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Wnt5a作用下人胚胎干细胞定向分化为晶状体小体的差异表达基因分析
被引量：
1
1
作者
陈奕嘉
李金燕
+1 位作者
欧阳帅
罗莉霞
《中华实验眼科杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2020年第10期837-844,共8页
目的探讨人胚胎干细胞(hESCs)定向分化为晶状体小体(LB)过程中非经典Wnt信号通路配体Wnt5a对晶状体发育的作用。方法选取人H9胚胎干细胞系,采用mTeSR培养基进行干细胞培养。“三阶段法”诱导hESCs分化为LB。培养至18 d,将细胞分为对照组...
目的探讨人胚胎干细胞(hESCs)定向分化为晶状体小体(LB)过程中非经典Wnt信号通路配体Wnt5a对晶状体发育的作用。方法选取人H9胚胎干细胞系,采用mTeSR培养基进行干细胞培养。“三阶段法”诱导hESCs分化为LB。培养至18 d,将细胞分为对照组和Wnt5a处理组,其中Wnt5a处理组培养基中添加500 ng/ml Wnt5a。培养至35 d,在倒置显微镜下观察细胞形态变化和LB的大小并提取对照组和Wnt5a处理组的总RNA进行转录组测序(RNA-Sequence)检测,表达差异大于1.5倍且P≤0.05被定义为差异表达基因(DEGs),进行生物信息学分析。结果培养结束时发现,与对照组相比,Wnt5a处理组细胞形成的LB面积明显变大。转录组测序结果显示,与对照组相比,Wnt5a处理组中478个基因表达下调,201个基因表达上调,其中Wnt5a可使晶状体细胞分化及晶状体特异基因的表达上调。生物信息学分析结果显示,Wnt5a主要参与了细胞外基质(ECM)改变的过程,提示在晶状体细胞分化中,Wnt5a可改变ECM;同时,富集结果还显示经Wnt5a处理,上皮-间充质转化过程相关过程受抑制,提示Wnt5a还可抑制晶状体细胞,特别是晶状体上皮细胞的异常分化;此外,Wnt5a还可影响晶状体细胞骨架重塑。结论Wnt5a可能通过上调MAPK/ERK级联信号调整ECM的结构成分,影响晶状体细胞骨架重塑,从而促进晶状体细胞的分化。
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关键词
人胚胎干细胞
晶状体小体
WNT5A
高通量测序
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职称材料
人胚胎干细胞定向分化为晶状体小体过程中晶状体发育相关转录因子的动态变化
被引量：
1
2
作者
韩琛璐
王春筱
+1 位作者
李金燕
罗莉霞
《中华实验眼科杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2018年第7期500-507,共8页
目的探讨人胚胎干细胞（hESC）定向分化为晶状体小体（LB）过程中晶状体发育相关转录因子的表达特点和规律。方法通过＂三阶段法＂体外诱导hESC定向分化为LB。取hESC（D0）和诱导分化不同时间点的细胞，应用高通量测序技术，通过生物信...
目的探讨人胚胎干细胞（hESC）定向分化为晶状体小体（LB）过程中晶状体发育相关转录因子的表达特点和规律。方法通过＂三阶段法＂体外诱导hESC定向分化为LB。取hESC（D0）和诱导分化不同时间点的细胞，应用高通量测序技术，通过生物信息学方法分析晶状体发育相关的转录因子及其亚型的表达变化特点和规律。采用Western blot法和免疫荧光染色技术对相关基因在蛋白水平的表达进行检测。结果光学显微镜下，未分化的hESC呈圆形；分化后0～6 d（D0～D6）的细胞更圆且排列更紧密；D7～D18细胞由圆形逐渐延长变为梭形；D19～D32，形成有三维立体结构的透明结构，即LB。荧光定量PCR结果显示，干细胞标记基因的表达在分化过程显著降低，而晶状体特异性基因的表达明显升高。免疫荧光染色结果显示，LB表达晶状体特异性蛋白α-crystallin和β-crystallin。高通量测序聚类分析结果显示，D0与D32之间的转录因子基因表达谱差异最为显著，而D6和D18之间的差异最小。前基板基因DLX3、DLX5、DLX6、HES1、HES4、OTX2和EYA1在分化第一阶段表达显著升高，随后下降；晶状体特异性基因中SOX2蛋白表达逐渐降低，而后升高，而PAX6蛋白的表达随分化时间延长逐渐增加；晶状体分化基因MAB21L1、CMAF、PROX1及PITX3等在分化早期变化不显著，在分化第三阶段表达明显增加。结论体外定向分化的3个阶段依次对应体内晶状体发育的前基板外胚层（PPE）阶段、前晶状体外胚层（PLE）和晶状体外胚层（LE）阶段、晶状体泡（LV）和晶状体细胞分化阶段，提示hESC体外定向分化过程很好地模拟了体内晶状体的胚胎发育过程，为研究晶状体发育和先天性晶状体疾病的分子机制提供了理想的模型。
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关键词
人胚胎干细胞
晶状体小体
转录因子
高通量测序
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职称材料
晶状体类器官培养技术的发展与挑战
被引量：
1
3
作者
傅秋黎
姚克
《中华实验眼科杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2022年第5期385-388,共4页
类器官培养技术是目前干细胞领域的研究热点,即在体外培养与体内器官高度相似的,具有立体结构与生理功能的器官样细胞群。目前,利用人源性多能干细胞培养人晶状体类器官,即晶状体小体的构建已经实现并在不断地演进,双凸透明、具备天然...
