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猪流行性腹泻病毒N蛋白在昆虫杆状病毒系统中的表达及单克隆抗体制备
1
作者 柴茂 马震原 +8 位作者 杨海波 王淑娟 刘影 王东方 赵雪丽 王翠 谢彩华 王华俊 闫若潜 《中国动物传染病学报》 北大核心 2025年第2期124-131,共8页
利用昆虫杆状病毒表达系统(BEVS)表达猪流行性腹泻病毒(PEDV)N蛋白,并制备单克隆抗体。构建PEDV N基因重组穿梭质粒pFastBac-N,转化至感受态细胞DH10Bac中获取重组杆粒Bacmid-N,将Bacmid-N转染至SF9昆虫细胞中制备重组蛋白。将重组蛋白... 利用昆虫杆状病毒表达系统(BEVS)表达猪流行性腹泻病毒(PEDV)N蛋白,并制备单克隆抗体。构建PEDV N基因重组穿梭质粒pFastBac-N,转化至感受态细胞DH10Bac中获取重组杆粒Bacmid-N,将Bacmid-N转染至SF9昆虫细胞中制备重组蛋白。将重组蛋白免疫小鼠,经融合、筛选、纯化出单克隆抗体,并测定单克隆抗体相关特性。获得重组杆状病毒rBV-N,获得大小为59 kDa重组N蛋白(rN),制备出抗N蛋白单克隆抗体3C8E3,该单克隆抗体为IgG1亚类,效价为1∶1.024×10^(5),效价高、特异性强、稳定性好,更具实用性。本研究为PEDV抗原/抗体诊断试剂盒、PEDV亚单位疫苗研究奠定了基础。 展开更多
关键词 昆虫杆状病毒表达系统 猪流行腹泻病毒 单克隆抗体
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弓形虫MIC1蛋白在杆状病毒系统中的表达及活性分析
2
作者 李响 张小涵 +5 位作者 李美琪 陈冉 冯颖 李林 桑晓宇 杨娜 《华中农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第1期210-218,共9页
为构建可溶性表达弓形虫MIC1蛋白质的重组杆状病毒株并分析重组蛋白质的活性,通过PCR扩增弓形虫mic1基因的编码序列并连接到pFastBac 1质粒中,将重组的转移质粒转化DH10Bac感受态细胞,通过蓝白斑筛选获得重组杆粒,转染Sf9细胞后连续培养... 为构建可溶性表达弓形虫MIC1蛋白质的重组杆状病毒株并分析重组蛋白质的活性,通过PCR扩增弓形虫mic1基因的编码序列并连接到pFastBac 1质粒中,将重组的转移质粒转化DH10Bac感受态细胞,通过蓝白斑筛选获得重组杆粒,转染Sf9细胞后连续培养3代获得重组杆状病毒株。结果显示,Sf9细胞在感染后的第3天出现典型的细胞病变;间接免疫荧光和Western blot试验结果表明MIC1重组蛋白质在感染的Sf9细胞中成功可溶性表达;纯化的MIC1重组蛋白质不仅具有结合唾液酸乳糖的能力,同时能够刺激Balb/c小鼠产生较高水平的特异性抗体(>1∶25600)。以上结果表明,通过杆状病毒表达系统可获得具有生物学活性的弓形虫MIC1重组蛋白质。 展开更多
关键词 弓形虫 MIC1蛋白 杆状病毒系统 活性分析
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鸡传染性支气管炎病毒GX-YL5株N蛋白在昆虫杆状病毒系统中的分泌表达 被引量：2
3
作者 张志鹏 张丽华 +4 位作者 孙新宽 宋丽丽 韦天超 磨美兰 韦平 《中国家禽》 北大核心 2016年第6期20-24,共5页
以鸡传染性支气管炎病毒(IBV)广西优势血清型代表株GX-YL5为研究对象,利用RT-PCR扩增出其核蛋白(N)基因,引入昆虫细胞识别的蜂素(Honeybee melittin,HBM)信号肽,同时在C端加入6个组氨酸标签以利于纯化,将其定向克隆到转座载体pFast Bac^... 以鸡传染性支气管炎病毒(IBV)广西优势血清型代表株GX-YL5为研究对象,利用RT-PCR扩增出其核蛋白(N)基因,引入昆虫细胞识别的蜂素(Honeybee melittin,HBM)信号肽,同时在C端加入6个组氨酸标签以利于纯化,将其定向克隆到转座载体pFast Bac^(TM)dual中,转化DH10Bac^(TM)感受态细胞进行同源重组获得重组杆粒r HBM-N;利用脂质体介导转染Sf9昆虫细胞,获得重组杆状病毒,通过间接免疫荧光(IFA)和Western-blot鉴定表达的N蛋白。结果显示:IFA出现特异性荧光,Western-blot中细胞上清和细胞沉淀均出现51 ku的特异性条带。结果表明N蛋白获得了分泌表达且具有良好的免疫原性。研究首次引入昆虫细胞识别的HBM信号肽进行N蛋白的表达,不仅为N蛋白的生物学功能、诊断试剂以及IBV新型亚单位疫苗研究奠定了基础,也为其它蛋白的表达提供参考。 展开更多
