基于杆状病毒-昆虫细胞表达系统的猪脑心肌炎病毒样颗粒的表达及鉴定

1

作者 王运航 景伟 +3 位作者 穆素雨 孙世琪 郭慧琛 白满元 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第10期4571-4578,共8页

脑心肌炎(encephalomyocarditis)是由脑心肌炎病毒(encephalomyocarditis virus,EMCV)引起的以猪的脑炎、心肌炎为主要特征的病毒性人畜共患病,可感染多种哺乳动物,目前国内尚无有效疫苗。本研究旨在开发一款安全有效的疫苗以防控该病... 脑心肌炎(encephalomyocarditis)是由脑心肌炎病毒(encephalomyocarditis virus,EMCV)引起的以猪的脑炎、心肌炎为主要特征的病毒性人畜共患病,可感染多种哺乳动物,目前国内尚无有效疫苗。本研究旨在开发一款安全有效的疫苗以防控该病。采用P1、3CD共表达的构建策略,利用杆状病毒-昆虫细胞表达系统获得EMCV病毒样颗粒(virus-like particals,VLPs)并将其免疫小鼠,初步评价其在小鼠体内的免疫应答效果。结果显示,免疫组小鼠特异性抗体滴度达到1∶192以上,中和抗体滴度达到1∶64以上,且与ISA206佐剂混合使用可诱导机体产生更高的抗体水平。IL-4、IFN-γ、IL-5、TNF-α细胞因子水平均可达到20 pg·mL^(-1),且明显高于PBS组。综上,本研究获得的EMCV病毒样颗粒疫苗可以诱导机体产生良好的细胞免疫和体液免疫应答,还能诱导炎症细胞因子的产生,有助于激发机体的免疫反应,增强疫苗的保护效果,为EMCV的防控提供了理论依据和技术储备。 展开更多

关键词 杆状病毒-昆虫细胞表达系统 脑心肌炎病毒 病毒样颗粒

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杆状病毒-昆虫细胞表达系统在复合体重组表达应用中的研究进展 被引量：5

2

作者 万婧 相兴伟 +1 位作者 江玲丽 周向阳 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第2期7-14,共8页

真核细胞大部分生命活动是通过复合体催化的。因此,系统了解这些复合体的生物学功能,将在健康和疾病方面具有重要意义。由于内源性复合体存在低丰度和异质性特点,因而直接提取复合体存在一定的困难。杆状病毒-昆虫细胞表达系统可成功表... 真核细胞大部分生命活动是通过复合体催化的。因此,系统了解这些复合体的生物学功能,将在健康和疾病方面具有重要意义。由于内源性复合体存在低丰度和异质性特点,因而直接提取复合体存在一定的困难。杆状病毒-昆虫细胞表达系统可成功表达复合体,为研究复合体的结构和功能提供新的手段。综述近年来利用杆状病毒-昆虫细胞表达系统进行蛋白质复合体结构和功能研究的进展。 展开更多

关键词 杆状病毒-昆虫细胞表达系统 复合体 晶体结构 功能

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鸭圆环病毒Cap基因在昆虫细胞杆状病毒系统中的表达及鉴定 被引量：4

3

作者 张兴晓 邹金峰 +4 位作者 相琪旺 王鑫 陈琳 谢之景 姜世金 《西北农业学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第3期7-11,共5页

