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抗人有机阴离子转运蛋白3抗体制备及其在肾脏定位的研究
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作者 张萍 陈香美 +3 位作者 许国双 何娅妮 吴镝 杨聚荣 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第23期2333-2335,共3页
目的采用新的基因免疫方法制备小鼠抗人有机阴离子转运蛋白3(anti-humanorganicaniontransporter3,hOAT3)多克隆抗体,并用该抗体对hOAT3在人肾小管上皮细胞的表达进行定位研究。方法应用Accelrys软件分析hOAT3抗原表位,选择其细胞内表位... 目的采用新的基因免疫方法制备小鼠抗人有机阴离子转运蛋白3(anti-humanorganicaniontransporter3,hOAT3)多克隆抗体,并用该抗体对hOAT3在人肾小管上皮细胞的表达进行定位研究。方法应用Accelrys软件分析hOAT3抗原表位,选择其细胞内表位,用反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)方法从人肾组织RNA中扩增其261bp的cDNA序列,克隆到pBQAP-TT构建基因免疫载体,与辅助载体pCMVi-GMCSF和pCMVi-FlT3L同时免疫小鼠,5周后获得血清抗体,人肾组织Westernblot和免疫组化鉴定抗体的特异性和定位表达。结果成功构建基因免疫载体pBQAP-TT-hOAT3,序列分析鉴定正确,ELISA方法测得抗体滴度高达1∶3000,该抗体识别人肾皮质膜蛋白62×103的hOAT3,人肾组织免疫组化提示该抗体识别定位在肾小管上皮细胞基底膜。结论成功用基因免疫方法制备高效特异性抗hOAT3多克隆抗体,为今后的生理病理研究奠定基础。 展开更多
关键词 肾脏 有机阴离子转运蛋白3 基因免疫 抗体制备
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佐剂性关节炎大鼠肾功能损伤及对肾脏有机阴离子转运体3表达的影响
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作者 李孟阳 汪乾镭 +1 位作者 魏伟 王春 《安徽医科大学学报》 CAS 北大核心 2024年第9期1495-1500,共6页
目的研究佐剂性关节炎(AA)对大鼠肾脏功能和肾脏有机阴离子转运体3(OAT3)表达的影响。方法在大鼠右侧后足趾皮内注射弗氏完全佐剂建立AA模型。固定时间点收集大鼠血液和尿液,观察肾损伤指标的动态变化。通过肾脏的HE染色切片观察肾损伤... 目的研究佐剂性关节炎(AA)对大鼠肾脏功能和肾脏有机阴离子转运体3(OAT3)表达的影响。方法在大鼠右侧后足趾皮内注射弗氏完全佐剂建立AA模型。固定时间点收集大鼠血液和尿液,观察肾损伤指标的动态变化。通过肾脏的HE染色切片观察肾损伤情况。免疫组化和Western blot检测肾皮质OAT3蛋白和炎性因子白介素-6(IL-6)、白介素-1β(IL-1β)及肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的表达水平。结果与正常组相比,AA大鼠关节炎指数评分、继发性足爪肿胀、关节肿胀数、全身评分均显著增加(P<0.05)。X线检测结果显示,AA模型大鼠足爪骨关节出现软组织水肿以及骨畸形的特征。生化指标显示,AA大鼠的肾损伤指标出现明显异常。免疫组化与Western blot结果显示,AA大鼠肾皮质OAT3的表达水平显著降低,同时炎性因子IL-6、TNF-α和IL-1β的表达水平明显升高(P<0.05)。结论AA大鼠的肾功能损伤可能与肾脏OAT3的表达降低及炎性因子表达升高有关。 展开更多
关键词 佐剂性关节炎 肾损伤 大鼠 肾皮质 有机阴离子转运3 炎性因子
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有机阴离子转运蛋白的研究进展 被引量:8
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作者 宋必卫 周彦君 《生理科学进展》 CAS CSCD 北大核心 2012年第1期11-16,共6页
有机阴离子转运蛋白(organic anion transporters,OATs)是一类底物特异性较差、主要表达于屏障上皮的转运蛋白,主要位于肾近曲小管,在其他器官如肝、脑和胎盘也有分布,介导众多带负电的体内代谢产物(包括尿酸、神经递质酸性代谢终产物... 有机阴离子转运蛋白(organic anion transporters,OATs)是一类底物特异性较差、主要表达于屏障上皮的转运蛋白,主要位于肾近曲小管,在其他器官如肝、脑和胎盘也有分布,介导众多带负电的体内代谢产物(包括尿酸、神经递质酸性代谢终产物、甾体激素、前列腺素等)和药物跨细胞转运,对药物排泄和药动学有重要影响。本文就已克隆的各亚型OATs的特性、生理功能及其活性调节、转运机制、底物、对药动力学的影响等方面作一介绍。 展开更多
关键词 有机阴离子转运蛋白 肾近曲小管 分泌 药动学 主动转运