关键词 鸡传染性支气管炎病毒 N蛋白 蜂素信号肽 昆虫杆状病毒系统
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猪传染性胃肠炎S基因A D抗原位点在昆虫杆状病毒系统中的表达 被引量：1
4
作者 张炳丽 唐丽杰 +4 位作者 范京慧 王玉玲 边亚娟 钟涛 李一经 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2006年第8期22-24,共3页
关键词 猪传染性胃肠炎病毒 杆状病毒系统 抗原位点 S基因 接触性传染病 昆虫 AD 养猪业发展
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中华蜜蜂溶血肽基因在杆状病毒系统中的表达
5
作者 施婉君 张传溪 程家安 《昆虫学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第1期16-21,共6页
构建含中华蜜蜂溶血肽基因的重组转移载体pBacHT_GFPTAccM,转化受体菌DH10Bac,得重组穿梭载体Bacmid_GFPTAccM,Lipofectin介导其基因组DNA转染粉纹夜蛾细胞系Tn_5B1_4。SDS_PAGE分析表明,感染重组杆状病毒Bacmid_GFPTAccM的细胞表达产... 构建含中华蜜蜂溶血肽基因的重组转移载体pBacHT_GFPTAccM,转化受体菌DH10Bac,得重组穿梭载体Bacmid_GFPTAccM,Lipofectin介导其基因组DNA转染粉纹夜蛾细胞系Tn_5B1_4。SDS_PAGE分析表明,感染重组杆状病毒Bacmid_GFPTAccM的细胞表达产物在约为34kD处出现特异性条带,其表达量约占细胞总蛋白的3%。Westernblotting和细胞表达时相动态分析证明中华蜜蜂溶血肽基因已在粉纹夜蛾细胞系Tn_5B1_4中进行了成功的表达。 展开更多
关键词 中华蜜蜂 溶血肽 表达 杆状病毒系统 粉纹夜蛾细胞系
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马巴贝西虫EMA-1蛋白基因在杆状病毒系统中的表达
6
作者 张守发 鞠玉琳 贾洪林 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2004年第11期14-15,共2页
关键词 马巴贝西虫 血液寄生原虫 EMA-1蛋白基因 杆状病毒系统 表达 免疫原性
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抗菌肽M50基因在Bac-To-Bac杆状病毒系统中的表达 被引量：3
7
作者 杨斯琦 周勇志 +2 位作者 张厚双 曹杰 周金林 《中国动物传染病学报》 CAS 2010年第5期49-53,共5页
将镰形扇头蜱体内的抗菌肽M50全长基因,克隆于杆状病毒转移载体pFastBacHTA中,构建重组质粒pFastBacHTA-M50,并将其转化DH10Bac细胞后,得到重组穿梭质粒reBacmid-M50,再转染到sf9昆虫细胞,进行M50重组蛋白的表达,用Western blot和间接... 将镰形扇头蜱体内的抗菌肽M50全长基因,克隆于杆状病毒转移载体pFastBacHTA中,构建重组质粒pFastBacHTA-M50,并将其转化DH10Bac细胞后,得到重组穿梭质粒reBacmid-M50,再转染到sf9昆虫细胞,进行M50重组蛋白的表达,用Western blot和间接免疫荧光等方法对表达的蛋白进行鉴定。结果表明M50基因在Bac-To-Bac杆状病毒系统中成功表达。带His标签的重组蛋白分子量约为15 kDa,在昆虫细胞中表达的M50蛋白能被抗原核表达的M50蛋白的血清识别,也能被标签His单抗识别。 展开更多
