利用柞蚕核型多角体病毒表达载体系统在柞蚕蛹中表达增强型绿色荧光蛋白 被引量：7

1

作者 王林美 张波 +5 位作者 叶博 赵振军 李树英 李文利 岳冬梅 范琦 《蚕业科学》 CAS CSCD 北大核心 2010年第5期792-799,共8页

为了探讨外源蛋白在柞蚕蛹-柞蚕核型多角体病毒(ApNPV)表达系统的表达水平和稳定性,将增强型绿色荧光蛋白(EGFP)基因克隆到柞蚕核型多角体病毒转移表达载体pApM748BE中,获得重组质粒DNA,与ApNPV DNA共转染樗蚕(Phi-losamia cynthiam)培... 为了探讨外源蛋白在柞蚕蛹-柞蚕核型多角体病毒(ApNPV)表达系统的表达水平和稳定性,将增强型绿色荧光蛋白(EGFP)基因克隆到柞蚕核型多角体病毒转移表达载体pApM748BE中,获得重组质粒DNA,与ApNPV DNA共转染樗蚕(Phi-losamia cynthiam)培养细胞Pc-01后,用末端稀释法筛选获得重组病毒ApNPV-Δph/egfp+。将该重组病毒感染柞蚕蛹,采用SDS-PAGE和Western blot方法检测EGFP在柞蚕蛹中的表达,结果显示:在柞蚕蛹感染重组病毒ApNPV-Δph/egfp+后6 d,EG-FP就有明显的表达;感染后12～18 d,蛹体液中的EGFP含量保持较高水平,以EGFP标准样品定量分析EGFP在柞蚕蛹体液中的表达水平高于1 mg/mL;感染后30～39 d仍可以检测到蛹体液中EGFP的表达,而且蛋白稳定。研究结果表明,利用柞蚕核型多角体病毒作表达载体,可在柞蚕蛹中高效稳定地表达EGFP,并且EGFP在雌雄蛹间的表达水平无明显差异。 展开更多

关键词 柞蚕蛹 核型多角体病毒表达载体系统 增强型绿色荧光蛋白基因 樗蚕培养细胞

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利用柞蚕核型多角体病毒(ApNPV)表达载体系统在柞蚕蛹中表达人生长激素 被引量：3

2

作者 叶博 王林美 +4 位作者 赵振军 岳冬梅 张波 李树英 范琦 《蚕业科学》 CAS CSCD 北大核心 2014年第2期277-283,共7页

为探究柞蚕核型多角体病毒（ApNPV）表达载体一柞蚕蛹表达系统用于表达哺乳动物活性蛋白的可行性，利用该表达系统表达医用蛋白人生长激素（hGH）。构建插入hgh基因的转移表达载体pApM748BE／hgh，将该转移表达载体质粒DNA与病毒ApNPV-... 为探究柞蚕核型多角体病毒（ApNPV）表达载体一柞蚕蛹表达系统用于表达哺乳动物活性蛋白的可行性，利用该表达系统表达医用蛋白人生长激素（hGH）。构建插入hgh基因的转移表达载体pApM748BE／hgh，将该转移表达载体质粒DNA与病毒ApNPV-△ph／Aefp／hgh’基因组DNA共转染樗蚕（Philosamiacynthiam）培养细胞Pc一01，用末端稀释法筛选获得重组病毒ApNPV-△ph／Aefp／hgh。采用Westernblotting和ELISA方法，检测到柞蚕蛹感染重组病毒ApNPV—△ph／-△ph／Aefp／hgh／hgh’后第7天体液中就有hGH明显表达；感染后第13～14天蛹体液中的hGH含量保持较高水平，重组hGH的最高表达量可达251．18肛g／mL；感染后第15～20天仍可以检测到hGH的表达，但表达产物出现降解现象。用活化的人红白血病细胞K562检测利用ApNPV表达载体系统在柞蚕蛹表达的重组hGH的体外活性，结果显示其对K562细胞的增殖具有明显的促进作用。 展开更多

关键词 柞蚕核型多角体病毒表达载体系统 柞蚕蛹 人生长激素 体外活性

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利用柞蚕核型多角体病毒表达系统表达谷氨酰胺果糖-6-磷酸酰胺转移酶 被引量：1

