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柯萨奇病毒-腺病毒受体在结肠癌组织中的表达及意义 被引量:3
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作者 张念华 宋立兵 +6 位作者 伍小军 高艳芳 彭瑞清 丁娅 李瑞平 万德森 张晓实 《中国肿瘤临床》 CAS CSCD 北大核心 2007年第6期316-318,325,共4页
目的:柯萨奇病毒-腺病毒受体(coxsackie and adenovirus receptor,CAR)介导腺病毒与靶细胞之间的粘附,是腺病毒转染靶细胞的限速因子。本文分析CAR在瘤旁上皮组织、结肠肿瘤原发灶和淋巴结转移灶中的表达,为设计腺病毒载体基因治疗方案... 目的:柯萨奇病毒-腺病毒受体(coxsackie and adenovirus receptor,CAR)介导腺病毒与靶细胞之间的粘附,是腺病毒转染靶细胞的限速因子。本文分析CAR在瘤旁上皮组织、结肠肿瘤原发灶和淋巴结转移灶中的表达,为设计腺病毒载体基因治疗方案提供依据。方法:采用免疫组织化学方法检测62例结肠癌组织中CAR的表达,分析CAR表达与临床病理特征的关系。结果:与瘤旁上皮组织相比,肿瘤组织普遍存在CAR表达下调,但CAR在原发灶和淋巴结转移灶的表达水平无明显差异。CAR的表达水平与患者年龄及肿瘤大小相关。结论:结肠癌组织中存在CAR表达下调,提示在设计腺病毒载体基因治疗方案时应充分考虑CAR表达变化对疗效的影响。 展开更多
关键词 柯萨奇病毒-腺病毒受体 结肠癌 基因治疗
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肿瘤细胞表面柯萨奇病毒-腺病毒受体与5型腺病毒感染效率的关系 被引量:2
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作者 任鹏康 韦芳 +5 位作者 李惠明 王丰 张巨峰 陈霞芳 李宗海 黄倩 《中国肿瘤生物治疗杂志》 CAS CSCD 2006年第3期209-213,共5页
目的:探讨不同肿瘤细胞系柯萨奇病毒-腺病毒受体(CAR)和整合素的表达水平与5型腺病毒感染效率的关系,为腺病毒基因治疗研究奠定基础。方法:利用瞬时转染CAR的真核表达质粒提高肿瘤细胞表面CAR的表达,应用抗体封闭细胞表面的CAR和整合素... 目的:探讨不同肿瘤细胞系柯萨奇病毒-腺病毒受体(CAR)和整合素的表达水平与5型腺病毒感染效率的关系,为腺病毒基因治疗研究奠定基础。方法:利用瞬时转染CAR的真核表达质粒提高肿瘤细胞表面CAR的表达,应用抗体封闭细胞表面的CAR和整合素后,通过流式细胞仪和荧光素酶分析法测定腺病毒Ad5-CMV-EGFP和Ad5-CMV-Luc对肿瘤细胞的感染效率和基因表达水平的变化。结果:不同肿瘤细胞表面CAR和整合素的表达水平是不同的,其中SMMC-7721和A549细胞CAR的表达量最高,而K562细胞CAR的表达水平最低;荧光显微镜和流式细胞仪检测Ad5-CMV-EGFP对肿瘤细胞的感染效率,结果显示5型腺病毒对于SMMC-7721和A549细胞的感染效率最高,而对于K562细胞则很低;瞬时转染表达CAR的真核质粒可提高多种肿瘤细胞表面CAR的表达,较大幅度提高了5型腺病毒的感染效率。而抗体封闭肿瘤细胞表面的CAR或整合素后,腺病毒感染效率显著下降。结论:肿瘤细胞表面CAR和整合素的表达水平决定了腺病毒对肿瘤细胞的感染效率。 展开更多
关键词 腺病毒 柯萨奇病毒-腺病毒受体 整合素 感染 基因治疗
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柯萨奇病毒-腺病毒受体在肺癌组织中的表达意义 被引量:2
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作者 王谦 潘毅 +1 位作者 李君文 战忠利 《中国肿瘤临床》 CAS CSCD 北大核心 2007年第20期1150-1153,共4页
目的:初步探讨柯萨奇病毒-腺病毒受体(Coxsackie and adenovirus receptor,CAR)与人肺鳞状细胞癌及腺癌发生、发展的关系,为设计腺病毒载体对肺癌进行基因治疗的方案提供理论依据。方法:采用免疫组织化学方法检测112例肺癌(包括鳞状细胞... 目的:初步探讨柯萨奇病毒-腺病毒受体(Coxsackie and adenovirus receptor,CAR)与人肺鳞状细胞癌及腺癌发生、发展的关系,为设计腺病毒载体对肺癌进行基因治疗的方案提供理论依据。方法:采用免疫组织化学方法检测112例肺癌(包括鳞状细胞癌65例,腺癌47例)组织中CAR的表达情况,利用统计学方法(SPSS10.0软件)分析CAR的表达在鳞状细胞癌、腺癌以及癌旁正常肺组织中有否差异。