitePlus®、SOPMA和SWISS-MODEL等在线工具分析NR1D1蛋白的氨基酸组成、亲/疏水性、跨膜区域、信号肽、二级结构和三级结构。结果:酶切鉴定和测序结果均表明过表达载体pcDNA3.1-NR1D1构建成功。与对照组比较,pcDNA3.1-NR1D1转染组细胞中NR1D1 mRNA和蛋白表达水平明显升高(P<0.01)。生物信息学分析,小鼠NR1D1 CDS区与人、大鼠、中国仓鼠、黑猩猩、兔、犬、猪、马、牛、绵羊、山羊、家猫和斑马鱼的相似性分别为90.0%、94.8%、86.5%、90.0%、89.6%、88.3%、89.7%、89.8%、88.8%、89.1%、89.1%、89.7%和65.1%。系统进化树分析,小鼠NR1D1基因与中国仓鼠和大鼠的遗传距离最近,与斑马鱼的遗传距离最远。小鼠NR1D1蛋白是一种疏水性碱性蛋白质,不属于分泌蛋白和跨膜蛋白,含有12个磷酸化位点和10个泛素化位点;二级结构中无规则卷曲占54.63%,α-螺旋占26.50%,延伸链占12.68%,β-转角占6.18%;三级结构预测,小鼠与人的NR1D1蛋白相似度大,差异较小。结论:成功构建了小鼠NR1D1基因过表达载体pcDNA3.1-NR1D1,验证了其在HEK293T细胞中的过表达效果,为进一步研究NR1D1基因及其蛋白的功能提供了依据。 展开更多
关键词 小鼠 ICR 核受体亚家族1组D成员1 生物钟 过表达载体 生物信息学
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乳化异氟醚对低氧性肺动脉内皮细胞损伤及NR4A1表达的影响 被引量：1
6
作者 刘荣 徐志勇 +1 位作者 翁浩 黄丁丁 《海南医学院学报》 CAS 2019年第17期1304-1307,1313,共5页
目的:探讨乳化异氟醚(EI)对低氧性肺动脉内皮细胞(HPAECs)损伤及孤儿核受体亚家族4A1(NR4A1)表达的影响。方法:将HPAECs分为正常对照组、模型组和实验组;正常对照组置于常氧下培养,模型组和实验组细胞置于氧浓度约为3%的低氧箱(95%N2+5%... 目的:探讨乳化异氟醚(EI)对低氧性肺动脉内皮细胞(HPAECs)损伤及孤儿核受体亚家族4A1(NR4A1)表达的影响。方法:将HPAECs分为正常对照组、模型组和实验组;正常对照组置于常氧下培养,模型组和实验组细胞置于氧浓度约为3%的低氧箱(95%N2+5%CO2)中处理2 h。实验组加入终浓度为1 mmol/L EI,正常对照组和模型组加入30%Intralipid■;于干预0、1、2、4、8、12 h后MTT法检测细胞增殖情况,Hoechst 33258核染色法检测细胞凋亡,Griess法检测细胞上清NO生成量,蛋白免疫印迹法(WB)及实时荧光定量PCR(q-RT-PCR)检测细胞中NR4A1蛋白及mRNA表达量。结果:干预0~12 h,模型组和实验组细胞活力呈逐渐降低趋势,但干预后2~12 h实验组细胞活力均高于模型组(P<0.05);干预0~12 h,模型组和实验组细胞凋亡率呈逐渐升高趋势,但干预后2~12 h实验组细胞凋亡率均低于模型组(P<0.05);干预0~12 h,模型组和实验组细胞上清中NO浓度呈逐渐降低趋势,但干预后2~12 h实验组细胞NO均高于模型组(P<0.05);干预0~12 h,模型组和实验组细胞NR4A1蛋白及mRNA相对表达量呈逐渐升高趋势,但干预后2~12 h实验组细胞NR4A1 mRNA相对表达量均低于模型组(P<0.05)。结论:EI可促进低氧性HPAECs增殖,抑制凋亡,并增加NO的生成,NR4A1可能参与了低氧后内皮细胞损伤的内源性保护机制。 展开更多
