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植物染色质免疫共沉淀方法 被引量:4
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作者 李东明 宋渊 安黎哲 《草业科学》 CAS CSCD 北大核心 2014年第4期659-667,共9页
染色质结构的动态变化和基因的适时适量表达,在植物生长发育过程中起着非常重要的作用。研究染色质结合蛋白和DNA的时空结合关系,对认识这些复杂的生命过程有重大意义。染色质免疫共沉淀(Chromatin Immunoprecipitation)就是在体内染色... 染色质结构的动态变化和基因的适时适量表达,在植物生长发育过程中起着非常重要的作用。研究染色质结合蛋白和DNA的时空结合关系,对认识这些复杂的生命过程有重大意义。染色质免疫共沉淀(Chromatin Immunoprecipitation)就是在体内染色质环境下研究蛋白质和DNA结合关系的方法,本研究利用先提核再甲醛交联的方法,详细叙述了该方法的6个主要步骤。通过对拟南芥(Arabidopsis thaliana)野生型Col-0和突变体met1中组蛋白H3K9甲基化在At4g03870转座子上差异的研究,认为染色质免疫共沉淀方法可行、稳定,此方法不仅适用于单个基因与蛋白结合关系的研究,还适用于特异蛋白结合位点的全基因组学研究。 展开更多
关键词 染色质结构 提细胞核 超声波破碎 染色体免疫共沉淀
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Menin调控小鼠胚胎早期发育相关基因的研究 被引量:2
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作者 张翠平 朱雅欣 +4 位作者 张宏利 李文毅 吴铃 龙红梅 李果 《上海交通大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2010年第6期660-664,673,共6页
目的研究1型多发性内分泌肿瘤综合征相关基因(Men1)编码的蛋白(menin)对小鼠胚胎早期发育相关基因的调控,并探讨其可能的作用机制。方法以经丝裂霉素C处理的小鼠胚胎成纤维细胞作为滋养层细胞培养未分化的小鼠胚胎干细胞,使其体外分化... 目的研究1型多发性内分泌肿瘤综合征相关基因(Men1)编码的蛋白(menin)对小鼠胚胎早期发育相关基因的调控,并探讨其可能的作用机制。方法以经丝裂霉素C处理的小鼠胚胎成纤维细胞作为滋养层细胞培养未分化的小鼠胚胎干细胞,使其体外分化形成胚胎体。RT-PCR鉴定胚胎体胚胎发育期标志基因表达;染色体免疫共沉淀结合启动子基因芯片技术检测成熟胚胎体中menin调控的下游基因,Real-Time PCR鉴定结果。结果 RT-PCR结果表明胚胎体相当于小鼠胚胎发育的早期器官形成期。基因芯片检测显示,menin能调控8 640个备选基因中的784个;基因分析显示,menin能通过多个信号通路调控下游基因,包括Wnt信号通路的1500003O03Rik、Prkca、Fosl1、Nfatc3、Dvl1;TGF-β信号转导途径的Thbs1、Tgfb3、Bmp4、Smurf2;凋亡信号通路的Casp6、1500003O03Rik、Prkar1a、Ripk1、Traf2、Capn5、Endog、Myd88;MAPK信号通路的Casp6、Arrb2、Fgf15、1500003O03Rik、Map3k4、Map2k1ip1、Tgfb3、Prkca、Traf2、Dusp7、Atf2等。结论 Menin可能通过Wnt、MAPK、TGF-β、凋亡等多种信号通路对小鼠胚胎早期发育相关基因进行调控。 展开更多
关键词 MENIN 胚胎体 染色体免疫共沉淀 启动子基因芯片 信号通路
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利用ChIP-seq技术研究转录因子EDAG在全基因组的结合谱 被引量:3
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作者 董小明 郑巍薇 +3 位作者 尹荣华 詹轶群 杨晓明 李长燕 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第6期578-584,共7页
为揭示红系分化相关基因(erythroid differentiation-associated gene,EDAG)在造血中的作用机制,利用ChIP-seq分析EDAG的全基因组结合谱.首先从产妇脐带血分离CD34+细胞,EPO诱导CD34+细胞培养5 d.利用EDAG抗体进行染色体免疫共沉淀(chro... 为揭示红系分化相关基因(erythroid differentiation-associated gene,EDAG)在造血中的作用机制,利用ChIP-seq分析EDAG的全基因组结合谱.首先从产妇脐带血分离CD34+细胞,EPO诱导CD34+细胞培养5 d.利用EDAG抗体进行染色体免疫共沉淀(chromatin immunoprecipitation,ChIP)实验、Western印迹法检测EDAG抗体的富集情况.将富集到的DNA样品进行高通量测序,最后利用生物信息学分析测序结果.成功富集染色体DNA,经高通量测序和生物信息学分析,共得到1 292个EDAG结合位点的Peaks数目,代表了975个结合的基因且错误发现率(false discovery rate,FDR)小于0.0001.EDAG Peaks主要分布在基因间区和内含子区.进一步利用Q-PCR对ChIP-Seq数据进行了验证,证实EDAG可结合在检测的靶基因调控区上.将EDAG结合的基因进行基因功能(gene ontology,GO)注释,表明EDAG参与了细胞周期、细胞生长、细胞分化、细胞凋亡及信号通路等多种生物学过程.综上,利用ChIP-seq技术在促红细胞生成素(EPO)诱导分化的CD34+细胞中鉴定了1 292个EDAG结合的peaks对应975个基因,并对该结果进行了随机验证,提示EDAG广泛参与了多种生物学过程.该研究为揭示EDAG的功能及作用机制提供了线索. 展开更多
关键词 红系分化相关基因(EDAG) 染色体免疫共沉淀-高通量测序(ChIP-seq) CD34+细胞 生物信息学分析
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雄激素通过雄激素受体途径调控垂体肿瘤转化基因(PTTG1)的表达
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作者 黄盛权 陈艺成 +2 位作者 牛晓华 毛泽斌 辛殿祺 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第6期556-560,共5页
雄激素能上调大鼠前列腺中垂体肿瘤转化基因1(PTTG1)的表达,在前列腺癌标本中,发现PTTG1的表达明显高于正常组织.因此,用雄激素依赖的前列腺癌细胞LNCaP来研究雄激素调控PTTG1表达的分子机制.在LNCaP细胞中,通过雄激素刺激后,PTTG1的表... 雄激素能上调大鼠前列腺中垂体肿瘤转化基因1(PTTG1)的表达,在前列腺癌标本中,发现PTTG1的表达明显高于正常组织.因此,用雄激素依赖的前列腺癌细胞LNCaP来研究雄激素调控PTTG1表达的分子机制.在LNCaP细胞中,通过雄激素刺激后,PTTG1的表达明显升高.根据序列分析以及5-缺失体实验(deletion)和突变实验(mutation),发现PTTG1的启动子上游-950到-933的序列上有1个雄激素受体反应元件(ARE),染色体免疫共沉淀实验(CHIP)也证实了雄激素能促进雄激素受体与PTTG1启动子上ARE结合,从而在转录水平调控PTTG1的表达. 展开更多
关键词 垂体肿瘤转化基因1 转录调控 染色体免疫共沉淀
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