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构象敏感凝胶电泳用于检测乙型肝炎病毒P区核苷类似物耐药准种的初步研究 被引量:2
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作者 刘霖 汤影子 +3 位作者 王宇明 王小红 周吉军 李俊刚 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第21期2102-2103,共2页
目的建立经济、实用、准确的乙型肝炎病毒准种分析方法。方法采用"PCR-克隆-测序"的方法,对2例血清样本的各60个克隆测序,χ2检验分析所研究克隆毒株的数量对准种组成反映准确性的影响;用建立的构象敏感凝胶电泳(CSGE)法区分... 目的建立经济、实用、准确的乙型肝炎病毒准种分析方法。方法采用"PCR-克隆-测序"的方法,对2例血清样本的各60个克隆测序,χ2检验分析所研究克隆毒株的数量对准种组成反映准确性的影响;用建立的构象敏感凝胶电泳(CSGE)法区分克隆目的片段,比对CSGE结果与测序结果的一致性。结果对于优势准种比例的反映检测15个克隆以上(χ2=2.700,P=0.100>0.05)、对劣势株的检出检测30个以上则与检测60个克隆无统计学差异(χ2=2.411,P>0.05);比较8个样本共270个克隆的CSGE及测序结果,两者表现出良好的对应性(准确率达98.9%)。结论用"PCR-克隆-CSGE-测序"的方法视不同需求检测15或30个克隆可准确反映1份血清样本中HBV准种的组成和分布。 展开更多
关键词 肝炎病毒 乙型 准种 构象敏感凝胶电泳 方法学
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荧光-构象敏感凝胶电泳技术筛查上海市郊区野生小家鼠线粒体编码区SNP位点 被引量:4
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作者 范忠鹏 朱旺升 +7 位作者 张超 周宇荀 李凯 梁银明 邢正宏 陈国强 柏熊 肖君华 《遗传》 CAS CSCD 北大核心 2008年第4期475-482,共8页
利用通用引物荧光PCR方案,应用荧光-构象敏感凝胶电泳(fluorescence-basedconformation sensitive gel electrophoresis,F-CSGE)和DNA直接测序分型技术,对上海地区64只野生小家鼠线粒体DNA(mtDNA)编码区进行序列分析,在上海市郊区野生... 利用通用引物荧光PCR方案,应用荧光-构象敏感凝胶电泳(fluorescence-basedconformation sensitive gel electrophoresis,F-CSGE)和DNA直接测序分型技术,对上海地区64只野生小家鼠线粒体DNA(mtDNA)编码区进行序列分析,在上海市郊区野生小家鼠群体中初步检测mtDNA编码区SNP,以发现合适的遗传位标用于野生小家鼠遗传多态性分析。结果发现:F-CSGE所有存在SNP突变的峰图中同源双链和异源双链峰电泳泳动距离差异均较为明显,在检测未知SNP中无假阳性出现,检测效率高。F-CSGE检出野生小鼠mtDNA编码区SNP24个,其中新发现SNP为16个。结果表明,F-CSGE可用于mtDNA编码区SNP检测,新发现的SNP可作为遗传位标用以研究整个上海地区野生小家鼠的遗传结构和遗传多态性。 展开更多
关键词 线粒体DNA 单核苷酸多态性 荧光-构象敏感凝胶电泳 野生小家鼠
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RHO基因突变在视网膜色素变性中的分子遗传学分析 被引量:1
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作者 张晓莉 府伟灵 +1 位作者 薛强 张雪 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2002年第1期55-57,共3页
