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腺病毒细胞受体CAR研究进展
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作者 王泱 刘静瑞 +4 位作者 张瀚文 高亚茹 刘琳 李新生 宋亚鹏 《中国家禽》 北大核心 2025年第9期135-142,共8页
腺病毒(Adenovirus,Ad)是一类无包膜的双链DNA病毒,能广泛感染脊椎动物,导致从轻症到严重的感染。腺病毒通过其纤突蛋白与宿主细胞表面受体结合,柯萨奇-腺病毒受体(Coxsackievirus and adenovirus receptor,CAR)是主要的介导者。CAR是... 腺病毒(Adenovirus,Ad)是一类无包膜的双链DNA病毒,能广泛感染脊椎动物,导致从轻症到严重的感染。腺病毒通过其纤突蛋白与宿主细胞表面受体结合,柯萨奇-腺病毒受体(Coxsackievirus and adenovirus receptor,CAR)是主要的介导者。CAR是一种高度保守的跨膜蛋白,在多种脊椎动物中发挥关键作用。文章聚焦于CAR的生物学功能和结构特征,探讨其在腺病毒感染机制中的核心作用;重点分析了CAR与人腺病毒、禽腺病毒及其他物种腺病毒的相互作用及功能差异,揭示腺病毒与宿主受体结合的多样性和复杂性。此外,文章讨论了CAR在基因治疗中的应用前景,特别是利用CAR介导的腺病毒载体递送抗癌基因和免疫调节基因的研究进展。同时,调控CAR表达水平及阻断其与病毒结合的策略被认为是优化腺病毒治疗的重要方向。文章通过总结现有研究成果,深化了对腺病毒感染机制的认识,并为基因治疗及相关疾病的治疗策略提供了重要的理论依据和实践参考。 展开更多
关键词 细胞受体 CAR 腺病毒 治疗策略
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柯萨奇病毒-腺病毒受体在结肠癌组织中的表达及意义 被引量:3
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作者 张念华 宋立兵 +6 位作者 伍小军 高艳芳 彭瑞清 丁娅 李瑞平 万德森 张晓实 《中国肿瘤临床》 CAS CSCD 北大核心 2007年第6期316-318,325,共4页
目的:柯萨奇病毒-腺病毒受体(coxsackie and adenovirus receptor,CAR)介导腺病毒与靶细胞之间的粘附,是腺病毒转染靶细胞的限速因子。本文分析CAR在瘤旁上皮组织、结肠肿瘤原发灶和淋巴结转移灶中的表达,为设计腺病毒载体基因治疗方案... 目的:柯萨奇病毒-腺病毒受体(coxsackie and adenovirus receptor,CAR)介导腺病毒与靶细胞之间的粘附,是腺病毒转染靶细胞的限速因子。本文分析CAR在瘤旁上皮组织、结肠肿瘤原发灶和淋巴结转移灶中的表达,为设计腺病毒载体基因治疗方案提供依据。方法:采用免疫组织化学方法检测62例结肠癌组织中CAR的表达,分析CAR表达与临床病理特征的关系。结果:与瘤旁上皮组织相比,肿瘤组织普遍存在CAR表达下调,但CAR在原发灶和淋巴结转移灶的表达水平无明显差异。CAR的表达水平与患者年龄及肿瘤大小相关。结论:结肠癌组织中存在CAR表达下调,提示在设计腺病毒载体基因治疗方案时应充分考虑CAR表达变化对疗效的影响。 展开更多
关键词 柯萨奇病毒-腺病毒受体 结肠癌 基因治疗
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柯萨奇-腺病毒受体基因-968G/A多态性与柯萨奇病毒性心肌炎的关系 被引量:14
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作者 杨云华 邓晖 +2 位作者 刘丹莉 杜九中 李双杰 《临床儿科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2010年第8期755-757,共3页
