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PCR-ELISA法检测食品中空肠弯曲菌 被引量:12
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作者 史艳宇 刘金华 +8 位作者 薛力刚 邴炜 华蕾 赵立群 周亮 刘晓晖 王潇 张庆波 冷喜芳 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2013年第10期246-249,共4页
针对空肠弯曲菌16S rRNA基因应用Primer Express 3.0软件设计特异性引物和探针,核酸探针5’端标记生物素,将聚合酶链式反应(PCR)、核酸液杂交以及酶联显色技术结合,对检测条件进行优化,建立食品中空肠弯曲菌的聚合酶链式反应-酶联免疫... 针对空肠弯曲菌16S rRNA基因应用Primer Express 3.0软件设计特异性引物和探针,核酸探针5’端标记生物素,将聚合酶链式反应(PCR)、核酸液杂交以及酶联显色技术结合,对检测条件进行优化,建立食品中空肠弯曲菌的聚合酶链式反应-酶联免疫吸附分析法(PCR-ELISA)。该方法特异性强、灵敏度高(比PCR高10倍),可以快速、准确检测食品中污染的空肠弯曲菌。该方法可应用于临床诊断、食品卫生监控及出口食品的病原微生物检测等各个领域。 展开更多
关键词 空肠弯曲菌 聚合链式反应-联免疫吸附分析 检测
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RT-PCR法快速鉴别新城疫强弱毒株的试验 被引量:4
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作者 俞宁 岳华 《四川畜牧兽医》 2005年第5期25-26,28,共3页
通过对大量不同毒力NDVF基因核苷酸序列的分析,根据强弱毒株F0裂解位点的序列差异设计合成了三对引物,建立了快速诊断新城疫并能鉴别其强弱毒株的反转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)方法,整个试验过程可在5h内完成。试验表明,该方法具有快... 通过对大量不同毒力NDVF基因核苷酸序列的分析,根据强弱毒株F0裂解位点的序列差异设计合成了三对引物,建立了快速诊断新城疫并能鉴别其强弱毒株的反转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)方法,整个试验过程可在5h内完成。试验表明,该方法具有快速特异和操作简便的特点,不仅适用于对鸡胚毒的检测,而且适用于对病鸡组织匀浆液的检测,是新城疫鉴别诊断和流行病学调查的颇具潜力的分子诊断方法。 展开更多
关键词 强弱毒株 RT-PCR 新城疫 快速鉴别 反转录-聚合链式反应 流行病学调查 核苷酸序列 组织匀浆液 设计合成 序列差异 裂解位点 快速诊断 试验过程 诊断方 鉴别诊断 NDV F基因 检测 适用 毒力 鸡胚 病鸡
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RT-PCR检测健康猪扁桃体和流产死胎猪瘟病毒的应用及RFLP分析 被引量:14
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作者 罗廷荣 孙敬锋 +6 位作者 莫扬 刘芳 黄伟坚 陆芹章 温荣辉 秦爱珍 余克伦 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2004年第3期192-195,共4页
本研究用反转录_聚合酶链反应(RT_PCR)技术对广西部分猪场的健康猪扁桃体材料以及流产胎儿和死胎中的猪瘟病毒(HCV)进行检测。70份健康猪扁桃体材料中阳性11份,阳性率达15 7%;52份流产胎儿及死胎材料中检出阳性9份,阳性率达17 3%。表... 本研究用反转录_聚合酶链反应(RT_PCR)技术对广西部分猪场的健康猪扁桃体材料以及流产胎儿和死胎中的猪瘟病毒(HCV)进行检测。70份健康猪扁桃体材料中阳性11份,阳性率达15 7%;52份流产胎儿及死胎材料中检出阳性9份,阳性率达17 3%。表明广西猪场中有比较严重的健康带毒情况。用限制性片段长度多态性分析法(RFLP)对25份阳性材料、HCLV和石门毒的引物A1/A2的PCR产物进行分析,发现HCLV、石门强毒和广西流行野毒的RT_PCR扩增产物中均有RsaⅠ的一个识别序列,但HCLV上的识别序列所在位置不同。本研究表明,用引物A1/A2作RT_PCR检测,并结合RFLP分析技术可把兔化弱毒和流行野毒区分开来,这将对预防猪瘟起到十分重要的作用。 展开更多
关键词 猪瘟病毒 反转录-聚合链式反应 限制性片段长度多态性分析
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PAR-2在人胰腺肿瘤细胞中的表达及其相关机制的研究 被引量:2
