苦荞查尔酮合酶基因FtCHS1启动子的克隆及分析 被引量：8

1

作者 赵学荣 杨燕 +4 位作者 雒晓鹏 姚攀锋 王安虎 赵海霞 吴琦 《植物科学学报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第4期543-550,共8页

采用染色体步移技术,从苦荞(Fagopyrum tataricum Gaertn.)中克隆获得Ft CHS1基因5'端侧翼序列,共1038 bp,将其命名为PFt CHS1。生物信息学分析表明,PFt CHS1中A/T碱基含量为63.5%,含有4个可能的转录起始位点,分别位于起始密码子上... 采用染色体步移技术,从苦荞(Fagopyrum tataricum Gaertn.)中克隆获得Ft CHS1基因5'端侧翼序列,共1038 bp,将其命名为PFt CHS1。生物信息学分析表明,PFt CHS1中A/T碱基含量为63.5%,含有4个可能的转录起始位点,分别位于起始密码子上游-684^-734、-692^-742、-920^-970、-929^-979 bp处,该序列包含TATA-Box和CAAT-Box等启动子核心元件以及与光、低温和激素应答等相关的功能元件。本研究进一步构建了PFt CHS1-p BI101植物表达载体,并瞬时转化拟南芥(Arabidopsis thaliana L.)叶片,结果显示该序列可驱动GUS报告基因的表达。低温(4℃)和光照(UV-B)处理苦荞幼芽后,采用荧光定量PCR技术分析Ft CHS1基因的表达量,结果表明PFt CHS1可响应低温和紫外环境胁迫,从而引起Ft CHS1基因表达量发生变化。 展开更多

关键词 苦荞 查尔酮合酶基因 启动子 序列分析

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查尔酮合酶基因在植物防御反应中的调控作用 被引量：27

2

作者 廖靖军 安成才 +1 位作者 吴思 陈章良 《北京大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2000年第4期566-575,共10页

论述了查尔酮合酶基因 (chs)在植物防御反应中与病原物的相互关系 ,探讨了与查尔酮合酶基因诱导表达相关的顺式作用元件和反式作用因子及其DNA 蛋白质间的相互作用 ,阐明其在植物抗病性防御反应中的重要作用。

关键词 查尔酮合酶基因 防御反应 调控作用

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转查尔酮合酶基因对烟草花色及花器官的影响 被引量：13

3

作者 夏玉凤 耿晓娜 +1 位作者 王万双 赵宝华 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第1期93-98,共6页

花色是重要的园艺性状,一直是育种工作者苦苦追求的目标。利用植物基因工程技术可定向改良花色。根据已知的CHS序列(序列号M20308.),用PCR方法从拟南芥中克隆CHS基因,并分别将其以正向、反向插入到真核表达载体pBI121,在农杆菌介导下用... 花色是重要的园艺性状,一直是育种工作者苦苦追求的目标。利用植物基因工程技术可定向改良花色。根据已知的CHS序列(序列号M20308.),用PCR方法从拟南芥中克隆CHS基因,并分别将其以正向、反向插入到真核表达载体pBI121,在农杆菌介导下用叶盘转化法转化烟草。对转基因烟草进行检测,结果表明,转基因烟草的花色变淡、花青素含量降低;叶片颜色变浅、叶绿素含量降低。转基因烟草花的形态也发生了明显变异。 展开更多

关键词 花青素 花色 基因工程 查尔酮合酶基因

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红树植物秋茄查尔酮合酶基因克隆及其在盐胁迫下的表达分析 被引量：6

4

作者 潘德灼 林伟彬 +1 位作者 谭芳林 陈伟 《福建农林大学学报（自然科学版）》 CSCD 北大核心 2017年第2期180-186,共7页

以秋茄(Kandelia candel)叶片为试验材料,采用RT-PCR的方法获得秋茄查尔酮合酶(chalcone synthase,CHS)基因的cDNA序列,命名为KcCHS,GenBank登录号为KX673194.1.序列分析结果表明,KcCHS基因的cDNA序列长度为1170bp,编码389个氨基酸,属于... 以秋茄(Kandelia candel)叶片为试验材料,采用RT-PCR的方法获得秋茄查尔酮合酶(chalcone synthase,CHS)基因的cDNA序列,命名为KcCHS,GenBank登录号为KX673194.1.序列分析结果表明,KcCHS基因的cDNA序列长度为1170bp,编码389个氨基酸,属于CHS超家族.序列比对结果显示,秋茄与其他物种的CHS基因核苷酸序列具有较高的相似性,平均达到80%以上.系统进化分析显示,KcCHS基因与余甘子CHS基因亲缘关系最近.实时荧光定量PCR分析表明,秋茄叶片KcCHS基因的转录水平随着NaCl浓度的升高而上升.此外,随着NaCl浓度的升高,黄酮类化合物的含量显著增加,羟自由基清除率也明显提高. 展开更多