3

作者 朱彤 赵振军 +4 位作者 叶博 刘宇博 范琦 张嘉宁 李文利 《蚕业科学》 CAS CSCD 北大核心 2020年第4期478-484,共7页

谷氨酰胺果糖-6-磷酸酰胺转移酶(glutamine:fructose-6-phosphate amidotransferase,GFAT)是己糖胺生物合成途径(HBP)中的限速酶,与蛋白质糖基化修饰密切相关。本研究克隆的柞蚕GFAT基因(ApGFAT)CDS由2 022个碱基构成,编码674个氨基酸... 谷氨酰胺果糖-6-磷酸酰胺转移酶(glutamine:fructose-6-phosphate amidotransferase,GFAT)是己糖胺生物合成途径(HBP)中的限速酶,与蛋白质糖基化修饰密切相关。本研究克隆的柞蚕GFAT基因(ApGFAT)CDS由2 022个碱基构成,编码674个氨基酸。将该基因连接到柞蚕杆状病毒转移载体pApM748BE后与ApNPV-Δph/egfp+共转染Tn-High Five细胞获得重组病毒。将重组病毒注射到柞蚕蛹体内,收集发病蛹血淋巴,用镍离子螯合柱纯化得到纯化蛋白,SDS-PAGE和Western blot检测表明,ApGFAT蛋白在柞蚕蛹体内得到成功表达,酶活力为0.978μmol/(min·mg)。 展开更多

关键词 柞蚕 谷氨酰胺果糖-6-磷酸酰胺转移酶 柞蚕核型多角体病毒表达载体系统

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柞蚕核型多角体病毒载体表达系统基因工程研究进展 被引量：1

4

作者 张春发 刘淑珊 +1 位作者 范琦 李广泽 《华南农业大学学报》 CAS CSCD 1995年第1期133-137,共5页

柞蚕是一种野外饲养的经济昆虫，它以蛹滞育越冬，主要分布在我国东北部山区。我国柞蚕年产茧量６万ｔ左右，占世界柞蚕茧产量的９０％以上。柞蚕核型多角体病毒（ＡｐＮＰＶ）属杆状病毒科Ａ亚组，是柞蚕脓病的病原体，对柞蚕蛹十分敏... 柞蚕是一种野外饲养的经济昆虫，它以蛹滞育越冬，主要分布在我国东北部山区。我国柞蚕年产茧量６万ｔ左右，占世界柞蚕茧产量的９０％以上。柞蚕核型多角体病毒（ＡｐＮＰＶ）属杆状病毒科Ａ亚组，是柞蚕脓病的病原体，对柞蚕蛹十分敏感。建立柞蚕核型多角体病毒载体表达系统，以柞蚕蛹为宿主昆虫进行外源基因的大量表达生产，具有成本低、安全、易管理，可工业化生产等特点。本文概述柞蚕核型多角体病毒载体基因工程研究的进展，其中包括核型多角体蛋白基因的克隆，核苷酸序列分析，ｍＲＮＡ起始点的确定，转移载体的组建及所载外源基因在昆虫细胞和柞蚕体内的表达等。 展开更多

关键词 柞蚕核型多角体 病毒 蛋白基因 载体 蚕病

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美国白蛾核型多角体病毒ORF72原核表达载体的构建、表达及纯化 被引量：2

5

作者 李娜 李恩杰 +3 位作者 王青华 王玉珠 张永安 段立清 《林业科学研究》 CSCD 北大核心 2018年第5期57-63,共7页

[目的]根据Ikdea对Hycu NPV全基因组序列的分析,筛选出功能还未被研究的、保守性高的ORF72基因。[方法]将ORF72基因构建到原核表达载体p GEX-4T-1上,对其进行诱导表达,优化表达的条件,并通过GST亲和层析色谱柱纯化融合蛋白。[结果]重组... [目的]根据Ikdea对Hycu NPV全基因组序列的分析,筛选出功能还未被研究的、保守性高的ORF72基因。[方法]将ORF72基因构建到原核表达载体p GEX-4T-1上,对其进行诱导表达,优化表达的条件,并通过GST亲和层析色谱柱纯化融合蛋白。[结果]重组质粒p GEX-4T-1-ORF72的酶切检测以及测序结果均正确,证明重组质粒载体构建成功。通过SDS-PAGE凝胶电泳显示,ORF72蛋白能够与p GEX-4T-1载体上的GST标签蛋白进行融合表达,诱导表达后的融合蛋白大小约为38. 2 k Da。优化后的表达条件为:异丙基硫代β-D-半乳糖苷(IPTG)诱导浓度为1. 0 mmol·L-1,最佳诱导温度为25℃,最佳诱导时间为4 h,并且该蛋白在大肠杆菌BL21和Rosetta表达菌株中均能很好的表达,但在Rosetta菌株中表达量更高。[结论]成功构建了p GEX-4T-1-ORF72原核表达载体,确定出ORF72融合蛋白最佳诱导表达条件,诱导表达并纯化出ORF72融合蛋白,为进一步研究其生物功能奠定基础。 展开更多