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有机阴离子转运蛋白介导马兜铃酸进入肾小管上皮细胞 被引量:3
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作者 王艳艳 谌贻璞 芮宏亮 《中国医学科学院学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第4期476-480,共5页
目的探讨马兜铃酸是否能进入人近端肾小管上皮细胞(HKC)及其进入HKC的可能途径。方法液相色谱-串联质谱法检测经马兜铃酸钠作用后HKC破碎液中马兜铃酸的含量。乳酸脱氢酶释放实验检测马兜铃酸钠对HKC的毒性作用,并比较有机阴离子转运蛋... 目的探讨马兜铃酸是否能进入人近端肾小管上皮细胞(HKC)及其进入HKC的可能途径。方法液相色谱-串联质谱法检测经马兜铃酸钠作用后HKC破碎液中马兜铃酸的含量。乳酸脱氢酶释放实验检测马兜铃酸钠对HKC的毒性作用,并比较有机阴离子转运蛋白抑制剂丙磺舒与有机阳离子转运蛋白抑制剂四乙基铵对马兜铃酸钠导致的细胞毒作用的影响。逆转录实时聚合酶链反应和免疫印迹法检测马兜铃酸钠对HKC表达结缔组织生长因子的影响。结果马兜铃酸钠孵育后的细胞破碎液中可检测到马兜铃酸。60mg/L马兜铃酸钠可使HKC的乳酸脱氢酶释放率显著升高(P<0.01),丙磺舒可显著抑制上调的乳酸脱氢酶释放(P<0.05),而四乙基铵却无此作用。丙磺舒可抑制马兜铃酸钠诱导的结缔组织生长因子高表达(P<0.05)。结论马兜铃酸钠能通过HKC的细胞膜有机阴离子转运蛋白进入细胞发挥生物学效应和毒性作用。 展开更多
关键词 马兜铃酸 肾小管上皮细胞 液相色谱-串联质谱 有机阴离子转运蛋白 结缔组织生长因子
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有机阴离子转运蛋白介导绿原酸肾小管分泌 被引量:2
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作者 陈媚 葛建丹 宋必卫 《浙江工业大学学报》 CAS 北大核心 2010年第3期322-325,337,共5页
利用狗肾近端小管上皮(MDCK)细胞单层模型比较丙磺舒、牛磺酸、青霉素钠等不同药物转运蛋白底物对双黄连口服液中绿原酸分泌的影响.MDCK细胞以1.5×104个细胞/孔接种于Milli-cell-CMculture plate inserts上培养,定期观察细胞形态,... 利用狗肾近端小管上皮(MDCK)细胞单层模型比较丙磺舒、牛磺酸、青霉素钠等不同药物转运蛋白底物对双黄连口服液中绿原酸分泌的影响.MDCK细胞以1.5×104个细胞/孔接种于Milli-cell-CMculture plate inserts上培养,定期观察细胞形态,测定跨膜电阻值,待细胞单层达到一定致密程度后进行分泌实验.用M2e酶标仪测定单用双黄连口服液和合用丙磺舒、牛磺酸、青霉素钠时各组双黄连口服液中绿原酸的跨细胞转运情况,计算累积分泌量.实验结果表明,合用不同转运蛋白底物后,双黄连口服液中绿原酸的分泌量均明显降低.可见绿原酸经肾小管上皮细胞的分泌过程是一可饱和过程,有机阴离子转运蛋白部分参与绿原酸的分泌机制. 展开更多
关键词 MDCK细胞模型 绿原酸 有机阴离子转运蛋白
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有机阴离子转运多肽3参与全氟辛烷磺酸诱导支持细胞损伤
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作者 仇梁林 钱颖赟 +2 位作者 瞿建华 张旭辉 王守林 《南京医科大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2014年第12期1774-1778,共5页
目的 :探讨Oatp3在PFOS诱导的支持细胞毒性中的作用。方法 :体外分离纯化原代大鼠支持细胞,通过细胞毒性实验,观察PFOS对原代支持细胞生长的影响;利用Oatp3 si RNA构建Oatp3基因敲减模型,观察Oatp3在PFOS诱导的支持细胞毒性中的作用,... 目的 :探讨Oatp3在PFOS诱导的支持细胞毒性中的作用。方法 :体外分离纯化原代大鼠支持细胞,通过细胞毒性实验,观察PFOS对原代支持细胞生长的影响;利用Oatp3 si RNA构建Oatp3基因敲减模型,观察Oatp3在PFOS诱导的支持细胞毒性中的作用,并采用Western blot法检测PFOS对Oatp3蛋白表达的影响。结果:0-30μmol/L剂量的PFOS对大鼠支持细胞生长无明显影响(P〉0.05);当PFOS剂量增至40μmol/L时,对支持细胞毒性作用明显(P〈0.01),PFOS毒作用的IC50值约为45.6μmol/L。40μmol/L的PFOS可明显诱导Oatp3蛋白的表达(P〈0.01),联合Oatp3 si RNA处理后,其诱导作用明显抑制(P〈0.01)。与转染试剂对照组(Mock)相比,加入40μmol/L的PFOS后,支持细胞存活率明显降低(P〈0.01),联合Oatp3 si RNA处理后,PFOS诱导的支持细胞毒性明显被抑制(P〈0.05或P〈0.01)。结论:Oatp3很可能参与PFOS诱导支持细胞损伤。 展开更多
