目的:制备特异性识别晚期氧化蛋白产物(Advanced oxidation protein products,AOPP)的多克隆抗体,为研究AOPP的致病机理及与临床病情相关性提供有效工具。方法:用次氯酸氧化家兔血清白蛋白以获得AOPP-RSA,以此为免疫原免疫家兔,亲和层...目的:制备特异性识别晚期氧化蛋白产物(Advanced oxidation protein products,AOPP)的多克隆抗体,为研究AOPP的致病机理及与临床病情相关性提供有效工具。方法:用次氯酸氧化家兔血清白蛋白以获得AOPP-RSA,以此为免疫原免疫家兔,亲和层析纯化免疫血清,ELISA鉴定多克隆抗体的效价及特异性,Western blot检测慢性肾脏病(chronic kidney disease,CKD)患者血浆中AOPP,免疫组织化学方法检测肾组织中AOPP分布与定位。结果:获得效价达10-6的抗AOPP免疫血清,纯化抗体可特异地与不同种属来源的氧化修饰白蛋白结合,而与正常白蛋白及糖基化蛋白终产物无交叉反应。该抗体可识别人血浆中的AOPP,可特异地与大鼠CKD模型及各种炎症性CKD患者肾组织成份反应。结论:成功制备了可与不同种属AOPP结合的特异性多克隆抗体,并首次用于检测存在于CKD患者血浆、肾组织及模型动物肾组织中的AOPP,为深入研究AOPP的病理作用及其在组织定位提供了有效工具。展开更多
目的研究p38有丝分裂素激活蛋白激酶(p38 mitogen-activated protein kinase,MAPK)在晚期氧化蛋白产物(advanced oxidation protein products,AOPP)诱导的鼠血管平滑肌细胞单核细胞趋化蛋白-1表达中的作用。方法使用200和400μmol/LAOP...目的研究p38有丝分裂素激活蛋白激酶(p38 mitogen-activated protein kinase,MAPK)在晚期氧化蛋白产物(advanced oxidation protein products,AOPP)诱导的鼠血管平滑肌细胞单核细胞趋化蛋白-1表达中的作用。方法使用200和400μmol/LAOPP分别以不同时间刺激培养的鼠血管平滑肌细胞,在阻断实验中加入特异性p38MAPK阻断剂SB203580阻断p38MAPK信号转导通路。采用免疫印迹法(Western blot)检测细胞中MCP-1和磷酸化p38MAPK的表达情况。结果用特异性p38MAPK阻断剂SB203580预处理后,400μmol/LAOPP刺激4h的鼠血管平滑肌细胞MCP-1表达(平均灰度值)从42.00±0.95降至9.35±1.35受到显著抑制(P<0.01)。结论①p38MAPK信号转导途径参与了AOPP诱导的鼠血管平滑肌细胞MCP-1的表达。②晚期氧化蛋白产物促进平滑肌细胞MCP-1 mRNA和蛋白表达可能是其致动脉粥样硬化机制之一。展开更多
目的晚期氧化蛋白质终产物(Advanced Oxidation Protein Products,AOPPs)是一种新型炎症介质,参与多种疾病的发生、发展。本研究探讨AOPPs对老年大鼠骨密度和骨微结构的影响。方法 70只18月龄雄性SD大鼠随机分为A、B、C、D、E5组,分别...目的晚期氧化蛋白质终产物(Advanced Oxidation Protein Products,AOPPs)是一种新型炎症介质,参与多种疾病的发生、发展。本研究探讨AOPPs对老年大鼠骨密度和骨微结构的影响。方法 70只18月龄雄性SD大鼠随机分为A、B、C、D、E5组,分别给予以下处理:A组,PBS液,50 mg/kg·d(静脉注射);B组,大鼠血清白蛋白溶液(RSA)50 mg/kg·d(静脉注射);C组,AOPPs修饰的RSA溶液(AOPPs-RSA)50mg/kg·d(静脉注射);D组,AOPPs-RSA 50mg/kg.d(静脉注射)+apocynin溶液(NADPH氧化酶抑制剂)100mg/kg·d(经饮水摄入);E组,apocynin 100mg/kg·d溶液(经饮水摄入)。