关键词 蜱 M50基因 Bac-To-Bac杆状病毒系统
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应用杆状病毒系统高效表达猪繁殖与呼吸综合征病毒GP5基因 被引量：6
8
作者 周艳君 仇华吉 +5 位作者 王云峰 钱平 蔡雪晖 柴文君 翁长江 童光志 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 2000年第4期278-281,共4页
将猪繁殖与呼吸综合征病毒CH_la株囊膜糖蛋白 (GP5 )基因定向亚克隆到杆状病毒转移载体pBlueBacHisB中 ,与杆状病毒线性DNA(Bac_N_BlueTMDNA)共转染昆虫细胞sf9,经过三轮蚀斑纯化后 ,获得重组杆状病毒rBac_GP5。用该重组病毒感染sf9细胞... 将猪繁殖与呼吸综合征病毒CH_la株囊膜糖蛋白 (GP5 )基因定向亚克隆到杆状病毒转移载体pBlueBacHisB中 ,与杆状病毒线性DNA(Bac_N_BlueTMDNA)共转染昆虫细胞sf9,经过三轮蚀斑纯化后 ,获得重组杆状病毒rBac_GP5。用该重组病毒感染sf9细胞后 ,应用间接免疫荧光试验、SDS_PAGE和Westernblot检测表明 ,GP5基因在杆状病毒系统中获得了高效表达 ,表达产物因糖基化程度差异 ,表观分子量有 2 2、2 5和 30kDa三种总计约占细胞蛋白总量的 2 6 .4%。 展开更多
关键词 杆状病毒表达系统 GP5基因 PRRS 重组疫苗
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A群猪轮状病毒VP6结构蛋白在杆状病毒系统中的表达及鉴定 被引量：6
9
作者 原霖 张瑜 +6 位作者 刘洋 王婧怡 寇占英 亢文华 杨林 王传彬 倪建强 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2018年第6期476-480,共5页
为在杆状病毒表达系统中表达和纯化A群猪轮状病毒(PoRVA)VP6结构蛋白,在PoRVA VP6基因5'端融合添加组氨酸标签(6×His)后,克隆至杆状病毒表达载体pFastBac HTB中,得到重组转移载体pFastBac-VP6,并将其转化至DH10Bac感受态细胞... 为在杆状病毒表达系统中表达和纯化A群猪轮状病毒(PoRVA)VP6结构蛋白,在PoRVA VP6基因5'端融合添加组氨酸标签(6×His)后,克隆至杆状病毒表达载体pFastBac HTB中,得到重组转移载体pFastBac-VP6,并将其转化至DH10Bac感受态细胞进行蓝白斑筛选。将鉴定正确的重组杆状病毒杆粒转染Sf9细胞后收获重组杆状病毒rBac-PoRVA-VP6,经SDS-PAGE和western blot鉴定结果显示,表达的PoRVA重组VP6蛋白约45 ku,并且能够被PoRVA阳性血清识别。上述结果表明,经杆状病毒表达系统表达的重组VP6蛋白具有良好的反应原性,为建立PoRVA抗体检测技术奠定了基础。 展开更多
关键词 A群猪轮状病毒 VP6蛋白 杆状病毒表达系统 重组蛋白表达
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仙台病毒F基因在昆虫/杆状病毒系统中的表达及抗原性分析 被引量：5
10
作者 曲连东 蒋良丰 +6 位作者 刘家森 司昌德 郭东春 姜骞 林欢 韩凌霞 刘娣 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第5期347-350,共4页
为真核表达仙台病毒(SeV)融合蛋白(F)基因,本研究根据GenBank登录的SeV F基因序列设计合成一对特异性引物,以pMD18-T-F阳性重组质粒为模板扩增F基因,并将其克隆至杆状病毒穿梭质粒pFastBac HTa中,经酶切、PCR及测序鉴定正确后,转化感受... 为真核表达仙台病毒(SeV)融合蛋白(F)基因,本研究根据GenBank登录的SeV F基因序列设计合成一对特异性引物,以pMD18-T-F阳性重组质粒为模板扩增F基因,并将其克隆至杆状病毒穿梭质粒pFastBac HTa中,经酶切、PCR及测序鉴定正确后,转化感受态细胞DH10Bac,提取重组杆粒rBacmid-F,经PCR鉴定正确将rBacmid-F转染Sf9细胞,连续传代后,细胞病变明显。经SDS-PAGE分析,成功表达了相对分子量为65ku左右的F蛋白,western blot和ELISA分析表明重组F蛋白具有良好的抗原性。 展开更多