结果:正常肺组织中仅有少量CAR的表达。两类型肺癌分别与癌旁组织CAR的表达差别有统计学意义(P<0.01),在鳞状细胞癌中CAR的表达较癌旁组织提高34.75%,在腺癌中CAR的表达较癌旁组织提高38.30%。其中,鳞状细胞癌的CAR阳性率为43.08%,腺癌的阳性率为70.21%,两类型肺癌间CAR表达的阳性率差别亦有统计学意义(P<0.01)。但CAR的表达在肺鳞状细胞癌不同组织学分级中(Ⅰ~Ⅲ级)的差别未有统计学意义(P>0.05)。此外,我们发现在肺腺癌中所包含的细支气管肺泡癌部分几乎都有CAR的表达。结论:肺癌组织(鳞状细胞癌和腺癌)CAR的表达普遍提高,提示CAR与肺癌的发生、发展有一定的联系,并且与肺腺癌的形成及发展的关系更为密切,因此为进一步实现用腺病毒载体对肺癌进行基因治疗提供了理论基础。 展开更多
关键词 柯萨奇病毒-腺病毒受体 肺癌 基因治疗
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柯萨奇-腺病毒受体基因-968G/A多态性与柯萨奇病毒性心肌炎的关系 被引量:14
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作者 杨云华 邓晖 +2 位作者 刘丹莉 杜九中 李双杰 《临床儿科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2010年第8期755-757,共3页
目的探讨柯萨奇-腺病毒受体(CAR)基因-968G/A多态性与中国南方汉族人群柯萨奇病毒性心肌炎的关系。方法收集病毒性心肌炎患儿280例,将其中CVB-IgM阳性130例作为心肌炎组,并选择同期130名健康儿童作为对照组,采用聚和酶链反应-限制性内... 目的探讨柯萨奇-腺病毒受体(CAR)基因-968G/A多态性与中国南方汉族人群柯萨奇病毒性心肌炎的关系。方法收集病毒性心肌炎患儿280例,将其中CVB-IgM阳性130例作为心肌炎组,并选择同期130名健康儿童作为对照组,采用聚和酶链反应-限制性内切酶片断长度多态性(PCR-RFLP)、DNA测序等方法检测2组CAR基因-968G/A多态性,采用酶联免疫吸附法(ELISA)测定两组血清CAR水平。结果心肌炎组GG基因型和G等位基因频率均显著高于对照组(P<0.05)。心肌炎组血清CAR水平明显高于对照组(P<0.01),CAR基因-968G/A多态位点中含G等位基因(GG+GA)者血清CAR水平和CVB感染率均显著高于非G等位基因(AA)携带者(P均<0.05)。结论 CAR基因-968G/A多态性可能与中国南方汉族人群柯萨奇病毒性心肌炎有关,G等位基因是柯萨奇病毒性心肌炎的易感基因。 展开更多
关键词 柯萨奇-腺病毒受体 基因多态性 病毒性心肌炎
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柯萨奇-腺病毒受体在肾癌组织中的表达及意义 被引量:6
5
作者 张林琳 贺大林 +4 位作者 李翔 李磊 罗勇 于琳华 Hsieh JT 《中国肿瘤临床》 CAS CSCD 北大核心 2005年第20期1141-1143,共3页
目的:研究柯萨奇-腺病毒受体(CAR)在肾癌组织中的表达及意义。方法:应用免疫组化SP法检测12例癌旁正常肾组织和48例肾细胞癌组织中CAR的表达。结果:12例正常肾组织全部表达CAR,48例肾细胞癌组织中31例无CAR表达。不同分级CAR表达率分别... 目的:研究柯萨奇-腺病毒受体(CAR)在肾癌组织中的表达及意义。方法:应用免疫组化SP法检测12例癌旁正常肾组织和48例肾细胞癌组织中CAR的表达。结果:12例正常肾组织全部表达CAR,48例肾细胞癌组织中31例无CAR表达。不同分级CAR表达率分别为Ⅰ级54.5%(12/22)、Ⅱ级23.5%(4/17)、Ⅲ级11.1%(1/9);不同分期CAR表达率分别为Ⅰ期57.9%(11/19)、Ⅱ期30.8%(4/13)、Ⅲ期18.2%(2/11)、Ⅳ期0(0/5)。结论:在多数肾细胞癌组织中CAR基因表达丧失;CAR表达变化与肾癌的分级、分期相关,可以作为肾癌分化、转移的重要生物学指标。 展开更多
关键词 肾细胞癌 柯萨奇-腺病毒受体 免疫组织化学
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柯萨奇-腺病毒受体在病毒性心肌炎患儿白细胞中的表达及意义 被引量:3
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作者 于小华 李双杰 唐国华 《临床儿科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第7期470-471,482,共3页