关键词 美国白蛾核型多角体病毒 ORF72 载体构建 诱导表达 纯化

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重组家蚕核型多角体病毒——家蚕表达系统的产业化 被引量：3

6

作者 何家禄 吴祥甫 《国外农学（蚕业）》 1994年第1期6-11,共6页

一、迅猛发展中的基因工程产业80年代初兴起的生物技术因其重要的社会效益和巨大利润的刺激,发展势头极猛。美、欧、日等先进工业国家已形成巨大的新兴产业。应用生物技术生产的产品众多,业已渗入到人类日常生活的方方面面。

关键词 家蚕 核型 多角体病毒 表达系统

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柞蚕核型多角体病毒ptp-2基因克隆及表达

7

作者 石生林 潘敏慧 鲁成 《浙江大学学报（农业与生命科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2007年第2期125-128,共4页

为研究柞蚕核型多角体病毒(Antheraea pernyi nucleopolyhedrovirus,ApNPV)ptp-2基因特性,根据ApNPV PstⅠ-C片段核酸序列,设计引物克隆了ApNPV ptp-2基因;将ptp-2基因亚克隆至原核表达载体pQE-30,构建重组质粒pQE-ptp-2,并在大肠杆菌M1... 为研究柞蚕核型多角体病毒(Antheraea pernyi nucleopolyhedrovirus,ApNPV)ptp-2基因特性,根据ApNPV PstⅠ-C片段核酸序列,设计引物克隆了ApNPV ptp-2基因;将ptp-2基因亚克隆至原核表达载体pQE-30,构建重组质粒pQE-ptp-2,并在大肠杆菌M15中进行诱导表达,表达量达菌体总蛋白的38.7%,经His标签杂交鉴定证明表达产物为His融合蛋白.以原核表达的His-PTP-2蛋白作为抗原,制作兔多克隆抗血清,Western blot分析表明PTP-2蛋白不参与ApNPV包涵体的结构组成. 展开更多

关键词 核型多角体病毒 基因表达 基因克隆 柞蚕 ptp-2基因

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柞蚕核型多角体病毒研究进展 被引量：9

8

作者 石生林 王学英 +2 位作者 刘限 韩艳君 李群 《沈阳农业大学学报》 CAS CSCD 2003年第1期72-74,共3页

柞蚕核型多角体病毒(AntheraeapernyiNuclearPolyhedrosisVirus,简称ApNPV) ,属杆状病毒科包含体杆状病毒亚科核型多角体病毒属 ,是柞蚕核型多角体病的病原。该成熟病毒包含体的断面分三层结构 :最外层是致密层 ,次外层是多角体蛋白层 ... 柞蚕核型多角体病毒(AntheraeapernyiNuclearPolyhedrosisVirus,简称ApNPV) ,属杆状病毒科包含体杆状病毒亚科核型多角体病毒属 ,是柞蚕核型多角体病的病原。该成熟病毒包含体的断面分三层结构 :最外层是致密层 ,次外层是多角体蛋白层 ,内部是病毒束。柞蚕核型多角体病毒的核酸为DNA ,经限制性内切酶PstⅠ,HindⅢ,BamHⅠ,XhoⅠ,SalⅠ,EcoRⅠ和EcoRⅠ +BamHⅠ酶解后 ,电泳分别形成31,25,6,15,24,5,7条谱带。柞蚕核型多角体病毒主要通过食下和体壁创伤途径感染柞蚕幼虫 ,不同病毒株对柞蚕的致病性存在着差异。柞蚕幼虫消化液对柞蚕核型多角体病毒有溶解、灭活作用 ;柞蚕幼虫中肠围食膜对柞蚕核型多角体病毒有灭活作用。柞蚕核型多角体病毒多角体在自然条件下有自然裂解现象 ,游离的病毒粒子在自然条件下很快失活。目前已建立柞蚕核型多角体病毒载体表达系统 ,并在分别在体内。 展开更多

