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题名大肠杆菌重组菌生产极端耐热木聚糖酶的研究
被引量：1
- 1
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作者
娄恺
于安峰
邢新会
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机构
清华大学化工系生物化工研究所
新疆农科院微生物研究所
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出处
《新疆农业科学》
CAS
CSCD
2004年第F08期5-7,共3页
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文摘
将含有来自于嗜热网球菌 (Dictyoglomusthermophilum)Rt4 6B .1编码极端耐热木聚糖酶基因xynB的表达载体pET -DBc转化大肠杆菌EscherichiacoliBL2 1(DE3) ,获得重组菌E .coliDB1,目的基因可表达出有活性且耐 90℃的木聚糖酶。E .coliDB1发酵培养基的较佳组成为 (g/l) :葡萄糖 5 0 ,NH4Cl 3、MgSO40 .5、CaCl2 0 .6、Na2 HPO4·7H2 O 12 .8、KH2 PO43.0和NaCl 0 .5。在工程菌培养的对数生长前期加入终浓度为 1mmol/l的异丙基硫代 - β -D -半乳糖苷 (IPTG)进行诱导 ,对菌体生长无阻碍作用 ,木聚糖酶酶活在菌体生长的后期达到最高 ,利用优化的培养基在不加入IPTG的情况下木聚糖酶酶活仍维持在很高的水平。
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关键词
大肠杆菌重组菌
极端耐热性
木聚糖酶
发酵培养基
诱导条件
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分类号
TQ925
[轻工技术与工程—发酵工程]
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题名解糖热纤维菌木糖苷酶的分离纯化及其酶学性质
被引量：5
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作者
王月皎
夏乾竣
周佩
张瑜
王飞
李迅
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机构
南京林业大学江苏省林业资源高效加工利用协同创新中心
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出处
《化工进展》
EI
CAS
CSCD
北大核心
2017年第3期1041-1046,共6页
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基金
国家林业局“948”项目(2014-4-37)
国家自然科学基金(31270612,31370572)
江苏高校品牌专业建设工程项目(PPZY2015C22)
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文摘
通过生物信息学分析,确定厌氧孢子菌Caldicellulosiruptor saccharolyticus编码的木糖苷酶(XYL39B)属于糖苷水解酶第2家族,是极端耐热的水解低聚木糖为木糖的关键酶。将XYL39B基因(xyl39B)导入大肠杆菌BL21(DE3)中表达,通过热处理和镍柱亲和层析获得纯酶。对纯化的重组XYL39B进行酶学性质的表征,结果表明该酶的最适反应温度为70℃,最适反应p H为6.0。在p H 6.0,70℃条件下保温2h后残留相对酶活仍达90%以上,在55~75℃范围内酶活较高且比较稳定。Zn2+、Cu2+、SDS对酶活力的抑制作用较明显,其他金属离子和化学试剂对该酶的酶活力影响不显著。在以4-对硝基苯酚-β-D-木糖苷(p NPX)为底物,该酶的表观活化能为14.52k J/mol,其Km值为11.47mmol/L,Vmax为29.4U/g,Kcat为20.60s–1,木糖对其反馈抑制较弱(抑制常数Ki为306.87mmol/L),综上结果显示该酶是活性较高且抑耐木糖抑制的细菌源极端耐热木糖苷酶。研究结果为其后续的基因改造和实际应用奠定理论基础。
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关键词
极端耐热
Β-木糖苷酶
解糖热纤维菌
亲和层析
酶学性质
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Keywords
thermostable
β-xylosidase
Caldicellulosiruptor saccharolyticus
affinity chromatography
enzyme characterization
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分类号
Q556.2
[生物学—生物化学]
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