关键词 秋茄 查尔酮合酶基因 克隆 盐胁迫

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查尔酮合酶基因的克隆及双元载体的构建 被引量：1

5

作者 黄胤怡 沈明山 +2 位作者 陈亮 熊玲媛 陈睦传 《厦门大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2002年第5期541-545,共5页

以中国水仙为材料 ,利用RT PCR方法克隆查尔酮合酶基因 (CHS)的cDNA ,核酸序列分析表明 ,该基因的编码区长 116 7bp ,编码 389个氨基酸 .通过进一步的中间克隆 ,将CHS连上CaMV35s启动子和Tnos终止子 .进一步将重组片段插入植物表达载体 ... 以中国水仙为材料 ,利用RT PCR方法克隆查尔酮合酶基因 (CHS)的cDNA ,核酸序列分析表明 ,该基因的编码区长 116 7bp ,编码 389个氨基酸 .通过进一步的中间克隆 ,将CHS连上CaMV35s启动子和Tnos终止子 .进一步将重组片段插入植物表达载体 pCAMBIA130 1,PCR及测序结果都证明植物双元表达载体p130 1BΩC构建获得成功 . 展开更多

关键词 查尔酮合酶基因 植物表达载体 载体构建 基因克隆 花色形成 类黄酮

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矮牵牛遗传转化查尔酮合酶基因的研究 被引量：5

6

作者 冯慧 王建红 +2 位作者 王茂良 李毅 李燕 《天津农学院学报》 CAS 2007年第2期9-12,共4页

本文建立了矮牵牛的遗传转化体系,并将查尔酮合酶基因转入矮牵牛。经PCR检测,得到34个转查尔酮合酶基因株系。探讨了查尔酮合酶基因对花色及育性的影响。

关键词 矮牵牛 遗传转化 查尔酮合酶基因

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多花黄精查尔酮合酶PcCHS的原核表达、亚细胞定位及表达分析 被引量：1

7

作者 潘萍萍 徐志浩 +2 位作者 张怡雯 李青 王忠华 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第5期280-289,共10页

【目的】探究查尔酮合酶(chalcone synthase,PcCHS)基因在多花黄精类黄酮合成中的作用,为后续解析PcCHS功能以及多花黄精新品种选育提供可靠的理论依据。【方法】以多花黄精为cDNA模板,克隆多花黄精PcCHS基因的编码序列,对该基因进行生... 【目的】探究查尔酮合酶(chalcone synthase,PcCHS)基因在多花黄精类黄酮合成中的作用,为后续解析PcCHS功能以及多花黄精新品种选育提供可靠的理论依据。【方法】以多花黄精为cDNA模板,克隆多花黄精PcCHS基因的编码序列,对该基因进行生物信息学分析。通过构建PcCHS的原核表达载体,纯化目的重组蛋白,验证该酶的体外表达活性。利用瞬时超表达体系探究该基因过表达后总黄酮的含量变化。利用Gateway技术构建亚细胞定位载体35S::PcCHS-GFP,通过本氏烟草表达系统确定目的蛋白亚细胞定位情况。【结果】PcCHS基因的开放阅读框为1 251 bp,理论分子量为44.63 kD,等电点为5.89,属于亲水蛋白,与石刁柏(Asparagus officinalis)CHS亲缘关系较近。原核表达实验表明,pET28a-PcCHS经IPTG(异丙基-β-D-硫代半乳糖苷)诱导表达可溶性重组蛋白,Western-blot显示大小约为45 kD,与预期大小一致,且纯化的目的蛋白具有一定的酶活性,能催化对香豆酰辅酶A和丙二酰辅酶A转化为柚皮素查尔酮。此外,PcCHS瞬时超表达中,PcCHS组的表达量显著高于空载K组,总黄酮含量也显著高于空载K组,最高可达1.83倍。亚细胞定位结果显示,该基因在细胞膜和细胞核中发挥作用。【结论】PcCHS基因原核表达的酶具有体外酶活性,其亚细胞定位于细胞膜和细胞核,且瞬时超表达能够显著提高多花黄精叶片总黄酮含量。 展开更多