目的探讨柯萨奇-腺病毒受体(CAR)基因-968G/A多态性与中国南方汉族人群柯萨奇病毒性心肌炎的关系。方法收集病毒性心肌炎患儿280例,将其中CVB-IgM阳性130例作为心肌炎组,并选择同期130名健康儿童作为对照组,采用聚和酶链反应-限制性内... 目的探讨柯萨奇-腺病毒受体(CAR)基因-968G/A多态性与中国南方汉族人群柯萨奇病毒性心肌炎的关系。方法收集病毒性心肌炎患儿280例,将其中CVB-IgM阳性130例作为心肌炎组,并选择同期130名健康儿童作为对照组,采用聚和酶链反应-限制性内切酶片断长度多态性(PCR-RFLP)、DNA测序等方法检测2组CAR基因-968G/A多态性,采用酶联免疫吸附法(ELISA)测定两组血清CAR水平。结果心肌炎组GG基因型和G等位基因频率均显著高于对照组(P<0.05)。心肌炎组血清CAR水平明显高于对照组(P<0.01),CAR基因-968G/A多态位点中含G等位基因(GG+GA)者血清CAR水平和CVB感染率均显著高于非G等位基因(AA)携带者(P均<0.05)。结论 CAR基因-968G/A多态性可能与中国南方汉族人群柯萨奇病毒性心肌炎有关,G等位基因是柯萨奇病毒性心肌炎的易感基因。 展开更多
关键词 柯萨奇-腺病毒受体 基因多态性 病毒性心肌炎
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柯萨奇-腺病毒受体在肾癌组织中的表达及意义 被引量:6
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作者 张林琳 贺大林 +4 位作者 李翔 李磊 罗勇 于琳华 Hsieh JT 《中国肿瘤临床》 CAS CSCD 北大核心 2005年第20期1141-1143,共3页
目的:研究柯萨奇-腺病毒受体(CAR)在肾癌组织中的表达及意义。方法:应用免疫组化SP法检测12例癌旁正常肾组织和48例肾细胞癌组织中CAR的表达。结果:12例正常肾组织全部表达CAR,48例肾细胞癌组织中31例无CAR表达。不同分级CAR表达率分别... 目的:研究柯萨奇-腺病毒受体(CAR)在肾癌组织中的表达及意义。方法:应用免疫组化SP法检测12例癌旁正常肾组织和48例肾细胞癌组织中CAR的表达。结果:12例正常肾组织全部表达CAR,48例肾细胞癌组织中31例无CAR表达。不同分级CAR表达率分别为Ⅰ级54.5%(12/22)、Ⅱ级23.5%(4/17)、Ⅲ级11.1%(1/9);不同分期CAR表达率分别为Ⅰ期57.9%(11/19)、Ⅱ期30.8%(4/13)、Ⅲ期18.2%(2/11)、Ⅳ期0(0/5)。结论:在多数肾细胞癌组织中CAR基因表达丧失;CAR表达变化与肾癌的分级、分期相关,可以作为肾癌分化、转移的重要生物学指标。 展开更多
关键词 肾细胞癌 柯萨奇-腺病毒受体 免疫组织化学
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柯萨奇-腺病毒受体在病毒性心肌炎患儿白细胞中的表达及意义 被引量:3
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作者 于小华 李双杰 唐国华 《临床儿科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第7期470-471,482,共3页
目的观察柯萨奇-腺病毒受体(CAR)在病毒性心肌炎(VM)外周血白细胞中的表达及意义。方法选择柯萨奇B病毒性心肌炎患儿及同龄健康儿童各20例,采用全血免疫荧光流式细胞术检测白细胞中CAR表达水平,并对VM患儿CAR表达值与心功能(EF值)的变... 目的观察柯萨奇-腺病毒受体(CAR)在病毒性心肌炎(VM)外周血白细胞中的表达及意义。方法选择柯萨奇B病毒性心肌炎患儿及同龄健康儿童各20例,采用全血免疫荧光流式细胞术检测白细胞中CAR表达水平,并对VM患儿CAR表达值与心功能(EF值)的变化相关性进行分析。结果流式细胞表明,心肌炎组(VM组)平均荧光强度(MFI)和阳性细胞百分率(PPC)均明显高于正常对照组,差异均有高度显著性(t=6.23、10.87,P均<0.01);其MFI与EF值呈显著负相关(r=-0.757,P<0.05)。结论CAR表达水平有助于判断患儿对柯萨奇B组病毒感染的易感性,对VM的诊断、判断病情和预后有一定的价值。 展开更多
