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小鼠树突状细胞相关C型凝集素-1基因重组腺病毒载体的构建及鉴定
被引量：
3
1
作者
夏迪
钱倩
+5 位作者
刘志成
谭鸣鸣
丁媛
苏欣
孙文逵
施毅
《医学研究生学报》
CAS
北大核心
2015年第4期341-345,共5页
目的树突状细胞相关C型凝集素-1(dendritic cell-associated C-type lectin-1,Dectin-1)是介导抗真菌天然免疫的重要受体之一。文中旨在构建表达小鼠Dectin-1基因的重组腺病毒载体,扩增、纯化获得高浓度的重组腺病毒。方法将PCR扩增的...
目的树突状细胞相关C型凝集素-1(dendritic cell-associated C-type lectin-1,Dectin-1)是介导抗真菌天然免疫的重要受体之一。文中旨在构建表达小鼠Dectin-1基因的重组腺病毒载体,扩增、纯化获得高浓度的重组腺病毒。方法将PCR扩增的目的片段CLEC7A-p IRES2-EGFP重组到中间载体p DONR221上,再与腺病毒骨架质粒p AD/CMV/V5-DEST重组,获得重组腺病毒质粒p AD-CLEC7A-p IRES2-EGFP,经Pac I线性化后转染人胚肾293(HEK293)细胞,收获重组腺病毒p AD-CLEC7A-p IRES2-EGFP;利用HEK293细胞大量扩增腺病毒;并进行重组腺病毒的滴度测定;用荧光显微镜和实时荧光定量PCR鉴定转染重组腺病毒组(Dectin-1基因重组腺病毒转染HEK293细胞)和转染空病毒组(空病毒转染HEK293细胞)中Dectin-1基因的表达。结果菌落PCR鉴定、酶切鉴定及测序结果均显示重组腺病毒含有Dectin-1基因,腺病毒滴度为5×1011IU/m L,荧光显微镜下可见绿色荧光,PCR检测到转染重组腺病毒组Dectin-1表达量是转染空病毒组的8677.25倍。结论成功构建并获得了较高浓度的Dectin-1基因重组腺病毒载体,为下一步体内外研究Dectin-1高表达在宿主抗真菌天然免疫中的作用奠定基础。
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关键词
树突
状
细胞
相关
c
型
凝集
素
-1
c
LE
c
7A基因
腺病毒载体
模式识别受体
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职称材料
DC-SIGN基因在阿萨希毛孢子菌小鼠皮肤感染时的表达与调控
被引量：
2
2
作者
王文岭
杨蓉娅
+4 位作者
郝震锋
敖俊红
赵逊
张洁
王聪敏
《解放军医学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2008年第4期462-464,共3页
目的了解树突细胞C型凝集素(DC-SIGN)是否参与了皮肤毛孢子菌感染过程中的免疫应答。方法25只BALB/C小鼠备皮后皮下接种3.2×107cfu/ml的阿萨希毛孢子菌悬液,分别于接种后1、3、7、14d处死小鼠,切取皮损,RT-PCR检测皮肤毛孢子菌感...
目的了解树突细胞C型凝集素(DC-SIGN)是否参与了皮肤毛孢子菌感染过程中的免疫应答。方法25只BALB/C小鼠备皮后皮下接种3.2×107cfu/ml的阿萨希毛孢子菌悬液,分别于接种后1、3、7、14d处死小鼠,切取皮损,RT-PCR检测皮肤毛孢子菌感染过程中DC-SIGN mRNA的表达,基因芯片技术观察免疫相关基因的改变。结果皮下接种后3、7、14d接种侧皮肤组织标本可扩增出DC-SIGN目的片段,而未接种侧皮肤组织标本均未扩增出DC-SIGN目的片段。补体C2、前列腺素EP4受体、肿瘤坏死因子诱导蛋白cg12-1(CG12-1)、干扰素诱导蛋白(Ifit3)、淋巴细胞抗原6复合物、CD53抗原、CD22抗原等下调。结论DC-SIGN参与了皮肤毛孢子菌的感染过程,它不仅抑制Th1型细胞免疫,而且可抑制前列腺素EP4受体及部分补体因子等,从而导致皮肤毛孢子菌感染的慢性化。
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关键词
毛孢子菌属
树突细胞c型凝集素
反转录聚合酶链反应
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职称材料
题名
小鼠树突状细胞相关C型凝集素-1基因重组腺病毒载体的构建及鉴定
被引量：
3
1
作者
夏迪
钱倩
刘志成
谭鸣鸣
丁媛
苏欣
孙文逵
施毅
机构
南京大学医学院附属金陵医院(南京军区南京总医院)呼吸与危重症医学科
南京市胸科医院呼吸科
南方医科大学临床医学院
出处
《医学研究生学报》
CAS
北大核心