关键词 柞蚕 核型多角体病毒 核型多角体病 结构 感染途径 自然裂解现象 表达系统 致病性

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甜菜夜蛾多核壳型核型多角体病毒vp39基因的克隆与表达(英文) 被引量：1

9

作者 段媛媛 杨成丽 +1 位作者 刘德立 范文韬 《华中师范大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2001年第2期214-218,共5页

参照苜宿银纹夜蛾核型多角体病毒 ( Ac MNPV)衣壳蛋白基因 vp3 9的序列设计引物 ,采用PCR技术扩增了甜菜夜蛾核型多角体病毒的约 1 .3 kb片段。通过将该片段亚克隆至原核表达载体p ET-2 8构建出重组表达质粒 p ET-Se3 9.以 p ET-Se3 9转... 参照苜宿银纹夜蛾核型多角体病毒 ( Ac MNPV)衣壳蛋白基因 vp3 9的序列设计引物 ,采用PCR技术扩增了甜菜夜蛾核型多角体病毒的约 1 .3 kb片段。通过将该片段亚克隆至原核表达载体p ET-2 8构建出重组表达质粒 p ET-Se3 9.以 p ET-Se3 9转化 E.coli BL2 1 .经 IPTG诱导后 ,Se MNPVvp3 9基因高效表达 .SDS-PAGE分析显示表达产物的分子量为 3 9KD,并且表达量在 IPTG诱导 4 h达到最高水平 . 展开更多

关键词 核衣壳蛋白基因 基因克隆 基因表达 SeMNPV 甜菜夜蛾多核壳型核型多角体病毒 表质载体

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棉铃虫核型多角体病毒(HaSNPV)ORF99基因在昆虫细胞中的表达及亚细胞定位 被引量：1

10

作者 安世恒 杜孟芳 张传溪 《河南农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第6期670-674,共5页

棉铃虫核型多角体病毒ORF99基因Ha99是其基因组中特有的一个基因,序列分析发现Ha99基因开放阅读框包含354 bp核苷酸,编码118个氨基酸残基,预测相对分子质量为13 kDa.Ha99基因进一步在Bac-to-Bac系统中进行表达,SDS-PAGE和Western blot... 棉铃虫核型多角体病毒ORF99基因Ha99是其基因组中特有的一个基因,序列分析发现Ha99基因开放阅读框包含354 bp核苷酸,编码118个氨基酸残基,预测相对分子质量为13 kDa.Ha99基因进一步在Bac-to-Bac系统中进行表达,SDS-PAGE和Western blot分析显示Ha99基因得到了成功表达,表达的相对分子质量为13kDa,与预测的大小相符.亚细胞定位分析表明,ORF99基因的表达产物主要定位在细胞质中.时序表达分析显示Ha99基因在病毒侵染后6 h开始表达,一直持续到侵染后122 h,表明Ha99基因是一个晚期表达的基因. 展开更多