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作者 刘星 胡煜辉 +3 位作者 肖游章 张晓春 周青 李晓飞 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2011年第4期430-432,共3页
目的:通过对蛋白酶激活受体-2(PAR-2)在人胰腺癌细胞及癌旁组织中表达态势的研究,以期明确PAR-2在胰腺癌中表达特点,并探索其相关机制。方法:收集胰腺癌标本,采用免疫组织化学(SP法)检测胰腺癌PAR-2基因的表达;培养胰腺癌细胞,采用逆转... 目的:通过对蛋白酶激活受体-2(PAR-2)在人胰腺癌细胞及癌旁组织中表达态势的研究,以期明确PAR-2在胰腺癌中表达特点,并探索其相关机制。方法:收集胰腺癌标本,采用免疫组织化学(SP法)检测胰腺癌PAR-2基因的表达;培养胰腺癌细胞,采用逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)检测胰腺癌PAR-2基因的表达。结果:胰腺癌组PAR-2 mR-NA的表达高于对照组(P<0.01)。PAR-2在胰腺癌中的表达与患者年龄、性别无关(P>0.05),但癌细胞远处转移者显著高于无转移者(P<0.01)。结论:胰腺癌的发生与发展与PAR-2正相关。PAR-2在胰腺癌中的表达与患者年龄、性别无关;但与淋巴结转移正相关。 展开更多
关键词 胰腺癌 蛋白激活受体-2 SP 逆转录聚合链式反应 表达
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冷却牦牛肉贮藏过程中优势菌的PCR-变性梯度凝胶电泳分析 被引量:9
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作者 岑璐伽 唐善虎 +2 位作者 郝小倩 李雪 邓宇 《肉类研究》 2012年第1期36-40,共5页
应用聚合酶链式反应-变性梯度凝胶电泳(PCR-DGGE)技术,研究托盘保鲜膜包装的冷却牦牛肉在4℃贮藏过程中的微生物多样性及其动态变化。直接从样品中提取细菌总的DNA,采用降落PCR扩增16S rDNA的V3可变区序列,再通过DGGE得到动态变化的指... 应用聚合酶链式反应-变性梯度凝胶电泳(PCR-DGGE)技术,研究托盘保鲜膜包装的冷却牦牛肉在4℃贮藏过程中的微生物多样性及其动态变化。直接从样品中提取细菌总的DNA,采用降落PCR扩增16S rDNA的V3可变区序列,再通过DGGE得到动态变化的指纹图谱,并对主要条带进行测序分析。结果表明:检测到的优势腐败菌为Pseudomonas sp.(假单胞菌)、Lactococcus sp.(乳球菌)、Acinetobacter sp.(不动杆菌)、Brochothrix thermosphacta(热死环丝菌)、Enterobacteriaceae bacterium(肠杆菌科细菌),此外还检测到Uncultured Citrobacter sp.(非培养的柠檬酸杆菌)和Staphylococcus sp.(葡萄球菌)。 展开更多
关键词 冷却牦牛肉 微生物 16S RDNA 聚合链式反应-变性梯度凝胶电脉(PCR—DGGE)
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鱼类水产品中耐冷性摩根菌Morganela psychrotolerans污染情况与分离株组胺生成能力
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作者 李锦 王迪 +3 位作者 陈胜军 吴燕燕 李春生 王悦齐 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2024年第5期275-282,共8页
对市售水产品中耐冷性摩根菌Morganella psychrotolerans的污染情况进行调查,研究其分离株组胺生成。实验共调查了广东省市售100个鱼类样本,研究结果表明,M.psychrotolerans广泛分布于广东省市售中水产品中,在样品中的污染率达34%,在青... 对市售水产品中耐冷性摩根菌Morganella psychrotolerans的污染情况进行调查,研究其分离株组胺生成。实验共调查了广东省市售100个鱼类样本,研究结果表明,M.psychrotolerans广泛分布于广东省市售中水产品中,在样品中的污染率达34%,在青皮红肉鱼中的污染率为35.9%,在白肉鱼中的污染率为27.3%,其中鲭鱼样本的污染率在总阳性样品中占比38.24%,金枪鱼样本的污染率占比29.41%。在呈现阳性的样品中共分离到16株M.psychrotolerans,对分离的16株M.psychrotolerans进行组胺生成能力研究发现,在20℃培养48 h后分离株组胺生成量均大于1000 mg/L,其中分离株1的组胺生成量大于模式菌株。将分离株1与模式菌株在不同温度(4、20℃)条件下对比研究发现,分离株1与模式菌株的生长并未呈现明显差异,但组胺生成量呈现不同。分离株1在4℃培养10 d后,其组胺生成量显著高于模式菌株;在20℃培养60 h后,模式菌株组胺生成量显著高于离株1。本研究为冷链物流水产品中可能存在的组胺积累问题提供了理论数据支撑。 展开更多