类器官培养技术是目前干细胞领域的研究热点,即在体外培养与体内器官高度相似的,具有立体结构与生理功能的器官样细胞群。目前,利用人源性多能干细胞培养人晶状体类器官,即晶状体小体的构建已经实现并在不断地演进,双凸透明、具备天然晶状体所有组分以及屈光性能的晶状体类器官作为一种可靠的人晶状体体外模型,在研究晶状体发育机制上优势显著,在此基础上建立的年龄相关性白内障和先天性白内障的体外疾病模型,更为白内障的病理机制研究、潜在药物筛选带来了极大的便利性与可靠性,在白内障基础研究乃至于临床转化上具有广阔的前景。
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关键词
晶状体小体
晶状体
类器官
干细胞
白内障
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职称材料
题名
Wnt5a作用下人胚胎干细胞定向分化为晶状体小体的差异表达基因分析
被引量：
1
1
作者
陈奕嘉
李金燕
欧阳帅
罗莉霞
机构
中山大学中山眼科中心眼科学国家重点实验室
出处
《中华实验眼科杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2020年第10期837-844,共8页
基金
广东省自然科学基金项目(2019A1515011452)。
文摘
目的探讨人胚胎干细胞(hESCs)定向分化为晶状体小体(LB)过程中非经典Wnt信号通路配体Wnt5a对晶状体发育的作用。方法选取人H9胚胎干细胞系,采用mTeSR培养基进行干细胞培养。“三阶段法”诱导hESCs分化为LB。培养至18 d,将细胞分为对照组和Wnt5a处理组,其中Wnt5a处理组培养基中添加500 ng/ml Wnt5a。培养至35 d,在倒置显微镜下观察细胞形态变化和LB的大小并提取对照组和Wnt5a处理组的总RNA进行转录组测序(RNA-Sequence)检测,表达差异大于1.5倍且P≤0.05被定义为差异表达基因(DEGs),进行生物信息学分析。结果培养结束时发现,与对照组相比,Wnt5a处理组细胞形成的LB面积明显变大。转录组测序结果显示,与对照组相比,Wnt5a处理组中478个基因表达下调,201个基因表达上调,其中Wnt5a可使晶状体细胞分化及晶状体特异基因的表达上调。生物信息学分析结果显示,Wnt5a主要参与了细胞外基质(ECM)改变的过程,提示在晶状体细胞分化中,Wnt5a可改变ECM;同时,富集结果还显示经Wnt5a处理,上皮-间充质转化过程相关过程受抑制,提示Wnt5a还可抑制晶状体细胞,特别是晶状体上皮细胞的异常分化;此外,Wnt5a还可影响晶状体细胞骨架重塑。结论Wnt5a可能通过上调MAPK/ERK级联信号调整ECM的结构成分,影响晶状体细胞骨架重塑,从而促进晶状体细胞的分化。
关键词
人胚胎干细胞
晶状体小体
WNT5A
高通量测序
Keywords
Human embryonic stem cell
Lentoid body
Wnt5a
High throughput RNA sequencing
分类号
R771 [医药卫生—眼科]
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职称材料
题名
人胚胎干细胞定向分化为晶状体小体过程中晶状体发育相关转录因子的动态变化
被引量：
1
2
作者
韩琛璐
王春筱
李金燕
罗莉霞
机构
中山大学中山眼科中心眼科学国家重点实验室
出处
《中华实验眼科杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2018年第7期500-507,共8页
基金
国家自然科学基金项目（81370994、81770905）
文摘
