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云南不同地区蜘蛛兰上朱顶红褪绿环斑病毒RNA S序列分析 被引量:5
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作者 高君直 吴保为 +5 位作者 高雪 白继龙 李文贵 飞进强 刘雅婷 李永忠 《云南农业大学学报(自然科学版)》 CSCD 北大核心 2017年第2期218-225,共8页
朱顶红褪绿环斑病毒(Hippeastrum chlorotic ringspot virus,HCRV)是2013年首次发现并报道的番茄斑萎病毒属(Tospovirus)的新种,该病毒可引起蜘蛛兰产生同心环纹、叶片畸形、坏死斑等症状。本研究从云南省不同地区选出6份HCRV单独侵染... 朱顶红褪绿环斑病毒(Hippeastrum chlorotic ringspot virus,HCRV)是2013年首次发现并报道的番茄斑萎病毒属(Tospovirus)的新种,该病毒可引起蜘蛛兰产生同心环纹、叶片畸形、坏死斑等症状。本研究从云南省不同地区选出6份HCRV单独侵染的蜘蛛兰样本,通过RT-PCR、克隆、转化、测序和拼接,获得6份样本的HCRV分离物RNA S序列。6个分离物S序列长度在2 714~2 747 nt之间,其上编码的非结构蛋白NSs(Nonstructural protein by the S RNA)的NSs基因是1 332 nt,编码N(Nucleocapsid)蛋白的N基因是825 nt。通过生物信息学分析,确定了不同HCRV株系间的关系。同时对S RNA序列及其所编码的非结构蛋白NSs及核壳体蛋白N进行突变和重组分析,确定这6个HCRV分离物的RNA S序列均存在突变和重组事件。结合6个分离物采集地的环境信息,可以看出气候类型、温度等环境差异很大,因此推测云南省多样的气候类型跟HCRV在云南省的广泛分布有关,在这6个HCRV分离物中检测到的快速突变和重组可能是导致HCRV快速适应不同环境,分布范围广泛的原因之一。最后,通过系统进化分析,推测采集自云南省保山市的HLSTCRH是6个HCRV分离物中最先开始进化的,由它分为两个进化支,一支包括玉溪的YN-YX-HT-1和德宏瑞丽的HLS-YNRL-1,另一支包括昆明的HLS-YL,红河的HLS-HHXY以及临沧的HLS-LC-YLHW。 展开更多
关键词 蜘蛛兰 番茄斑萎病毒 朱顶红褪绿环斑病毒 突变 重组
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朱顶红褪绿环斑病毒云南君子兰分离物S序列的克隆及分析 被引量:6
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作者 吴保为 吴家琪 +3 位作者 胡玉洁 贾志强 高雪 刘雅婷 《江苏农业科学》 2018年第14期38-41,共4页
利用RT-PCR以及ELISA对采自云南省昆明市的君子兰样品进行鉴定,确定了其病原物为朱顶红褪绿环斑病毒(hippeastrum chlorotic ringspot virus,HCRV)。这是首次在君子兰(Clivia miniata)中检测到番茄斑萎病毒属(Tospovirus)病毒,为明确其... 利用RT-PCR以及ELISA对采自云南省昆明市的君子兰样品进行鉴定,确定了其病原物为朱顶红褪绿环斑病毒(hippeastrum chlorotic ringspot virus,HCRV)。这是首次在君子兰(Clivia miniata)中检测到番茄斑萎病毒属(Tospovirus)病毒,为明确其序列特征,设计了HCRV S RNA全序列扩增引物,进一步克隆了该分离物的S RNA全基因组序列,并进行了序列分析。结果表明,HCRV-CM分离物S RNA全长2 749 nt(Gen Bank登录号:KY484836),与已报道的HCRV基因结构一致。基于核壳体蛋白N基因序列的系统进化分析显示HCRV-CM与来自云南的HCRV株系聚为一支,说明HCRV-CM与HCRV云南分离物亲缘关系较近。 展开更多
关键词 朱顶红褪绿环斑病毒 君子兰 基因克隆 序列分析
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朱顶红褪绿环斑病毒在细角带蓟马中的增殖规律研究
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作者 吴家琦 徐烨 +1 位作者 李永忠 刘雅婷 《云南农业大学学报(自然科学版)》 CSCD 北大核心 2020年第1期15-19,61,共6页
【目的】朱顶红褪绿环斑病毒(Hippeastrum chlorotic ringspot virus,HCRV)危害严重,细角带蓟马(Taeniothrips eucharii)是其主要的传播媒介。明确HCRV病毒粒子在细角带蓟马体内的增值规律,为HCRV防控提供理论依据。【方法】应用实时荧... 【目的】朱顶红褪绿环斑病毒(Hippeastrum chlorotic ringspot virus,HCRV)危害严重,细角带蓟马(Taeniothrips eucharii)是其主要的传播媒介。明确HCRV病毒粒子在细角带蓟马体内的增值规律,为HCRV防控提供理论依据。【方法】应用实时荧光定量PCR技术(qRT-PCR),结合HCRV N基因和细角带蓟马βactin基因特异性引物,选用SYBR Green方法对获毒后不同虫龄细角带蓟马体内的HCRV含量进行定量分析。【结果】所建立的实时荧光定量方法可以准确特异地对细角带蓟马中的HCRV进行相对定量,发现1龄若虫的HCRV核酸含量最低,1龄若虫、2龄若虫及蛹中的病毒含量没有统计学差异,成虫的HCRV核酸含量最高。【结论】细角带蓟马在获毒后,体内HCRV核酸含量随着细角带蓟马的发育而增加。 展开更多