关键词 棉铃虫核型多角体病毒 ORF99 昆虫表达系统 细胞定位

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柞蚕核型多角体病毒对柞蚕蛹的感染性试验

11

作者 刘限 王学英 +1 位作者 石生林 许方国 《蚕业科学》 CAS CSCD 北大核心 2005年第2期239-239,共1页

关键词 柞蚕核型多角体病毒 柞蚕蛹 感染性试验 载体表达系统 外源基因表达

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家蚕核型多角体病毒gp41基因的融合表达及功能鉴定

12

作者 朱莎 李兵 沈卫德 《蚕业科学》 CAS CSCD 北大核心 2010年第1期79-83,共5页

为了研究家蚕核型多角体病毒(Bombyx mori nucleopolyhedro virus,BmNPV)中GP41蛋白的包装功能,从BmNPV基因组中克隆了gp41基因,并将其克隆到杆状病毒转移载体pFastBac1-gfp中,构建重组转移载体pFastBac1-gp41-gfp,再利用杆状病毒表达系... 为了研究家蚕核型多角体病毒(Bombyx mori nucleopolyhedro virus,BmNPV)中GP41蛋白的包装功能,从BmNPV基因组中克隆了gp41基因,并将其克隆到杆状病毒转移载体pFastBac1-gfp中,构建重组转移载体pFastBac1-gp41-gfp,再利用杆状病毒表达系统(Bac-to-Bac)筛选重组杆状病毒,在家蚕BmN细胞系中进行融合表达和定位分析。SDS-PAGE和Western blot检测结果显示,经重组杆状病毒r-gp41-gfp感染的BmN细胞新增一条大小为65 kD左右的蛋白条带,证明该融合蛋白在BmN细胞中成功表达。用激光共聚焦显微镜观察到绿色荧光充满于细胞质中,不能形成聚集体。与野生型BmNPV混合感染的实验也表明荧光出现的位置与多角体无关,说明GP41-GFP蛋白不能附着在多角体表面,融合表达可能影响了GP41蛋白与多角体的结合。 展开更多

关键词 家蚕核型多角体病毒 gp41基因 杆状病毒表达系统 绿色荧光蛋白 融合表达 免疫印迹检测

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柞蚕核型多角体病毒IE-1基因启动子的克隆与分析

13

作者 冷春玲 李文利 《华北农学报》 CSCD 北大核心 2008年第5期147-150,共4页

以柞蚕核型多角体病毒(ApNPV)DNA为模板,运用PCR技术钓取ApNPV(IE-1)基因的启动子片段,并将其克隆到pMD18-T载体上进行测序分析。将测序的2.7 kb DNA片段用EcoRⅠ和BglⅡ双酶切,回收3'端1.6 kb的DNA片段。将该片段插入到pGFP-N2表... 以柞蚕核型多角体病毒(ApNPV)DNA为模板,运用PCR技术钓取ApNPV(IE-1)基因的启动子片段,并将其克隆到pMD18-T载体上进行测序分析。将测序的2.7 kb DNA片段用EcoRⅠ和BglⅡ双酶切,回收3'端1.6 kb的DNA片段。将该片段插入到pGFP-N2表达载体上构建以其作为启动子的IE-1/pGFP-N2重组质粒。重组质粒经脂质体介导转染Hela细胞,结果可见绿色荧光蛋白(GFP)在细胞中的表达,证明钓取的IE-1基因启动子片段具有启动子的转录活性。 展开更多

关键词 IE-1基因启动子 柞蚕核型多角体病毒 pGFP-N2表达载体

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同安钮夜蛾核型多角体病毒Opdi108基因的分子克隆和细胞定位(英文) 被引量：1

14

作者 常润磊 刘莉 +4 位作者 韦春梅 郎国俊 许雯 毛珊珊 林同 《昆虫学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第4期403-411,共9页

【目的】同安钮夜蛾Ophiusa disjungens(鳞翅目,夜蛾科)是危害桉树的主要害虫之一。同安钮夜蛾核型多角体病毒(OpdiNPV)是从O.disjungens中分离到的新病毒。本研究主要目的是从分子水平上了解该病毒。【方法】对一条PstⅠ的酶切片段进... 【目的】同安钮夜蛾Ophiusa disjungens(鳞翅目,夜蛾科)是危害桉树的主要害虫之一。同安钮夜蛾核型多角体病毒(OpdiNPV)是从O.disjungens中分离到的新病毒。本研究主要目的是从分子水平上了解该病毒。【方法】对一条PstⅠ的酶切片段进行了克隆、测序和分析。【结果】在基因数据库中通过对碱基序列的比对,发现了一个Ac108的同源基因,命名为Opdi108(GenBank登录号为EU732666)。该基因的开放阅读框含有225对碱基,其编码蛋白与其他已知杆状病毒同源物有16%～37%的氨基酸序列一致性。在起始密码子ATG上游有一个晚期启动子TAAG。C末端含有His-tag的Opdi108基因在大肠杆菌中Escherichiacoli进行了表达,融合蛋白的分子量为28.7kDa。以荧光蛋白EGFP为标记物,构建了Opdi108与EGFP的重组体,利用Bac-to-Bac表达系统实现了与AcMNPV的重组,用该重组病毒vEGFP-Opdi108感染斜纹夜蛾Trichoplusiani细胞。感染24和72h后分别用共聚荧光显微镜观察,发现Opdi108定位在细胞质内。【结论】本研究从分子生物学角度研究OpdiNPV,为进一步利用该病毒防治包括同安钮夜蛾在内的害虫,以及构建重组杀虫剂等奠定基础。 展开更多