通过PCR方法扩增完整的鸭圆环病毒Cap基因,按正确的阅读框架将其克隆入pFastBacTM HTB杆状病毒载体,将筛选的阳性重组载体pF-CP转化至含有杆状病毒穿梭载体和辅助载体的DH10Bac大肠杆菌感受态细胞,经过蓝白斑筛选和PCR鉴定,获得重组表... 通过PCR方法扩增完整的鸭圆环病毒Cap基因,按正确的阅读框架将其克隆入pFastBacTM HTB杆状病毒载体,将筛选的阳性重组载体pF-CP转化至含有杆状病毒穿梭载体和辅助载体的DH10Bac大肠杆菌感受态细胞,经过蓝白斑筛选和PCR鉴定,获得重组表达载体rBacmid-CP。在脂质体的介导下转染Sf9昆虫细胞,72h后获得重组杆状病毒。Western blot和间接免疫荧光(IFA)试验结果表明,表达的蛋白与原核表达Cap蛋白免疫小鼠采集的血清具有良好的反应原性,为进一步研究Cap蛋白的功能奠定基础。 展开更多

关键词 鸭圆环病毒 Cap基因 昆虫细胞-杆状病毒表达系统 IFA

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人CD4胞外区蛋白在杆状病毒-昆虫细胞系统中的表达纯化及性质鉴定

4

作者 乔佳明 张芝晴 +3 位作者 张振勇 李少伟 夏宁邵 顾颖 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2018年第8期1201-1205,共5页

目的:通过条件优化实现人CD4蛋白胞外区在杆状病毒-昆虫细胞表达系统中的高效表达,并对纯化获得的人CD4蛋白胞外区进行抗原性与免疫原性分析。方法:通过选择人CD4分子胞外片段构建重组杆状病毒(p Ac-CD4),然后感染昆虫细胞进行蛋白的表... 目的:通过条件优化实现人CD4蛋白胞外区在杆状病毒-昆虫细胞表达系统中的高效表达,并对纯化获得的人CD4蛋白胞外区进行抗原性与免疫原性分析。方法:通过选择人CD4分子胞外片段构建重组杆状病毒(p Ac-CD4),然后感染昆虫细胞进行蛋白的表达,采用镍离子亲和层析纯化。运用SDS-PAGE、Western blot、体积排阻色谱、ELISA、SPR法等分析纯化得到目的蛋白的理化性质和抗原性。通过弗氏佐剂与目的蛋白混合免疫BALB/c小鼠,监测小鼠免疫血清的抗体生成。结果:经纯化可获得纯度90%以上的人CD4蛋白,每升细胞培养液最终可获得11.2 mg的目的蛋白,且该人CD4胞外区蛋白具有良好的抗原性。小鼠血清监测结果显示人CD4蛋白能有效刺激机体产生免疫应答,显示其具有良好的免疫原性。结论:本研究通过杆状病毒-昆虫细胞系统进行高效表达,获得抗原性和免疫原性良好的人CD4胞外区蛋白,为HIV受体和感染的研究奠定基础。 展开更多

关键词 杆状病毒-昆虫细胞表达系统 人CD4 免疫

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猫传染性腹膜炎病毒N蛋白在昆虫细胞-杆状病毒系统中的表达与鉴定 被引量：10

5

作者 李双星 刘业兵 +7 位作者 柳方远 吉婧 杜吉革 李倩琳 朱真 李启红 陈小云 印春生 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2021年第1期273-279,共7页