目的观察柯萨奇-腺病毒受体(CAR)在病毒性心肌炎(VM)外周血白细胞中的表达及意义。方法选择柯萨奇B病毒性心肌炎患儿及同龄健康儿童各20例,采用全血免疫荧光流式细胞术检测白细胞中CAR表达水平,并对VM患儿CAR表达值与心功能(EF值)的变... 目的观察柯萨奇-腺病毒受体(CAR)在病毒性心肌炎(VM)外周血白细胞中的表达及意义。方法选择柯萨奇B病毒性心肌炎患儿及同龄健康儿童各20例,采用全血免疫荧光流式细胞术检测白细胞中CAR表达水平,并对VM患儿CAR表达值与心功能(EF值)的变化相关性进行分析。结果流式细胞表明,心肌炎组(VM组)平均荧光强度(MFI)和阳性细胞百分率(PPC)均明显高于正常对照组,差异均有高度显著性(t=6.23、10.87,P均<0.01);其MFI与EF值呈显著负相关(r=-0.757,P<0.05)。结论CAR表达水平有助于判断患儿对柯萨奇B组病毒感染的易感性,对VM的诊断、判断病情和预后有一定的价值。 展开更多
关键词 柯萨奇-腺病毒受体 病毒性心肌炎 流式细胞术 白细胞
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曲古抑菌素A上调肿瘤细胞柯萨奇-腺病毒受体表达而抑制其侵袭力的体外研究 被引量:1
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作者 方勇 王蓓蓓 +4 位作者 吴鹏 马晓黎 卢运萍 周剑锋 马丁 《医学研究生学报》 CAS 2007年第5期451-454,I0001,共5页
目的:探讨组蛋白去乙酰化酶抑制剂(HDACI)曲古抑菌素A(TSA)抑制肿瘤细胞侵袭力是否通过上调肿瘤细胞表面柯萨奇-腺病毒受体(CAR)的表达而实现的。方法:在TSA作用T24细胞和MCF-7细胞后,分别检测CAR mRNA和蛋白水平的表达;同时采用体外黏... 目的:探讨组蛋白去乙酰化酶抑制剂(HDACI)曲古抑菌素A(TSA)抑制肿瘤细胞侵袭力是否通过上调肿瘤细胞表面柯萨奇-腺病毒受体(CAR)的表达而实现的。方法:在TSA作用T24细胞和MCF-7细胞后,分别检测CAR mRNA和蛋白水平的表达;同时采用体外黏附实验和Boyden小室体外侵袭实验,以评价细胞黏附和侵袭力的改变。结果:TSA作用72 h后,肿瘤细胞CAR mRNA和蛋白表达水平明显上调,细胞间同型黏附增强,侵袭力下降。且这一过程可被CAR特异性抗体部分逆转。结论:TSA可以通过上调CAR而使肿瘤细胞同型黏附增加,侵袭力下降。 展开更多
关键词 曲古抑菌素A 柯萨奇-腺病毒受体 同型黏附 侵袭
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柯萨奇病毒和腺病毒受体在VMC和DCM猝死者心肌组织中的表达 被引量:2
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作者 李红妍 李永宏 朱团结 《法医学杂志》 CAS CSCD 2007年第4期247-249,F0004,共4页
目的探讨病毒性心肌炎(VMC)和扩张性心肌病(DCM)的发病机制及相互关系。方法应用改良免疫组化技术检测病毒性心肌炎(28例)、扩张性心肌病(31例)和对照组19例。结果CAR阳性表达为棕色,主要表达于心肌细胞膜。在VMC心肌中均检测到较高水平... 目的探讨病毒性心肌炎(VMC)和扩张性心肌病(DCM)的发病机制及相互关系。方法应用改良免疫组化技术检测病毒性心肌炎(28例)、扩张性心肌病(31例)和对照组19例。结果CAR阳性表达为棕色,主要表达于心肌细胞膜。在VMC心肌中均检测到较高水平的CAR表达(免疫组化面积积分为4.3975±0.0365);DCM组26例心肌组织中有较高水平的CAR表达(4.2064±0.0526),有5例几乎无表达(0.0723±0.0014),对照组心肌中几乎未检测到CAR的表达(0.0731±0.0362),VMC组及DCM组与对照组比较差异有显著性(P<0.05)。结论VMC和DCM心肌组织中CAR表达明显高于对照组,提示VMC和DCM的发病都有病毒感染的参与,两者可能来自同一个病因。 展开更多
关键词 心性猝死 病毒性心肌炎 扩张性心肌病 柯萨奇病毒-腺病毒受体 免疫组织化学
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柯萨奇B3病毒诱导鼠心肌炎血浆β-内啡肽及其受体的变化 被引量:3
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作者 沈茜 丁继军 徐玉莲 《第二军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 1999年第8期557-559,共3页