关键词 全氟辛烷磺酸 支持细胞 有机阴离子转运多肽3
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人源有机阴离子转运多肽1B1和多药耐药相关蛋白2双转MDCKⅡ细胞株的构建及其功能验证 被引量:1
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作者 胡楠 马国 杨青 《复旦学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2017年第2期134-142,共9页
目的构建人源有机阴离子转运多肽1B1(human organic anion transporting polypeptide 1B1,hOATP1B1)和多药耐药相关蛋白2(multidrug resistance-associated protein2,hMRP2)双转MDCKⅡ细胞株,验证其功能,并应用其考察创新药物2,3-双加... 目的构建人源有机阴离子转运多肽1B1(human organic anion transporting polypeptide 1B1,hOATP1B1)和多药耐药相关蛋白2(multidrug resistance-associated protein2,hMRP2)双转MDCKⅡ细胞株,验证其功能,并应用其考察创新药物2,3-双加氧化酶(indoleamine 2,3-dioxygenase,IDO)抑制剂1-甲基色氨酸(1-methyl-tryptophan,1-MT)的转运特性。方法采用基因工程手段获得hOATP1B1和hMRP2表达真核载体pVITRO2-SLCO1B1-ABCC2,转染MDCKⅡ细胞,通过遗传霉素G418筛选得到稳定表达的细胞株;通过Realtime PCR、Western blot、免疫荧光共聚焦显微镜确认目的蛋白特异性;利用该双转模型考察普伐他汀(不同pH环境和不同底物浓度)和1-MT的转运。结果经电泳分析、双酶切、DNA测序鉴定表明重组质粒构建成功;通过Real-time PCR、Western blot、免疫荧光共聚焦显微镜证明经遗传霉素筛选的MDCK-OATP1B1/MRP2细胞构建成功;pH=6.5时,普伐他汀在所构建双转细胞模型上转运最佳;在0~500μmol/L的浓度范围内,普伐他汀在该模型上的转运呈现浓度依赖性。1-MT在该细胞模型上无明显转运。结论成功构建人源MDCKOATP1B1/MRP2双转细胞株,发现1-MT既不是OATP1B1蛋白也不是MRP2蛋白的底物,该细胞株可用于OATP1B1/MRP2介导的外源性物质(如药物)和内源性物质(如胆红素)的转运研究。 展开更多
关键词 有机阴离子转运多肽1B1 多药耐药相关蛋白2 MDCKⅡ 普伐他汀 1-甲基色氨酸 转运
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有机阴离子转运蛋白1对大鼠滑膜细胞吸收甲氨蝶呤、增殖及迁移的影响
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作者 王勇 孙伟 +3 位作者 高锦张 肖宁 王春 魏伟 《安徽医科大学学报》 CAS 北大核心 2021年第11期1750-1756,共7页
目的探讨有机阴离子转运蛋白1(OAT1)对胶原诱导性关节炎(CIA)大鼠成纤维样滑膜细胞(FLS)吸收甲氨蝶呤(MTX)以及对其增殖和迁移的影响。方法对CIA大鼠FLS使用转染技术上调OAT1的表达,并用Western blot、RT-qPCR方法验证转染效率。将FLS... 目的探讨有机阴离子转运蛋白1(OAT1)对胶原诱导性关节炎(CIA)大鼠成纤维样滑膜细胞(FLS)吸收甲氨蝶呤(MTX)以及对其增殖和迁移的影响。方法对CIA大鼠FLS使用转染技术上调OAT1的表达,并用Western blot、RT-qPCR方法验证转染效率。将FLS分为阴性对照组(NC组)、Overexpress组,并用肿瘤坏死因子-α(TNF-α)(20 ng/ml)刺激。另取正常大鼠FLS为对照组(Control),给予同浓度(100 ng/ml)MTX和OAT1特异性底物对氨基马尿酸(PAH),采用UPLC-MS/MS方法评估FLS对MTX及PAH吸收功能。给予MTX(100 ng/ml)后使用CCK-8、Transwell方法检测FLS增殖效应及迁移能力。结果与NC组相比,Overexpress组的OAT1及Slc22a6表达均上升;与NC组比较,OAT1过表达组FLS对MTX和PAH的吸收在15、30、45、60、120 min时均增加;与NC组比较,Overexpress组FLS的增殖效应在12 h时下降,并趋近于Control组水平;与NC组比较,12 h时OAT1过表达组的迁移能力下降,并趋近于Control组水平。结论OAT1表达的升高能增加炎性FLS对MTX的吸收,并可抑制其异常的增殖效应和迁移能力。 展开更多
关键词 有机阴离子转运蛋白1 成纤维样滑膜细胞 甲氨蝶呤
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大鼠无肝状态肾脏罗库溴铵相关转运蛋白OATP-3及其基因的表达变化的研究 被引量:2
