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枯草芽孢杆菌蛋白酶结构与表达载体分析 被引量:1
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作者 张荣宗 江丁文 陈锦香 《农业技术与装备》 2021年第7期60-61,64,共3页
文章对枯草芽孢杆菌蛋白酶同源建模的三维结构进行分析,并对基因密码子和不同生物细胞载体基因密码子偏好性进行比较,确定枯草芽孢杆菌蛋白酶比较一致的表达载体。结果表明,枯草芽孢杆菌蛋白酶三维预测模型超过90%氨基酸残基落在最适区... 文章对枯草芽孢杆菌蛋白酶同源建模的三维结构进行分析,并对基因密码子和不同生物细胞载体基因密码子偏好性进行比较,确定枯草芽孢杆菌蛋白酶比较一致的表达载体。结果表明,枯草芽孢杆菌蛋白酶三维预测模型超过90%氨基酸残基落在最适区,属于高质量的预测模型,其主要结构是α-螺旋和不规则结构。对枯草芽孢杆菌蛋白酶基因与不同候选生物细胞载体基因组进行比较,发现巴斯德毕赤酵母是枯草芽孢杆菌蛋白酶最适合的表达载体。 展开更多
关键词 枯草芽孢杆菌蛋白酶 密码子 同源建模 结构 表达载体
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枯草芽孢杆菌蛋白酶基因的密码子分析
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作者 张荣宗 江丁文 陈锦香 《农业技术与装备》 2021年第6期66-68,共3页
枯草芽孢杆菌是一种有益的微生物,在土壤、空气、水和腐败的有机物中都有分布,有消毒抑菌防腐、水生态保护、除臭、提高免疫力等功能,可应用在生态发酵、微生物医学、动植物的生产和保护、粪污环境污染控制等方面。文章对枯草芽孢杆菌... 枯草芽孢杆菌是一种有益的微生物,在土壤、空气、水和腐败的有机物中都有分布,有消毒抑菌防腐、水生态保护、除臭、提高免疫力等功能,可应用在生态发酵、微生物医学、动植物的生产和保护、粪污环境污染控制等方面。文章对枯草芽孢杆菌的成熟枯草杆菌蛋白酶基因进行分析发现,密码子第3位以A、T为主,密码子偏性中等,可利用二步重叠PCR法等进一步优化表达;有较多的优势密码子,表达水平提升空间大,可进一步选择大肠杆菌、酵母、芽孢杆菌、昆虫或者哺乳动物等比较一致的表达载体系统转化表达。 展开更多
关键词 枯草芽孢杆菌蛋白酶 基因 密码子 优化 表达
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紫外诱变选育高产蛋白酶枯草芽孢杆菌 被引量:28
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作者 牛春华 高岩 +2 位作者 李玉秋 王成业 王景会 《中国酿造》 CAS 北大核心 2011年第12期67-69,共3页
紫外线辐射是目前最为广泛的物理诱变因子之一,其引起菌体DNA结构变化的形式很多,如DNA链的断裂、碱基的破坏等,但最主要的作用是使同链DNA的相邻嘧啶间形成胸腺嘧啶二聚体,阻碍碱基间的正常配对,从而引起微生物突变或死亡。以实验室保... 紫外线辐射是目前最为广泛的物理诱变因子之一,其引起菌体DNA结构变化的形式很多,如DNA链的断裂、碱基的破坏等,但最主要的作用是使同链DNA的相邻嘧啶间形成胸腺嘧啶二聚体,阻碍碱基间的正常配对,从而引起微生物突变或死亡。以实验室保存的枯草芽孢杆菌为出发菌株,利用紫外诱变的方法,以获取可高效发酵生产蛋白酶的突变株。通过大量筛选及连续传代实验,确定了一株突变性状能稳定遗传的突变株,其蛋白酶产量较出发菌株有大幅度提高。 展开更多
关键词 紫外诱变 枯草芽孢杆菌:蛋白酶
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枯草芽孢杆菌中性蛋白酶的固定化研究 被引量:2
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作者 张宇军 曹慧 +3 位作者 徐斐 袁敏 叶泰 于劲松 《食品与生物技术学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第10期98-104,共7页