关键词 仙台病毒 F基因 重组杆状病毒表达系统
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狂犬病病毒核蛋白在Bac-To-Bac/AcMNPV杆状病毒系统的表达 被引量：6
11
作者 尹伟 徐洁萍 +2 位作者 张金阳 颜焰 周继勇 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第2期86-89,115,共5页
为真核表达狂犬病病毒的核蛋白,本研究通过RT-PCR克隆狂犬病病毒ERA株核蛋白基因,将其克隆于杆状病毒转移载体pFastBacHTB中,构建重组质粒pFastBacHTB-NP并将其转化DH10Bac细胞,得到重组穿梭质粒reBacmid-NP;通过转染昆虫细胞sf9包装重... 为真核表达狂犬病病毒的核蛋白,本研究通过RT-PCR克隆狂犬病病毒ERA株核蛋白基因,将其克隆于杆状病毒转移载体pFastBacHTB中,构建重组质粒pFastBacHTB-NP并将其转化DH10Bac细胞,得到重组穿梭质粒reBacmid-NP;通过转染昆虫细胞sf9包装重组杆状病毒。SDS-PAGE、western blot和间接免疫荧光对表达的蛋白进行鉴定和反应原性分析。分别以重组杆状病毒表达的核蛋白、原核表达核蛋白为包被抗原进行ELISA检测。结果表明,在昆虫细胞中表达的狂犬病病毒重组核蛋白能与鼠抗RV核蛋白单克隆抗体和RV阳性血清特异性结合,其相对分子量约为50.5ku。以重组杆状病毒表达的核蛋白为抗原建立的rNP-ELISA的敏感性、特异性、符合率分别为86.36%,89.83%,90.00%,优于大肠杆菌表达的RV核蛋白。说明杆状病毒系统表达的核蛋白是建立RV核蛋白ELISA抗体检测方法的理想抗原。 展开更多
关键词 狂犬病病毒 核蛋白基因 Bac—To—Bac/AcMNPV杆状病毒表达系统.
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鸭圆环病毒Cap基因在昆虫细胞杆状病毒系统中的表达及鉴定 被引量：4
12
作者 张兴晓 邹金峰 +4 位作者 相琪旺 王鑫 陈琳 谢之景 姜世金 《西北农业学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第3期7-11,共5页
通过PCR方法扩增完整的鸭圆环病毒Cap基因,按正确的阅读框架将其克隆入pFastBacTM HTB杆状病毒载体,将筛选的阳性重组载体pF-CP转化至含有杆状病毒穿梭载体和辅助载体的DH10Bac大肠杆菌感受态细胞,经过蓝白斑筛选和PCR鉴定,获得重组表... 通过PCR方法扩增完整的鸭圆环病毒Cap基因,按正确的阅读框架将其克隆入pFastBacTM HTB杆状病毒载体,将筛选的阳性重组载体pF-CP转化至含有杆状病毒穿梭载体和辅助载体的DH10Bac大肠杆菌感受态细胞,经过蓝白斑筛选和PCR鉴定,获得重组表达载体rBacmid-CP。在脂质体的介导下转染Sf9昆虫细胞,72h后获得重组杆状病毒。Western blot和间接免疫荧光(IFA)试验结果表明,表达的蛋白与原核表达Cap蛋白免疫小鼠采集的血清具有良好的反应原性,为进一步研究Cap蛋白的功能奠定基础。 展开更多
关键词 鸭圆环病毒 Cap基因 昆虫细胞-杆状病毒表达系统 IFA
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ORFV-Yulin株的分离鉴定及其B2L基因在昆虫杆状病毒系统中的表达 被引量：3
13
作者 冯平 李云章 +2 位作者 孙丰廷 屈雷 闫海龙 《西北农林科技大学学报（自然科学版）》 CSCD 北大核心 2017年第9期32-38,共7页
