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几个杨树木质部特异启动子片段表达载体的构建与功能分析 被引量:2
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作者 张爽 武会 杜克久 《蚕业科学》 CAS CSCD 北大核心 2012年第2期199-203,共5页
木质部纤维素合酶基因(CesA)在植物正常生长期的木质部特异表达,受到外界压力时可诱导在韧皮部表达,因而被用作杨树抗桑天牛转基因研究中的特异性表达启动子。将前期分离的CesA上游DNA片段JCesAP、YCesAP和MDCesAP分别替换植物表达载体p... 木质部纤维素合酶基因(CesA)在植物正常生长期的木质部特异表达,受到外界压力时可诱导在韧皮部表达,因而被用作杨树抗桑天牛转基因研究中的特异性表达启动子。将前期分离的CesA上游DNA片段JCesAP、YCesAP和MDCesAP分别替换植物表达载体pCAMBIA1302中的组成型启动子CaMV35S,构建成新的植物组织特异性表达载体pJCesAP-GFP、pYCesAP-GFP和pMDCesAP-GFP,然后采用农杆菌介导法转化烟草,均得到完整的再生烟草植株。经PCR初步检测证明目的基因已整合到烟草基因组中。荧光检测JCesAP、YCesAP和MDCesAP片段均能启动GFP蛋白的表达,在395 nm激发光下出现黄绿色荧光,显示3个CesA片段均具有在木质部特异表达的启动子活性。 展开更多
关键词 木质部特异启动子 载体构建 转基因 绿色荧光蛋白
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杨树木质部特异启动子诱导活性分析
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作者 李杰 雒雅婧 +1 位作者 张爽 杜克久 《江苏农业科学》 北大核心 2016年第1期63-67,共5页
以融合pMDCesAP-GUS、pJCesAP-GUS、pDMDCesAP-GUS的转基因杨树作为试验材料,分别对其根、茎、叶进行创伤及ABA(脱落酸)激素诱导处理,通过定量检测转基因杨树不同器官的GUS酶活性,分析不同启动子对创伤及ABA激素诱导的响应情况。结果表... 以融合pMDCesAP-GUS、pJCesAP-GUS、pDMDCesAP-GUS的转基因杨树作为试验材料,分别对其根、茎、叶进行创伤及ABA(脱落酸)激素诱导处理,通过定量检测转基因杨树不同器官的GUS酶活性,分析不同启动子对创伤及ABA激素诱导的响应情况。结果表明,创伤处理转基因杨树12h时,PMDCesAP杨树根的GUS酶活力达到最高点。ABA激素处理转基因杨树,pBI121在根、叶中的GUS酶活力的趋势是先升高后降低;处理3h时,GUS酶活力最高;pBI121的茎在ABA激素处理前GUS酶活力是最高的;PMDCesAP的根、茎在ABA激素处理前GUS酶活力处于最大值。 展开更多
关键词 杨树 木质部特异启动子 创伤诱导 脱落酸诱导 GUS活性
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杨树木质部特异启动子5'端侧翼序列缺失表达载体构建及转化烟草的研究 被引量:6
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作者 赵金风 李杰 +1 位作者 张爽 杜克久 《蚕业科学》 CAS CSCD 北大核心 2013年第5期858-861,共4页
采用5'端系列缺失分析法,PCR扩增杨树木质部特异性启动子JCesAP中与转录起始位点距离不同的5'端缺失启动子片段ZU2、ZU3、ZU4。为鉴定缺失片段的功能活性,以β-葡糖醛酸酶基因(GUS)作为报告基因,分别构建JCesAP启动子3个缺失片... 采用5'端系列缺失分析法,PCR扩增杨树木质部特异性启动子JCesAP中与转录起始位点距离不同的5'端缺失启动子片段ZU2、ZU3、ZU4。为鉴定缺失片段的功能活性,以β-葡糖醛酸酶基因(GUS)作为报告基因,分别构建JCesAP启动子3个缺失片段的表达载体,并通过农杆菌介导瞬时转化烟草。对转化烟草植株进行GUS活性检测的结果表明,缺失片段ZU3、ZU4有启动子活性,且ZU4启动子活性强度与CaMV35S启动子相当,转化烟草的叶片表面都呈现大面积蓝色,而ZU2没有启动子活性。木质部特异性核心启动子的筛选将有助于利用转基因技术治理桑天牛等天牛类蛀干害虫。 展开更多
关键词 杨树 木质部特异启动子 缺失分析法 载体构建 瞬时表达
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杨树组织特异性强启动子的筛选
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作者 李杰 赵金风 +1 位作者 张爽 杜克久 《华北农学报》 CSCD 北大核心 2014年第B12期40-43,共4页
为了筛选到具有木质部组织特异性并有较强功能的启动子,将河北林木种质资源与森林保护重点实验室前期已获得的MDCes A启动子、JCes AP启动子、DMDCes AP启动子(含2个串联MDCes AP启动子)融合GUS报告基因的p MDCes AP-GUS、p JCes AP-GUS... 为了筛选到具有木质部组织特异性并有较强功能的启动子,将河北林木种质资源与森林保护重点实验室前期已获得的MDCes A启动子、JCes AP启动子、DMDCes AP启动子(含2个串联MDCes AP启动子)融合GUS报告基因的p MDCes AP-GUS、p JCes AP-GUS、p DMDCes AP-GUS这3个植物表达载体,通过农杆菌介导转化杨树,对转化后的杨树进行GUS活性的定性及荧光定量检测,以比较3个启动子在转基因植物中的表达能力和水平。筛选到的组织特异启动子与抗天牛基因融合,将提高毒蛋白在相应部位的表达量,这对天牛类蛀干害虫的防治具有重大意义。 展开更多
关键词 木质部特异启动子 筛选 GUS报告基因 荧光定量检测
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