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转木糖还原酶基因XYL1酿酒酵母的构建及产木糖醇能力研究 被引量:5
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作者 王凤梅 张邦建 +1 位作者 岳泰新 马利兵 《中国酿造》 CAS 北大核心 2018年第12期66-70,共5页
将人工合成的树干毕赤酵母(Pichia stipitis)的木糖还原酶基因XYL1插入酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)表达载体pYES2中,然后将重组质粒pYES2-XYL1导入酿酒酵母INVSc1中,构建转木糖还原酶基因XYL1酿酒酵母菌株INVSc1/pYES2-XYL1,最... 将人工合成的树干毕赤酵母(Pichia stipitis)的木糖还原酶基因XYL1插入酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)表达载体pYES2中,然后将重组质粒pYES2-XYL1导入酿酒酵母INVSc1中,构建转木糖还原酶基因XYL1酿酒酵母菌株INVSc1/pYES2-XYL1,最后采用营养缺陷培养基筛选转木糖还原酶基因酿酒酵母并对其产木糖醇的能力进行检测。结果表明,成功获得2株转木糖还原酶基因XYL1酿酒酵母菌株INVSc1/pYES2-XYL1-01、INVSc1/pYES2-XYL1-02,当两菌株以50 g/L木糖及10 g/L半乳糖为碳源发酵5 d后,木糖醇产量分别高达(13.68±2.37)g/L、(12.09±1.45)g/L,显著高于非转基因酿酒酵母INVSc1的木糖醇产量(1.08±0.37)g/L(P<0.05),说明XYL1基因的导入显著提高了酿酒酵母INVSc1生产木糖醇的能力(P<0.05)。为采用基因工程酿酒酵母制备食用木糖醇提供了理论及技术基础。 展开更多
关键词 酿酒酵母 木糖还原酶基因 工程菌构建
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树干毕赤酵母木糖还原酶基因的克隆及在大肠杆菌中的表达 被引量:1
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作者 麻慧明 陈介南 +1 位作者 张伟涛 何钢 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第4期171-175,共5页
根据NCBI中的木糖还原酶基因序列设计引物,利用高保真聚合酶克隆树干毕赤酵母木糖还原酶基因,加A后克隆到质粒pGM-T中,测序验证。然后将目的基因克隆到含有强启动子的穿梭表达载体p424GPD中,构建含有XYL1基因的重组质粒p424GPD-XYL1。将... 根据NCBI中的木糖还原酶基因序列设计引物,利用高保真聚合酶克隆树干毕赤酵母木糖还原酶基因,加A后克隆到质粒pGM-T中,测序验证。然后将目的基因克隆到含有强启动子的穿梭表达载体p424GPD中,构建含有XYL1基因的重组质粒p424GPD-XYL1。将p424GPD-XYL1转化到大肠杆菌中,提取总蛋白,聚丙烯酰胺凝胶电泳分析,酶活测定确定木糖还原酶基因XYL1在大肠杆菌中得到活性表达,表明表达载体构建成功。表达载体的成功构建为后续构建重组酿酒酵母利用木糖发酵奠定基础。 展开更多
关键词 树干毕赤酵母 木糖还原酶基因 穿梭载体 酿酒酵母 乙醇
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代谢木糖和葡萄糖的重组酿酒酵母的构建 被引量:4
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作者 刘继开 田沈 +2 位作者 张亚珍 张金鑫 杨秀山 《可再生能源》 CAS 2007年第1期13-16,共4页
采用RT-PCR的方法克隆得到Candida shehatae木糖还原酶基因xyl1,将该基因插入到含有强启动子ADH1的穿梭质粒pACT2中,用同样的方法克隆得到Pichia stipitis的木糖醇脱氢酶基因xyl2,将该基因插入到含有强启动子PMA1的穿梭质粒pDR195中,两... 采用RT-PCR的方法克隆得到Candida shehatae木糖还原酶基因xyl1,将该基因插入到含有强启动子ADH1的穿梭质粒pACT2中,用同样的方法克隆得到Pichia stipitis的木糖醇脱氢酶基因xyl2,将该基因插入到含有强启动子PMA1的穿梭质粒pDR195中,两套外源基因连同各自的启动子和终止子将连接到酵母整合质粒YIp5-kanR中,并预期整合到酿酒酵母的基因组当中,从而构建代谢木糖和葡萄糖的重组酿酒酵母。 展开更多
关键词 重组酵母菌 乙醇 染色体整合 木糖还原酶基因 醇脱氢酶基因
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代谢木糖重组酿酒酵母的初步构建 被引量:1
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作者 张金鑫 张亚珍 +3 位作者 杨忞 李颖 高文 杨秀山 《可再生能源》 CAS 2008年第2期35-39,共5页
为使酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)代谢木糖产乙醇,须要在酿酒酵母胞内表达木糖代谢途径的关键酶基因——木糖还原酶基因xyl1和木糖醇脱氢酶基因xyl2,这2种酶基因的相对表达水平对乙醇的产生和木糖醇的积累具有重要影响。该研究... 为使酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)代谢木糖产乙醇,须要在酿酒酵母胞内表达木糖代谢途径的关键酶基因——木糖还原酶基因xyl1和木糖醇脱氢酶基因xyl2,这2种酶基因的相对表达水平对乙醇的产生和木糖醇的积累具有重要影响。该研究初步构建了含有诱导型启动子控制的木糖还原酶基因xyl1的酵母表达载体pYes2-xyl1和含有组成型强启动子控制的木糖醇脱氢酶基因xyl2的酵母表达载体pDR195-xyl2,同时,在国内首次克隆出热带假丝酵母(Candida tropicalis)的木糖醇脱氢酶基因。这2个表达载体的构建为后续重组酵母的构建提供了重要基础。 展开更多
关键词 重组酿酒酵母 乙醇 木糖还原酶基因 醇脱氢酶基因
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