关键词 耐冷性摩根菌 组胺生成 最大可能数法-聚合酶链式反应 污染情况
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气调包装酱卤鸭翅贮藏过程中菌群结构分析 被引量:19
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作者 叶可萍 刘佳 +2 位作者 刘梅 李春保 郭成祥 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2015年第14期201-205,共5页
运用传统细菌平板培养和聚合酶链式反应-变性梯度凝胶电脉方法研究气调包装酱卤鸭翅15℃贮藏过程中微生物菌群结构变化。细菌总数计数结果表明,产品生产的卫生条件较好,细菌初始污染菌数较低(小于2(lg(CFU/g))),至贮藏第9天左右产品细... 运用传统细菌平板培养和聚合酶链式反应-变性梯度凝胶电脉方法研究气调包装酱卤鸭翅15℃贮藏过程中微生物菌群结构变化。细菌总数计数结果表明,产品生产的卫生条件较好,细菌初始污染菌数较低(小于2(lg(CFU/g))),至贮藏第9天左右产品细菌总数超过4(lg(CFU/g))。变性梯度凝胶电脉指纹图谱结果表明,贮藏初期产品的初始污染菌主要为不动杆菌属,至贮藏末期,产品中的主要菌群有嗜冷杆菌、莫拉氏菌、链球菌等,其中嗜冷杆菌属成为产品贮藏末期的优势菌。 展开更多
关键词 酱卤鸭翅 气调包装 贮藏 菌群结构 聚合链式反应-变性梯度凝胶电脉
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真空包装冷却猪肉冷藏过程中菌相变化 被引量:24
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作者 江芸 高峰 +2 位作者 徐幸莲 叶可萍 周光宏 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2011年第4期241-245,共5页
应用传统微生物培养和PCR-DGGE方法研究真空包装冷却猪肉4℃贮藏过程中的菌相变化。细菌培养计数结果表明,乳酸菌生长迅速,在贮藏后期即超过了细菌总数值。DGGE结合16S rRNA基因序列分析结果表明,贮藏初期肉中初始菌相较复杂,贮藏末期... 应用传统微生物培养和PCR-DGGE方法研究真空包装冷却猪肉4℃贮藏过程中的菌相变化。细菌培养计数结果表明,乳酸菌生长迅速,在贮藏后期即超过了细菌总数值。DGGE结合16S rRNA基因序列分析结果表明,贮藏初期肉中初始菌相较复杂,贮藏末期主要是漫游球菌、肉食杆菌、乳杆菌、乳球菌和热死环丝菌成为优势腐败菌。 展开更多
关键词 冷却猪肉 真空包装 菌相组成 聚合链式反应-变性梯度凝胶电脉(PCR-DGGE)
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上海市水产品副溶血性弧菌的污染情况及毒力基因分布 被引量:3
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作者 张玉洁 孙晓红 +3 位作者 周彤彤 赵勇 吴启华 潘迎捷 《食品与生物技术学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第6期153-159,共7页
副溶血性弧菌是引起沿海城市食源性疾病爆发的主要致病菌之一。为了调查2015年7月-2016年6月上海市内水产品中副溶血性弧菌的污染情况及毒力菌株的分布,根据GB/T4789. 2013《食品卫生微生物学检验副溶血性弧菌检验》方法结合聚合酶链式... 副溶血性弧菌是引起沿海城市食源性疾病爆发的主要致病菌之一。为了调查2015年7月-2016年6月上海市内水产品中副溶血性弧菌的污染情况及毒力菌株的分布,根据GB/T4789. 2013《食品卫生微生物学检验副溶血性弧菌检验》方法结合聚合酶链式反应及环介导等温扩增技术,从206份水产样品中分离出201株疑似副溶血性弧菌,挑取疑似菌株接种至科玛嘉弧菌显色培养基并获取最大可能数,提取菌株基因组DNA对其进行毒力基因鉴定。从上海芦潮港码头收集71份样品中,有59份样品中分离出副溶血性弧菌,污染量为88.36 MPN/hg。上海市水产市场采样副溶血性弧菌污染率高达91.11%,污染量为1 361.76 MPN/hg。其中,tdh、trh阳性菌株污染率分别为1.6%、1.0%,均分离自虾中。研究表明,上海市售水产品中虾类是总副溶血性弧菌及致病性副溶血性弧菌污染率最高的水产品种类。水产品市场相对于自然环境而言具有更高的污染率和污染量,水产品捕捞后的一系列操作增加了副溶血性弧菌的污染。这些结果为上海市食源性疾病的防控提供了依据。 展开更多
关键词 副溶血性弧菌 最大可能 聚合链式反应 环介导等温扩增
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