目的:观察病毒性心肌炎病理过程中内源性阿片系统激活的动态变化,探讨阿片肽在心肌炎病理损伤中的作用。方法:以柯萨奇 B3 病毒( Cox B3)诱导 B A L B/c 鼠心肌炎为实验模型,观察感染后第3,7 ,10,15,25... 目的:观察病毒性心肌炎病理过程中内源性阿片系统激活的动态变化,探讨阿片肽在心肌炎病理损伤中的作用。方法:以柯萨奇 B3 病毒( Cox B3)诱导 B A L B/c 鼠心肌炎为实验模型,观察感染后第3,7 ,10,15,25 和35 d 鼠体、肝和肺的质量,血浆β内啡肽(β E P)水平、心肌细胞膜 β E P受体及心肌病损程度。采用放射免疫法测定血浆 β E P、放射配体结合法测定β E P受体、常规病理检查心肌病损程度。结果:以1 000 T C I D50 Cox B3 感染 B A L B/c 鼠,约92.8% (65~70)鼠诱导出典型的心肌炎病理改变。感染后 3~25 d 受染鼠血浆 β E P水平显著高于正常对照组;感染后10~25 d 受染鼠肺/体质量和肝/体质量比均高于正常对照鼠,提示受染鼠出现较严重的充血性心力衰竭。同时,受染鼠心肌细胞膜 β E P受体 Bm ax 显著增高, Kd值变化不明显。结论:由于病毒和自身免疫对心肌细胞的损伤,使病毒性心肌炎患鼠出现充血性心力衰竭,引起循环中阿片肽水平升高及相应受体的变化。通过神经内分泌免疫网络,这些变化必将对心脏的病理损伤产生明显的作用。 展开更多
关键词 柯萨奇病毒B3 心肌炎 Β-内啡肽 受体
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柯萨奇—腺病毒受体在扩张型心肌病心肌中的表达及意义 被引量:1
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作者 于小华 张新刚 +2 位作者 陈瑞珍 杨英珍 李双杰 《中国循环杂志》 CSCD 北大核心 2006年第1期29-32,共4页
目的:探讨柯萨奇—腺病毒受体(CAR)在扩张型心肌病(DCM)心肌组织中的表达及其在 DCM 发病中的意义。方法:利用多聚酶链反应(PCR)技术检测20例原位异体心脏移植的 DCM 受体心肌组织以及5例正常对照心肌组织中柯萨奇 B 组病毒(CVB)、腺... 目的:探讨柯萨奇—腺病毒受体(CAR)在扩张型心肌病(DCM)心肌组织中的表达及其在 DCM 发病中的意义。方法:利用多聚酶链反应(PCR)技术检测20例原位异体心脏移植的 DCM 受体心肌组织以及5例正常对照心肌组织中柯萨奇 B 组病毒(CVB)、腺病毒(ADV)基因,采用免疫组化及逆转录多聚酶链反应(RT-PCR)检测心肌柯萨奇—腺病毒受体 mRNA 及蛋白表达水平。结果:20例 DCM 心肌标本中,柯萨奇 B 组病毒阳性7例(柯萨奇病毒组),腺病毒阳性5例(腺病毒组):其余8例柯萨奇 B 组病毒、腺病毒均阴性(其它组),5例正常对照柯萨奇 B 组病毒、腺病毒也均为阴性。正常对照和其它组心肌中均无柯萨奇—腺病毒受体 mRNA 及蛋白表达,而在柯萨奇病毒组和腺病毒组其表达水平明显增加,但两组之间比较,差异无显著性。结论:柯萨奇—腺病毒受体表达上调可能是导致柯萨奇病毒或腺病毒易感性增加,促使病毒性心肌炎向扩张型心肌病转化的重要原因。 展开更多
关键词 柯萨奇腺病毒受体 扩张型心肌病 柯萨奇病毒 腺病毒
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单免疫球蛋白白介素-1受体相关蛋白基因腺病毒载体构建及其在体内外表达效力检测 被引量:2
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作者 陈旭昕 冯华松 +2 位作者 段蕴铀 吴学玲 钱桂生 《实用医学杂志》 CAS 北大核心 2013年第21期3489-3492,共4页
目的:构建携带小鼠源性单免疫球蛋白白介素-1受体相关蛋白(mSIGIRR)基因重组腺病毒并对其体内外表达效力进行检测。方法:构建重组穿梭质粒pDC316-mSIGIRR,行酶切、测序鉴定。将穿梭质粒和骨架质粒共转293细胞,包装重组腺病毒Ad.mSIGIRR,... 目的:构建携带小鼠源性单免疫球蛋白白介素-1受体相关蛋白(mSIGIRR)基因重组腺病毒并对其体内外表达效力进行检测。方法:构建重组穿梭质粒pDC316-mSIGIRR,行酶切、测序鉴定。将穿梭质粒和骨架质粒共转293细胞,包装重组腺病毒Ad.mSIGIRR,行PCR及滴度鉴定。Ad.mSIGIRR感染A549细胞及小鼠肺组织后,通过RT-PCR、Western blot、免疫组化检测mSIGIRR表达情况。结果:扩增得到目的基因片段与Genbank中序列一致,获得表达mSIGIRR蛋白的重组腺病毒。病毒感染滴度为4×109pfu/mL,在体内外感染模型中均有较高表达效力。结论:成功构建携带mSIGIRR基因重组腺病毒,为进一步研究SIGIRR在炎症调控中的作用及分子机制奠定基础。 展开更多
关键词 单免疫球蛋白白介素-1受体相关蛋白 腺病毒载体 急性肺损伤 Toll样受体