【目的】从榆林市具有典型羊口疮症状的陕北白绒山羊唇结痂病料中分离羊口疮病毒(Orf virus,ORFV),克隆分析其B2L基因序列,并通过昆虫杆状病毒表达B2L基因。【方法】利用牛肾传代细胞进行ORFV的分离培养,通过PCR的方法从分离到的病毒中... 【目的】从榆林市具有典型羊口疮症状的陕北白绒山羊唇结痂病料中分离羊口疮病毒(Orf virus,ORFV),克隆分析其B2L基因序列,并通过昆虫杆状病毒表达B2L基因。【方法】利用牛肾传代细胞进行ORFV的分离培养,通过PCR的方法从分离到的病毒中扩增出B2L全长基因,测序后进行序列及遗传进化分析。利用扩增所得的B2L基因构建昆虫杆状病毒表达载体,包装出杆状病毒后侵染sf9细胞,并通过SDS-PAGE、Western-blot以及质谱鉴定等方法验证目的基因的表达情况。【结果】成功分离出1株羊口疮病毒,命名为ORFV-Yulin株;扩增的B2L全长基因长度为1 137bp,与Hub13和GY-AHF10株亲缘关系最近,核苷酸序列和氨基酸序列的相似性分别为99%和99.2%。通过昆虫杆状病毒表达系统成功表达了B2L基因,获得了47ku的重组蛋白。【结论】从榆林市陕北白绒山羊中获得了羊口疮病毒分离株(ORFV-Yulin);通过昆虫杆状病毒表达系统成功表达了ORFV-Yulin株的B2L基因。 展开更多
关键词 羊口疮病毒 B2L基因 昆虫杆状病毒表达系统
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狂犬病病毒糖蛋白在Bac-to-bac杆状病毒系统中的表达及应用 被引量：2
14
作者 范晓娟 李刚 +2 位作者 李伟 曾妮 宫苗苗 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第5期366-369,共4页
为表达狂犬病病毒(RV)糖蛋白(G),本研究通过RT-PCR方法克隆RVFluryLEP病毒株G基因,将其克隆至质粒pFastBacHTα中,重组质粒pFastBac-RV-G转化DH10Bac感受态细胞,经同源重组获得重组杆状病毒穿梭质粒Bacmid-RV-G,将其转染昆虫细胞sf21获... 为表达狂犬病病毒(RV)糖蛋白(G),本研究通过RT-PCR方法克隆RVFluryLEP病毒株G基因,将其克隆至质粒pFastBacHTα中,重组质粒pFastBac-RV-G转化DH10Bac感受态细胞,经同源重组获得重组杆状病毒穿梭质粒Bacmid-RV-G,将其转染昆虫细胞sf21获得含有G基因的重组杆状病毒。采用SDS-PAGE和westernblot对重组蛋白进行鉴定及抗原性分析,以重组G蛋白作为包被抗原的ELISA检测36份犬血清样品。结果表明,在Bac-to-bac杆状病毒系统中表达的RVG蛋白能与his-tag单克隆抗体及RV阳性血清发生特异性反应,其相对分子量为60ku;与以RV为包被抗原的商品化ELISA试剂盒相比,以重组RVG蛋白为抗原建立的间接ELISA的敏感性、特异性和符合率分别为80%、81.8%和80.6%,表明杆状病毒系统表达的RVG蛋白是检测RV抗体的理想抗原蛋白,作为一种亚单位疫苗具有潜在的应用前景。 展开更多
关键词 狂犬病病毒 糖蛋白 杆状病毒表达系统
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应用杆状病毒系统制备8型腺相关病毒
15
作者 范丽 徐增辉 +4 位作者 金华君 徐凤青 丁娜 严淋 钱其军 《第二军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第2期134-138,共5页
目的建立应用杆状病毒系统制备8型腺相关病毒(adeno-associated virus,AAV)的技术体系,并初步检测所制备病毒的感染活力。方法采用杆状病毒生产系统包装rAAV8-EGFP,经高效液相色谱法提取并纯化病毒,实时荧光定量PCR测定病毒滴度,通过观... 目的建立应用杆状病毒系统制备8型腺相关病毒(adeno-associated virus,AAV)的技术体系,并初步检测所制备病毒的感染活力。方法采用杆状病毒生产系统包装rAAV8-EGFP,经高效液相色谱法提取并纯化病毒,实时荧光定量PCR测定病毒滴度,通过观察绿色荧光蛋白的表达强度来检测rAAV8-EGFP对HEK-293细胞的感染活力。结果实时荧光定量PCR显示成功制备高滴度rAAV8-EGFP,滴度可达1.5×1012vg/ml,100ml摇瓶共得到1.5×1013vg rAAV8-EGFP病毒颗粒;感染后的HEK-293细胞具有较强的绿色荧光蛋白表达。结论应用杆状病毒系统成功制备高滴度、高活力的重组腺相关病毒,为后续研究奠定了基础。 展开更多
