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基于杆状病毒-昆虫细胞表达系统的猪脑心肌炎病毒样颗粒的表达及鉴定: 1; 作者王运航景伟 +3 位作者穆素雨孙世琪郭慧琛白满元《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第10期4571-4578,共8页; 脑心肌炎(encephalomyocarditis)是由脑心肌炎病毒(encephalomyocarditis virus,EMCV)引起的以猪的脑炎、心肌炎为主要特征的病毒性人畜共患病,可感染多种哺乳动物,目前国内尚无有效疫苗。本研究旨在开发一款安全有效的疫苗以防控该病... 展开更多; 关键词杆状病毒-昆虫细胞表达系统脑心肌炎病毒病毒样颗粒; 在线阅读下载PDF 职称材料

猫传染性腹膜炎病毒N蛋白在昆虫细胞-杆状病毒系统中的表达与鉴定被引量：10: 2; 作者李双星刘业兵 +7 位作者柳方远吉婧杜吉革李倩琳朱真李启红陈小云印春生《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2021年第1期273-279,共7页; 本研究旨在利用昆虫细胞-杆状病毒表达系统表达猫传染性腹膜炎病毒(Feline infectious peritonitis virus,FIPV)N蛋白,并制备抗该蛋白的多克隆抗体,用于FIPV临床抗原/抗体诊断及N蛋白功能研究。参考GenBank中FIPV的N基因序列,选择FIPV毒... 展开更多; 关键词猫传染性腹膜炎病毒(FIPV) 核衣壳蛋白昆虫细胞-杆状病毒表达系统; 在线阅读下载PDF 职称材料

经密码子优化的猪Ficolin α在昆虫细胞的表达及其体外抗病毒作用初步分析: 3; 作者李兰乔绪稳 +3 位作者张元鹏陈瑾郑其升侯继波《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第12期2358-2364,共7页; 利用Bac-to-Bac昆虫杆状病毒表达系统表达具有天然构象的猪Ficolinα。首先构建重组穿梭质粒rBacmid-Ficolinα,转染sf9细胞获得重组杆状病毒rBV-Ficolinα;通过Image J软件对优化表达的Western blot图片进行灰度分析确定较佳表达条件;... 展开更多; 关键词猪Ficolin 杆状病毒-昆虫细胞表达系统抗病毒作用; 在线阅读下载PDF 职称材料

蜂王浆主蛋白2在昆虫细胞-杆状病毒系统中的表达与鉴定: 4; 作者段香媛武江利 +1 位作者魏俏红冯毛《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2021年第10期3779-3786,共8页; 本研究旨在利用昆虫细胞-杆状病毒表达系统表达蜂王浆主蛋白2(MRJP2),为后续MRJP2功能的深入研究提供材料。根据GenBank中意大利蜜蜂(Apis mellifera L.)MRJP2基因序列,经PCR扩增、克隆至真核表达载体pFastBac1,构建重组杆状病毒质粒MRJ... 展开更多; 关键词蜂王浆主蛋白2(MRJP2) 昆虫细胞-杆状病毒表达系统蛋白纯化; 在线阅读下载PDF 职称材料

禾谷镰孢菌β-1,3-葡聚糖合成酶催化亚基GLS2异源表达体系的建立: 5; 作者延扬帆张峰《农药学学报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第3期611-620,共10页; 本研究旨在利用草地贪夜蛾Spodoptera frugiperda昆虫细胞Sf9-杆状病毒表达系统筛选禾谷镰孢菌Fusarium graminearum β-1,3-葡聚糖合成酶催化亚基GLS2在昆虫细胞中的异源表达载体和分离纯化所用的去污剂,为后续研究该蛋白与药剂的结合... 