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枯草芽孢杆菌WB600角蛋白酶重组菌发酵条件优化 被引量:7
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作者 廖朝勇 张铁鹰 +1 位作者 刘俊丽 隋景巍 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2020年第1期44-52,共9页
本试验旨在对已构建枯草芽孢杆菌WB600角蛋白酶重组菌WB600-K进行发酵条件优化,获得最佳产酶条件,以期提高重组菌角蛋白酶的产量;同时通过研究不同种类碳源和氮源间的组合优化获得成本低廉的重组菌发酵培养基配方。结果显示,当发酵液D 6... 本试验旨在对已构建枯草芽孢杆菌WB600角蛋白酶重组菌WB600-K进行发酵条件优化,获得最佳产酶条件,以期提高重组菌角蛋白酶的产量;同时通过研究不同种类碳源和氮源间的组合优化获得成本低廉的重组菌发酵培养基配方。结果显示,当发酵液D 600 nm=1.0时添加0.5%木糖诱导发酵WB600-K分泌表达角蛋白酶酶活最佳(P<0.05);山梨醇作为碳源可显著提高WB600-K角蛋白酶酶活(P<0.05),但成本较高不宜作为混合碳源来源;不同种类碳源(葡萄糖、玉米粉、糖蜜、甘油)组合添加能显著提高重组菌角蛋白酶酶活(P<0.05)。不同种类氮源(蛋白胨、酵母粉、豆粕粉、尿素)组合添加对于重组菌提高角蛋白酶酶活效果不如单一氮源(蛋白胨)(P<0.05)。在诱导发酵48 h时WB600-K产角蛋白酶酶活最高(P<0.05)。对发酵配方进行正交试验优化,WB600-K在玉米粉5.1 g/L、葡萄糖5.9 g/L、糖蜜5.9 g/L、甘油3.0 g/L、蛋白胨20 g/L、NaCl 10 g/L,发酵液D 600 nm=1.0时加0.5%木糖诱导发酵48 h能显著提高角蛋白酶酶活(P<0.05),达到56.9 U/mL,较初始培养条件提高49.74%。综上,在优化发酵条件下进行发酵及不同种类碳源间组合能提高WB600-K角蛋白酶活性,可为角蛋白酶工业化生产提供试验依据。 展开更多
关键词 枯草芽孢杆菌wb600 角蛋白酶 发酵条件 优化
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绿色荧光蛋白在枯草芽孢杆菌WB600中的表达
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作者 雍婕 杨辉 +2 位作者 肖红仕 田云 周海燕 《生物产业技术》 2019年第5期71-75,共5页
根据绿色荧光蛋白(green fluorescent protein,GFP)的特性,将GFP作为目的基因,与穿梭载体pHY300PLK结合,构建一个芽孢杆菌WB600的蛋白表达体系,为在枯草芽孢杆菌中表达其他蛋白提供了一定的技术和理论支持。本文结合pHY300PLK的克隆位点... 根据绿色荧光蛋白(green fluorescent protein,GFP)的特性,将GFP作为目的基因,与穿梭载体pHY300PLK结合,构建一个芽孢杆菌WB600的蛋白表达体系,为在枯草芽孢杆菌中表达其他蛋白提供了一定的技术和理论支持。本文结合pHY300PLK的克隆位点,设计gfp基因的引物,PCR扩增后回收的gfp基因片段进行双酶切,与相同双酶切的pHY300PLK连接获得pHY300PLK-GFP,通过电转化将pHY300PLK-GFP转化至芽孢杆菌WB600中并检测。获得转化子WB1,检测到转化子在荧光显微镜下显示绿色荧光,且后续测序检测表明重组质粒构建成功。 展开更多
关键词 芽孢杆菌wb600 荧光蛋白 蛋白表达体系
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甘露聚糖酶基因Man23在芽孢杆菌WB600中的表达 被引量:4
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作者 胡杨 周海燕 +1 位作者 董蕾 吴永尧 《湖南农业大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2007年第5期539-541,共3页
兼具纤维素酶和半纤维素酶活性的Man23基因(Man23)来自于芽孢杆菌B23,将其连接到质粒pHY-P43上,由强启动子P43来启动Man23的表达,重组质粒pHY-p43-Man23转入蛋白酶缺陷型芽孢杆菌WB600中,表达产物与原体系相比,甘露聚糖酶活力提高了21%... 兼具纤维素酶和半纤维素酶活性的Man23基因(Man23)来自于芽孢杆菌B23,将其连接到质粒pHY-P43上,由强启动子P43来启动Man23的表达,重组质粒pHY-p43-Man23转入蛋白酶缺陷型芽孢杆菌WB600中,表达产物与原体系相比,甘露聚糖酶活力提高了21%,电泳检测得到的蛋白图谱显示目的酶丰度有显著提高,杂蛋白未见大量表达,可见构建的WB600体系适用于Man23基因表达. 展开更多