关键词 柯萨奇-腺病毒受体 病毒性心肌炎 流式细胞术 白细胞
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柯萨奇—腺病毒受体在扩张型心肌病心肌中的表达及意义 被引量:1
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作者 于小华 张新刚 +2 位作者 陈瑞珍 杨英珍 李双杰 《中国循环杂志》 CSCD 北大核心 2006年第1期29-32,共4页
目的:探讨柯萨奇—腺病毒受体(CAR)在扩张型心肌病(DCM)心肌组织中的表达及其在 DCM 发病中的意义。方法:利用多聚酶链反应(PCR)技术检测20例原位异体心脏移植的 DCM 受体心肌组织以及5例正常对照心肌组织中柯萨奇 B 组病毒(CVB)、腺... 目的:探讨柯萨奇—腺病毒受体(CAR)在扩张型心肌病(DCM)心肌组织中的表达及其在 DCM 发病中的意义。方法:利用多聚酶链反应(PCR)技术检测20例原位异体心脏移植的 DCM 受体心肌组织以及5例正常对照心肌组织中柯萨奇 B 组病毒(CVB)、腺病毒(ADV)基因,采用免疫组化及逆转录多聚酶链反应(RT-PCR)检测心肌柯萨奇—腺病毒受体 mRNA 及蛋白表达水平。结果:20例 DCM 心肌标本中,柯萨奇 B 组病毒阳性7例(柯萨奇病毒组),腺病毒阳性5例(腺病毒组):其余8例柯萨奇 B 组病毒、腺病毒均阴性(其它组),5例正常对照柯萨奇 B 组病毒、腺病毒也均为阴性。正常对照和其它组心肌中均无柯萨奇—腺病毒受体 mRNA 及蛋白表达,而在柯萨奇病毒组和腺病毒组其表达水平明显增加,但两组之间比较,差异无显著性。结论:柯萨奇—腺病毒受体表达上调可能是导致柯萨奇病毒或腺病毒易感性增加,促使病毒性心肌炎向扩张型心肌病转化的重要原因。 展开更多
关键词 柯萨奇腺病毒受体 扩张型心肌病 柯萨奇病毒 腺病毒
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曲古抑菌素A上调肿瘤细胞柯萨奇-腺病毒受体表达而抑制其侵袭力的体外研究 被引量:1
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作者 方勇 王蓓蓓 +4 位作者 吴鹏 马晓黎 卢运萍 周剑锋 马丁 《医学研究生学报》 CAS 2007年第5期451-454,I0001,共5页
目的:探讨组蛋白去乙酰化酶抑制剂(HDACI)曲古抑菌素A(TSA)抑制肿瘤细胞侵袭力是否通过上调肿瘤细胞表面柯萨奇-腺病毒受体(CAR)的表达而实现的。方法:在TSA作用T24细胞和MCF-7细胞后,分别检测CAR mRNA和蛋白水平的表达;同时采用体外黏... 目的:探讨组蛋白去乙酰化酶抑制剂(HDACI)曲古抑菌素A(TSA)抑制肿瘤细胞侵袭力是否通过上调肿瘤细胞表面柯萨奇-腺病毒受体(CAR)的表达而实现的。方法:在TSA作用T24细胞和MCF-7细胞后,分别检测CAR mRNA和蛋白水平的表达;同时采用体外黏附实验和Boyden小室体外侵袭实验,以评价细胞黏附和侵袭力的改变。结果:TSA作用72 h后,肿瘤细胞CAR mRNA和蛋白表达水平明显上调,细胞间同型黏附增强,侵袭力下降。且这一过程可被CAR特异性抗体部分逆转。结论:TSA可以通过上调CAR而使肿瘤细胞同型黏附增加,侵袭力下降。 展开更多
关键词 曲古抑菌素A 柯萨奇-腺病毒受体 同型黏附 侵袭
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柯萨奇病毒和腺病毒受体及其在病毒性心肌炎发病机制中的作用 被引量:2
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作者 赵武 《临床儿科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2002年第11期699-700,702,共3页
病毒性心肌炎(viral myocarditis,VMC)是临床常见的心脏疾患,发病机理目前尚不十分清楚,一般认为该病的发生与病毒的溶细胞作用及机体的自身免疫反应有关.