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作者 陈毅飞 陶国才 +1 位作者 崔剑 易斌 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第10期1040-1042,共3页
目的研究无肝状态前后大鼠肾脏罗库溴铵相关转运蛋白阴离子转运多肽3(organanion transportingpoly peptides3,oatp3)及其基因表达的变化,以期初步阐释罗库溴铵无肝期肝外代谢特点形成的原因。方法12只大鼠随机分为2组(6只/组),对照组... 目的研究无肝状态前后大鼠肾脏罗库溴铵相关转运蛋白阴离子转运多肽3(organanion transportingpoly peptides3,oatp3)及其基因表达的变化,以期初步阐释罗库溴铵无肝期肝外代谢特点形成的原因。方法12只大鼠随机分为2组(6只/组),对照组与阻断肝门60min组,取各组大鼠肾脏组织,采用Westernblot检测各组OATP3蛋白的表达。采用逆转录聚合酶链式反应(RT PCR)检测各组oatp3mRNA的表达。结果大鼠肾脏组织OATP3蛋白表达水平阻断肝门60min组表达水平高于对照组(P<0.01);大鼠肾脏组织oatp3mRNA表达水平阻断肝门60min组明显高于对照组(P<0.05)。结论大鼠肾脏组织oatp3在无肝期比无肝期前增多,oatp3基因表达在无肝期比无肝期前增多,这可能是罗库溴铵无肝期肝外代谢增强的机制。 展开更多
关键词 罗库溴铵 oatp-3 无肝期 RT-PCR 转运蛋白阴离子转运多肽-3 肝外代谢 肝移植
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藏药二十五味儿茶丸降尿酸作用及对尿酸转运蛋白表达水平的影响 被引量:9
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作者 方聪 陈兰英 +4 位作者 李雪亮 官紫祎 周朦静 张妮 谢永艳 《中成药》 CAS CSCD 北大核心 2018年第11期2374-2379,共6页
目的研究藏药二十五味儿茶丸对氧嗪酸钾联合次黄嘌呤诱导的大鼠高尿酸血症的防治作用。方法 60只大鼠随机分为空白组、模型组、别嘌醇组(10 mg/kg)和二十五味儿茶丸高、中、低剂量组(1、0. 5、0. 25 g/kg),除空白组外,其余各组皮下注射... 目的研究藏药二十五味儿茶丸对氧嗪酸钾联合次黄嘌呤诱导的大鼠高尿酸血症的防治作用。方法 60只大鼠随机分为空白组、模型组、别嘌醇组(10 mg/kg)和二十五味儿茶丸高、中、低剂量组(1、0. 5、0. 25 g/kg),除空白组外,其余各组皮下注射氧嗪酸钾(200 mg/kg)联合灌胃次黄嘌呤(300 mg/kg)建立高尿酸血症模型,1 h后灌胃给予相应药物,连续7 d。生化法测定血清尿酸(UA)、肌酐(Cr)、尿素氮(BUN)水平,血清及肝组织中黄嘌呤氧化酶(XOD)活性; HE染色观察肾脏组织病理变化;免疫组化法测定肾脏有机阴离子转运蛋白1 (OAT1)、有机阴离子转运蛋白3 (OAT3)及尿酸盐阴离子转运体1 (URAT1)的表达。结果与空白组比较,模型组血尿酸水平、血清及肝脏组织XOD水平显著升高,肾脏组织出现病理损伤,肾脏组织OAT1及OAT3表达显著降低,URAT1表达显著升高。与模型组比较,二十五味儿茶丸高剂量组能明显降低血尿酸水平,抑制XOD活性,改善肾脏病理损伤,升高OAT1及OAT3的表达,抑制URAT1的表达。结论二十五味儿茶丸可以有效治疗高尿酸血症并对肾脏有一定的保护作用,其降尿酸机制可能与抑制XOD活性,提高OAT1、OAT3的表达,抑制URAT1的表达有关。 展开更多
关键词 二十五味儿茶丸 高尿酸血症 有机阴离子转运蛋白1(0AT1) 有机阴离子转运蛋白3(0AT3) 尿酸盐阴离子转运体1(URAT1)
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药物转运蛋白在药物吸收、分布和排泄中的作用及对新药研发的意义 被引量:18
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作者 陈西敬 王广基 《中国药科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2003年第6期483-486,共4页
介绍了药物转运蛋白 (drugtransporter)在药物处置过程中的作用 ,探讨了其在新药开发中应用的可能性。通过对药物转运蛋白功能的了解和利用 ,可以增加口服药物的生物利用度 ,开发出对某些器官有靶向性的药物 ,或避免药物分布到某些器官... 介绍了药物转运蛋白 (drugtransporter)在药物处置过程中的作用 ,探讨了其在新药开发中应用的可能性。通过对药物转运蛋白功能的了解和利用 ,可以增加口服药物的生物利用度 ,开发出对某些器官有靶向性的药物 ,或避免药物分布到某些器官中 ,从而提高药物的疗效 ,降低其的毒副作用 ;也可以控制药物的消除速度。在药物研发过程中可以通过两种手段达到上述目的 ,一是根据需要选择与某些转运蛋白有作用或没有作用的先导化合物 ,另一个则是使用转运蛋白抑制剂。在药物研发的初始阶段 ,就开始重视其药动学特性 ,这一观念近年来已被很多人所接受。对转运蛋白的深入认识和利用 ,建立研究药物转运特性的有效方法 。 展开更多
