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基于RPA-CRISPR/Cas12a的杰克贝尔氏粉蚧可视化快速检测体系建立
被引量：
1
1
作者
陈燕婷
史梦竹
+4 位作者
胡美玲
陈彦
杨秀娟
赵建伟
李建宇
《昆虫学报》
北大核心
2025年第6期830-839,共10页
【目的】本研究旨在利用重组酶聚合酶等温扩增(recombinase polymerase amplification,RPA)-CRISPR/Cas12a技术建立一套对杰克贝尔氏粉蚧Pseudococcus jackbeardsleyi进行快速、灵敏、便捷和可视化的荧光检测和侧向流层析检测(lateral f...
【目的】本研究旨在利用重组酶聚合酶等温扩增(recombinase polymerase amplification,RPA)-CRISPR/Cas12a技术建立一套对杰克贝尔氏粉蚧Pseudococcus jackbeardsleyi进行快速、灵敏、便捷和可视化的荧光检测和侧向流层析检测(lateral flow assay)体系,以实现在田间或者口岸等资源受限场所的现场实时检测。【方法】基于杰克贝尔氏粉蚧28S rDNA基因序列设计RPA特异性引物和crRNA,分别对杰克贝尔氏粉蚧与其他9种粉蚧(木瓜秀粉蚧Paracoccus marginatus、石蒜绵粉蚧Phenacoccus solani、扶桑绵粉蚧Phenacoccus solenopsis、柑橘臀纹粉蚧Planococcus citri、南洋臀纹粉蚧Planococcus lilacinus、新菠萝灰粉蚧Dysmicoccus neobrevipes、大洋臀纹粉蚧Planococcus minor、柑橘棘粉蚧Pseudococcus cryptus和奥德曼粉蚧Pseudococcus odermatti)进行RPA和CRISPR/Cas12a检测,验证该体系的特异性。对RPA-CRISPR/Cas12a检测体系进行条件优化,包括RPA反应时间、Cas12a和crRNA的浓度比及其浓度、荧光报告分子FQ Reporter的浓度、试纸条报告分子LF Reporter的浓度以及CRISPR/Cas12a体系反应时间,筛选获得最佳检测体系。【结果】利用设计的RPA特异性引物的RPA体系可扩增出一条201 bp的杰克贝尔氏粉蚧28S rDNA基因片段,结合CRISPR/Cas12a反应体系,可特异性地将杰克贝尔氏粉蚧与其他9种粉蚧区分开,并呈现可视化结果。通过条件优化建立的对杰克贝尔氏粉蚧的最适RPA-CRISPR/Cas12a检测体系中,RPA反应时间为20 min,Cas12a和crRNA浓度比为1∶1且在体系中的浓度均为50 nmol/L,LF Reporter浓度为500 nmol/L,LF Reporter浓度为800 nmol/L,荧光检测体系和侧向流层析检测体系的反应时间分别为5和20 min。【结论】本研究建立了一套杰克贝尔氏粉蚧RPA-CRISPR/Cas12a检测体系,具有高特异性、快速(25~40 min)、不依赖仪器设备且结果可视化的优点。该检测体系在入侵粉蚧的早期识别和现场检测具有重要的应用价值,为制定合理的管理策略提供了指导。
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关键词
杰克贝尔氏粉蚧
重组酶聚合酶扩增
CRISPR/Cas12a检测
荧光检测
侧向流层析检测
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职称材料
警惕杰克贝尔氏粉蚧Pseudococcus jackbeardsleyi Gimpel & Miller在中国大陆扩散
被引量：
10
2
作者
王玉生
周培
+2 位作者
田虎
万方浩
张桂芬
《生物安全学报》
2018年第3期171-177,共7页
杰克贝尔氏粉蚧原产于新热带区,是新近传入中国大陆的一种外来生物,主要危害水果、蔬菜、园林植物和粮食作物。该虫于2012年首次在我国海南乐东被发现,寄主植物为丝瓜;之后又在新疆乌鲁木齐的花卉市场被发现,寄主植物为来自广东或福建...