关键词 柯萨奇病毒 腺病毒受体 病毒性心肌炎 发病机制
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肿瘤细胞表面柯萨奇病毒-腺病毒受体与5型腺病毒感染效率的关系 被引量:2
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作者 任鹏康 韦芳 +5 位作者 李惠明 王丰 张巨峰 陈霞芳 李宗海 黄倩 《中国肿瘤生物治疗杂志》 CAS CSCD 2006年第3期209-213,共5页
目的:探讨不同肿瘤细胞系柯萨奇病毒-腺病毒受体(CAR)和整合素的表达水平与5型腺病毒感染效率的关系,为腺病毒基因治疗研究奠定基础。方法:利用瞬时转染CAR的真核表达质粒提高肿瘤细胞表面CAR的表达,应用抗体封闭细胞表面的CAR和整合素... 目的:探讨不同肿瘤细胞系柯萨奇病毒-腺病毒受体(CAR)和整合素的表达水平与5型腺病毒感染效率的关系,为腺病毒基因治疗研究奠定基础。方法:利用瞬时转染CAR的真核表达质粒提高肿瘤细胞表面CAR的表达,应用抗体封闭细胞表面的CAR和整合素后,通过流式细胞仪和荧光素酶分析法测定腺病毒Ad5-CMV-EGFP和Ad5-CMV-Luc对肿瘤细胞的感染效率和基因表达水平的变化。结果:不同肿瘤细胞表面CAR和整合素的表达水平是不同的,其中SMMC-7721和A549细胞CAR的表达量最高,而K562细胞CAR的表达水平最低;荧光显微镜和流式细胞仪检测Ad5-CMV-EGFP对肿瘤细胞的感染效率,结果显示5型腺病毒对于SMMC-7721和A549细胞的感染效率最高,而对于K562细胞则很低;瞬时转染表达CAR的真核质粒可提高多种肿瘤细胞表面CAR的表达,较大幅度提高了5型腺病毒的感染效率。而抗体封闭肿瘤细胞表面的CAR或整合素后,腺病毒感染效率显著下降。结论:肿瘤细胞表面CAR和整合素的表达水平决定了腺病毒对肿瘤细胞的感染效率。 展开更多
关键词 腺病毒 柯萨奇病毒-腺病毒受体 整合素 感染 基因治疗
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柯萨奇病毒-腺病毒受体在肺癌组织中的表达意义 被引量:2
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作者 王谦 潘毅 +1 位作者 李君文 战忠利 《中国肿瘤临床》 CAS CSCD 北大核心 2007年第20期1150-1153,共4页
目的:初步探讨柯萨奇病毒-腺病毒受体(Coxsackie and adenovirus receptor,CAR)与人肺鳞状细胞癌及腺癌发生、发展的关系,为设计腺病毒载体对肺癌进行基因治疗的方案提供理论依据。方法:采用免疫组织化学方法检测112例肺癌(包括鳞状细胞... 目的:初步探讨柯萨奇病毒-腺病毒受体(Coxsackie and adenovirus receptor,CAR)与人肺鳞状细胞癌及腺癌发生、发展的关系,为设计腺病毒载体对肺癌进行基因治疗的方案提供理论依据。方法:采用免疫组织化学方法检测112例肺癌(包括鳞状细胞癌65例,腺癌47例)组织中CAR的表达情况,利用统计学方法(SPSS10.0软件)分析CAR的表达在鳞状细胞癌、腺癌以及癌旁正常肺组织中有否差异。结果:正常肺组织中仅有少量CAR的表达。两类型肺癌分别与癌旁组织CAR的表达差别有统计学意义(P<0.01),在鳞状细胞癌中CAR的表达较癌旁组织提高34.75%,在腺癌中CAR的表达较癌旁组织提高38.30%。其中,鳞状细胞癌的CAR阳性率为43.08%,腺癌的阳性率为70.21%,两类型肺癌间CAR表达的阳性率差别亦有统计学意义(P<0.01)。但CAR的表达在肺鳞状细胞癌不同组织学分级中(Ⅰ~Ⅲ级)的差别未有统计学意义(P>0.05)。此外,我们发现在肺腺癌中所包含的细支气管肺泡癌部分几乎都有CAR的表达。结论:肺癌组织(鳞状细胞癌和腺癌)CAR的表达普遍提高,提示CAR与肺癌的发生、发展有一定的联系,并且与肺腺癌的形成及发展的关系更为密切,因此为进一步实现用腺病毒载体对肺癌进行基因治疗提供了理论基础。 展开更多
关键词 柯萨奇病毒-腺病毒受体 肺癌 基因治疗
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柯萨奇病毒和腺病毒受体在VMC和DCM猝死者心肌组织中的表达 被引量:2