本研究旨在利用昆虫细胞-杆状病毒表达系统表达猫传染性腹膜炎病毒(Feline infectious peritonitis virus,FIPV)N蛋白,并制备抗该蛋白的多克隆抗体,用于FIPV临床抗原/抗体诊断及N蛋白功能研究。参考GenBank中FIPV的N基因序列,选择FIPV毒... 本研究旨在利用昆虫细胞-杆状病毒表达系统表达猫传染性腹膜炎病毒(Feline infectious peritonitis virus,FIPV)N蛋白,并制备抗该蛋白的多克隆抗体,用于FIPV临床抗原/抗体诊断及N蛋白功能研究。参考GenBank中FIPV的N基因序列,选择FIPV毒株N基因(登录号:KC461235.1),并对该N基因进行密码子优化、基因合成,酶切后将N基因连接至pFastBac1载体,转化大肠杆菌DH5α感受态细胞,经氨苄西林抗性筛选阳性克隆,提取质粒经酶切及测序鉴定正确后,转化大肠杆菌DH10Bac感受态细胞,经蓝白斑筛选及PCR鉴定后,最终成功构建重组杆状病毒质粒Bacmid-N,转染Sf9细胞包装杆状病毒,于28℃温箱培养4 d后收集感染Sf9细胞上清,并通过镍离子亲和层析纯化获得重组N蛋白。经SDS-PAGE及Western blotting鉴定结果表明,本研究成功利用昆虫细胞-杆状病毒表达系统表达出大小约为51 ku的FIPV重组N蛋白。将该蛋白与弗氏佐剂按一定比例混合后,免疫6周龄BALB/c小鼠。用间接ELISA方法检测小鼠血清抗体效价可达1∶102400;利用Western blotting和间接免疫荧光试验对N蛋白多克隆抗体进行检测分析,结果表明,真核表达的重组蛋白免疫原性良好,多克隆抗体具有良好的反应原性,可特异识别FIPV感染细胞。本研究为FIPV抗原/抗体诊断试剂盒的研发奠定了基础。 展开更多

关键词 猫传染性腹膜炎病毒(FIPV) 核衣壳蛋白 昆虫细胞-杆状病毒表达系统

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猪圆环病毒衣壳蛋白在昆虫细胞中表达形成病毒样颗粒的研究 被引量：9

6

作者 李玲 李国新 +3 位作者 徐彦召 高景鹏 周艳君 童光志 《中国动物传染病学报》 CAS 2011年第5期15-20,共6页

本研究应用Bac-to-Bac杆状病毒/昆虫细胞表达系统,将猪圆环病毒(Porcine circovirus,PCV)PCV2b的ORF2基因插入供体质粒pFastBacTMⅠPPH启动子控制下的多克隆位点,构建的质粒转化DH10BAC感受态细胞,经抗性和蓝白斑筛选,获得重组穿梭质粒r... 本研究应用Bac-to-Bac杆状病毒/昆虫细胞表达系统,将猪圆环病毒(Porcine circovirus,PCV)PCV2b的ORF2基因插入供体质粒pFastBacTMⅠPPH启动子控制下的多克隆位点,构建的质粒转化DH10BAC感受态细胞,经抗性和蓝白斑筛选,获得重组穿梭质粒rBacmid-cap。将rBacmid-cap转染对数生长期的Sf9昆虫细胞,间接免疫荧光试验证明目的蛋白在重组杆状病毒感染的Sf9昆虫细胞中获得了表达。将该重组杆状病毒感染HighFiveTM细胞后,用Western blot在细胞培养上清中检测到了目的蛋白,并于d 5达到表达高峰。电镜观察结果显示上清中的目的蛋白可以装配成直径约为17 nm的病毒样颗粒。病毒样颗粒在培养上清中的大量存在,为目的蛋白进一步的分离和纯化提供了便利,也为PCV2基因工程疫苗的产业化奠定了基础。 展开更多

关键词 猪圆环病毒 昆虫细胞表达系统 重组杆状病毒 病毒样颗粒

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昆虫杆状病毒表达系统的研究进展 被引量：11

7

作者 朱帮福 卢兹凡 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2002年第6期681-684,共4页

关键词 杆状病毒 研究进展 昆虫细胞表达系统 生物学特性 病毒载体

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狂犬病病毒糖蛋白在昆虫细胞中的表达及其免疫学特性分析 被引量：2

8

作者 王晓蕾 陈芳芳 +10 位作者 袁伟 钱国强 耿以如 张晓 杨瑾 熊四平 陈雅 唐奇 仇镇宁 冯振卿 朱进 《南京医科大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2015年第6期772-776,822,共6页

