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黄瓜细菌性角斑病PMA-qPCR检测方法的建立和应用
被引量：
8
1
作者
孔维文
李云龙
+4 位作者
王敬琦
刘婷婷
陈南
金一
何晓青
《生物技术通报》
CAS
CSCD
北大核心
2016年第2期70-75,共6页
黄瓜细菌性角斑病为黄瓜常见的一种细菌病害,其致病菌为丁香假单胞菌黄瓜致病型。目前该病在全球范围内已经造成严重的经济损失。针对于PMA染料能够区分细胞死活的特性将其与荧光定量PCR技术结合。(1)通过比对分析Gen Bank中该菌种不同...
黄瓜细菌性角斑病为黄瓜常见的一种细菌病害,其致病菌为丁香假单胞菌黄瓜致病型。目前该病在全球范围内已经造成严重的经济损失。针对于PMA染料能够区分细胞死活的特性将其与荧光定量PCR技术结合。(1)通过比对分析Gen Bank中该菌种不同株的gap1基因序列,找出gap1基因的保守区并根据保守区基因序列设计了一对特异性引物Dxf1和Dxr1,以其他5种非丁香假单胞菌基因组为模板进行实时定量PCR扩增,只有丁香假单胞菌有扩增曲线,证明引物非常特异。(2)以gap1基因为目的基因构建其克隆载体,将克隆载体导入到大肠杆菌感受态细胞中进行培养,使其大量复制。再将质粒提取,以提取的质粒作为标准品,根据其浓度将其稀释为5×101-5×107 7个梯度绘制标准曲线,获得的扩增效率为96.6%,并做组内重复和组间重复,变异系数均在2%内,证明标准曲线重复性良好。(3)将构建好的方法用于实际样品的检测,得到的Ct值为27.99,根据标准曲线所得的起始模板与Ct值之间的线性关系公式,检测到100 mg患病叶片中含有的菌体为7.69×102拷贝。研究表明,该方法可以快速鉴定并检测实际样品中的活的致病菌的数量,为黄瓜细菌性角斑病的防控提供技术支持。
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关键词
黄瓜细
菌
性角斑病
PMA-qPCR
丁香假单胞
菌
检测
有活力菌体
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职称材料
题名
黄瓜细菌性角斑病PMA-qPCR检测方法的建立和应用
被引量：
8
1
作者
孔维文
李云龙
王敬琦
刘婷婷
陈南
金一
何晓青
机构
北京林业大学生物科学与技术学院
北京市植物保护站
出处
《生物技术通报》
CAS
CSCD
北大核心
2016年第2期70-75,共6页
基金
国家自然科学基金青年科学基金项目(51108029)
中央高校基本科研业务费专项资金资助项目(TD2012-03)
北京市优秀人才培养资助项目(2013D002006000001)
文摘
黄瓜细菌性角斑病为黄瓜常见的一种细菌病害,其致病菌为丁香假单胞菌黄瓜致病型。目前该病在全球范围内已经造成严重的经济损失。针对于PMA染料能够区分细胞死活的特性将其与荧光定量PCR技术结合。(1)通过比对分析Gen Bank中该菌种不同株的gap1基因序列,找出gap1基因的保守区并根据保守区基因序列设计了一对特异性引物Dxf1和Dxr1,以其他5种非丁香假单胞菌基因组为模板进行实时定量PCR扩增,只有丁香假单胞菌有扩增曲线,证明引物非常特异。(2)以gap1基因为目的基因构建其克隆载体,将克隆载体导入到大肠杆菌感受态细胞中进行培养,使其大量复制。再将质粒提取,以提取的质粒作为标准品,根据其浓度将其稀释为5×101-5×107 7个梯度绘制标准曲线,获得的扩增效率为96.6%,并做组内重复和组间重复,变异系数均在2%内,证明标准曲线重复性良好。(3)将构建好的方法用于实际样品的检测,得到的Ct值为27.99,根据标准曲线所得的起始模板与Ct值之间的线性关系公式,检测到100 mg患病叶片中含有的菌体为7.69×102拷贝。研究表明,该方法可以快速鉴定并检测实际样品中的活的致病菌的数量,为黄瓜细菌性角斑病的防控提供技术支持。
关键词
黄瓜细
菌
性角斑病
PMA-qPCR
丁香假单胞
菌
检测
有活力菌体
Keywords
bacterial angular leaf spot on cucumber
PMA-qPCR
Pseudomonas syringae
detection
viable cell
分类号
S436.421.1 [农业科学—农业昆虫与害虫防治]
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作者
出处
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被引量
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1
黄瓜细菌性角斑病PMA-qPCR检测方法的建立和应用
孔维文
李云龙
王敬琦
刘婷婷
陈南
金一
何晓青
《生物技术通报》
CAS
CSCD
北大核心
2016
8
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