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NIP7促进泛素缀合酶E2 C表达介导甲状腺未分化癌细胞增殖及肿瘤生长
1
作者
龚荧荧
方籽雯
+2 位作者
王艺璇
葛明华
潘宗富
《浙江大学学报(医学版)》
北大核心
2025年第3期372-381,共10页
目的:探讨核仁前rRNA加工蛋白NIP7(NIP7)在维持甲状腺未分化癌(ATC)恶性表型中的作用及分子机制。方法:利用基因表达谱芯片(GSE33630)、蛋白质组学数据集(IPX0008941000)和Dependency Map数据库分别分析NIP7在ATC组织中的表达及细胞上...
目的:探讨核仁前rRNA加工蛋白NIP7(NIP7)在维持甲状腺未分化癌(ATC)恶性表型中的作用及分子机制。方法:利用基因表达谱芯片(GSE33630)、蛋白质组学数据集(IPX0008941000)和Dependency Map数据库分别分析NIP7在ATC组织中的表达及细胞上的基因敲除效应。通过蛋白质印迹法检测NIP7在正常甲状腺细胞、甲状腺乳头状癌细胞和ATC细胞上的表达及定位。在ATC细胞上转染小干扰RNA并用定量逆转录聚合酶链反应(qRT-PCR)和蛋白质印迹法检测NIP7的沉默效率。进一步利用CCK-8法检测细胞增殖能力,平板克隆实验检测克隆形成能力,裸鼠皮下成瘤实验评估肿瘤生长。使用嘌呤霉素掺入实验结合免疫共沉淀验证沉默NIP7对泛素缀合酶E2 C(UBE2C)翻译的影响。最后通过基因集富集分析筛选NIP7和UBE2C的共同通路并利用qRT-PCR进行验证。结果:与正常组织及甲状腺乳头状癌组织比较,NIP7在ATC组织中显著上调,且在不同ATC细胞上均有较强的基因敲除效应。ATC细胞中NIP7蛋白相对表达显著高于人正常甲状腺细胞,且主要表达于细胞核。沉默NIP7显著抑制不同ATC细胞的增殖能力,并减少细胞克隆形成数。体内研究显示,敲除NIP7可显著减缓ATC裸鼠异种移植瘤的生长速度,并且肿瘤体积和质量均小于对照组(均P<0.05)。机制研究表明,沉默NIP7可引起UBE2C新生蛋白表达下调,而不影响UBE2C信使RNA表达。与对照组比较,沉默UBE2C显著抑制ATC细胞增殖(P<0.01)和克隆形成能力(P<0.05),且过表达UBE2C可逆转沉默NIP7对细胞增殖的抑制作用(P<0.01)。基因集富集分析表明NIP7和UBE2C共同参与DNA复制,沉默NIP7或UBE2C均可明显下调DNA复制通路中DNA聚合酶ε催化亚基2和复制因子4的表达水平。结论:NIP7通过促进UBE2C翻译介导DNA复制,从而促进ATC生长。
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关键词
甲状腺未分化癌
核糖体生物合成
核仁前rrna加工蛋白nip7
泛素缀合酶E2
C
DNA复制
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题名
NIP7促进泛素缀合酶E2 C表达介导甲状腺未分化癌细胞增殖及肿瘤生长
1
作者
龚荧荧
方籽雯
王艺璇
葛明华
潘宗富
机构
浙江省人民医院(杭州医学院附属人民医院)耳鼻喉科头颈外科中心癌症中心头颈外科
浙江省人民医院(杭州医学院附属人民医院)临床药学研究中心癌症中心药学部
浙江省头颈部恶性肿瘤临床医学研究中心
全省头颈肿瘤精准医学研究重点实验室
出处
《浙江大学学报(医学版)》
北大核心
2025年第3期372-381,共10页
基金
中国药学会医院药学专业委员会医院药学人才专项(CPA-Z05-ZC-2024-003)
中央引导地方科技发展资金(2023ZY1059)。
文摘
目的:探讨核仁前rRNA加工蛋白NIP7(NIP7)在维持甲状腺未分化癌(ATC)恶性表型中的作用及分子机制。方法:利用基因表达谱芯片(GSE33630)、蛋白质组学数据集(IPX0008941000)和Dependency Map数据库分别分析NIP7在ATC组织中的表达及细胞上的基因敲除效应。通过蛋白质印迹法检测NIP7在正常甲状腺细胞、甲状腺乳头状癌细胞和ATC细胞上的表达及定位。在ATC细胞上转染小干扰RNA并用定量逆转录聚合酶链反应(qRT-PCR)和蛋白质印迹法检测NIP7的沉默效率。进一步利用CCK-8法检测细胞增殖能力,平板克隆实验检测克隆形成能力,裸鼠皮下成瘤实验评估肿瘤生长。使用嘌呤霉素掺入实验结合免疫共沉淀验证沉默NIP7对泛素缀合酶E2 C(UBE2C)翻译的影响。最后通过基因集富集分析筛选NIP7和UBE2C的共同通路并利用qRT-PCR进行验证。结果:与正常组织及甲状腺乳头状癌组织比较,NIP7在ATC组织中显著上调,且在不同ATC细胞上均有较强的基因敲除效应。ATC细胞中NIP7蛋白相对表达显著高于人正常甲状腺细胞,且主要表达于细胞核。沉默NIP7显著抑制不同ATC细胞的增殖能力,并减少细胞克隆形成数。体内研究显示,敲除NIP7可显著减缓ATC裸鼠异种移植瘤的生长速度,并且肿瘤体积和质量均小于对照组(均P<0.05)。机制研究表明,沉默NIP7可引起UBE2C新生蛋白表达下调,而不影响UBE2C信使RNA表达。与对照组比较,沉默UBE2C显著抑制ATC细胞增殖(P<0.01)和克隆形成能力(P<0.05),且过表达UBE2C可逆转沉默NIP7对细胞增殖的抑制作用(P<0.01)。基因集富集分析表明NIP7和UBE2C共同参与DNA复制,沉默NIP7或UBE2C均可明显下调DNA复制通路中DNA聚合酶ε催化亚基2和复制因子4的表达水平。结论:NIP7通过促进UBE2C翻译介导DNA复制,从而促进ATC生长。
关键词
甲状腺未分化癌
核糖体生物合成
核仁前rrna加工蛋白nip7
泛素缀合酶E2
C
DNA复制
Keywords
Anaplastic thyroid cancer
Ribosome biogenesis
Nucleolar pre-
rrna
processing protein
nip
7
Ubiquitin-conjugating enzyme E2 C
DNA replication
分类号
R736.1 [医药卫生—肿瘤]
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1
NIP7促进泛素缀合酶E2 C表达介导甲状腺未分化癌细胞增殖及肿瘤生长
龚荧荧
方籽雯
王艺璇
葛明华
潘宗富
《浙江大学学报(医学版)》
北大核心
2025
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