采用多重RT-PCR方法,建立可同时检测李属坏死环斑病毒(Prunus necrotic ring spot virus,简称PNRSV)、李矮缩病毒(Prune dwarf virus,简称PDV)、樱桃绿环斑驳病毒(Cherry green ring mottle virus,简称CGRMV)的方法。根据GenBank中PNRSV...采用多重RT-PCR方法,建立可同时检测李属坏死环斑病毒(Prunus necrotic ring spot virus,简称PNRSV)、李矮缩病毒(Prune dwarf virus,简称PDV)、樱桃绿环斑驳病毒(Cherry green ring mottle virus,简称CGRMV)的方法。根据GenBank中PNRSV、PDV、CGRMV的保守基因序列设计特异性引物,并对多重RT-PCR的退火温度、循环数、灵敏度、特异性、dNTPs浓度等因素进行优化,建立能同时检测3种樱桃病毒的多重RT-PCR方法。该方法能同时扩增出PNRSV(675 bp)、CGRMV(363 bp)、PDV(304 bp)特异片段,扩增产物大小与预期相符。测序结果表明,3种病毒的序列与相应参考序列相似性达90%以上。多重RT-PCR反应条件优化结果显示,在退火温度为58℃、35个循环条件下,效果均较为理想;dNTP的浓度对试验结果影响不大,最适的浓度为0.6 mmol/L;灵敏度分析结果显示,最低检测浓度为59.7 ng/μL。应用该方法对新疆石河子地区的樱桃样本进行检测,结果显示,该方法可以准确、快速、灵敏地同时检测单一或复合侵染的3种樱桃病毒。展开更多
为明确江苏省扬州市蔷薇科植物中李属坏死环斑病毒(Prunus necrotic ring spot virus,PNRSV)的发生情况,采用ELISA方法,以采集自扬州市不同地点的243份蔷薇科植物叶片样品为试材,测定其中4个分离物的外壳蛋白(CP)编码区序列,结合GenBan...为明确江苏省扬州市蔷薇科植物中李属坏死环斑病毒(Prunus necrotic ring spot virus,PNRSV)的发生情况,采用ELISA方法,以采集自扬州市不同地点的243份蔷薇科植物叶片样品为试材,测定其中4个分离物的外壳蛋白(CP)编码区序列,结合GenBank中已报道的相关序列对其进行多样性和系统发育分析。结果表明,江苏省扬州市蔷薇科植物中PNRSV的检出率为13%;序列分析表明本研究获得的PNRSV分离物与GenBank中其它286个分离物的核苷酸序列一致率为82%~99%;系统发育分析表明PNRSV可以分成4个组,组间具有较为清晰的地理和寄主特异性,其中本研究获得的PNRSV分离物均位于PV32组。总之,PNRSV已经在扬州市发生并流行,应当引起重视。展开更多
文摘为明确江苏省扬州市蔷薇科植物中李属坏死环斑病毒(Prunus necrotic ring spot virus,PNRSV)的发生情况,采用ELISA方法,以采集自扬州市不同地点的243份蔷薇科植物叶片样品为试材,测定其中4个分离物的外壳蛋白(CP)编码区序列,结合GenBank中已报道的相关序列对其进行多样性和系统发育分析。结果表明,江苏省扬州市蔷薇科植物中PNRSV的检出率为13%;序列分析表明本研究获得的PNRSV分离物与GenBank中其它286个分离物的核苷酸序列一致率为82%~99%;系统发育分析表明PNRSV可以分成4个组,组间具有较为清晰的地理和寄主特异性,其中本研究获得的PNRSV分离物均位于PV32组。总之,PNRSV已经在扬州市发生并流行,应当引起重视。