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过氧化物酶增殖子活化受体-γsiRNA腺病毒载体的构建 被引量:1
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作者 王义生 张弛 +5 位作者 李月白 赵国强 王少华 李振伟 殷力 刘宏建 《郑州大学学报(医学版)》 CAS 北大核心 2008年第3期477-479,共3页
目的:构建针对过氧化物酶体增殖子活化受体-γ(PPARγ)基因的siRNA腺病毒载体。方法:依据siR-NA设计原则,在PPARγmRNA(AF013266)序列中设计2个特异性靶序列(36-54、73-91),体外合成对应发卡样DNAs,退火后先将其克隆入pSIREN-Shuttle载... 目的:构建针对过氧化物酶体增殖子活化受体-γ(PPARγ)基因的siRNA腺病毒载体。方法:依据siR-NA设计原则,在PPARγmRNA(AF013266)序列中设计2个特异性靶序列(36-54、73-91),体外合成对应发卡样DNAs,退火后先将其克隆入pSIREN-Shuttle载体,再亚克隆入pAdeno腺病毒载体,对插入序列进行DNA序列分析。结果:发卡样siRNA单链DNA寡核苷酸退火后,电泳可见明亮靶条带。连接退火寡核苷酸和pSIREN-Shuttle载体得到阳性克隆pSIREN-Shuttle-siPPARγ-36、pSIREN-Shuttle-siPPARγ-73。同源重组后得到亚克隆pAdeno-siPPARγ-36、pAdeno-siPPARγ-73,测序证实插入序列与设计序列完全一致。结论:成功构建2个靶向PPARγ基因的siRNA载体pAdeno-siPPARγ-36和pAdeno-siPPARγ-73。 展开更多
关键词 RNA干扰 过氧化物酶体增殖子活化受体-γ 腺病毒载体 克隆
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柯萨奇病毒和腺病毒受体及其在病毒性心肌炎发病机制中的作用 被引量:2
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作者 赵武 《临床儿科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2002年第11期699-700,702,共3页
病毒性心肌炎(viral myocarditis,VMC)是临床常见的心脏疾患,发病机理目前尚不十分清楚,一般认为该病的发生与病毒的溶细胞作用及机体的自身免疫反应有关.
关键词 柯萨奇病毒 腺病毒受体 病毒性心肌炎 发病机制
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肺癌患者柯萨奇病毒和腺病毒受体的表达及其临床意义 被引量:1
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作者 夏文彬 孙蕾娜 +1 位作者 钱碧云 战忠利 《中国肿瘤临床》 CAS CSCD 北大核心 2012年第17期1277-1280,共4页
目的:探索柯萨奇病毒和腺病毒受体(Coxsackie and adenovirns receptor,CAR)与肺癌的关系,为使用基于腺病毒载体的基因治疗方案提供依据方法:运用免疫组织化学法检测112例肺癌患者肿瘤组织、癌旁组织以及正常组织中CAR的表达;通过RT-PCR... 目的:探索柯萨奇病毒和腺病毒受体(Coxsackie and adenovirns receptor,CAR)与肺癌的关系,为使用基于腺病毒载体的基因治疗方案提供依据方法:运用免疫组织化学法检测112例肺癌患者肿瘤组织、癌旁组织以及正常组织中CAR的表达;通过RT-PCR和Western blot法检测32例患者CARmRNA及CAR蛋白的表达。结果:在正常肺组织中未见CAR表达,癌旁组织中可见少量的CAR表达鳞状细胞癌和腺癌中CAR阳性表达比率分别为43%和70%,均较癌旁组织明显升高同时,腺癌中CAR的表达也显著高于鳞状细胞癌,RT-PCR和Western blot法进一步证实免疫组织化学法检测结果。结论:肺癌中CAR过表达,在腺癌中尤为明显,提示CAR可能参与了肺癌的发生发展。 展开更多
关键词 柯萨奇腺病毒受体 肺癌 基因治疗
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改良腺病毒AdF35-eGFP转染人及大鼠骨髓间充质干细胞的效率对比研究 被引量:3
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作者 胡硕 熊玲静 +3 位作者 余剑英 雷萌 赵敏 张永学 《中南大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2010年第9期983-989,共7页