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作者 李红妍 李永宏 朱团结 《法医学杂志》 CAS CSCD 2007年第4期247-249,F0004,共4页
目的探讨病毒性心肌炎(VMC)和扩张性心肌病(DCM)的发病机制及相互关系。方法应用改良免疫组化技术检测病毒性心肌炎(28例)、扩张性心肌病(31例)和对照组19例。结果CAR阳性表达为棕色,主要表达于心肌细胞膜。在VMC心肌中均检测到较高水平... 目的探讨病毒性心肌炎(VMC)和扩张性心肌病(DCM)的发病机制及相互关系。方法应用改良免疫组化技术检测病毒性心肌炎(28例)、扩张性心肌病(31例)和对照组19例。结果CAR阳性表达为棕色,主要表达于心肌细胞膜。在VMC心肌中均检测到较高水平的CAR表达(免疫组化面积积分为4.3975±0.0365);DCM组26例心肌组织中有较高水平的CAR表达(4.2064±0.0526),有5例几乎无表达(0.0723±0.0014),对照组心肌中几乎未检测到CAR的表达(0.0731±0.0362),VMC组及DCM组与对照组比较差异有显著性(P<0.05)。结论VMC和DCM心肌组织中CAR表达明显高于对照组,提示VMC和DCM的发病都有病毒感染的参与,两者可能来自同一个病因。 展开更多
关键词 心性猝死 病毒性心肌炎 扩张性心肌病 柯萨奇病毒-腺病毒受体 免疫组织化学
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柯萨奇-腺病毒受体基因的原核表达和多克隆抗体制备 被引量:2
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作者 吴赟 陈洪 +2 位作者 黄孝天 陈宏新 刘晶星 《上海第二医科大学学报》 CSCD 2004年第9期726-730,共5页
目的利用原核基因工程克隆表达柯萨奇-腺病毒受体(CAR)胞外段,并制备多克隆抗体。方法从HeLa细胞中抽提总RNA,通过RT-PCR获得编码CAR胞外段的cDNA,与pQE31质粒连接,构建表达型重组质粒,测序证实后诱导表达,经Ni-NTA柱亲和纯化后,免疫新... 目的利用原核基因工程克隆表达柯萨奇-腺病毒受体(CAR)胞外段,并制备多克隆抗体。方法从HeLa细胞中抽提总RNA,通过RT-PCR获得编码CAR胞外段的cDNA,与pQE31质粒连接,构建表达型重组质粒,测序证实后诱导表达,经Ni-NTA柱亲和纯化后,免疫新西兰兔,ELISA检测抗血清滴度。结果重组质粒转化的大肠杆菌M15经IPTG诱导表达及亲和纯化后得到滴度较高的融合蛋白,SDS-PAGE和Western blot显示其分子量约为26 kd,具有特异的抗原性,主要以包涵体形式存在于菌体中。纯化的融合蛋白免疫新西兰兔后产生的抗体,经ELISA检测抗体滴度>1:32 000。结论CAR胞外段基因的克隆表达和多克隆抗体的制备,为进一步研究该受体在以腺病毒载体为基础的基因治疗中的作用及柯萨奇病毒的致病机制奠定了基础。 展开更多
关键词 胞外段 腺病毒受体 多克隆抗体 滴度 基因 重组质粒 新西兰兔 克隆表达 诱导表达 纯化
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肺癌患者柯萨奇病毒和腺病毒受体的表达及其临床意义 被引量:1
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作者 夏文彬 孙蕾娜 +1 位作者 钱碧云 战忠利 《中国肿瘤临床》 CAS CSCD 北大核心 2012年第17期1277-1280,共4页
目的:探索柯萨奇病毒和腺病毒受体(Coxsackie and adenovirns receptor,CAR)与肺癌的关系,为使用基于腺病毒载体的基因治疗方案提供依据方法:运用免疫组织化学法检测112例肺癌患者肿瘤组织、癌旁组织以及正常组织中CAR的表达;通过RT-PCR... 目的:探索柯萨奇病毒和腺病毒受体(Coxsackie and adenovirns receptor,CAR)与肺癌的关系,为使用基于腺病毒载体的基因治疗方案提供依据方法:运用免疫组织化学法检测112例肺癌患者肿瘤组织、癌旁组织以及正常组织中CAR的表达;通过RT-PCR和Western blot法检测32例患者CARmRNA及CAR蛋白的表达。结果:在正常肺组织中未见CAR表达,癌旁组织中可见少量的CAR表达鳞状细胞癌和腺癌中CAR阳性表达比率分别为43%和70%,均较癌旁组织明显升高同时,腺癌中CAR的表达也显著高于鳞状细胞癌,RT-PCR和Western blot法进一步证实免疫组织化学法检测结果。结论:肺癌中CAR过表达,在腺癌中尤为明显,提示CAR可能参与了肺癌的发生发展。 展开更多