展开更多; 关键词禾谷镰孢菌 β-1 3-葡聚糖合成酶催化亚基昆虫细胞表达系统去污剂; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名基于杆状病毒-昆虫细胞表达系统的猪脑心肌炎病毒样颗粒的表达及鉴定: 1; 作者王运航景伟穆素雨孙世琪郭慧琛白满元; 机构中国农业科学院兰州兽医研究所兰州大学动物医学与生物安全学院动物疫病防控全国重点实验室榆林学院生命科学学院; 出处《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第10期4571-4578,共8页; 基金国家重点研发计划(2022YFD1800603,2021YFD1800300) 国家自然科学基金(32072859,32072847,32002272) +1 种基金所长基金:《口蹄疫病毒持续性感染牛咽上皮细胞遗传变异的机制研究》LVRI-SZJJ-202107。; 文摘脑心肌炎(encephalomyocarditis)是由脑心肌炎病毒(encephalomyocarditis virus,EMCV)引起的以猪的脑炎、心肌炎为主要特征的病毒性人畜共患病,可感染多种哺乳动物,目前国内尚无有效疫苗。本研究旨在开发一款安全有效的疫苗以防控该病。采用P1、3CD共表达的构建策略,利用杆状病毒-昆虫细胞表达系统获得EMCV病毒样颗粒(virus-like particals,VLPs)并将其免疫小鼠,初步评价其在小鼠体内的免疫应答效果。结果显示,免疫组小鼠特异性抗体滴度达到1∶192以上,中和抗体滴度达到1∶64以上,且与ISA206佐剂混合使用可诱导机体产生更高的抗体水平。IL-4、IFN-γ、IL-5、TNF-α细胞因子水平均可达到20 pg·mL^(-1),且明显高于PBS组。综上,本研究获得的EMCV病毒样颗粒疫苗可以诱导机体产生良好的细胞免疫和体液免疫应答,还能诱导炎症细胞因子的产生,有助于激发机体的免疫反应,增强疫苗的保护效果,为EMCV的防控提供了理论依据和技术储备。; 关键词杆状病毒-昆虫细胞表达系统脑心肌炎病毒病毒样颗粒; Keywords baculovirus-insect cell expression system encephalomyocarditis virus virus-like particles; 分类号 S852.65 [农业科学—基础兽医学]; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名猫传染性腹膜炎病毒N蛋白在昆虫细胞-杆状病毒系统中的表达与鉴定被引量：10: 2; 作者李双星刘业兵柳方远吉婧杜吉革李倩琳朱真李启红陈小云印春生; 机构中国兽医药品监察所青岛农业大学; 出处《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2021年第1期273-279,共7页; 基金国家重点研发计划“畜禽重大疫病防控与高效安全养殖综合技术研发”(2016YFD0501004)。; 文摘本研究旨在利用昆虫细胞-杆状病毒表达系统表达猫传染性腹膜炎病毒(Feline infectious peritonitis virus,FIPV)N蛋白,并制备抗该蛋白的多克隆抗体,用于FIPV临床抗原/抗体诊断及N蛋白功能研究。参考GenBank中FIPV的N基因序列,选择FIPV毒株N基因(登录号:KC461235.1),并对该N基因进行密码子优化、基因合成,酶切后将N基因连接至pFastBac1载体,转化大肠杆菌DH5α感受态细胞,经氨苄西林抗性筛选阳性克隆,提取质粒经酶切及测序鉴定正确后,转化大肠杆菌DH10Bac感受态细胞,经蓝白斑筛选及PCR鉴定后,最终成功构建重组杆状病毒质粒Bacmid-N,转染Sf9细胞包装杆状病毒,于28℃温箱培养4 d后收集感染Sf9细胞上清,并通过镍离子亲和层析纯化获得重组N蛋白。经SDS-PAGE及Western blotting鉴定结果表明,本研究成功利用昆虫细胞-杆状病毒表达系统表达出大小约为51 ku的FIPV重组N蛋白。将该蛋白与弗氏佐剂按一定比例混合后,免疫6周龄BALB/c小鼠。用间接ELISA方法检测小鼠血清抗体效价可达1∶102400;利用Western blotting和间接免疫荧光试验对N蛋白多克隆抗体进行检测分析,结果表明,真核表达的重组蛋白免疫原性良好,多克隆抗体具有良好的反应原性,可特异识别FIPV感染细胞。本研究为FIPV抗原/抗体诊断试剂盒的研发奠定了基础。