关键词 多花黄精 查尔酮合酶基因(CHS) 原核表达 瞬时超表达 蛋白纯化 体外酶活 亚细胞定位

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向日葵查尔酮合酶HaCHS基因的克隆与逆境应答 被引量：16

8

作者 马立功 张匀华 +4 位作者 孟庆林 石凤梅 刘佳 李易初 王志英 《中国油料作物学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第1期19-26,共8页

为探讨查尔酮合成酶(CHS)基因在向日葵抗逆机制中的作用,在核盘菌诱导向日葵转录组文库的基础上,从向日葵耐病品种龙食葵2号中克隆了1个CHS的c DNA序列,该基因开放阅读框为1 197bp,编码398个氨基酸残基,分子量为43.54k D,等电点为6.17,... 为探讨查尔酮合成酶(CHS)基因在向日葵抗逆机制中的作用,在核盘菌诱导向日葵转录组文库的基础上,从向日葵耐病品种龙食葵2号中克隆了1个CHS的c DNA序列,该基因开放阅读框为1 197bp,编码398个氨基酸残基,分子量为43.54k D,等电点为6.17,命名为Ha CHS(Gen Bank登录号为KR921882)。氨基酸序列分析显示,Ha CHS具有CHS家族蛋白3个保守的功能活性位点(C^(167),H^(306)和N^(339))和特征多肽标签序列GVLFGFGPGL。系统进化分析表明,Ha CHS与菊科植物的大丽菊、紫茎泽兰和黑心菊等的CHS蛋白有很高的同源性,氨基酸序列相似性在93%~94%。实时荧光定量PCR结果表明,该基因在向日葵花中表达量最高为19.96,其次是盘、叶、茎和种,在根中的表达量最低为0.02。Ha CHS基因表达受核盘菌、创伤、4℃低温和茉莉酸(JA)等因素调控,但对脱落酸(ABA)和水杨酸(SA)处理的应答差异不显著。 展开更多

关键词 向日葵 查尔酮合酶基因 基因克隆 生物信息学分析 基因表达

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植物查尔酮合酶(CHS)及其基因的研究进展 被引量：9

9

作者 张必弦 朱延明 +6 位作者 来永才 胡小梅 李炜 李琬 毕影东 肖佳雷 张俐俐 《安徽农业科学》 CAS 2012年第20期10376-10379,共4页

文中详细阐述植物查尔酮合酶(CHS)及其基因的研究进展情况。

关键词 查尔酮合酶(CHS) 查尔酮合酶基因

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玫瑰查尔酮合酶CHS基因的克隆及生物信息学分析 被引量：6

10

作者 齐宇 赵兰勇 《农学学报》 2015年第11期91-96,共6页

本研究旨在克隆玫瑰查尔酮合酶CHS基因并对其进行生物信息学分析,以期为利用基因工程技术改变玫瑰花色、培育玫瑰新品种奠定良好基础。以玫瑰品种‘唐红’(Rosa rugosa‘Tanghong’)为试材,采用RT-PCR和RACE方法从花瓣中获得了玫瑰查尔... 本研究旨在克隆玫瑰查尔酮合酶CHS基因并对其进行生物信息学分析,以期为利用基因工程技术改变玫瑰花色、培育玫瑰新品种奠定良好基础。以玫瑰品种‘唐红’(Rosa rugosa‘Tanghong’)为试材,采用RT-PCR和RACE方法从花瓣中获得了玫瑰查尔酮合酶(chalcone synthase,CHS)基因的c DNA全长。经生物信息学分析,该基因全长1416 bp,开放阅读框1167 bp,编码389个氨基酸,其蛋白的分子式为C1899H3043N505O562S18,相对分子质量为42.518 k Da,等电点为6.12。该蛋白不稳定系数低于40,为稳定性蛋白,无信号肽和剪切位点存在。其蛋白质二级结构主要由42.16%的α螺旋、29.05%的随机卷曲、10.54%的β转角和18.25%的延伸链组成。系统进化分析表明,玫瑰CHS基因与同科植物月季、草莓亲缘关系最近,与其他科及同科其他属植物的亲缘关系较远。本研究首次克隆了玫瑰CHS基因,获得了其生物信息学相关信息,探明了CHS基因在类黄酮生物合成过程中的重要作用,为改良玫瑰花色提供了理论依据。 展开更多