关键词 同安钮夜蛾 核型多角体病毒 Bac-to-Bac表达系统 细胞定位 Opdi108

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杆状病毒表达载体系统研究进展 被引量：4

15

作者 曾铮 吴大洋 《中国蚕业》 2005年第3期4-7,共4页

关键词 表达载体系统 杆状病毒 苜蓿银纹夜蛾核型多角体病毒 研究进展 环状DNA分子 多角体蛋白基因 昆虫病毒 ACMNPV Virus

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棉铃虫核型多角体病毒Ha105的序列分析及敲除和回复菌株的构建

16

作者 曾利平 闫尧 徐旭士 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第7期134-138,共5页

通过生物信息学方法对Ha105的生物功能进行预测,运用λ噬菌体Red重组系统介导的同源重组,在大肠杆菌BW25113中,用含有350 bp同源臂的氯霉素抗性基因和绿色荧光蛋白基因替换了棉铃虫病毒细菌人工染色体HaBacHZ8上的Ha105基因,然后利用Bac... 通过生物信息学方法对Ha105的生物功能进行预测,运用λ噬菌体Red重组系统介导的同源重组,在大肠杆菌BW25113中,用含有350 bp同源臂的氯霉素抗性基因和绿色荧光蛋白基因替换了棉铃虫病毒细菌人工染色体HaBacHZ8上的Ha105基因,然后利用Bac-to-Bac系统把Ha105回复到Ha105缺失的重组病毒上,构建了Ha105的缺失和回复重组病毒。生物信息学分析结果表明,Ha105是bro基因家族成员,含有Bro-N结构域,可能对宿主细胞的转录和病毒复制有一定影响。此外,重组病毒的PCR及酶切结果表明,成功构建了vHaHa105-KO-PH-gfp缺失菌株和vHaHa105-REP-PH-gfp、vHaHa105-REP-gfp回复菌株。该Ha105缺失及回复菌株的获得为进一步研究Ha105的功能奠定基础。 展开更多

关键词 棉铃虫核型多角体病毒 Bro基因 基因敲除 Red-ET重组 Bac-to-Bac昆虫表达系统

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柞蚕NPV转移载体组建及外源基因在Sf9细胞、柞蚕卵巢原代细胞和蛹体中的表达 被引量：12

17

作者 张春发 刘淑珊 +3 位作者 范琦 王林美 李文利 李广泽 《蚕业科学》 CAS CSCD 1992年第3期164-172,共9页

根据对载有ApNPV核多角体蛋白基因的片段的酶谱和核苷酸序列分析结果,采用人工合成寡核苷酸引物引导的点突变方法,去掉了该基因的起始密码子(ATG突变为ATT),经系列克隆组建了pApM740转移载体,其外源基因插入位点为nt+141(BamHI)。系用... 根据对载有ApNPV核多角体蛋白基因的片段的酶谱和核苷酸序列分析结果,采用人工合成寡核苷酸引物引导的点突变方法,去掉了该基因的起始密码子(ATG突变为ATT),经系列克隆组建了pApM740转移载体,其外源基因插入位点为nt+141(BamHI)。系用多聚酶链反应(Polymerase Chain Rea-ction简称PCR)技术,分别将nt+2～+140,nt+9～+140、和nt+37～+140切掉,组建了pApM740、741、748和736转移载体,其外源基因克隆位点分别为nt+1、+8和+36(均为BamHI切点)。将IL-4、DE基因分别克隆到pApM740、741、748和736载体中,并进行了转染表达实验:(1)将载有DE基因的上述四种载体质粒DNA分别与AcNPV_(WT)DNA共转染Sf9细胞、经免疫抗体荧光检测,供试4个载体所载DE基因均得到表达;(2)将pApM741-IL_4和pApM748-IL_4重组载体质粒DNA分别与ApNPV_(WT)DNA共转染柞蚕卵巢原代细胞,待多角体出现后,用PCR法检测病毒基因,证实IL-4基因已整合到ApNPV DNA基因组中;(3)将pApM748-DE重组载体质粒DNA与ApNPV _(WT)DNA共转染柞蚕蛹获得成功。对病蛹病毒DNA进行PCR检测,证实DE基因已整合到病毒基因组中;取病蛹体液,用免疫沉淀及Western blotting方法检测DE蛋白,证实DE蛋白确已被表达。 展开更多