采用酰胺交联法将葡萄糖酸冼必泰修饰在载体上,并优化了修饰后的载体对中性蛋白酶的结合条件及催化活性的影响。结果表明,葡萄糖酸冼必泰对载体的修饰条件及修饰后的载体对中性蛋白酶的固定条件为:葡萄糖酸冼必泰的添加量为0.095 mmol... 采用酰胺交联法将葡萄糖酸冼必泰修饰在载体上,并优化了修饰后的载体对中性蛋白酶的结合条件及催化活性的影响。结果表明,葡萄糖酸冼必泰对载体的修饰条件及修饰后的载体对中性蛋白酶的固定条件为:葡萄糖酸冼必泰的添加量为0.095 mmol、树脂活化时间为1 h、载体羧基与1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺(EDC)摩尔比为1∶3、中性蛋白酶的添加量为600 U,酶活化时EDC的添加量为13.7 mg。在此条件下,固定化中性蛋白酶的酶活性可达398 U/g树脂。经傅立叶红外分析,枯草芽孢杆菌中性蛋白酶成功的交联到修饰有亲和配基的亲和树脂载体上。经过固定后,固定化酶的米氏常数Km值为2.9 mg/mL,游离酶的Km值为1.7 mg/mL,随意固定化酶的Km值为7.1 mg/mL。 展开更多
关键词 枯草芽孢杆菌中性蛋白酶 葡萄糖酸冼必泰 固定化酶
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枯草杆菌蛋白酶QK的活性与氨基酸突变位点的相关性
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作者 杨媛媛 周立 +3 位作者 唐艺萍 刘秋晨 梁宁 王业富 《食品工业科技》 CAS 北大核心 2019年第13期89-93,共5页
目的:鉴定不同来源的枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)产生的枯草杆菌蛋白酶QK(subtilisin QK)的活性与编码其序列的氨基酸位点突变的相关性。方法:以筛选得到的15株菌株的总DNA为模板,细菌16SrRNA为通用引物,进行PCR扩增,将产物测序后... 目的:鉴定不同来源的枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)产生的枯草杆菌蛋白酶QK(subtilisin QK)的活性与编码其序列的氨基酸位点突变的相关性。方法:以筛选得到的15株菌株的总DNA为模板,细菌16SrRNA为通用引物,进行PCR扩增,将产物测序后输入NCBI比对,确定其均为枯草芽孢杆菌属。再扩增这15株菌株的QK基因,测序后与GenBank上已提交的QK基因所对应的蛋白序列进行比对,找出氨基酸差异位点。使用纤维蛋白平板法测定菌株所产枯草杆菌蛋白酶的活性,用BCA蛋白测定试剂盒测定发酵液的总蛋白含量,并计算得到单位酶活。结果:根据突变位点的不同把15株菌株分为A、B、C、D四组。A组的突变位点为S184T,单位酶活显著最高(p<0.05);B组的突变位点为Q90K,N193S,S236T,N365S,C组的突变位点为N193S,S236T,A289V,B、C两组之间单位酶活并无显著性差异(p>0.05),但B、C两组单位酶活显著小于A组(p<0.05);D组的突变位点为Q90K,N193S,S236T,A289V,单位酶活显著低于其他三组(p<0.05)。结论:枯草杆菌蛋白酶QK的单位酶活与氨基酸突变位点之间有相关性:S184T和N365S位点变化对单位酶活性有促进作用,A289V位点变化对单位酶活性有抑制作用。据此推测,这些位点位于枯草杆菌蛋白酶QK的活性中心。 展开更多
关键词 枯草芽孢杆菌蛋白酶 QK基因 酶活 氨基酸突变位点
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纳豆激酶分子结构与潜在应用价值分析 被引量:7
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作者 马国兴 潘峰 +3 位作者 王庆波 温春光 吴雅清 许瑞安 《食品与生物技术学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第4期342-349,共8页
纳豆激酶因具有较强的溶血能力而著称。目前国内外大量研究人员聚焦于纳豆激酶研究,其开发利用已经获得了长足发展,但同时许多问题与不足也随之暴露出来。一方面是对纳豆激酶的开发利用大多局限于溶栓活性的利用与开发,低估了纳豆激酶... 纳豆激酶因具有较强的溶血能力而著称。目前国内外大量研究人员聚焦于纳豆激酶研究,其开发利用已经获得了长足发展,但同时许多问题与不足也随之暴露出来。一方面是对纳豆激酶的开发利用大多局限于溶栓活性的利用与开发,低估了纳豆激酶应有的整体价值;其次是针对该酶开发和利用的方法过于传统,尚未形成组学大数据和生物信息学技术相结合的探索思维。因此,需要利用更为开阔的研究思路和开发手段来实现纳豆激酶开发利用的最大化。作者从纳豆激酶分子水平和家族分类层次上系统地阐述该酶分子特征,同时对纳豆激酶家族蛋白酶的应用现状进行分析,并对纳豆激酶研发前景进行了展望。 展开更多
关键词 纳豆激酶 保守区域 枯草芽孢杆菌蛋白酶 Peptidase-S8-subtilian-subset蛋白酶家族
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