关键词 药物转运蛋白 药物靶向性 P-糖蛋白 多药耐药蛋白 多药耐药相关蛋白 有机阴离子转运蛋白 有机离子转运蛋白 有机阴离子转运 寡肽转运蛋白
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钠/二羧酸转运蛋白研究进展
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作者 何娅妮 陈香美 《生理科学进展》 CAS CSCD 北大核心 2003年第3期245-247,共3页
钠 /二羧酸转运蛋白 (NaDCs)是一类负责转运枸橼酸、琥珀酸及α 酮酸等三羧酸循环中间产物的跨膜有机阴离子转运蛋白。分布于小肠、肾脏、肝脏、肾上腺、脑、肺及胎盘等组织。它不仅参与能量代谢、酸碱平衡调节 ,而与氨基酸及糖皮质激... 钠 /二羧酸转运蛋白 (NaDCs)是一类负责转运枸橼酸、琥珀酸及α 酮酸等三羧酸循环中间产物的跨膜有机阴离子转运蛋白。分布于小肠、肾脏、肝脏、肾上腺、脑、肺及胎盘等组织。它不仅参与能量代谢、酸碱平衡调节 ,而与氨基酸及糖皮质激素的合成也有密切关系 ,新近研究发现它可能还是调控哺乳类寿限的重要基因之一。 展开更多
关键词 钠/二羧酸转运蛋白 有机阴离子 肾脏 生物学功能
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miR-1-3p/206/613对LXRα和OATP1B1蛋白表达的影响及其机制研究 被引量:1
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作者 叶容芳 刘名义 +4 位作者 许玉 张艳丽 朱丹丹 丁薇 熊玉卿 《中国临床药理学与治疗学》 CAS CSCD 2018年第8期846-854,共9页
目的:探究miR-1-3p、miR-206和miR-613对肝X受体α(LXRα)和有机阴离子转运多肽1B1(OATP1B1)蛋白表达及OATP1B1转运能力的影响及其机制研究。方法:通过生物信息学数据库预测可靶向作用于LXRα和OATP1B1 mRNA 3'-UTR的miRNAs;采用RT-... 目的:探究miR-1-3p、miR-206和miR-613对肝X受体α(LXRα)和有机阴离子转运多肽1B1(OATP1B1)蛋白表达及OATP1B1转运能力的影响及其机制研究。方法:通过生物信息学数据库预测可靶向作用于LXRα和OATP1B1 mRNA 3'-UTR的miRNAs;采用RT-q PCR、Western blot方法检测miR-1-3p/206/613及LXRα和OATP1B1蛋白水平;采用LC-MS/MS方法检测Hep G2细胞中瑞舒伐他汀(RSV)的含量;应用双荧光素酶报告基因法,研究miR-1-3p/206/613影响LXRα和OATP1B1表达的分子机制。结果:预测结果表明miR-1-3p/206/613与LXRα和OATP1B1 mRNA 3'-UTR互补配对,且具有较高的特异性、保守性及结合稳定性。与对照组相比,miR-1-3p/206/613 mimics能明显下调Hep G2细胞中LXRα蛋白表达水平16.5%、16.0%、25.1%,OATP1B1蛋白30.4%、30.5%、44.4%;相反,miR-1-3p/206/613 inhibitors明显上调LXRα蛋白表达水平13.3%、13.3%、16.0%,OATP1B1蛋白25.0%、25.6%、30.4%。当RSV浓度为5、60、125μmol/L时,miR-1-3p/206/613mimics显著减少Hep G2细胞对RSV的摄取至对照组的0.50、0.19、0.30倍,0.49、0.24、0.23倍和0.64、0.48、0.31倍;与之相反,miR-1-3p/206/613inhibitors上调1.26、1.59、2.07倍,1.97、2.44、2.63倍,2.22、2.86、2.93倍。与对照组相比,miR-1-3p/206/613 mimics或miR-1-3p/206/613 inhibitors,p GL/LXRα-WT报告基因荧光素酶活性分别下降38.5%、32.5%、32.8%或升高137.0%、75.8%、55.7%,而p GL/LXRα-Mut报告基因荧光素酶活性未见明显改变;同上,p GL/OATP1B1-WT报告基因荧光素酶活性下降24.3%、28.9%、32.1%或升高33.5%、48.3%、61.6%,而p GL/OATP1B1-Mut报告基因荧光素酶活性也未见明显改变。结论:miR-1-3p/206/613既可通过直接靶向作用于OATP1B1 mRNA 3'-UTR而调控OATP1B1的蛋白表达和转运功能,也可通过靶向作用于LXRαmRNA 3'-UTR而发挥间接调控作用。 展开更多
关键词 miR-1-3p miR-206 miR-613 肝X受体Α 有机阴离子转运多肽1B1
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鸡OATP1B3互作蛋白筛选及其相关基因的转录表达分析 被引量:1