目的 探明我国RP患者视紫红质 (rhodopsin ,RHO)基因突变的特征和意义。方法 在 98例RP患者中运用构象敏感凝胶电泳 (conformationsensitivegelelectrophoresis ,CSGE)和DNA直接测序方法检测RHO基因全编码区范围内的点突变。结果 一... 目的 探明我国RP患者视紫红质 (rhodopsin ,RHO)基因突变的特征和意义。方法 在 98例RP患者中运用构象敏感凝胶电泳 (conformationsensitivegelelectrophoresis ,CSGE)和DNA直接测序方法检测RHO基因全编码区范围内的点突变。结果 一个ADRP家系的 4名患者第 347密码子发生点突变 ,Pro347Leu ;另一个ADRP家系中一名晚发型患者及其目前还未出现症状的女儿在第 32 7密码子出现点突变 ,Pro32 7( 1 bpdel) ,而对照组 10 0例健康成年人未发现上述两种突变。此外在 1名患者和 2名对照者中还检出一非致病的点突变 ,Ala2 99Ser ,属单个碱基多态现象 (singlenucleotidepolymophism ,SNP)。结论  98例RP先证者中检出 2例携带RHO基因突变 ,由此可初步预测RHO基因在我国RP患者中的突变频率约为 2 % ( 95 %的可信区间为 0 .2 %~ 7.0 % )。Pro347Leu突变改变了视蛋白C末端一段高度保守的氨基酸序列 ,致使该蛋白在胞内的运输发生障碍。Pro32 7( 1 bpdel)使突变蛋白的羧基末端失去了原有的磷酸化位点及上述一段高度保守的功能区 。 展开更多
关键词 视网膜色素变性 视紫红质基因 基因突变 构象敏感凝胶电泳 DNA测序 RHO基因 分子遗传学
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视网膜色素变性光感受器发育相关基因分型的研究
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作者 张晓莉 府伟灵 +1 位作者 彭智培 杨冠寅 《眼科研究》 CSCD 北大核心 2003年第1期21-23,共3页
目的 探讨一新近发现的与氧调节光感受器发育相关基因(0RP1)在常染色体显性遗传(RP)发病机制中的作用。方法 运用聚合酶链反应(PCR)、构象敏感凝胶电泳(CSGE)和DNA直接测序方法对92例RP患者ORP1基因全编码区进行突变的筛选与检测。 结果... 目的 探讨一新近发现的与氧调节光感受器发育相关基因(0RP1)在常染色体显性遗传(RP)发病机制中的作用。方法 运用聚合酶链反应(PCR)、构象敏感凝胶电泳(CSGE)和DNA直接测序方法对92例RP患者ORP1基因全编码区进行突变的筛选与检测。 结果 检出-ORP1致病突变因子R677X,并首次发现一非致病的无义突变因子R1933X。 结论 预测香港地区大约有1.1%(95%的可信区间为5.4%以下)的RP是由ORP1基因突变所致。R1933X无致病意义.结合最近发现的Y1 053(1-bp del)的病理意义,推测密码子1052至1 933区域的稳定对ORP1结构及功能的维持起着重要的作用。 展开更多
关键词 氧调节 光感受器 发育 基因 0RPl PCR 聚合酶 链反应 DNA 视网膜色素变性 基因突变 构象敏感凝胶电泳
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人类免疫缺陷病毒1型在垂直传播的个体间病毒基因型和准种的差异性的实验研究 被引量:2
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作者 黄广宇 王宇明 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第17期1785-1788,共4页
目的通过对人类免疫缺陷病毒1型(hum an immunodefic iency virus-1,H IV-1)在垂直传播的个体间病毒基因型和准种的差异性研究揭示H IV-1在垂直传播过程中的变异规律。方法提取H IV-1感染母亲及其子女共4例的血浆中总RNA,通过逆转录多... 目的通过对人类免疫缺陷病毒1型(hum an immunodefic iency virus-1,H IV-1)在垂直传播的个体间病毒基因型和准种的差异性研究揭示H IV-1在垂直传播过程中的变异规律。方法提取H IV-1感染母亲及其子女共4例的血浆中总RNA,通过逆转录多聚酶链反应(RT-PCR)获得H IV-1包膜蛋白(env)基因的C2-V5区域片段,纯化后装入T载体,转化至Top10大肠埃希菌内增殖,通过蓝白筛选获得阳性克隆,阳性克隆为模板行PCR,产物进行构象敏感性凝胶电泳(conform ation sensitive gel electrophoresis,CSGE)分析,挑选优势准种和劣势准种测序。结果第1对母亲准种复杂性较其子女低,母子之间各准种的核苷酸序列高度同源,均为C亚型;第2对母亲准种复杂性较其子女高,母子之间各准种的核苷酸序列高度同源,母子均为AE亚型。结论H IV-1在垂直传播过程中亚型不发生变化,病毒准种在传播过程中可能具有选择性,进入新宿主后因环境变化而被重新筛选,二者可能共同导致优势/劣势准种的变化。此外,母婴之间准种的复杂性与其宿主的免疫状态有关。 展开更多
关键词 HIV-1 准种 构象敏感凝胶电泳
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