关键词 柯萨奇腺病毒受体 肺癌 基因治疗
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蟾毒内酯抗柯萨奇病毒、腺病毒和流感病毒作用的研究 被引量:6
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作者 孙非 张淑芹 +2 位作者 刘志屹 靳玉琴 毋英杰 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2004年第4期478-479,共2页
关键词 蟾毒内酯 柯萨奇病毒B3 腺病毒7型(Ad7) 流感病毒(FM1)
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柯萨奇病毒B3的VP1 DNA疫苗与蛋白或重组腺病毒疫苗不同组合免疫方式的免疫效果观察 被引量:3
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作者 蓝佳明 高志云 +5 位作者 金玉怀 李剑 刘贵霞 羡鲜 张永红 王永祥 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第1期41-45,50,共6页
目的观察柯萨奇病毒B3(Coxsackievirus B3,CVB3)衣壳蛋白VP1DNA疫苗初免后VP1蛋白或重组腺病毒rAd/VP1加强的prime-boost策略的免疫效果。方法用CVB3VP1的真核表达质粒pcDNA3/VP1初次免疫小鼠后,分别用VP1蛋白或重组腺病毒rAd/VP1加强免... 目的观察柯萨奇病毒B3(Coxsackievirus B3,CVB3)衣壳蛋白VP1DNA疫苗初免后VP1蛋白或重组腺病毒rAd/VP1加强的prime-boost策略的免疫效果。方法用CVB3VP1的真核表达质粒pcDNA3/VP1初次免疫小鼠后,分别用VP1蛋白或重组腺病毒rAd/VP1加强免疫2次。检测免疫小鼠血清特异性IgG抗体、中和抗体滴度以及脾脏细胞毒性T淋巴细胞(cytotoxic lymphocytes,CTLs)杀伤活性;致死量CVB3攻击后,检测小鼠血中病毒滴度并观察动物的存活情况。结果 pcDNA3/VP1+VP1蛋白组小鼠血清IgG抗体、中和抗体滴度以及动物生存率明显高于pcDNA3/VP1+rAd/VP1组和pcDNA3/VP1质粒组(P<0.05);pcDNA3/VP1+rAd/VP1组和pcDNA3/VP1+VP1蛋白组小鼠脾脏CTLs杀伤活性明显高于pcDNA3/VP1质粒组(P<0.05)。结论质粒pcDNA3/VP1初次免疫后,VP1蛋白或重组腺病毒rAd/VP1加强的prime-boost策略有较好的免疫效果,两者比较pcDNA3/VP1+VP1蛋白prime-boost免疫策略的效果更为明显。 展开更多
关键词 柯萨奇病毒B3 PRIME-BOOST DNA 蛋白 重组腺病毒
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大鼠Toll样受体2基因siRNA重组腺病毒载体的构建及鉴定 被引量:3
16
作者 张赟 龚敏 +4 位作者 毕杨 江伟 喻琴 李廷玉 陈洁 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2012年第2期144-147,共4页
目的:构建特异性抑制大鼠TLR2基因的重组腺病毒载体,并在大鼠嗜铬细胞瘤PC12细胞中进行功能鉴定。方法:体外合成3对大鼠siTLR2的双链DNA序列,经退火定向克隆到穿梭质粒pSES-HUS中获得pSES-HUS-siTLR2质粒,Pme I线性化后在BJ5183细菌中与... 目的:构建特异性抑制大鼠TLR2基因的重组腺病毒载体,并在大鼠嗜铬细胞瘤PC12细胞中进行功能鉴定。方法:体外合成3对大鼠siTLR2的双链DNA序列,经退火定向克隆到穿梭质粒pSES-HUS中获得pSES-HUS-siTLR2质粒,Pme I线性化后在BJ5183细菌中与pAdEasy-1骨架质粒进行同源重组获得pAd-siTLR2质粒,脂质体转染HEK293细胞,包装获得Ad-siTLR2腺病毒颗粒,继而感染PC12细胞,通过Real-time PCR和Western blot方法检测3对siRNA对TLR2基因的抑制效率。结果:PCR凝胶电泳和测序结果均证实目的基因正确克隆到腺病毒载体中;Real-time PCR和Western blot结果显示:携带siTLR2的病毒颗粒能够在mRNA和蛋白水平有效抑制PC12细胞中TLR2的表达。结论:成功构建了Ad-siTLR2重组腺病毒载体,并在HEK293细胞中包装成重组腺病毒,转染PC12细胞后能有效抑制TLR2基因的表达,为进一步研究TLR2在不同疾病中的免疫调节机制奠定重要基础。 展开更多