关键词 柞蚕 核型多角体 病毒 转移载体

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杆状病毒表达载体系统研究进展

18

作者 李青兵 《广东蚕业》 1998年第4期60-64,共5页

昆虫杆状病毒科(Baculoviridae)因包埋于多角体中的病毒粒子呈棒状而得名,迄今为止,用于基因工程的杆状病毒均属核型多角体病毒(nuclear polyhedrosis virus,NPV)。NPV是一类双链DNA病毒,它的DNA是90—230Kb的环状分子。利用NPV作为外... 昆虫杆状病毒科(Baculoviridae)因包埋于多角体中的病毒粒子呈棒状而得名,迄今为止,用于基因工程的杆状病毒均属核型多角体病毒(nuclear polyhedrosis virus,NPV)。NPV是一类双链DNA病毒,它的DNA是90—230Kb的环状分子。利用NPV作为外源基因表达载体的设想最初是由Miller 1981年提出。 展开更多

关键词 杆状病毒表达载体系统 启动子序列 外源基因 昆虫杆状病毒 多角体蛋白 转移载体 研究进展 重组病毒 核型多角体病毒 病毒粒子

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昆虫杆状病毒作为外源基因表达载体的应用

19

作者 马景霞 《中国家禽》 北大核心 2008年第11期36-38,共3页

1昆虫杆状病毒的分子生物学研究 昆虫核型多角体病毒属于杆状病毒科，这类病毒具有双链超螺旋大分子DNA，能感染数百种昆虫。近10余年来对于杆状病毒的分子生物学研究取得了很大进展，特别是杆状病毒被用作表达外源基因的载体以来，对... 1昆虫杆状病毒的分子生物学研究 昆虫核型多角体病毒属于杆状病毒科，这类病毒具有双链超螺旋大分子DNA，能感染数百种昆虫。近10余年来对于杆状病毒的分子生物学研究取得了很大进展，特别是杆状病毒被用作表达外源基因的载体以来，对其分子生物学研究更加引人注目，其中对苜蓿银纹夜蛾核型多角体病毒（AcMNPV）的研究最为深入，已被用作昆虫核型多角体病毒分子生物学研究的模型。 展开更多

关键词 昆虫杆状病毒 基因表达载体 苜蓿银纹夜蛾核型多角体病毒 病毒分子生物学 应用 杆状病毒科 外源基因 DNA

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报告基因在柞蚕幼虫体内表达的研究

20

作者 石生林 王学英 +2 位作者 谢怀江 刘限 张忠泽 《沈阳农业大学学报》 CAS CSCD 2003年第3期173-176,共4页

利用柞蚕核型多角体病毒(AntheraeapernyiNuclearPolyhedrosisVirus,ApNPV)作为载体研究了报告基因(β-半乳糖苷酶基因)在柞蚕幼虫体内的表达。结果表明 :重组ApNPV能够使柞蚕幼虫产生典型的脓病病症 ,但不形成多角体。柞蚕核型多角体... 利用柞蚕核型多角体病毒(AntheraeapernyiNuclearPolyhedrosisVirus,ApNPV)作为载体研究了报告基因(β-半乳糖苷酶基因)在柞蚕幼虫体内的表达。结果表明 :重组ApNPV能够使柞蚕幼虫产生典型的脓病病症 ,但不形成多角体。柞蚕核型多角体病毒作为表达载体能够使β-半乳糖苷酶基因在柞蚕幼虫体内得到高效表达。雌性幼虫个体的表达量为2.4×107u,雄性幼虫个体的表达量为1.8×107U;雌性个体较雄性个体在表达时相上早96h;对于同一个体 ,组织细胞中β-半乳糖苷酶的含量较血淋巴上清液中β-半乳糖苷酶的含量高。SDS-PAGE结果显示,所表达的β-半乳糖苷酶分子量为116kD。 展开更多

关键词 柞蚕 幼虫 报告基因 基因表达 Β-半乳糖苷酶 核型多角体病毒 SDS-PAGE 生物反应器

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