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淡色库蚊抗药性相关胰蛋白酶基因稳定转染细胞系的建立与表达鉴定
被引量：
1
1
作者
公茂庆
顾燕
+4 位作者
胡小邦
孙艳
马磊
李秀兰
朱昌亮
《中国人兽共患病杂志》
CSCD
北大核心
2005年第6期454-457,共4页
目的为进一步研究胰蛋白酶基因与抗药性的关系。方法采用PCR方法,以淡色库蚊抗性品系cDNA文库为模板,扩增出抗药性品系高表达的胰蛋白酶(trypsin)基因编码区。T/A克隆测序鉴定后,亚克隆到昆虫细胞表达载体pIE13,构建重组昆虫细胞表达载...
目的为进一步研究胰蛋白酶基因与抗药性的关系。方法采用PCR方法,以淡色库蚊抗性品系cDNA文库为模板,扩增出抗药性品系高表达的胰蛋白酶(trypsin)基因编码区。T/A克隆测序鉴定后,亚克隆到昆虫细胞表达载体pIE13,构建重组昆虫细胞表达载体pIE13/try。经酶切和PCR鉴定后,与带有筛选标记的pIE1neo质粒共转染蚊虫细胞C6/36,通过G418选择培养,建立稳定转染细胞。用RTPCR、Westernblotting鉴定胰蛋白酶基因的转录表达。结果酶切和PCR鉴定表明,成功构建昆虫细胞表达载体pIE13/try;证实胰蛋白酶基因已转入C6/36细胞,并建立稳定转染细胞系,成功地表达目的基因。结论稳定转染细胞系的建立和基因表达为进一步研究胰蛋白酶与抗药性的关系提供了良好的实验基础。
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关键词
胰蛋白酶基因
昆虫细胞表达载体
抗药性
基因转染
C6/36
细胞
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职称材料
猪轮状病毒VP4、VP7基因PFastbac1重组载体的构建及转染
2
作者
肖长峰
卢永红
易建中
《上海农业学报》
CSCD
北大核心
2013年第5期23-27,共5页
从患病小猪粪便中提取病毒RNA,用RT-PCR方法扩增出猪轮状病毒(Porcine rotavirus,PRV)的核衣壳蛋白VP4、VP7基因,将目的基因片段克隆到昆虫表达载体PFastbacl;然后将重组载体转化入DH_(10)Bacl感受态细胞中转座重组后,纯化该重组杆状病...
从患病小猪粪便中提取病毒RNA,用RT-PCR方法扩增出猪轮状病毒(Porcine rotavirus,PRV)的核衣壳蛋白VP4、VP7基因,将目的基因片段克隆到昆虫表达载体PFastbacl;然后将重组载体转化入DH_(10)Bacl感受态细胞中转座重组后,纯化该重组杆状病毒并转染昆虫细胞sf9。结果表明:成功获得了含有目的基因的杆状病毒的阳性重组子,并将重组病毒成功转染sf9细胞。
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关键词
猪轮状病毒
核衣壳蛋白
昆虫细胞表达载体
转染
sf9
昆虫
细胞
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职称材料
题名
淡色库蚊抗药性相关胰蛋白酶基因稳定转染细胞系的建立与表达鉴定
被引量：
1
1
作者
公茂庆
顾燕
胡小邦
孙艳
马磊
李秀兰
朱昌亮
机构
南京医科大学病原生物学系
出处
《中国人兽共患病杂志》
CSCD
北大核心
2005年第6期454-457,共4页
基金
国家自然科学基金资助项目(No.30170835)
江苏省高校自然科学基金资助项目(03KJB180082)
文摘
目的为进一步研究胰蛋白酶基因与抗药性的关系。方法采用PCR方法,以淡色库蚊抗性品系cDNA文库为模板,扩增出抗药性品系高表达的胰蛋白酶(trypsin)基因编码区。T/A克隆测序鉴定后,亚克隆到昆虫细胞表达载体pIE13,构建重组昆虫细胞表达载体pIE13/try。经酶切和PCR鉴定后,与带有筛选标记的pIE1neo质粒共转染蚊虫细胞C6/36,通过G418选择培养,建立稳定转染细胞。用RTPCR、Westernblotting鉴定胰蛋白酶基因的转录表达。结果酶切和PCR鉴定表明,成功构建昆虫细胞表达载体pIE13/try;证实胰蛋白酶基因已转入C6/36细胞,并建立稳定转染细胞系,成功地表达目的基因。结论稳定转染细胞系的建立和基因表达为进一步研究胰蛋白酶与抗药性的关系提供了良好的实验基础。
关键词
胰蛋白酶基因
昆虫细胞表达载体
抗药性
基因转染
C6/36
细胞
Keywords
trypsin gene
expression vector for insect cell
insecticide resistance
gene transfection
C6/36 cell
分类号
R384.1 [医药卫生—医学寄生虫学]
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职称材料
题名
猪轮状病毒VP4、VP7基因PFastbac1重组载体的构建及转染
2
作者
肖长峰
卢永红
易建中
机构
上海市农业科学院畜牧兽医研究所
出处
《上海农业学报》
CSCD
北大核心
2013年第5期23-27,共5页
基金
上海市浦江人才计划(PJ[20])资助
文摘
从患病小猪粪便中提取病毒RNA,用RT-PCR方法扩增出猪轮状病毒(Porcine rotavirus,PRV)的核衣壳蛋白VP4、VP7基因,将目的基因片段克隆到昆虫表达载体PFastbacl;然后将重组载体转化入DH_(10)Bacl感受态细胞中转座重组后,纯化该重组杆状病毒并转染昆虫细胞sf9。结果表明:成功获得了含有目的基因的杆状病毒的阳性重组子,并将重组病毒成功转染sf9细胞。
关键词
猪轮状病毒
核衣壳蛋白
昆虫细胞表达载体
转染
sf9
昆虫
细胞
Keywords
Porcine rotavirus
Nucleocapsid protein
Insect cell ,expression vector
Transfection
In-sect cell sf9
分类号
S852.65 [农业科学—基础兽医学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
淡色库蚊抗药性相关胰蛋白酶基因稳定转染细胞系的建立与表达鉴定
公茂庆
顾燕
胡小邦
孙艳
马磊
李秀兰
朱昌亮
《中国人兽共患病杂志》
CSCD
北大核心
2005
1
在线阅读
下载PDF
职称材料
2
猪轮状病毒VP4、VP7基因PFastbac1重组载体的构建及转染
肖长峰
卢永红
易建中
《上海农业学报》
CSCD
北大核心
2013
0
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职称材料
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