关键词 正番茄斑萎病毒 朱顶红褪绿环斑病毒 细角带蓟马 荧光定量PCR
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朱顶红褪绿环斑病毒RT-LAMP快速检测体系的建立
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作者 赵正婷 盖晓彤 +3 位作者 张俊蕾 夏振远 姜宁 刘雅婷 《中国烟草科学》 CSCD 北大核心 2023年第3期39-46,共8页
为快速检测朱顶红褪绿环斑病毒(hippeastrum chlorotic ringspot virus, HCRV),根据HCRV的核壳体(N)蛋白基因保守核苷酸序列,设计了5组引物进行筛选,并采用单一变量法对RT-LAMP体系反应温度、时间、甜菜碱浓度、dNTPs浓度、Mg2+浓度、... 为快速检测朱顶红褪绿环斑病毒(hippeastrum chlorotic ringspot virus, HCRV),根据HCRV的核壳体(N)蛋白基因保守核苷酸序列,设计了5组引物进行筛选,并采用单一变量法对RT-LAMP体系反应温度、时间、甜菜碱浓度、dNTPs浓度、Mg2+浓度、内外引物浓度比等进行逐一优化,建立了HCRV逆转录环介导等温扩增(RT-LAMP)检测体系。结果表明,最佳引物组为P1,最适反应温度为64℃,Betaine、dNTPs、Mg2+的最佳终浓度分别为0.8、0.2、6 mmol/L,最佳内外引物浓度比为5∶1,最佳反应时间50 min。检测结果显示优化后的RT-LAMP经SYBR Green I染色可通过肉眼直接判断结果,具有高度特异性,且灵敏度是常规RT-PCR的100倍。本研究为HCRV的检测提供了一种便捷、高效、可靠的方法。 展开更多
关键词 朱顶红褪绿环斑病毒 RT-LAMP 特异性 灵敏度
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昆明市园艺植物番茄斑萎病的初步鉴定 被引量:8
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作者 黄亚宁 董玉梅 +4 位作者 徐烨 曹红云 高君直 刘雅婷 李永忠 《云南农业大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2015年第4期648-652,共5页
番茄斑萎病毒属(Tospovirus)是布尼亚科(Bunyaviridae)唯一能够侵染植物的病毒属。本研究于2012—2013年对云南省昆明市的园林绿化景区和蔬菜种植区进行调查,采集13份疑似番茄斑萎病毒属病毒感染的植物样品,并通过特异性引物进行RT-PCR... 番茄斑萎病毒属(Tospovirus)是布尼亚科(Bunyaviridae)唯一能够侵染植物的病毒属。本研究于2012—2013年对云南省昆明市的园林绿化景区和蔬菜种植区进行调查,采集13份疑似番茄斑萎病毒属病毒感染的植物样品,并通过特异性引物进行RT-PCR扩增,克隆和测序,获得完整的核壳体蛋白基因(nucleocapsid protein,NP)全序列,结合Genbank数据库中的数据,构建番茄斑萎病毒属属病毒NP蛋白的系统发育树。结果表明:13个样本中有11个样本被番茄斑萎病毒属病毒侵染,包括番茄斑萎病毒、马蹄莲褪绿斑病毒、番茄环斑病毒、凤仙花坏死斑病毒、朱顶红褪绿环斑病毒;寄主包括蜘蛛兰、蝴蝶兰、番茄和尖尾芋、曼陀罗、旱金莲、鸢尾、裂叶喜林芋,其中尖尾芋是番茄斑萎病毒属病毒入侵的新寄主。 展开更多
关键词 番茄斑萎病毒 朱顶红褪绿环斑病毒 植物寄主 RT-PCR
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侵染昆明园林植物的4个HCRV分离株核壳体蛋白氨基酸序列分析 被引量:2
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作者 王宇琪 吴保为 +4 位作者 陶宏征 贾志强 高雪 王景文 刘雅婷 《云南农业大学学报(自然科学版)》 CSCD 北大核心 2021年第1期165-168,共4页
【目的】比较分析侵染昆明园林植物HCRV核壳体蛋白氨基酸序列,探究地理分布和寄主来源与病毒变异的相关性。【方法】2016年,在云南省昆明市园林景区采集疑似感染番茄斑萎病毒属(Tospovirus)病毒样品,利用RT-PCR技术测定出葱莲(Zephyrant... 【目的】比较分析侵染昆明园林植物HCRV核壳体蛋白氨基酸序列,探究地理分布和寄主来源与病毒变异的相关性。【方法】2016年,在云南省昆明市园林景区采集疑似感染番茄斑萎病毒属(Tospovirus)病毒样品,利用RT-PCR技术测定出葱莲(Zephyranthes candida)、文殊兰(Crinum asiaticum)、喜林芋(Philodendron schott)和酢浆草(Oxalis corniculata)4份感染朱顶红褪绿环斑病毒(Hippeastrum chlorotic ringspot virus,HCRV)的样品,通过克隆、测序获得4份样品的S RNA序列,利用ORF Finder获得核壳体蛋白(nucleocapsid protein,N)并进行序列分析。【结果】文殊兰、喜林芋和酢浆草是首次报道的HCRV新寄主;4个HCRV分离物的N蛋白与NCBI首次报道的HLS1-2 N蛋白(登录号:AFX74694)一致性达到99.34%;系统进化树分析显示:4个HCRV分离物与GenBank公布的同样来自云南的株系聚为1支。【结论】病毒的地理分布相关性强于寄主相关性。 展开更多
关键词 朱顶红褪绿环斑病毒 核壳体蛋白 序列分析
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