关键词 乳化异氟醚 低氧 内皮细胞损伤 增殖 凋亡 孤儿核受体亚家族4A1(NR4A1)
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Rev-erbα在血管内皮损伤后内膜增生中的作用
7
作者 甘雪晴 侯娟妮 +2 位作者 李秀川 孙雄山 杨大春 《中华老年心脑血管病杂志》 CAS 北大核心 2020年第6期629-634,共6页
目的探讨Rev-erbα在血管内皮损伤后内膜增生中的作用。方法将雄性野生型C57BL/6J小鼠80只随机分为假手术1组和2组、激动剂1组、抑制剂1组、损伤1组和2组、激动剂2组和抑制剂2组,每组10只,前4组仅行假手术,后4组用机械损伤颈动脉内皮法... 目的探讨Rev-erbα在血管内皮损伤后内膜增生中的作用。方法将雄性野生型C57BL/6J小鼠80只随机分为假手术1组和2组、激动剂1组、抑制剂1组、损伤1组和2组、激动剂2组和抑制剂2组,每组10只,前4组仅行假手术,后4组用机械损伤颈动脉内皮法构建模型,造模后,按分组分别腹腔注射激动剂SR9011或抑制剂SR8278各100 mg/kg,1次/d,4周。用100 nmol/L血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)干预小鼠主动脉平滑肌细胞系(MOVAS)24 h诱导体外增殖,特异性小分子干扰(siRNA)转染技术敲低细胞中核苷酸结合寡聚化域样受体蛋白3(Nlrp3)水平。将细胞分为对照1组、2组和3组,AngⅡ1组、2组和3组,SR9011组,SR8278组,AngⅡ+SR8278组,siRNA对照组,si-Nlrp3组,SR8278+si-Nlrp3组,后9组用AngⅡ干预24 h,SR9011组和SR8278组先用5μmol/L的SR9011或SR8278干预12 h;后3组用siRNA敲低Nlrp3水平。分别用qRT-PCR和Western blot测Rev-erbα、Nlrp3 mRNA和蛋白表达,苏木精-伊红染色观察颈动脉内膜增生,分别用CCK-8法和Ki-67免疫荧光术测细胞增殖率。结果与假手术1组比较,内皮损伤1组Rev-erbαmRNA及蛋白表达下降(P<0.01)。与假手术2组比较,内皮损伤2组内膜增生更明显(P<0.01)。与内皮损伤2组比较,激动剂2组内膜/中膜面积比值下降(P<0.01);抑制剂2组内膜/中膜面积比值升高(P<0.01)。与对照1组比较,AngⅡ1组Rev-erbαmRNA和蛋白表达下降(P<0.01)。与AngⅡ2组比较,SR9011组吸光度和阳性细胞率减少,SR8278组吸光度和阳性细胞率明显增加(P<0.05)。与对照2组比较,AngⅡ2组Nlrp3 mRNA和蛋白表达增加(P<0.01);与AngⅡ2组比较,SR9011组Nlrp3 mRNA和蛋白表达降低,SR8278组Nlrp3 mRNA和蛋白表达增加(P<0.05)。si-Nlrp3组较siRNA对照组阳性细胞减少[(0.133±0.012)%vs(0.337±0.023)%,P<0.05];SR8278+si-Nlrp3组较AngⅡ+SR8278组阳性细胞减少[(0.138±0.011)%vs(0.498±0.023)%,P<0.05]。结论Rev-erbα可能通过抑制Nlrp3表达,抑制细胞增殖,抑制血管内皮损伤后内膜增生的进展。 展开更多
关键词 内皮 血管 血管紧张素Ⅱ 肌细胞 平滑肌 核受体亚家族1 D族 成受1
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