目的:比较改良腺病毒AdF35-增强绿荧光蛋白(eGFP)转染人骨髓间充质干细胞(humanbone marrow mesenchymal stem cells,hBMSCs)和大鼠骨髓间充质干细胞(rat BMSCs,rBMSCs)的效率。方法:分别从人体、大鼠骨髓中分离出BMSCs,成骨、成脂诱导... 目的:比较改良腺病毒AdF35-增强绿荧光蛋白(eGFP)转染人骨髓间充质干细胞(humanbone marrow mesenchymal stem cells,hBMSCs)和大鼠骨髓间充质干细胞(rat BMSCs,rBMSCs)的效率。方法:分别从人体、大鼠骨髓中分离出BMSCs,成骨、成脂诱导培养以鉴定BMSCs。构建含eGFP的AdF35重组腺病毒载体AdF35-eGFP,以不同感染复数(multiplicity of infection,MOI)分别转染BMSCs后,MTT检测AdF35-eGFP对2种BMSCs的毒性作用,荧光显微镜观察eGFP的表达,流式细胞仪检测转染效率,实时定量PCR检测2种BMSCs表达柯萨奇腺病毒受体(CAR)和CD46mRNA的水平。结果:hBMSCs和rBMSCs从骨髓中分离出来后,分别成功诱导分化成骨和成脂。当MOI为1 000 PFU/mL时,AdF35-EGFP对2种BMSCs的活性均有明显抑制作用(P<0.001)。AdF35-eGFP感染hBMSCs 48 h后,荧光显微镜下可见发强烈绿色荧光的细胞,流式细胞仪检测其转染效率可达(84.8±7.1)%;Ad5-eGFP感染rBMSCs后,荧光显微镜下仅见少量发绿色荧光的细胞,48 h转染效率为(3.1±1.1)%。hBMSCs高表达CD46mRNA,低表达CARmRNA;而rBMSCs则高表达CARmRNA,低表达CD46mRNA,2种基因的表达差异有统计学意义(P<0.01)。结论:AdF35可作为理想载体携带目的基因转染hBMSCs,但不适合作为转染rBMSCs的载体。 展开更多
关键词 35型腺病毒 骨髓间充质干细胞 转染 CD46 柯萨奇腺病毒受体
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小鼠树突状细胞相关C型凝集素-1基因重组腺病毒载体的构建及鉴定 被引量:3
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作者 夏迪 钱倩 +5 位作者 刘志成 谭鸣鸣 丁媛 苏欣 孙文逵 施毅 《医学研究生学报》 CAS 北大核心 2015年第4期341-345,共5页
目的树突状细胞相关C型凝集素-1(dendritic cell-associated C-type lectin-1,Dectin-1)是介导抗真菌天然免疫的重要受体之一。文中旨在构建表达小鼠Dectin-1基因的重组腺病毒载体,扩增、纯化获得高浓度的重组腺病毒。方法将PCR扩增的... 目的树突状细胞相关C型凝集素-1(dendritic cell-associated C-type lectin-1,Dectin-1)是介导抗真菌天然免疫的重要受体之一。文中旨在构建表达小鼠Dectin-1基因的重组腺病毒载体,扩增、纯化获得高浓度的重组腺病毒。方法将PCR扩增的目的片段CLEC7A-p IRES2-EGFP重组到中间载体p DONR221上,再与腺病毒骨架质粒p AD/CMV/V5-DEST重组,获得重组腺病毒质粒p AD-CLEC7A-p IRES2-EGFP,经Pac I线性化后转染人胚肾293(HEK293)细胞,收获重组腺病毒p AD-CLEC7A-p IRES2-EGFP;利用HEK293细胞大量扩增腺病毒;并进行重组腺病毒的滴度测定;用荧光显微镜和实时荧光定量PCR鉴定转染重组腺病毒组(Dectin-1基因重组腺病毒转染HEK293细胞)和转染空病毒组(空病毒转染HEK293细胞)中Dectin-1基因的表达。结果菌落PCR鉴定、酶切鉴定及测序结果均显示重组腺病毒含有Dectin-1基因,腺病毒滴度为5×1011IU/m L,荧光显微镜下可见绿色荧光,PCR检测到转染重组腺病毒组Dectin-1表达量是转染空病毒组的8677.25倍。结论成功构建并获得了较高浓度的Dectin-1基因重组腺病毒载体,为下一步体内外研究Dectin-1高表达在宿主抗真菌天然免疫中的作用奠定基础。 展开更多
关键词 树突状细胞相关C型凝集素-1 CLEC7A基因 腺病毒载体 模式识别受体
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受体依赖性TRAIL重组腺病毒对人肺癌细胞凋亡的诱导作用
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作者 马玲娣 王勇 +6 位作者 倪诚 王仕忠 鲍永仪 关乃富 张科 Leif G. Salford 樊小龙 《中国肿瘤生物治疗杂志》 CAS CSCD 北大核心 2009年第6期577-582,共6页