; 关键词猫传染性腹膜炎病毒(FIPV) 核衣壳蛋白昆虫细胞-杆状病毒表达系统; Keywords Feline infectious peritonitis virus(FIPV) nucleocapsid protein insect cell-baculovirus expression system; 分类号 S852.65 [农业科学—基础兽医学]; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名经密码子优化的猪Ficolin α在昆虫细胞的表达及其体外抗病毒作用初步分析: 3; 作者李兰乔绪稳张元鹏陈瑾郑其升侯继波; 机构江苏省农业科学院动物免疫工程研究所江苏省动物重要疫病与人兽共患病防控协同创新中心; 出处《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第12期2358-2364,共7页; 基金农业部公益性行业(农业)科研专项经费项目(201303046); 文摘利用Bac-to-Bac昆虫杆状病毒表达系统表达具有天然构象的猪Ficolinα。首先构建重组穿梭质粒rBacmid-Ficolinα,转染sf9细胞获得重组杆状病毒rBV-Ficolinα;通过Image J软件对优化表达的Western blot图片进行灰度分析确定较佳表达条件;纯化目的蛋白质后,进一步评价其体外抗病毒活性。Western blot结果显示以7.5MOI接种量感染的sf9细胞在96h时获得了较高的表达,同时获得的重组猪Ficolinα具有抗猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)活性。猪Ficolinα在sf9昆虫细胞中获得成功表达,且具有良好的抗PRRSV活性。本研究可以为猪Ficolinα的抗病毒活性及作用机制研究提供物质基础。; 关键词猪Ficolin 杆状病毒-昆虫细胞表达系统抗病毒作用; Keywords porcine Ficolin baculovirus-insect cell system antiviral activity; 分类号 S852.42 [农业科学—基础兽医学]; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名蜂王浆主蛋白2在昆虫细胞-杆状病毒系统中的表达与鉴定: 4; 作者段香媛武江利魏俏红冯毛; 机构中国农业科学院蜜蜂研究所; 出处《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2021年第10期3779-3786,共8页; 基金国家现代农业产业技术体系(蜜蜂)(CARS-45) 中国农业科学院科技创新工程(CAAS-ASTIP-2015-IAR)。; 文摘本研究旨在利用昆虫细胞-杆状病毒表达系统表达蜂王浆主蛋白2(MRJP2),为后续MRJP2功能的深入研究提供材料。根据GenBank中意大利蜜蜂(Apis mellifera L.)MRJP2基因序列,经PCR扩增、克隆至真核表达载体pFastBac1,构建重组杆状病毒质粒MRJP2-Bacmid并转染至Sf9昆虫细胞,以P2代杆状病毒感染Sf9细胞进行诱导表达,利用层析柱和离子交换柱对表达产物进行纯化,并通过SDS-PAGE、Western blotting及四极杆静电场轨道阱高分辨质谱仪(Q Exactive)对目的蛋白进行分析验证。结果显示,本试验成功构建杆状病毒质粒MRJP2-Bacmid,转染至Sf9昆虫细胞并获得表达产物。SDS-PAGE和Western blotting验证结果表明,本研究成功利用昆虫细胞-杆状病毒表达系统表达出大小约为52 ku的MRJP2重组蛋白,且纯度较高;质谱分析结果显示,该重组蛋白匹配到蜜蜂蛋白质数据库中MRJP2的特异性肽段为39个,序列覆盖率为61%,且与MRJP2的匹配得分最高,进一步确认该重组蛋白为MRJP2。本研究利用昆虫细胞-杆状病毒表达系统成功表达出MRJP2,为后续该蛋白生物学功能的深入研究奠定了基础。