杰克贝尔氏粉蚧原产于新热带区,是新近传入中国大陆的一种外来生物,主要危害水果、蔬菜、园林植物和粮食作物。该虫于2012年首次在我国海南乐东被发现,寄主植物为丝瓜;之后又在新疆乌鲁木齐的花卉市场被发现,寄主植物为来自广东或福建的盆景人参榕。杰克贝尔氏粉蚧寄主范围广泛,涉及50科200多种,且极易随农产品的贸易活动进行远距离传播扩散,对我国农林产业的安全生产构成了潜在巨大威胁。概述了杰克贝尔氏粉蚧的地理分布和生物学特征,浅析了其在我国的传播扩散趋势,并从物种鉴定、生物防治和检验检疫处理等方面提出了防控建议,以期为有效预防和控制该种粉蚧在我国的进一步传播扩散提供参考。
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关键词
杰克贝尔氏粉蚧
外来生物
传播扩散
中国大陆
防控措施
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职称材料
题名
基于RPA-CRISPR/Cas12a的杰克贝尔氏粉蚧可视化快速检测体系建立
被引量：
1
1
作者
陈燕婷
史梦竹
胡美玲
陈彦
杨秀娟
赵建伟
李建宇
机构
福建省农业科学院植物保护研究所
福建省农业科学院农业质量标准与检测技术研究所
福州海关技术中心
出处
《昆虫学报》
北大核心
2025年第6期830-839,共10页
基金
国家重点研发计划项目(2021YFC2600400)
福建省农业科学院优才专项(YCZX202406)
+1 种基金
福建省公益项目(2023R1022001)
福建省人民政府与中国农业科学院“5511”协同创新工程(XTCXGC2021017,XTCXGC2021011)。
文摘
【目的】本研究旨在利用重组酶聚合酶等温扩增(recombinase polymerase amplification,RPA)-CRISPR/Cas12a技术建立一套对杰克贝尔氏粉蚧Pseudococcus jackbeardsleyi进行快速、灵敏、便捷和可视化的荧光检测和侧向流层析检测(lateral flow assay)体系,以实现在田间或者口岸等资源受限场所的现场实时检测。【方法】基于杰克贝尔氏粉蚧28S rDNA基因序列设计RPA特异性引物和crRNA,分别对杰克贝尔氏粉蚧与其他9种粉蚧(木瓜秀粉蚧Paracoccus marginatus、石蒜绵粉蚧Phenacoccus solani、扶桑绵粉蚧Phenacoccus solenopsis、柑橘臀纹粉蚧Planococcus citri、南洋臀纹粉蚧Planococcus lilacinus、新菠萝灰粉蚧Dysmicoccus neobrevipes、大洋臀纹粉蚧Planococcus minor、柑橘棘粉蚧Pseudococcus cryptus和奥德曼粉蚧Pseudococcus odermatti)进行RPA和CRISPR/Cas12a检测,验证该体系的特异性。对RPA-CRISPR/Cas12a检测体系进行条件优化,包括RPA反应时间、Cas12a和crRNA的浓度比及其浓度、荧光报告分子FQ Reporter的浓度、试纸条报告分子LF Reporter的浓度以及CRISPR/Cas12a体系反应时间,筛选获得最佳检测体系。【结果】利用设计的RPA特异性引物的RPA体系可扩增出一条201 bp的杰克贝尔氏粉蚧28S rDNA基因片段,结合CRISPR/Cas12a反应体系,可特异性地将杰克贝尔氏粉蚧与其他9种粉蚧区分开,并呈现可视化结果。通过条件优化建立的对杰克贝尔氏粉蚧的最适RPA-CRISPR/Cas12a检测体系中,RPA反应时间为20 min,Cas12a和crRNA浓度比为1∶1且在体系中的浓度均为50 nmol/L,LF Reporter浓度为500 nmol/L,LF Reporter浓度为800 nmol/L,荧光检测体系和侧向流层析检测体系的反应时间分别为5和20 min。【结论】本研究建立了一套杰克贝尔氏粉蚧RPA-CRISPR/Cas12a检测体系,具有高特异性、快速(25~40 min)、不依赖仪器设备且结果可视化的优点。该检测体系在入侵粉蚧的早期识别和现场检测具有重要的应用价值,为制定合理的管理策略提供了指导。
关键词
杰克贝尔氏粉蚧
重组酶聚合酶扩增
CRISPR/Cas12a检测
荧光检测
侧向流层析检测
Keywords
Pseudococcus jackbeardsleyi
recombinase polymerase amplification
CRISPR/Cas12a assay
fluorescent detection
lateral flow assay
分类号
Q969 [生物学—昆虫学]
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职称材料
题名
警惕杰克贝尔氏粉蚧Pseudococcus jackbeardsleyi Gimpel & Miller在中国大陆扩散
被引量：
10
2
作者
王玉生
周培
田虎
万方浩
张桂芬
机构
中国农业科学院植物保护研究所植物病虫害生物学国家重点实验室/农业农村部作物有害生物综合治理重点实验室
无锡出入境检验检疫局
河北出入境检验检疫局检验检疫技术中心曹妃甸分中心
出处
《生物安全学报》
2018年第3期171-177,共7页
基金
国家重点研发计划(2017YFC1200600
2016YFC1201200)
+2 种基金
国家科技支撑计划项目(2015BAD08B03)
中国农业科学院科技创新工程项目
国家质检总局科技项目(2016IK145)
文摘
杰克贝尔氏粉蚧原产于新热带区,是新近传入中国大陆的一种外来生物,主要危害水果、蔬菜、园林植物和粮食作物。该虫于2012年首次在我国海南乐东被发现,寄主植物为丝瓜;之后又在新疆乌鲁木齐的花卉市场被发现,寄主植物为来自广东或福建的盆景人参榕。杰克贝尔氏粉蚧寄主范围广泛,涉及50科200多种,且极易随农产品的贸易活动进行远距离传播扩散,对我国农林产业的安全生产构成了潜在巨大威胁。概述了杰克贝尔氏粉蚧的地理分布和生物学特征,浅析了其在我国的传播扩散趋势,并从物种鉴定、生物防治和检验检疫处理等方面提出了防控建议,以期为有效预防和控制该种粉蚧在我国的进一步传播扩散提供参考。
关键词
杰克贝尔氏粉蚧
外来生物
传播扩散
中国大陆
防控措施
Keywords
Pseudococcus jackbeardsleyi
alien species
dispersal
China's Mainland
management measure
分类号
S41-30 [农业科学—植物保护]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
基于RPA-CRISPR/Cas12a的杰克贝尔氏粉蚧可视化快速检测体系建立
陈燕婷
史梦竹
胡美玲
陈彦
杨秀娟
赵建伟
李建宇
《昆虫学报》
北大核心
2025
1
在线阅读
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职称材料
2
警惕杰克贝尔氏粉蚧Pseudococcus jackbeardsleyi Gimpel & Miller在中国大陆扩散
王玉生
周培
田虎
万方浩
张桂芬
《生物安全学报》
2018
10
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职称材料
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