目的:观察重组TRAIL腺病毒(Ad5-TRAIL及Ad5F35-TRAIL)对人非小细胞肺癌(nonsmall-cell lung cancer,NSCLC)原代培养细胞和细胞株的凋亡诱导作用,探讨两种Ad-TRAIL用于肺癌基因治疗的价值。方法:采用流式细胞术检测人肺癌细胞系A549、Z79... 目的:观察重组TRAIL腺病毒(Ad5-TRAIL及Ad5F35-TRAIL)对人非小细胞肺癌(nonsmall-cell lung cancer,NSCLC)原代培养细胞和细胞株的凋亡诱导作用,探讨两种Ad-TRAIL用于肺癌基因治疗的价值。方法:采用流式细胞术检测人肺癌细胞系A549、Z793、QG56和NCI-H520及10例原代培养肺癌细胞中CAR和CD46的表达水平;分别以Ad5-TRAIL及Ad5F35-TRAIL重组腺病毒按MOI 10和50感染上述细胞,48 h后Annexin V-FITC双标法流式细胞术检测细胞的早期凋亡。结果:A549、Z793、QG56和NCI-H520 4株肺癌细胞中,CD46的表达均明显高于CAR表达。Z793、QG56细胞对Ad5-TRAIL和Ad5F35-TRAIL的作用较敏感,MOI=10感染后凋亡率分别为(11.76±2.10)%、(15.96±2.89)%和(6.05±1.58)%、(10.11±1.26)%,显著高于对照组[(2.33±0.37)%和(5.95±1.89)%,P<0.05];MOI=50感染时NCI-H520细胞凋亡率分别为(12.89±3.2)%和(9.08±1.35)%,与对照组(7.04±2.17)%相比差异无统计学意义(P>0.05);Ad5-TRAIL和Ad5F35-TRAIL均不能诱导A549细胞凋亡。10例原代肺癌细胞CD46表达也明显较CAR高;Ad5-TRAIL或Ad5F35-TRAIL感染后,5例的原代肺癌细胞检测到凋亡;与Ad5-TRAIL相比,Ad5F35-TRAIL诱导的凋亡率更高。结论:两种TRAIL重组腺病毒对非小细胞肺癌细胞均有凋亡诱导作用,Ad5F35-TRAIL的作用强于Ad5-TRAIL,更适合于非小细胞肺癌的基因治疗。 展开更多
关键词 非小细胞肺癌 肿瘤坏死因子受体相关凋亡诱导配体 腺病毒 凋亡 柯萨奇腺病毒受体(CAR) CD46
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肿瘤细胞CAR表达水平与5型腺病毒转导效率的关系 被引量:2
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作者 王海娟 李云峰 +5 位作者 钱海利 张雪燕 付明 梁萧 詹启敏 林晨 《中国肿瘤生物治疗杂志》 CAS CSCD 2006年第6期429-434,共6页
目的:通过体外、体内实验探讨肿瘤细胞柯萨奇腺病毒受体(coxsackie adenovirus receptor,CAR)表达水平与腺病毒转导效率的关系,为腺病毒相关的生物制剂在临床个体化应用提供实验依据。方法:将载有绿色荧光蛋白的Ad5型腺病毒(Ad.... 目的:通过体外、体内实验探讨肿瘤细胞柯萨奇腺病毒受体(coxsackie adenovirus receptor,CAR)表达水平与腺病毒转导效率的关系,为腺病毒相关的生物制剂在临床个体化应用提供实验依据。方法:将载有绿色荧光蛋白的Ad5型腺病毒(Ad.GFP)以100MOI、200MOI分别感染人食管癌细胞系KYSE510、KYSE150、EC9706、人宫颈癌细胞系HeLa、人卵巢癌细胞系SKOV3、人肝癌细胞系HepG2和人肺癌细胞系A549,感染后48h通过流式细胞术检测Ad—GFP对不同细胞系的转导效率。采用Western blotting方法检测这些细胞中CAR的表达水平。将HeLa、A549、SKOV3、EC9706细胞分别接种于裸鼠腋下,接种细胞数分别为3×10^6、3×10^6、3×10^6、2×10^6,建立裸鼠移植瘤模型。待肿瘤长径达5~7mm时,在裸鼠移植瘤内注射Ad—GFP,每次1×10^9PFU,间隔48h注射第2次。第2次注射后48h处死裸鼠,剖取瘤组织,荧光显微镜观察冰冻切片中GFP的表达情况以判定腺病毒在瘤体内的转导效率,同时用免疫组化法检测瘤组织内的CAR表达水平。结果:200MOIAd—GFP感染A549、HeLa、HepG2、KYSE150细胞48h后分别有92.67%、89.31%、84.98%、74.59%的细胞表达GFP;而SKOV3、KYSE510、EC9706细胞中腺病毒的转导效率明显降低,GFP阳性率分别为30.06%、27.40%、18.93%;各种细胞的CAR蛋白表达水平与腺病毒的转导效率呈正相关。注射Ad—GFP的裸鼠移植瘤组织中可见HeLa、A549瘤组织内有明显的点状绿色荧光,而SKOV3、EC9706瘤组织内表达GFP的细胞数明显少于前两种瘤组织;HeLa、A549裸鼠移植瘤组织内大多数瘤细胞高表达CAR(卅),SKOV3、EC9706移植瘤组织内CAR表达水平较低(+或-),表明瘤体内CAR表达水平与Ad.GFP的转导效率也呈正相关。结论:体内外实验均显示肿瘤细胞的CAR表达水平与5型腺病毒转导效率密切相关。肿瘤患者治疗前检测组织中CAR表达水平有助于规范腺病毒载体的基因治疗药物的个体化使用。 展开更多