关键词 甘露聚糖酶 基因表达 芽孢杆菌wb600
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重组枯草芽孢杆菌产角蛋白酶的发酵培养基及发酵条件优化 被引量:6
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作者 利刚慧 刘俊杰 +3 位作者 彭帅英 梁颖茵 鄢陆琪 李昆太 《中国饲料》 北大核心 2023年第19期29-36,共8页
角蛋白是潜在的优良饲用蛋白资源,其中角蛋白酶作为可特异性降解角蛋白的酶类,在角蛋白饲料化领域展现出广泛的应用潜力和价值。本研究以自主构建的重组角蛋白酶工程菌枯草芽孢杆菌WB600-pMA5-kerJY-23为研究对象,利用单因素和二次通用... 角蛋白是潜在的优良饲用蛋白资源,其中角蛋白酶作为可特异性降解角蛋白的酶类,在角蛋白饲料化领域展现出广泛的应用潜力和价值。本研究以自主构建的重组角蛋白酶工程菌枯草芽孢杆菌WB600-pMA5-kerJY-23为研究对象,利用单因素和二次通用旋转组合设计试验对其摇瓶发酵产角蛋白酶的发酵培养基和发酵条件进行优化。结果表明:该菌株最佳发酵产酶条件为:葡萄糖25 g/L,蔗糖25 g/L,酵母浸膏20 g/L,硫酸铵10 g/L,磷酸氢二钾1.5 g/L,氯化钠0.3 g/L,氯化钙0.025 g/L,硫酸镁0.025 g/L,硫酸亚铁0.015 g/L,氯化锰0.05 g/L,初始pH 8,装液量45 mL/250 mL三角瓶,接种量6%,培养温度37℃,摇床转速200 r/min,发酵周期36 h。在该优化条件下,重组枯草芽孢杆菌WB600发酵产角蛋白酶的酶活达到(2110±15.011)U/mL,较优化前提高了5.10倍(P<0.05),为该酶在角蛋白降解及资源化利用领域的应用提供了理论依据与研究基础。 展开更多
关键词 角蛋白酶 重组枯草芽孢杆菌wb600 发酵培养基 发酵条件 优化
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长野芽孢杆菌普鲁兰酶基因在枯草芽孢杆菌中的表达及酶学性质研究 被引量:4
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作者 张艳 路福平 +2 位作者 刘逸寒 李玉 张春峰 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第7期114-118,共5页
根据NCBI上报道的基因序列设计引物,以长野芽孢杆菌(Bacillus naganoensis)ATCC53909的染色体DNA为模板,PCR扩增普鲁兰酶编码基因pulB。将此基因与表达载体pWB980连接构建重组质粒pWB-pulB,并转化枯草芽孢杆菌WB600。SDS-PAGE结果显示,... 根据NCBI上报道的基因序列设计引物,以长野芽孢杆菌(Bacillus naganoensis)ATCC53909的染色体DNA为模板,PCR扩增普鲁兰酶编码基因pulB。将此基因与表达载体pWB980连接构建重组质粒pWB-pulB,并转化枯草芽孢杆菌WB600。SDS-PAGE结果显示,在100 kD处有特异性条带,经测定重组转化子粗酶液酶活力达10.94 U/mL。酶学性质分析表明,其最适反应温度为60℃,最适反应pH为5.0,且在温度30-60℃及pH4.0-6.0范围内稳定,适合淀粉加工行业的应用。 展开更多
关键词 长野芽孢杆菌 普鲁兰酶 wb600表达 酶学性质
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粪产碱杆菌青霉素酰化酶在枯草芽孢杆菌中的表达优化 被引量:1
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作者 史敏龙 叶勤 《华东理工大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2003年第6期575-578,共4页
在5L发酵罐中进行了表达粪产碱杆菌青霉素G酰化酶的重组枯草杆菌WB600(pMA5)的发酵研究。实验表明,发酵液中的葡萄糖浓度和菌体产酶能力密切相关,维持低葡萄糖水平,可以提高枯草杆菌WB600(pMA5)青霉素G酰化酶的合成能力。采用混合碳源... 在5L发酵罐中进行了表达粪产碱杆菌青霉素G酰化酶的重组枯草杆菌WB600(pMA5)的发酵研究。实验表明,发酵液中的葡萄糖浓度和菌体产酶能力密切相关,维持低葡萄糖水平,可以提高枯草杆菌WB600(pMA5)青霉素G酰化酶的合成能力。采用混合碳源进行发酵,在生长阶段流加葡萄糖,并维持低浓度,在发酵12h菌体浓度达到约13.8g/L时停止流加葡萄糖,使菌体利用发酵液中的可溶性淀粉作为碳源,避免葡萄糖的代谢副产物对菌体产酶能力的抑制,青霉素G酰化酶的表达水平从原来的55u/L提高到582u/L。 展开更多
关键词 青霉素G酰化酶 枯草杆菌wb600(pMA5) 补料分批发酵 葡萄糖流加
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