关键词 TOLL样受体2 SIRNA 重组腺病毒载体 免疫调节
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腺病毒介导反义RNA抑制HIV-1辅助受体CCR5和CXCR4表达 被引量:2
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作者 李文刚 于敏 +4 位作者 白丽 田秀兰 张政 卜定方 徐小元 《中国医学科学院学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第5期626-631,共6页
目的抑制细胞表面人免疫缺陷病毒1型(HIV-1)的辅助受体CCR5和CXCR4表达,阻止HIV-1进入靶细胞。方法逆转录聚合酶链反应扩增HIV-1辅助受体基因5'-端cDNA片段,反向插入穿梭质粒中,再与腺病毒基因组骨架质粒在大肠杆菌BJ5183中同源重组... 目的抑制细胞表面人免疫缺陷病毒1型(HIV-1)的辅助受体CCR5和CXCR4表达,阻止HIV-1进入靶细胞。方法逆转录聚合酶链反应扩增HIV-1辅助受体基因5'-端cDNA片段,反向插入穿梭质粒中,再与腺病毒基因组骨架质粒在大肠杆菌BJ5183中同源重组,重组质粒在293细胞中包装、扩增得到含有CCR5、CXCR4反义RNA的重组腺病毒,分别感染U937细胞和MT4细胞,于感染后24、48和72h及10d时用流式细胞仪检测细胞表面相应受体的表达。并用Boyden小室法检测重组腺病毒感染对细胞趋化活性的影响以及用3H掺入法检测对细胞增殖能力的影响。结果成功获得含有CCR5和CXCR4反义RNA的重组腺病毒,其滴度为5×1011PFU/ml和7×1010PFU/ml。重组腺病毒感染24h后流式细胞仪检测显示,U937细胞表面CCR5的表达率分别为:Ad-antiR51.12%,未感染细胞对照82.10%,Ad-senseR580.94%,Ad-control81%。MT4细胞表面CXCR4的表达率分别为:Ad-antiX41.03%,未感染细胞对照42%,Ad-senseX444%,Ad-control39%。48、72h及10d后Ad-antiR5感染的U937细胞表面CCR5表达率分别为:1.02%、1.26%、1.23%;Ad-antiX4感染的MT4细胞表面CXCR4表达率分别为:1.13%、1.17%、1.22%。感染重组腺病毒后,两种细胞的趋化活性及增殖能力均无改变。结论包含有CCR5、CXCR4反义RNA的重组腺病毒可以使细胞表面相应受体表达下降,且重组腺病毒不影响细胞的趋化活性和增殖能力。 展开更多
关键词 重组腺病毒 辅助受体 反义RNA 抑制
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柯萨奇B3病毒诱导鼠心肌炎血浆β-内啡肽及其受体的变化 被引量:3
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作者 沈茜 丁继军 徐玉莲 《第二军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 1999年第8期557-559,共3页
目的:观察病毒性心肌炎病理过程中内源性阿片系统激活的动态变化,探讨阿片肽在心肌炎病理损伤中的作用。方法:以柯萨奇 B3 病毒( Cox B3)诱导 B A L B/c 鼠心肌炎为实验模型,观察感染后第3,7 ,10,15,25... 目的:观察病毒性心肌炎病理过程中内源性阿片系统激活的动态变化,探讨阿片肽在心肌炎病理损伤中的作用。方法:以柯萨奇 B3 病毒( Cox B3)诱导 B A L B/c 鼠心肌炎为实验模型,观察感染后第3,7 ,10,15,25 和35 d 鼠体、肝和肺的质量,血浆β内啡肽(β E P)水平、心肌细胞膜 β E P受体及心肌病损程度。采用放射免疫法测定血浆 β E P、放射配体结合法测定β E P受体、常规病理检查心肌病损程度。