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作者 陈友波 叶涛 +5 位作者 余欢 石钰仕 赵德鹏 龙霞 谭启松 李辉 《南方农业学报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第12期3683-3696,共14页
【目的】筛选鉴定鸡有机阴离子转运多肽1B3(OATP1B3)的互作蛋白,并探究其对鸡蛋绿壳颜色形成的影响,为提高绿壳蛋鸡群体选育准确性提供参考依据。【方法】以真核表达载体p EGFP-SLCO1B3和空载体pEGFP-C1分别转染绿壳型赤水乌骨母鸡蛋壳... 【目的】筛选鉴定鸡有机阴离子转运多肽1B3(OATP1B3)的互作蛋白,并探究其对鸡蛋绿壳颜色形成的影响,为提高绿壳蛋鸡群体选育准确性提供参考依据。【方法】以真核表达载体p EGFP-SLCO1B3和空载体pEGFP-C1分别转染绿壳型赤水乌骨母鸡蛋壳腺上皮细胞,通过免疫共沉淀(Co-IP)结合液相色谱与串联质谱联用技术(LC-MS/MS)筛选鸡OATP1B3互作蛋白,经GO功能注释分析、KEGG信号通路富集分析及蛋白相互作用网络分析鉴定出与鸡蛋绿壳性状形成相关的OATP1B3互作蛋白。同时,通过构建SLCO1B3基因沉默及过表达载体分别转染蛋壳腺上皮细胞,检测SLCO1B3基因过表达或沉默时部分OATP1B3互作蛋白基因(FXR1、CTTN、RPL12和RPS17)在蛋壳腺上皮细胞中的表达情况,并根据鸡蛋壳颜色分为白壳、浅绿和深绿3种类型,分析蛋壳颜色△a*值与FXR1、CTTN、RPL12和RPS17基因表达的相关性。【结果】共筛选鉴定出37个与鸡OATP1B3相互作用的蛋白,其中FXR1、CTTN、RPL12和RPS17与鸡蛋的绿壳性状有密切关系。SLCO1B3基因过表达能极显著下调蛋壳腺上皮细胞内FXR1基因的表达(P<0.01,下同),显著上调RPL12基因表达(P<0.05,下同),极显著上调RPS17基因表达;当SLCO1B3基因沉默后,蛋壳腺上皮细胞内FXR1和CTTN基因的表达极显著上调,而RPL12基因的表达显著下调。白壳类型赤水乌骨母鸡下丘脑中的FXR1基因相对表达量极显著高于绿壳类型赤水乌骨母鸡,肝脏中的RPL12和RPS17基因相对表达量极显著或显著高于绿壳类型赤水乌骨母鸡;此外,FXR1基因在下丘脑中的相对表达量与蛋壳颜色△a*值极显著正相关,RPL12基因在蛋壳腺和肝脏中的相对表达量与蛋壳颜色△a*值极显著正相关。【结论】筛选鉴定出的37个鸡OATP1B3互作蛋白主要定位于细胞质和细胞核,具有蛋白结合能力及结构分子活性,主要参与细胞过程、生物调节和能量代谢。在鸡壳腺上皮细胞内SLCO1B3基因与FXR1、CTTN、RPL12和RPS17基因间存在调控关系,其中,FXR1和RPL12基因在鸡蛋绿壳性状的形成过程中发挥着重要作用。 展开更多
关键词 赤水乌骨鸡 有机阴离子转运多肽1B3(OATP1B3) SLCO1B3基因 互作蛋白 表达调控
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稳定表达hOAT1的HEK293细胞系的建立及鉴定 被引量:3
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作者 李静 杨洋 +4 位作者 肖涛 李韬 欧瑜 傅晓钟 刘亭 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2018年第10期1471-1476,共6页
目的构建人肾脏近曲小管阴离子转运体1(human organic anion transporter 1,hOAT1)-增强型绿色荧光蛋白(EGFP)质粒,获得稳定表达pEGFP-hOAT1的HEK-293细胞系。方法构建EGFP与hOAT1的融合基因表达载体pEGFP-hOAT1,并利用FuGENE 6转染试... 目的构建人肾脏近曲小管阴离子转运体1(human organic anion transporter 1,hOAT1)-增强型绿色荧光蛋白(EGFP)质粒,获得稳定表达pEGFP-hOAT1的HEK-293细胞系。方法构建EGFP与hOAT1的融合基因表达载体pEGFP-hOAT1,并利用FuGENE 6转染试剂将其转染至HEK293细胞中,用荧光显微镜观察绿色荧光蛋白表达情况,经G418抗性筛选获得稳定转染细胞株。用RT-PCR法、qRT-PCR法和Western blot技术,检测稳定转染细胞及正常细胞hOAT1 mRNA和蛋白的表达情况,并进一步用超高效液相色谱-串联质谱法(UPLC-MS/MS)考察稳定转染细胞的对氨基马尿酸摄取能力,以及丙磺舒对hOAT1的抑制作用。结果使用该文的方法,细胞转染率可达90%。RT-PCR、qRT-PCR、Western blot,以及对氨基马尿酸摄取、丙磺舒抑制实验结果显示,相对于正常组,转染细胞在荧光显微镜下呈绿色荧光,其hOAT1表达均呈阳性(P<0.01);稳定转染细胞的对氨基马尿酸摄取能力明显升高(P<0.05),且丙磺舒对hOAT1有明显的抑制作用(P<0.05)。结论高效快速地建立了稳定高表达hOAT1的HEK293细胞系,为核苷类膦酸类似物这类药物引起的临床剂量依赖性肾毒性的机制研究奠定了模型基础,也为体外研究hOAT1底物或抑制剂的筛选提供了一个便利的工具。 展开更多