; 关键词蜂王浆主蛋白2(MRJP2) 昆虫细胞-杆状病毒表达系统蛋白纯化; Keywords major royal jelly protein 2(MRJP2) insect cell-baculovirus expression system protein purification; 分类号 S896.3 [农业科学—特种经济动物饲养]; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名禾谷镰孢菌β-1,3-葡聚糖合成酶催化亚基GLS2异源表达体系的建立: 5; 作者延扬帆张峰; 机构南京农业大学植物保护学院; 出处《农药学学报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第3期611-620,共10页; 基金国家重点研发计划(2022YFD1700200) 江苏省六大人才高峰高层次人才项目(NY-035) 教育部霍英东教育基金会高等学校青年教师基金(161022)。; 文摘本研究旨在利用草地贪夜蛾Spodoptera frugiperda昆虫细胞Sf9-杆状病毒表达系统筛选禾谷镰孢菌Fusarium graminearum β-1,3-葡聚糖合成酶催化亚基GLS2在昆虫细胞中的异源表达载体和分离纯化所用的去污剂,为后续研究该蛋白与药剂的结合模型提供基础。通过对杆状病毒表达质粒pFastBac进行设计和改造、利用同源重组的方法构建质粒、使用昆虫细胞表达系统对重组蛋白进行异源表达、筛选适合提取目的蛋白的去污剂等方法,得到适合禾谷镰孢菌β-1,3-葡聚糖合成酶催化亚基GLS2异源表达的载体和分离目的蛋白的方法。结果表明,载体pFastBac-GP67-8×His-GFP-TEV-FgGLS2、pFastBac-HA-8×His-GFP-TEV-FgGLS2、pFastBacGP67-6×His-2×Strep-TEV-FgGLS2和pFastBac-FgRHO-TEV-8×His均可在草地贪夜蛾昆虫细胞Sf9表达系统中进行表达,其中:GP67-8×His-GFP-TEV-FgGLS2融合蛋白可以用去污剂十二烷基二甲胺氧化胺(dodecyldimethylamine oxide,DDAO)从细胞膜上分离,HA-8×His-GFPTEV-FgGLS2融合蛋白可以用去污剂十二烷基-β-D-麦芽糖苷(n-dodecyl-β-maltoside, DDM)、十烷基-β-D-麦芽糖苷(n-decyl-β-maltoside, DM)或DDAO从细胞膜上分离,GP67-6×His-2×Strep-TEV-FgGLS2融合蛋白可以用去污剂DM或DDAO从细胞膜上分离。本研究首次成功地在草地贪夜蛾昆虫细胞Sf9表达系统中表达了β-1,3-葡聚糖合成酶催化亚基GLS2,FgRHO蛋白可促进FgGLS2的稳定表达,并筛选到适合FgGLS2提取的去污剂DDAO。; 关键词禾谷镰孢菌 β-1 3-葡聚糖合成酶催化亚基昆虫细胞表达系统去污剂; Keywords Fusarium graminearum β-1,3-glucan synthase GLS2 insect cell expression detergents; 分类号 S435.121.45 [农业科学—农业昆虫与害虫防治]; 在线阅读下载PDF 职称材料

	题名	作者	出处	发文年	被引量	操作
1	基于杆状病毒-昆虫细胞表达系统的猪脑心肌炎病毒样颗粒的表达及鉴定	王运航景伟穆素雨孙世琪郭慧琛白满元	《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心	2024	0	在线阅读下载PDF 职称材料
2	猫传染性腹膜炎病毒N蛋白在昆虫细胞-杆状病毒系统中的表达与鉴定	李双星刘业兵柳方远吉婧杜吉革李倩琳朱真李启红陈小云印春生	《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心	2021	10	在线阅读下载PDF 职称材料
3	经密码子优化的猪Ficolin α在昆虫细胞的表达及其体外抗病毒作用初步分析	李兰乔绪稳张元鹏陈瑾郑其升侯继波	《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心	2017	0	在线阅读下载PDF 职称材料
4	蜂王浆主蛋白2在昆虫细胞-杆状病毒系统中的表达与鉴定	段香媛武江利魏俏红冯毛	《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心	2021	0	在线阅读下载PDF 职称材料
5	禾谷镰孢菌β-1,3-葡聚糖合成酶催化亚基GLS2异源表达体系的建立	延扬帆张峰	《农药学学报》 CAS CSCD 北大核心	2023	0	在线阅读下载PDF 职称材料