在干预8周和16周后取动脉血、双侧胫骨、股骨和腰4(L4)椎体标本。检测血浆AOPPs浓度;测量右侧股骨及L4椎体骨密度;显微CT分析左侧胫骨及L4椎体骨微结构相关指标,包括骨小梁体积分数(BV/TV,%)、平均骨小梁厚度(Tb.Th,mm)、平均骨小梁数目(Tb.N,1/mm)、骨小梁分离度(Tb.Sp,mm)、骨小梁结构异性程度(Degree of Anisotropy,DA)及结构模型指数(Structure Model Index,SMI)。结果相对PBS组、RSA组,2个时间点下AOPPs-RSA组老年大鼠血浆AOPPs含量明显均升高;L4椎体骨密度降低,而股骨骨密度变化不大;胫骨及L4椎体BV/TV、Tb.Th减小而Tb.Sp增大,Tb.N、DA、SMI无明显变化。AOPPs-RSA所致以上效应均能被apocynin阻断。结论 AOPPs能引起老年大鼠骨量减少、骨微结构退行性改变,促进骨退化。本研究为探索老年性骨质疏松症的发生、发展机制提供了新的思路。展开更多
文摘目的研究p38有丝分裂素激活蛋白激酶(p38 mitogen-activated protein kinase,MAPK)在晚期氧化蛋白产物(advanced oxidation protein products,AOPP)诱导的鼠血管平滑肌细胞单核细胞趋化蛋白-1表达中的作用。方法使用200和400μmol/LAOPP分别以不同时间刺激培养的鼠血管平滑肌细胞,在阻断实验中加入特异性p38MAPK阻断剂SB203580阻断p38MAPK信号转导通路。采用免疫印迹法(Western blot)检测细胞中MCP-1和磷酸化p38MAPK的表达情况。结果用特异性p38MAPK阻断剂SB203580预处理后,400μmol/LAOPP刺激4h的鼠血管平滑肌细胞MCP-1表达(平均灰度值)从42.00±0.95降至9.35±1.35受到显著抑制(P<0.01)。结论①p38MAPK信号转导途径参与了AOPP诱导的鼠血管平滑肌细胞MCP-1的表达。②晚期氧化蛋白产物促进平滑肌细胞MCP-1 mRNA和蛋白表达可能是其致动脉粥样硬化机制之一。
文摘目的晚期氧化蛋白质终产物(Advanced Oxidation Protein Products,AOPPs)是一种新型炎症介质,参与多种疾病的发生、发展。本研究探讨AOPPs对老年大鼠骨密度和骨微结构的影响。方法 70只18月龄雄性SD大鼠随机分为A、B、C、D、E5组,分别给予以下处理:A组,PBS液,50 mg/kg·d(静脉注射);B组,大鼠血清白蛋白溶液(RSA)50 mg/kg·d(静脉注射);C组,AOPPs修饰的RSA溶液(AOPPs-RSA)50mg/kg·d(静脉注射);D组,AOPPs-RSA 50mg/kg.d(静脉注射)+apocynin溶液(NADPH氧化酶抑制剂)100mg/kg·d(经饮水摄入);E组,apocynin 100mg/kg·d溶液(经饮水摄入)。在干预8周和16周后取动脉血、双侧胫骨、股骨和腰4(L4)椎体标本。检测血浆AOPPs浓度;测量右侧股骨及L4椎体骨密度;显微CT分析左侧胫骨及L4椎体骨微结构相关指标,包括骨小梁体积分数(BV/TV,%)、平均骨小梁厚度(Tb.Th,mm)、平均骨小梁数目(Tb.N,1/mm)、骨小梁分离度(Tb.Sp,mm)、骨小梁结构异性程度(Degree of Anisotropy,DA)及结构模型指数(Structure Model Index,SMI)。结果相对PBS组、RSA组,2个时间点下AOPPs-RSA组老年大鼠血浆AOPPs含量明显均升高;L4椎体骨密度降低,而股骨骨密度变化不大;胫骨及L4椎体BV/TV、Tb.Th减小而Tb.Sp增大,Tb.N、DA、SMI无明显变化。AOPPs-RSA所致以上效应均能被apocynin阻断。结论 AOPPs能引起老年大鼠骨量减少、骨微结构退行性改变,促进骨退化。本研究为探索老年性骨质疏松症的发生、发展机制提供了新的思路。