关键词 有机阴离子转运体1 融合蛋白 稳定转染 HEK293细胞 对氨基马尿酸 丙磺舒
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急性肝衰竭犬模型肝细胞膜表面OATP1及MRP2蛋白表达与钆塞酸二钠增强MRI信号强度的相关性分析 被引量:1
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作者 王昊 陈好 +1 位作者 欧阳中敏 刘志强 《临床肝胆病杂志》 CAS 北大核心 2020年第8期1788-1793,共6页
目的探讨钆塞酸二钠(Gd-EOB-DTPA)增强MRI信号强度与肝细胞膜表面有机阴离子转运多肽1(OATP1)及多药耐药相关蛋白2(MRP2)表达的相关性。方法选取健康成年雄性Beagle犬16只,随机分成对照组(n=8)和急性肝衰竭组(n=8)。急性肝衰竭组造模24 ... 目的探讨钆塞酸二钠(Gd-EOB-DTPA)增强MRI信号强度与肝细胞膜表面有机阴离子转运多肽1(OATP1)及多药耐药相关蛋白2(MRP2)表达的相关性。方法选取健康成年雄性Beagle犬16只,随机分成对照组(n=8)和急性肝衰竭组(n=8)。急性肝衰竭组造模24 h后进行Gd-EOB-DTPA增强MRI扫描,测量肝实质不同信号区域信号强度及首过快速上升期中的增强斜率百分比,根据肝细胞期(注射Gd-EOB-DTPA 20 min时)的MRI图像选择高、中、低信号区域进行肝穿刺。对照组采用同样方法注射等剂量生理盐水后行Gd-EOB-DTPA增强MRI扫描,并在相应区域进行肝穿刺。将穿刺取得的肝组织用于Western Blot检测Gd-EOB-DTPA的摄取蛋白OATP1及排泄蛋白MRP2的表达情况。计量资料多组间比较采用单因素方差分析,进一步两两比较采用LSD-t检验,同一信号区不同组OATP1、MRP2蛋白表达的比较采用两个独立样本t检验。蛋白表达水平与信号强度的相关性采用Pearson分析。结果急性肝衰竭Beagle犬通过Gd-EOB-DTPA行MRI增强扫描在肝细胞期时图像呈现明显的高、中、低不同区域的信号差异,对应的SIbase值、SIst值、首过快速上升期中的增强斜率百分比对比差异有统计学意义(F值分别为70.70、55.12、19.82,P值均<0.001)。急性肝衰竭组不同MRI信号区域的肝组织中OATP1及MRP2的表达存在差异(F值分别为7.508、6.212,P值均<0.01),中、低不同信号区OATP1的表达与对照组相比呈逐渐下降的趋势(中、低信号区t值分别为3.301、3.641,P值均<0.05),并与肝细胞期信号减低的趋势相一致,以低信号区表达为著(高、低信号区对比t=3.436,中、低信号区对比t=2.378,P值均<0.05),差异具有统计学意义。急性肝衰竭组高、中、低不同信号区MRP2的表达与对照组相比均升高,且高、中、低信号区成逐渐升高的趋势,差异有统计学意义(t值分别为-7.236,-8.130、-9.614,P值均<0.05)。结论肝细胞膜表面OATP1、MRP2的表达水平与肝实质在Gd-EOB-DTPA增强肝细胞期的强化程度具有一定的关系,这为节段性评估肝细胞功能提供一定依据。 展开更多
关键词 肝功能衰竭 急性 磁共振成像 有机阴离子转运 多药耐药相关蛋白质类 犬科
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齐多夫定在人胎盘中转运机制的研究进展 被引量:1
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作者 付钰 吴迪 张峻 《中国临床药理学与治疗学》 CAS CSCD 2016年第4期477-480,共4页
齐多夫定是阻断艾滋病母婴传播的一线用药,临床上疗效显著。该药虽暂无相关致畸报道,但其妊娠期用药的安全性仍存在争议。有研究表明齐多夫定可以透过胎盘,对胎儿潜在的毒性与胎儿曝露量呈正相关。目前已有文献报道胎盘中乳腺癌耐药蛋白... 齐多夫定是阻断艾滋病母婴传播的一线用药,临床上疗效显著。该药虽暂无相关致畸报道,但其妊娠期用药的安全性仍存在争议。有研究表明齐多夫定可以透过胎盘,对胎儿潜在的毒性与胎儿曝露量呈正相关。目前已有文献报道胎盘中乳腺癌耐药蛋白(BCRP)、有机阴离子转运体4(OAT4)及核苷转运体2(ENT2)转运蛋白可能参与齐多夫定的转运,但具体转运机制尚未完全明确。本文将对齐多夫定在人类胎盘中的转运机制的研究进展进行综述,以期为评价齐多夫定在妊娠期的安全应用提供参考。 展开更多
关键词 齐多夫定 人胎盘 乳腺癌耐药蛋白 有机阴离子转运 核苷转运
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多态变异对药物转运体活性影响及其临床意义 被引量:1
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作者 张海霞 王连生 《中南大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2008年第8期765-768,F0003,共5页