关键词 玫瑰 查尔酮合酶基因 克隆 生物信息学

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藜麦CqCHS1基因的克隆及胁迫下表达分析

11

作者 尹航 陈紫岩 +4 位作者 张豪杰 魏杰 林参 张志鹏 吴传万 《江苏农业科学》 北大核心 2024年第1期49-55,共7页

查尔酮合成酶(chalcone synthase, CHS)是植物类黄酮合成途径中的一个关键限速酶,参与植物中多个合成代谢途径,包括花青素合成。通过PCR反应成功克隆出藜麦CHS基因(CqCHS1)的cDNA全长序列,并进行预测分析,包括CqCHS1基因结构和编码的蛋... 查尔酮合成酶(chalcone synthase, CHS)是植物类黄酮合成途径中的一个关键限速酶,参与植物中多个合成代谢途径,包括花青素合成。通过PCR反应成功克隆出藜麦CHS基因(CqCHS1)的cDNA全长序列,并进行预测分析,包括CqCHS1基因结构和编码的蛋白质保守结构域。同时,利用qRT-PCR技术检测了在不同胁迫处理下CqCHS1的表达情况。结果表明,CqCHS1基因包含2个外显子和1个内含子,其编码的蛋白质由392个氨基酸残基组成。CqCHS1蛋白是亲水性蛋白质,不存在信号肽,定位于细胞质。进化分析显示,CqCHS1与拟南芥AtCHS1的亲缘关系最近,其基因功能可能存在相似性。此外,还发现在CqCHS1基因启动子区域存在多个与胁迫和激素响应相关的顺式作用元件。表达分析结果表明,藜麦幼苗中CqCHS1的表达不会受到干旱胁迫的影响,而外源脱落酸(ABA)处理会抑制CqCHS1的表达,低温胁迫则会诱导CqCHS1的表达。本研究结果为进一步探究藜麦CqCHS1的基因功能提供了基础。 展开更多

关键词 藜麦 查尔酮合酶基因 克隆 生物信息学分析 表达分析

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辣椒CHS基因表达的定量分析及与雄性不育的相关性 被引量：4

12

作者 陈遥 彭彦 +1 位作者 刘峰 张学文 《湖南农业大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2013年第3期259-264,共6页

为了揭示辣椒胞质雄性不育(CMS)机制,以辣椒胞质雄性不育系9704A和其相应保持系9704B为材料,对其花蕾转录组进行了Solexa测序,经过生物信息学分析鉴别出1个花药特异性表达的查尔酮合酶基因(CHS),该基因在保持系9704B中的表达水平为其对... 为了揭示辣椒胞质雄性不育(CMS)机制,以辣椒胞质雄性不育系9704A和其相应保持系9704B为材料,对其花蕾转录组进行了Solexa测序,经过生物信息学分析鉴别出1个花药特异性表达的查尔酮合酶基因(CHS),该基因在保持系9704B中的表达水平为其对应不育系9704A的16倍;克隆后的序列比对分析表明,该基因属于CHS基因家族,与菸草花药特异表达的同源基因CHSLK的同源性达90%;用实时荧光定量RT-PCR对9704A和9704B的根、茎、叶中CHS基因的表达进行了定量分析,结果表明该基因在2种材料的茎中几乎不表达,在9704B的根和叶中表达量也极低,证实了在正常情况下该基因只在辣椒花药中有较高水平的表达;对不育系的定量PCR结果表明,CHS基因在9704A的根和叶中有异常的较高水平表达,结合其在花药中的低表达,推测辣椒不育系中CHS的异常表达可能与其CMS性状相关。 展开更多