关键词 肿瘤 腺病毒 柯萨奇腺病毒受体 基因治疗
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CAR的表达调节对肝癌基因治疗中腺病毒载体感染效率的影响 被引量:2
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作者 吴赟 郑辉 +3 位作者 陈宏新 黄孝天 沈佐君 刘晶星 《中国肿瘤生物治疗杂志》 CAS CSCD 2008年第3期205-209,共5页
目的:通过抑制Raf-MEK-ERK信号转导途径调节肝癌细胞表面柯萨奇病毒和腺病毒受体(coxsackie-adenovirus receptor,CAR)的表达,探索肝癌基因治疗中CAR表达与腺病毒(adenovirus,Ad)感染效率之间的关系。方法:选择两株人肝癌细胞株SMMC-772... 目的:通过抑制Raf-MEK-ERK信号转导途径调节肝癌细胞表面柯萨奇病毒和腺病毒受体(coxsackie-adenovirus receptor,CAR)的表达,探索肝癌基因治疗中CAR表达与腺病毒(adenovirus,Ad)感染效率之间的关系。方法:选择两株人肝癌细胞株SMMC-7721及HepG2,以Raf-MEK-ERK信号转导抑制剂U0126作用后,应用Western blotting检测细胞表面CAR蛋白的表达水平。选用能表达GFP的非复制型E_1A缺陷的Ad感染人肝癌细胞SMMC-7721及HepG_2,应用FACS分析U0126处理前后Ad感染效率的变化。结果:细胞经MEK抑制剂U0126处理后,细胞膜表面CAR的表达呈明显上调趋势。FACS检测显示,经U0126处理后,在相同感染复数(10 MOI)Ad-GFP的感染下,GFP^+细胞率明显升高,SMMC-7721细胞由(71.65±6.21)%上升至(86.54±5.70)%;HepG_2细胞由(77.53±4.62)%上升至(87.06±2.83)%(均P<0.05)。结论:抑制剂U0126抑制Raf-MEK-ERK信号转导途径后,可上调肝癌细胞膜表面CAR的表达,从而导致Ad在肝癌细胞感染效率的提高。 展开更多
关键词 柯萨奇病毒腺病毒受体 U0126 腺病毒 感染效率 肝细胞癌 基因治疗
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CAR在柯萨奇B3病毒感染心肌细胞中作用 被引量:2
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作者 赵武 周爱卿 +2 位作者 傅立军 梁瑛 唐宁 《临床儿科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2004年第11期748-750,753,共4页
目的探讨柯萨奇病毒和腺病毒受体(coxsackievirusandadenovirusreceptor,CAR)在嗜心性柯萨奇B3病毒(myocarditiccoxsaekievirusB3,CVB3m)感染心肌细胞中的作用。方法采用体外培养新生小鼠心肌细胞方法,建立CVB3m感染心肌细胞模型,将培养... 目的探讨柯萨奇病毒和腺病毒受体(coxsackievirusandadenovirusreceptor,CAR)在嗜心性柯萨奇B3病毒(myocarditiccoxsaekievirusB3,CVB3m)感染心肌细胞中的作用。方法采用体外培养新生小鼠心肌细胞方法,建立CVB3m感染心肌细胞模型,将培养48h的心肌细胞分为对照组、CVB3m组和CAR抗体+CVB3m组,并作相应处理,继续培养48h后,分别观察各组心肌细胞病变效应(cytopathiceffect,CPE),并用四唑盐(MTT)比色法测定各组心肌细胞存活力。结果CAR抗体+CVB3m组心肌细胞CPE明显减轻,存活力显著增强,与CVB3m组比较差异显著(P<0.01),与对照组比较差异无显著性(P>0.05)。结论CAR抗体对CVB3m感染心肌细胞具有保护作用,提示CAR在CVB3m感染心肌细胞中可能发挥重要的介导作用。 展开更多
关键词 柯萨奇病毒腺病毒受体 柯萨奇B3病毒 心肌细胞 小鼠
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