药物转运是药物反应个体差异及药物相互作用的重要环节。近年来,随着物质转运研究的深入,转运蛋白超家族成员正在不断增加。在已发现和命名的转运蛋白中,与药物转运有关的主要蛋白有ATP依赖性泵出转运体MDR1、有机阴离子转运蛋白(OATP)... 药物转运是药物反应个体差异及药物相互作用的重要环节。近年来,随着物质转运研究的深入,转运蛋白超家族成员正在不断增加。在已发现和命名的转运蛋白中,与药物转运有关的主要蛋白有ATP依赖性泵出转运体MDR1、有机阴离子转运蛋白(OATP)。MDR1在胃肠道、肝脏和肾脏等组织广泛分布,影响药物的吸收、分布以及分泌排泄。MDR1基因的多态性影响其表达和功能,改变底物药物体内过程。有机阴离子转运蛋白在肝脏等组织特异表达,调节药物的分泌排出,其遗传多态性是相关药物异常反应的重要原因。 展开更多
关键词 多药耐药蛋白 有机阴离子转运 遗传多态性
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基于OAT3介导的MTX治疗佐剂诱导性关节炎大鼠的药动学研究 被引量:1
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作者 潘淑 吴义金 +3 位作者 张洒洒 王启海 罗婷婷 殷勤 《中国临床药理学与治疗学》 CAS CSCD 2022年第5期516-525,共10页
目的:探究炎症条件下对甲氨蝶呤(MTX)的药代动力学的影响及其相关机制的研究。方法:建立佐剂诱导性关节炎(AIA)模型,通过免疫组化、蛋白免疫印迹法和QPCR法检测肾脏中有机阴离子转运体3(OAT3)的表达,并通过LC-MS/MS法检测MTX的血药浓度... 目的:探究炎症条件下对甲氨蝶呤(MTX)的药代动力学的影响及其相关机制的研究。方法:建立佐剂诱导性关节炎(AIA)模型,通过免疫组化、蛋白免疫印迹法和QPCR法检测肾脏中有机阴离子转运体3(OAT3)的表达,并通过LC-MS/MS法检测MTX的血药浓度,采用离体大鼠肾灌注、肾切片以及体外细胞摄取和转运实验对比给药不同时间后的药物代谢动力学行为。结果:在AIA大鼠肾脏中OAT3表达显著增加,同时通过优化的LC-MS/MS方法检测MTX的浓度,结果发现AIA大鼠肾切片对MTX的摄取显著增加,丙磺舒可以通过抑制OAT3,减少MTX的排泄;此外,体外证实了炎症病理可以通过增加OAT3的表达和功能活性促进MTX经肾脏排泄。结论:炎症病理条件下通过增加肾脏中OAT3的表达,增强其功能活性,加速了肾脏对MTX的摄取,从而促进了MTX的排泄。 展开更多
关键词 类风湿性关节炎 甲氨蝶呤 有机阴离子转运3 药代动力学 排泄
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PGE_(2)通过EP4/PKA信号通路调控滑膜细胞OAT1的表达及CP-25的作用 被引量:1
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作者 肖康俊 高锦张 +3 位作者 王勇 王斌 魏伟 王春 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第9期1658-1664,共7页
目的明确前列腺素E2(prostaglandin E2,PGE_(2))对滑膜细胞有机阴离子转运体1(organic anion transporter 1,OAT1)膜表达的调控机制及芍药苷-6'-O-苯磺酸酯(CP-25)的作用。方法免疫荧光法检测不同浓度CP-25对PGE_(2)处理后滑膜细胞O... 目的明确前列腺素E2(prostaglandin E2,PGE_(2))对滑膜细胞有机阴离子转运体1(organic anion transporter 1,OAT1)膜表达的调控机制及芍药苷-6'-O-苯磺酸酯(CP-25)的作用。方法免疫荧光法检测不同浓度CP-25对PGE_(2)处理后滑膜细胞OAT1和前列腺素E受体4(prostaglandin E receptor 4,EP4)表达的影响;使用EP4激动剂(TCS2510)与拮抗剂(GW627368X),探究EP4在OAT1调节中的作用;使用CP-25和蛋白激酶A(protein kinase A,PKA)抑制剂H-89,探究CP-25和PKA对滑膜细胞OAT1表达的影响。结果PGE_(2)在0~10 min内明显下调EP4与OAT1的膜表达,20~60 min后明显上调(P<0.05);CP-25明显上调PGE_(2)处理后细胞膜OAT1和EP4的表达(P<0.05);EP4激动剂TCS2510明显上调细胞膜OAT1的表达(P<0.01);CP-25上调PGE_(2)处理的细胞中OAT1的表达,GW627368X和H-89均能下调PGE_(2)和CP-25处理的滑膜细胞中OAT1的表达(P<0.01)。结论PGE_(2)介导的EP4/PKA信号通路可以调控OAT1在滑膜细胞膜上的表达,CP-25可以通过活化EP4/PKA信号通路明显上调滑膜细胞中OAT1的膜表达。 展开更多
关键词 芍药苷-6'-O-苯磺酸酯 滑膜细胞 有机阴离子转运蛋白1 前列腺素E2 前列腺素E受体4 蛋白激酶A
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