关键词 辣椒 查尔酮合酶基因(CHS) 定量分析 雄性不育

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三角梅CHS基因的克隆及表达分析 被引量：6

13

作者 孙蓉 刘姗 +3 位作者 高静雷 刁毅 姜少娟 王胜男 《西北农业学报》 CAS CSCD 北大核心 2021年第10期1565-1572,共8页

查尔酮合酶(chalcone synthase,CHS)为花青素苷合成途径的关键酶,是观赏植物花色改良分子育种的研究热点。随着生物技术的发展转录组测序技术成为快速克隆新基因的有效手段,以‘新加坡大白’三角梅苞片转录组数据库为基础,筛选克隆CHS基... 查尔酮合酶(chalcone synthase,CHS)为花青素苷合成途径的关键酶,是观赏植物花色改良分子育种的研究热点。随着生物技术的发展转录组测序技术成为快速克隆新基因的有效手段,以‘新加坡大白’三角梅苞片转录组数据库为基础,筛选克隆CHS基因,利用生物信息学方法预测分析其蛋白的结构与功能,通过实时荧光定量PCR技术检测该基因在不同花色三角梅中的表达模式。结果表明:获得的CHS基因cDNA全长1176 bp(GenBank ID:MT302539),编码一个43.96 ku的蛋白,定位于细胞质中,含有CHS特征基序及活性位点,三级结构预测显示为二聚体蛋白,系统进化树分析结果显示与同为中央种子目的植物亲缘关系较近,符合系统进化关系。qRT-PCR显示该基因在黄色叶片中的表达量是红色叶片的24倍,表明黄色更适用于花青素途径的研究。研究结果为三角梅花色改良基因转化受体的筛选提供参考。 展开更多

关键词 三角梅 查尔酮合酶基因 生物信息学 荧光定量

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卡特兰ChCHS1和ChDFR1基因的克隆及表达分析 被引量：2

14

作者 王紫珊 周琳 王雁 《热带作物学报》 CSCD 北大核心 2015年第7期1280-1289,共10页

以卡特兰紫色花品种‘粉女郎’(Cattleya hybrid‘Pink Lady’)为材料,采用RT-PCR和RACE方法从花瓣中分离得到了一个查尔酮合酶(chalcone synthase,CHS)和一个二氢黄酮醇4-还原酶(dihydroflavonol 4-reductase,DFR)同源基因的cDNA全长,... 以卡特兰紫色花品种‘粉女郎’(Cattleya hybrid‘Pink Lady’)为材料,采用RT-PCR和RACE方法从花瓣中分离得到了一个查尔酮合酶(chalcone synthase,CHS)和一个二氢黄酮醇4-还原酶(dihydroflavonol 4-reductase,DFR)同源基因的cDNA全长,分别命名为ChCHS1和ChDFR1,GenBank登录号分别为KP171693和KP171694。序列分析结果发现:Ch CHS1的cDNA全长1 508 bp,编码394个氨基酸;Ch DFR1基因的c DNA全长1 250 bp,编码350个氨基酸。同源性检索和生物信息学分析表明,这2个基因编码的蛋白都具有各自的功能位点和保守性特征多肽序列。氨基酸序列比对与系统进化树分析显示,ChCHS1、ChDFR1基因在兰科中与蕙兰、石斛兰关系最近,与百合科关系较近。相对实时荧光定量PCR结果表明,ChCHS1和ChDFR1都在蕾期表达量最低,伴随花朵的开放,表达量逐渐上升,最终分别在花朵盛开期和接近开放时达到最高。 展开更多

关键词 卡特兰 查尔酮合酶基因 二氢黄酮醇4-还原酶基因 克隆 表达分析

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CHS启动子差异片段在不同观赏海棠品种(系)中的功能验证

15

作者 孙文静 许扬 +2 位作者 高艺 张杰 宋婷婷 《北京农学院学报》 2022年第3期49-54,共6页

【目的】为探明查尔酮合酶基因的启动子序列差异在不同苹果属观赏海棠品种(系)中的功能。【方法】以‘王族’(Malus cv.‘Royalty’)和M10-5(Malus M10-5)及‘火焰’(Malus cv.‘Flame’)叶片为试材,克隆得到McCHS基因的启动子,并进行... 【目的】为探明查尔酮合酶基因的启动子序列差异在不同苹果属观赏海棠品种(系)中的功能。【方法】以‘王族’(Malus cv.‘Royalty’)和M10-5(Malus M10-5)及‘火焰’(Malus cv.‘Flame’)叶片为试材,克隆得到McCHS基因的启动子,并进行序列比对。检测McCHS基因在3个品种(系)中的表达水平,进一步通过酵母单杂交和凝胶阻滞迁移分析确定McCHS基因的启动子序列差异和调控花色素苷生物合成关键MYB转录因子McMYB10的结合关系。【结果】‘火焰’McCHS基因启动子与‘王族’McCHS基因启动子序列比对发现,‘火焰’McCHS基因启动子中有743 bp的缺失,而M10-5的McCHS基因启动子同时拥有缺失和完整的两种启动子序列;酵母单杂交和凝胶阻滞迁移结果表明,743 bp缺失序列能够和McMYB10结合,而且McCHS基因的表达量和花色素苷含量呈相同趋势。【结论】McCHS基因的启动子序列差异可能影响观赏海棠叶片着色。 展开更多

关键词 苹果属观赏海棠 查尔酮合酶基因 花色素苷

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