2015年第4期341-345,共5页
基金
国家自然科学基金(81270064
81200063)
南京市医学科技发展项目(YKK13089)
文摘
目的树突状细胞相关C型凝集素-1(dendritic cell-associated C-type lectin-1,Dectin-1)是介导抗真菌天然免疫的重要受体之一。文中旨在构建表达小鼠Dectin-1基因的重组腺病毒载体,扩增、纯化获得高浓度的重组腺病毒。方法将PCR扩增的目的片段CLEC7A-p IRES2-EGFP重组到中间载体p DONR221上,再与腺病毒骨架质粒p AD/CMV/V5-DEST重组,获得重组腺病毒质粒p AD-CLEC7A-p IRES2-EGFP,经Pac I线性化后转染人胚肾293(HEK293)细胞,收获重组腺病毒p AD-CLEC7A-p IRES2-EGFP;利用HEK293细胞大量扩增腺病毒;并进行重组腺病毒的滴度测定;用荧光显微镜和实时荧光定量PCR鉴定转染重组腺病毒组(Dectin-1基因重组腺病毒转染HEK293细胞)和转染空病毒组(空病毒转染HEK293细胞)中Dectin-1基因的表达。结果菌落PCR鉴定、酶切鉴定及测序结果均显示重组腺病毒含有Dectin-1基因,腺病毒滴度为5×1011IU/m L,荧光显微镜下可见绿色荧光,PCR检测到转染重组腺病毒组Dectin-1表达量是转染空病毒组的8677.25倍。结论成功构建并获得了较高浓度的Dectin-1基因重组腺病毒载体,为下一步体内外研究Dectin-1高表达在宿主抗真菌天然免疫中的作用奠定基础。
关键词
树突
状
细胞
相关
c
型
凝集
素
-1
c
LE
c
7A基因
腺病毒载体
模式识别受体
Keywords
c
LE
c
7A gene
Adenovirus ve
c
tor
Pattern re
c
ognition re
c
eptor
分类号
Q78 [生物学—分子生物学]
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职称材料
题名
DC-SIGN基因在阿萨希毛孢子菌小鼠皮肤感染时的表达与调控
被引量：
2
2
作者
王文岭
杨蓉娅
郝震锋
敖俊红
赵逊
张洁
王聪敏
机构
北京军区总医院全军皮肤病诊疗中心
出处
《解放军医学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2008年第4期462-464,共3页
基金
中华医学会皮肤科分会(诺华)基金资助课题(DEM075)
国家自然科学基金资助课题(30570099)
文摘
目的了解树突细胞C型凝集素(DC-SIGN)是否参与了皮肤毛孢子菌感染过程中的免疫应答。方法25只BALB/C小鼠备皮后皮下接种3.2×107cfu/ml的阿萨希毛孢子菌悬液,分别于接种后1、3、7、14d处死小鼠,切取皮损,RT-PCR检测皮肤毛孢子菌感染过程中DC-SIGN mRNA的表达,基因芯片技术观察免疫相关基因的改变。结果皮下接种后3、7、14d接种侧皮肤组织标本可扩增出DC-SIGN目的片段,而未接种侧皮肤组织标本均未扩增出DC-SIGN目的片段。补体C2、前列腺素EP4受体、肿瘤坏死因子诱导蛋白cg12-1(CG12-1)、干扰素诱导蛋白(Ifit3)、淋巴细胞抗原6复合物、CD53抗原、CD22抗原等下调。结论DC-SIGN参与了皮肤毛孢子菌的感染过程,它不仅抑制Th1型细胞免疫,而且可抑制前列腺素EP4受体及部分补体因子等,从而导致皮肤毛孢子菌感染的慢性化。
关键词
毛孢子菌属
树突细胞c型凝集素
反转录聚合酶链反应
Keywords
Tri
c
hosporon
D
c
-spe
c
ifi
c
I
c
AM-3 grabbing nonintegrin
reverse trans
c
riptase polymerase
c
hain rea
c
tion
分类号
R446.53 [医药卫生—诊断学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
小鼠树突状细胞相关C型凝集素-1基因重组腺病毒载体的构建及鉴定
夏迪
钱倩
刘志成
谭鸣鸣
丁媛
苏欣
孙文逵
施毅
《医学研究生学报》
CAS
北大核心
2015
3
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下载PDF
职称材料
2
DC-SIGN基因在阿萨希毛孢子菌小鼠皮肤感染时的表达与调控
王文岭
杨蓉娅
郝震锋
敖俊红
赵逊
张洁
王聪敏
《解放军医学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2008
2
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