关键词 杆状病毒系统 腺相关病毒 昆虫细胞
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减蛋下降综合征病毒重组Knob-S基因在杆状病毒系统中的表达及其免疫原性鉴定 被引量：2
16
作者 郑金 陈滔 +4 位作者 陆吉虎 高峰 候继波 黎满香 唐应华 《江苏农业学报》 CSCD 北大核心 2015年第3期600-603,共4页
为以杆状病毒系统在Sf9细胞中表达含减蛋下降综合征病毒(EDSV)重组Knob-S蛋白质来制备亚单位疫苗,采用PCR方法从鸭胚繁殖的EDSV尿囊液中扩增Knob-S基因,并克隆到p Fast Bac1中,经转化DH10Bac获得重组r Bac-Knob-S。将r Bac-Knob-S转染Sf... 为以杆状病毒系统在Sf9细胞中表达含减蛋下降综合征病毒(EDSV)重组Knob-S蛋白质来制备亚单位疫苗,采用PCR方法从鸭胚繁殖的EDSV尿囊液中扩增Knob-S基因,并克隆到p Fast Bac1中,经转化DH10Bac获得重组r Bac-Knob-S。将r Bac-Knob-S转染Sf9细胞获得重组杆状病毒,利用重组杆状病毒感染Sf9细胞表达重组蛋白质。重组Knob-S蛋白质经Western blotting和间接免疫荧光试验鉴定均为阳性。将重组Knob-S蛋白质制备成疫苗,按1羽0.3 ml(含50μg的重组病毒)免疫6周龄非免海兰褐雏鸡,在免疫后第2周可检测到血凝抑制抗体效价达8.5 lg2,在第3周达到高峰(9.5 lg2),表明重组Knob-S蛋白质具有较好的免疫原性。 展开更多
关键词 减蛋下降综合征病毒 重组Knob-S 真核表达 杆状病毒表达系统
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MPB64在杆状病毒系统中的表达纯化及免疫原性鉴定 被引量：1
17
作者 徐丹 姜潮 +3 位作者 陈昱 艾君 王晓艳 李校堃 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2014年第7期921-926,共6页
目的：在杆状病毒昆虫细胞表达系统中表达结核分枝杆菌蛋白MPB64，并鉴定其免疫原性。方法：目的基因MPB64连接到pFastBac载体，获得pFastBac-MPB64质粒转化DH10 Bac感受态，通过Tn7转座片段将目的基因转座到Bacmid中，得到Bacmid-MPB6... 目的：在杆状病毒昆虫细胞表达系统中表达结核分枝杆菌蛋白MPB64，并鉴定其免疫原性。方法：目的基因MPB64连接到pFastBac载体，获得pFastBac-MPB64质粒转化DH10 Bac感受态，通过Tn7转座片段将目的基因转座到Bacmid中，得到Bacmid-MPB64穿梭载体，脂质体包被后转染Sf 9细胞收获P1代病毒，重复转染Sf 9细胞三次获得高滴度的P4代病毒，收集细胞上清通过Q Sepharose FF和Ni亲和层析柱两步层析纯化得到目的蛋白MPB64。纯化的蛋白免疫BALB／c小鼠并检测血清中抗体滴度，ELISA检测MPB64蛋白刺激脾脏细胞产生IFN-γ的浓度，MTT法检测目的蛋白对免疫后小鼠脾脏细胞的增殖作用。结果：MPB64在昆虫细胞中成功表达，纯化后蛋白纯度达90％以上，蛋白产量为35 mg／L，纯化蛋白能有效刺激BALB／c小鼠产生抗体，提高小鼠脾脏细胞培养基中IFN-γ的含量，目的蛋白在0.2～100μg／ml之间对脾脏细胞有明显的促增殖作用。结论：成功在杆状病毒昆虫细胞表达系统中表达了具有免疫原性的MPB64蛋白，为生产结核病疫苗奠定了基础。 展开更多
关键词 MPB64 杆状病毒表达系统 Sf 9细胞 结核分枝杆菌
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猪瘟病毒Erns蛋白在杆状病毒系统中的表达及纯化