目的 :利用Bac-To-Bac杆状病毒昆虫细胞表达系统对狂犬病病毒糖蛋白(rabies virus glycoprotein,RVG)基因进行克隆、表达、纯化,并对重组RVG进行免疫学特性鉴定。方法:参照Gen Bank收录的狂犬病病毒CVS-11株RVG基因序列,设计特异性引物... 目的 :利用Bac-To-Bac杆状病毒昆虫细胞表达系统对狂犬病病毒糖蛋白(rabies virus glycoprotein,RVG)基因进行克隆、表达、纯化,并对重组RVG进行免疫学特性鉴定。方法:参照Gen Bank收录的狂犬病病毒CVS-11株RVG基因序列,设计特异性引物,扩增目的基因。RVG基因经Bam HⅠ/KpnⅠ双酶切后定向克隆到p Fast Bac-GP67B载体上,阳性重组转座质粒进一步转化E.Coli DH10Bac感受态细胞,经蓝白斑筛选及PCR鉴定后获得重组穿梭载体r Bacmid-RVG,将其转染至对数生长期的Sf-9昆虫细胞,进行重组RVG的真核表达。His-Trap HP纯化目的蛋白,SDS-PAGE和Western blot进行鉴定。重组RVG免疫小鼠,检测其免疫原性和血清中和活性。结果:用Bac-To-Bac杆状病毒昆虫细胞表达系统表达并纯化了重组RVG,分子量约58 000。经重组RVG免疫后的小鼠血清具有中和活性。结论:重组RVG具有天然RVG的活性,为进一步研制亚单位疫苗及制备筛选中和抗体奠定了基础。 展开更多

关键词 狂犬病病毒 狂犬病病毒糖蛋白 Bac-To-Bac杆状病毒昆虫细胞表达系统 纯化 抗体

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H5N1高致病性禽流感病毒HA基因在昆虫细胞中的表达 被引量：1

9

作者 金秋 刘哲 +6 位作者 陆敏华 戴望舒 徐言 张晓 曾晓燕 冯振卿 焦永军 《南京医科大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2011年第11期1583-1586,共4页

目的:扩增高致病性禽流感H5N1亚型病毒血凝素(hemagglutinin,HA)基因,并进行真核表达。方法:抽提毒株A/Jiangsu/08-6基因组RNA,反转录为cDNA,用特异性引物扩增HA基因。HA经BamHⅠ/XhoⅠ双酶切后克隆到pFastBac-GP67B载体上,筛选出阳性... 目的:扩增高致病性禽流感H5N1亚型病毒血凝素(hemagglutinin,HA)基因,并进行真核表达。方法:抽提毒株A/Jiangsu/08-6基因组RNA,反转录为cDNA,用特异性引物扩增HA基因。HA经BamHⅠ/XhoⅠ双酶切后克隆到pFastBac-GP67B载体上,筛选出阳性重组转座质粒pFastBac-GP67B-HA,并将其进一步转化DH10Bac感受态细胞,通过蓝白斑筛选和PCR鉴定后,获得重组穿梭载体(rBacmid-HA),再通过CellfectinⅡ试剂转染rBacmid-HA至对数生长期的sf9昆虫细胞,进行目的蛋白的真核表达。分别用SDS-PAGE、Western blot、血凝试验以及质谱分析对其进行鉴定。结果:HA基因在sf9细胞表达的蛋白分子量约70 000。血凝试验表明重组HA蛋白可使鸡红细胞发生凝集。质谱分析鉴定该重组蛋白为HA蛋白。结论:重组HA蛋白具有天然HA蛋白的活性,为亚单位疫苗的研制及中和抗体的筛选奠定了基础。 展开更多

关键词 H5N1型禽流感病毒 血凝素 杆状病毒昆虫细胞表达系统 血凝试验

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密码子优化的鸭坦布苏病毒E基因在昆虫细胞中的表达 被引量：1