目的探讨人胚胎干细胞（hESC）定向分化为晶状体小体（LB）过程中晶状体发育相关转录因子的表达特点和规律。方法通过＂三阶段法＂体外诱导hESC定向分化为LB。取hESC（D0）和诱导分化不同时间点的细胞，应用高通量测序技术，通过生物信息学方法分析晶状体发育相关的转录因子及其亚型的表达变化特点和规律。采用Western blot法和免疫荧光染色技术对相关基因在蛋白水平的表达进行检测。结果光学显微镜下，未分化的hESC呈圆形；分化后0～6 d（D0～D6）的细胞更圆且排列更紧密；D7～D18细胞由圆形逐渐延长变为梭形；D19～D32，形成有三维立体结构的透明结构，即LB。荧光定量PCR结果显示，干细胞标记基因的表达在分化过程显著降低，而晶状体特异性基因的表达明显升高。免疫荧光染色结果显示，LB表达晶状体特异性蛋白α-crystallin和β-crystallin。高通量测序聚类分析结果显示，D0与D32之间的转录因子基因表达谱差异最为显著，而D6和D18之间的差异最小。前基板基因DLX3、DLX5、DLX6、HES1、HES4、OTX2和EYA1在分化第一阶段表达显著升高，随后下降；晶状体特异性基因中SOX2蛋白表达逐渐降低，而后升高，而PAX6蛋白的表达随分化时间延长逐渐增加；晶状体分化基因MAB21L1、CMAF、PROX1及PITX3等在分化早期变化不显著，在分化第三阶段表达明显增加。结论体外定向分化的3个阶段依次对应体内晶状体发育的前基板外胚层（PPE）阶段、前晶状体外胚层（PLE）和晶状体外胚层（LE）阶段、晶状体泡（LV）和晶状体细胞分化阶段，提示hESC体外定向分化过程很好地模拟了体内晶状体的胚胎发育过程，为研究晶状体发育和先天性晶状体疾病的分子机制提供了理想的模型。
关键词
人胚胎干细胞
晶状体小体
转录因子
高通量测序
Keywords
Human embryonic stem cell
Lentoid body
Transcription factor
High throughput RNA sequencing
分类号
R776 [医药卫生—眼科]
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职称材料
题名
晶状体类器官培养技术的发展与挑战
被引量：
1
3
作者
傅秋黎
姚克
机构
浙江大学眼科医院浙江大学医学院附属第二医院眼科中心
出处
《中华实验眼科杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2022年第5期385-388,共4页
基金
国家自然科学基金项目(81670833、81870641)
浙江省重点研发项目(2019C03091)
中央高校基本科研业务费与专项资金资助基础研究基金项目(2019QNA7026)。
文摘
类器官培养技术是目前干细胞领域的研究热点,即在体外培养与体内器官高度相似的,具有立体结构与生理功能的器官样细胞群。目前,利用人源性多能干细胞培养人晶状体类器官,即晶状体小体的构建已经实现并在不断地演进,双凸透明、具备天然晶状体所有组分以及屈光性能的晶状体类器官作为一种可靠的人晶状体体外模型,在研究晶状体发育机制上优势显著,在此基础上建立的年龄相关性白内障和先天性白内障的体外疾病模型,更为白内障的病理机制研究、潜在药物筛选带来了极大的便利性与可靠性,在白内障基础研究乃至于临床转化上具有广阔的前景。
关键词
晶状体小体
晶状体
类器官
干细胞
白内障
Keywords
Lentoid bodies
Lens
Organoids
Stem cells
Cataract
分类号
R318.1 [医药卫生—生物医学工程]
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作者
出处
发文年
被引量
操作
1
Wnt5a作用下人胚胎干细胞定向分化为晶状体小体的差异表达基因分析
陈奕嘉
李金燕
欧阳帅
罗莉霞
《中华实验眼科杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2020
1
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职称材料
2
人胚胎干细胞定向分化为晶状体小体过程中晶状体发育相关转录因子的动态变化
韩琛璐
王春筱
李金燕
罗莉霞
《中华实验眼科杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2018
1
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职称材料
3
晶状体类器官培养技术的发展与挑战
傅秋黎
姚克
《中华实验眼科杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2022
1
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