18
作者 牛康 徐璐 +6 位作者 张乾义 夏应菊 朱元源 邹兴启 李翠 赵启祖 王琴 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2019年第2期31-35,38,I0004,共7页
采用杆状病毒表达系统表达并纯化猪瘟病毒E^rns蛋白,并对其反应原性进行鉴定。将猪瘟病毒的E^rns 基因克隆至pFastbac-HT-A 载体上,构建了pFA-E^rns重组质粒;经转座、转染后构建重组杆状病毒rBac-E^rns;通过优化接毒时间和接毒量等参数... 采用杆状病毒表达系统表达并纯化猪瘟病毒E^rns蛋白,并对其反应原性进行鉴定。将猪瘟病毒的E^rns 基因克隆至pFastbac-HT-A 载体上,构建了pFA-E^rns重组质粒;经转座、转染后构建重组杆状病毒rBac-E^rns;通过优化接毒时间和接毒量等参数,最终确定表达条件。将表达产物采用亲和层析法纯化后,采用Western Blotting 鉴定E^rns 蛋白的反应性,并采用间接ELISA 方法对其应用进行了初步探索。结果显示,获得了重组杆状病毒rBac-E^rns,经Western Blotting 和间接免疫荧光(IFA)鉴定,该重组病毒能够与猪瘟阳性血清和E^rns 单抗发生特异性反应。纯化后的E^rns 蛋白纯度较好,浓度为0. 2 mg/ mL,经Western Blotting 方法鉴定证明,纯化后的蛋白与E^rns单抗和猪瘟阳性血清能够发生特异性反应;初步建立了间接ELISA 方法检测猪瘟抗体,证明表达的蛋白可以区分猪瘟阳性血清和阴性血清。表明本研究利用杆状病毒表达系统成功表达并纯化了猪瘟病毒E^rns蛋白,纯化后的E^rns蛋白具有良好的反应性,可以作为开发鉴别诊断试剂的备选蛋白以及用于E^rns 蛋白的结构和生物学功能研究。 展开更多
关键词 猪瘟病毒 E^rns蛋白 杆状病毒系统 间接ELISA
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狂犬病病毒磷蛋白在杆状病毒系统的表达及鉴定 被引量：1
19
作者 许运斌 徐洁萍 +3 位作者 张金阳 昝洁 阮系真 周继勇 《中国动物传染病学报》 CAS 2012年第2期17-22,共6页
为了建立狂犬病毒磷蛋白(phosphoprotein,P)的体外表达系统,本研究将RT-PCR扩增的狂犬病病毒ERA株P蛋白基因克隆于杆状病毒转移载体pFastBacHTA,构建重组质粒pFastBacHTA-P,并转染昆虫细胞Sf9包装形成重组杆状病毒。SDS-PAGE分析显示重... 为了建立狂犬病毒磷蛋白(phosphoprotein,P)的体外表达系统,本研究将RT-PCR扩增的狂犬病病毒ERA株P蛋白基因克隆于杆状病毒转移载体pFastBacHTA,构建重组质粒pFastBacHTA-P,并转染昆虫细胞Sf9包装形成重组杆状病毒。SDS-PAGE分析显示重组质粒pFastBacHTA-P转染的Sf9细胞中出现了分子量约为42 kDa的蛋白条带,Western blot证实分子量约为42 kDa的蛋白能与抗His的单克隆抗体发生特异性反应,间接免疫荧光(indirect immunofluorescence assay,IFA)分析进一步显示Sf9细胞表达的P蛋白与抗P蛋白单克隆抗体能特异性结合。这些实验证明,狂犬病病毒P蛋白不仅在Sf9细胞中获得表达,而且具有良好的免疫反应性。狂犬病病毒P蛋白杆状病毒表达体系的建立,为蛋白结构的解析和诊断试剂的研制奠定了基础。 展开更多
关键词 狂犬病病毒 P蛋白 杆状病毒表达系统
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应用昆虫杆状病毒系统高效表达外源基因 被引量：1
20
作者 朱振洪 《生物学教学》 北大核心 2001年第3期2-4,共3页
昆虫杆状病毒表达系统于 1983年建立 ,迄今已有近千种外源基因在该系统中获得高效表达。本文对杆状病毒载体表达系统的原理。
关键词 昆虫杆状病毒表达系统 外源基因 多角体蛋自 核型多角体病毒 NPV 基因工程
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