结果:以1 000 T C I D50 Cox B3 感染 B A L B/c 鼠,约92.8% (65~70)鼠诱导出典型的心肌炎病理改变。感染后 3~25 d 受染鼠血浆 β E P水平显著高于正常对照组;感染后10~25 d 受染鼠肺/体质量和肝/体质量比均高于正常对照鼠,提示受染鼠出现较严重的充血性心力衰竭。同时,受染鼠心肌细胞膜 β E P受体 Bm ax 显著增高, Kd值变化不明显。结论:由于病毒和自身免疫对心肌细胞的损伤,使病毒性心肌炎患鼠出现充血性心力衰竭,引起循环中阿片肽水平升高及相应受体的变化。通过神经内分泌免疫网络,这些变化必将对心脏的病理损伤产生明显的作用。 展开更多
关键词 柯萨奇病毒B3 心肌炎 Β-内啡肽 受体
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携带人生长抑素2型受体的腺病毒载体的构建和表达 被引量:2
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作者 徐彬 徐浩 +3 位作者 李月琴 曹忠健 张欣 周天鸿 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2006年第10期1997-2001,共5页
目的:构建表达SSTR2的重组腺病毒载体,用于胰腺癌的基因治疗。方法:构建重组腺病毒穿梭质粒pDC316-SSTR2,通过脂质体与腺病毒骨架质粒pBHG lox(delta)E1,3Cre共转染293细胞,经位点特异性重组获得重组腺病毒Ad-SSTR2。通过PCR鉴定Ad-SSTR... 目的:构建表达SSTR2的重组腺病毒载体,用于胰腺癌的基因治疗。方法:构建重组腺病毒穿梭质粒pDC316-SSTR2,通过脂质体与腺病毒骨架质粒pBHG lox(delta)E1,3Cre共转染293细胞,经位点特异性重组获得重组腺病毒Ad-SSTR2。通过PCR鉴定Ad-SSTR2。经293细胞扩增,纯化制备高滴度病毒感染液。以病毒感染液感染人胰腺癌细胞capan-2,应用免疫印迹检测SSTR2蛋白的表达。结果:成功构建腺病毒穿梭质粒pDC316-SSTR2,与pBHG lox(delta)E1,3Cre共转染293细胞获得了重组腺病毒Ad-SSTR2,以Ad-SSTR2基因组DNA为模板同时扩增出了人SSTR2 cDNA基因片段和腺病毒骨架基因片段。Ad-SSTR2感染capan-2 48 h后,免疫印迹检测到SSTR2蛋白的表达。结论:表达人SSTR2的重组腺病毒载体构建成功,并在胰腺癌细胞中得到正确表达,为SSTR2基因治疗胰腺癌奠定了基础。 展开更多
关键词 受体 生长抑素 腺病毒 基因疗法
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血管紧张素Ⅱ2型受体基因重组腺病毒简便快速的构建方法 被引量:3
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作者 唐兵 黎军 +1 位作者 何国祥 李德 《医学研究生学报》 CAS 2005年第5期402-403,407,F003,共4页
目的:利用细菌内同源重组法构建含血管紧张素Ⅱ2型受体(AT2R)基因的重组腺病毒。方法:应用PCR技术从质粒PUHD AT2R中克隆出AT2R基因片段,定向克隆到腺病毒穿梭质粒pAdTrackCMV中,PmeⅠ酶切线性化后转化Adeasier1细胞,抽提经鉴定含有目... 目的:利用细菌内同源重组法构建含血管紧张素Ⅱ2型受体(AT2R)基因的重组腺病毒。方法:应用PCR技术从质粒PUHD AT2R中克隆出AT2R基因片段,定向克隆到腺病毒穿梭质粒pAdTrackCMV中,PmeⅠ酶切线性化后转化Adeasier1细胞,抽提经鉴定含有目的基因的重组腺病毒质粒,PacⅠ酶切后用脂质体转染293细胞,包装成重组腺病毒Ad AT2R。用PCR方法对重组腺病毒进行鉴定,利用穿梭质粒中带有GFP报告基因,对病毒滴度进行监测。结果:PCR检测表明重组腺病毒已含有目的基因AT2R,滴度为1.5×1012pfu/ml。结论:细菌内同源重组法构建腺病毒比传统的细胞内同源重组法具有成功率高、方法简便、快捷和实验周期短的优点。AT2R基因重组腺病毒的成功构建为进一步实验研究奠定了基础。 展开更多
关键词 腺病毒 血管紧张素Ⅱ2型受体基因 同源重组 细菌
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