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siRNA-LEDGFp52真核表达载体的构建和鉴定
1
作者
赵海生
王一
《眼科新进展》
CAS
2007年第3期184-187,共4页
目的构建晶状体来源的上皮生长因子p52(lens epithelium derived growth factor p52,LEDGFp52)基因RNA干扰(RNA interference,RNAi)的真核细胞表达载体。方法以LEDGFp52为靶基因,以pGensil-1质粒为载体,设计构建重组体,根据GenBank数据...
目的构建晶状体来源的上皮生长因子p52(lens epithelium derived growth factor p52,LEDGFp52)基因RNA干扰(RNA interference,RNAi)的真核细胞表达载体。方法以LEDGFp52为靶基因,以pGensil-1质粒为载体,设计构建重组体,根据GenBank数据库提供的LEDGFp52基因核苷酸序列,按照Tuschl设计原则,选择设计2条带发夹结构的核苷酸序列,克隆到空载体pGensil-1中,转化DH5α菌株,提取质粒,进行限制性内切酶酶切鉴定和测序分析。结果经酶切鉴定筛选出的重组体测序结果与目的序列完全一致,重组载体构建成功,重组质粒转染HeLa细胞48h,Western blotting检测到LEDGFp52蛋白表达的改变。结论利用RNAi技术可成功构建抑制LEDGFp52表达的小干扰RNA重组体。
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关键词
晶状体来源的上皮生长因子p52
RNA干扰
真核表达载体
构建
鉴定
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职称材料
rhLEDGF p52基因原核表达载体的构建、诱导表达及蛋白纯化
被引量：
2
2
作者
赵海生
王一
《眼科新进展》
CAS
2007年第1期25-29,共5页
目的构建rhLEDGFp52基因原核表达载体,获得rhLEDGFp52蛋白。方法利用基因重组技术将rhLEDGFp52基因构建于原核表达载体pET30a(+)中,经酶切、测序鉴定证实构建完全正确后,通过IPTG诱导在大肠杆菌BL21(DE3)中获得表达,经免疫蛋白印迹试验...
目的构建rhLEDGFp52基因原核表达载体,获得rhLEDGFp52蛋白。方法利用基因重组技术将rhLEDGFp52基因构建于原核表达载体pET30a(+)中,经酶切、测序鉴定证实构建完全正确后,通过IPTG诱导在大肠杆菌BL21(DE3)中获得表达,经免疫蛋白印迹试验对rhLEDGFp52进行鉴定并用Ni-NTAHis.Bind.Resin方法进行纯化。结果成功构建rhLEDGFp52基因原核表达载体,在大肠杆菌BL21(DE3)中获得可溶性形式表达,rhLEDGFp52蛋白表达量占菌体蛋白总量的34.63%.WesternBlot结果显示rhLEDGF2蛋白能够特异性与LEDGF-ab结合。Ni-NTAHis.Bind.Resin方法进行纯化后的rhLEDGFp52,最终质量浓度达520mg·L-1,分析其纯度达87.93%.结论成功获得rhLEDGFp52蛋白,这为深入研究其生物学功能奠定了基础。
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关键词
晶状体
上皮
p
52
基因
表达
蛋白纯化
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职称材料
题名
siRNA-LEDGFp52真核表达载体的构建和鉴定
1
作者
赵海生
王一
机构
中国人民解放军第三军医大学附属西南医院眼科
出处
《眼科新进展》
CAS
2007年第3期184-187,共4页
文摘
目的构建晶状体来源的上皮生长因子p52(lens epithelium derived growth factor p52,LEDGFp52)基因RNA干扰(RNA interference,RNAi)的真核细胞表达载体。方法以LEDGFp52为靶基因,以pGensil-1质粒为载体,设计构建重组体,根据GenBank数据库提供的LEDGFp52基因核苷酸序列,按照Tuschl设计原则,选择设计2条带发夹结构的核苷酸序列,克隆到空载体pGensil-1中,转化DH5α菌株,提取质粒,进行限制性内切酶酶切鉴定和测序分析。结果经酶切鉴定筛选出的重组体测序结果与目的序列完全一致,重组载体构建成功,重组质粒转染HeLa细胞48h,Western blotting检测到LEDGFp52蛋白表达的改变。结论利用RNAi技术可成功构建抑制LEDGFp52表达的小干扰RNA重组体。
关键词
晶状体来源的上皮生长因子p52
RNA干扰
真核表达载体
构建
鉴定
Keywords
lens e
p
ithelium derived growth factor
p
52
RNA interference
eukaryotic ex
p
ression vector
construction
identification
分类号
R776 [医药卫生—眼科]
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职称材料
题名
rhLEDGF p52基因原核表达载体的构建、诱导表达及蛋白纯化
被引量：
2
2
作者
赵海生
王一
机构
中国人民解放军第三军医大学附属西南医院眼科
出处
《眼科新进展》
CAS
2007年第1期25-29,共5页
文摘
目的构建rhLEDGFp52基因原核表达载体,获得rhLEDGFp52蛋白。方法利用基因重组技术将rhLEDGFp52基因构建于原核表达载体pET30a(+)中,经酶切、测序鉴定证实构建完全正确后,通过IPTG诱导在大肠杆菌BL21(DE3)中获得表达,经免疫蛋白印迹试验对rhLEDGFp52进行鉴定并用Ni-NTAHis.Bind.Resin方法进行纯化。结果成功构建rhLEDGFp52基因原核表达载体,在大肠杆菌BL21(DE3)中获得可溶性形式表达,rhLEDGFp52蛋白表达量占菌体蛋白总量的34.63%.WesternBlot结果显示rhLEDGF2蛋白能够特异性与LEDGF-ab结合。Ni-NTAHis.Bind.Resin方法进行纯化后的rhLEDGFp52,最终质量浓度达520mg·L-1,分析其纯度达87.93%.结论成功获得rhLEDGFp52蛋白,这为深入研究其生物学功能奠定了基础。
关键词
晶状体
上皮
p
52
基因
表达
蛋白纯化
Keywords
lens e
p
ithelium
11
52
gene
ex
p
ression
p
rotein
p
urification
分类号
R776 [医药卫生—眼科]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
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1
siRNA-LEDGFp52真核表达载体的构建和鉴定
赵海生
王一
《眼科新进展》
CAS
2007
0
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职称材料
2
rhLEDGF p52基因原核表达载体的构建、诱导表达及蛋白纯化
赵海生
王一
《眼科新进展》
CAS
2007
2
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