10

作者 肖亚莉 刘建龙 +5 位作者 李雪松 余磊 滕巧泱 闫丽萍 李国新 李泽君 《中国动物传染病学报》 CAS 2013年第3期13-17,共5页

为了使鸭坦布苏病毒(Duck tembusu virus,DTMUV)的E蛋白在Bac-to-Bac杆状病毒/昆虫细胞表达系统中高效表达,本研究将DTMUV的E基因按照昆虫细胞偏嗜性密码子进行了优化,合成了基因optiE,并将其插入到pFastBac HT载体上,得到质粒pFastBac-... 为了使鸭坦布苏病毒(Duck tembusu virus,DTMUV)的E蛋白在Bac-to-Bac杆状病毒/昆虫细胞表达系统中高效表达,本研究将DTMUV的E基因按照昆虫细胞偏嗜性密码子进行了优化,合成了基因optiE,并将其插入到pFastBac HT载体上,得到质粒pFastBac-optiE。将该质粒转化DH10BAC感受态细胞,经抗性和蓝白斑筛选,获得重组转座子rBacmid-optiE。将rBacmid-optiE转染对数生长期的Sf9昆虫细胞,间接免疫荧光试验和Western blot方法都证实目的蛋白在重组杆状病毒感染的Sf9昆虫细胞中获得了表达。本研究为进一步研究DTMUV E蛋白的结构与功能奠定了基础。 展开更多

关键词 鸭坦布苏病毒 E蛋白 杆状病毒-昆虫细胞表达系统 密码子优化

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经密码子优化的猪Ficolin α在昆虫细胞的表达及其体外抗病毒作用初步分析

11

作者 李兰 乔绪稳 +3 位作者 张元鹏 陈瑾 郑其升 侯继波 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第12期2358-2364,共7页

利用Bac-to-Bac昆虫杆状病毒表达系统表达具有天然构象的猪Ficolinα。首先构建重组穿梭质粒rBacmid-Ficolinα,转染sf9细胞获得重组杆状病毒rBV-Ficolinα;通过Image J软件对优化表达的Western blot图片进行灰度分析确定较佳表达条件;... 利用Bac-to-Bac昆虫杆状病毒表达系统表达具有天然构象的猪Ficolinα。首先构建重组穿梭质粒rBacmid-Ficolinα,转染sf9细胞获得重组杆状病毒rBV-Ficolinα;通过Image J软件对优化表达的Western blot图片进行灰度分析确定较佳表达条件;纯化目的蛋白质后,进一步评价其体外抗病毒活性。Western blot结果显示以7.5MOI接种量感染的sf9细胞在96h时获得了较高的表达,同时获得的重组猪Ficolinα具有抗猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)活性。猪Ficolinα在sf9昆虫细胞中获得成功表达,且具有良好的抗PRRSV活性。本研究可以为猪Ficolinα的抗病毒活性及作用机制研究提供物质基础。 展开更多

关键词 猪Ficolin 杆状病毒-昆虫细胞表达系统 抗病毒作用

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蜂王浆主蛋白2在昆虫细胞-杆状病毒系统中的表达与鉴定

12

作者 段香媛 武江利 +1 位作者 魏俏红 冯毛 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2021年第10期3779-3786,共8页

本研究旨在利用昆虫细胞-杆状病毒表达系统表达蜂王浆主蛋白2(MRJP2),为后续MRJP2功能的深入研究提供材料。根据GenBank中意大利蜜蜂(Apis mellifera L.)MRJP2基因序列,经PCR扩增、克隆至真核表达载体pFastBac1,构建重组杆状病毒质粒MRJ... 本研究旨在利用昆虫细胞-杆状病毒表达系统表达蜂王浆主蛋白2(MRJP2),为后续MRJP2功能的深入研究提供材料。根据GenBank中意大利蜜蜂(Apis mellifera L.)MRJP2基因序列,经PCR扩增、克隆至真核表达载体pFastBac1,构建重组杆状病毒质粒MRJP2-Bacmid并转染至Sf9昆虫细胞,以P2代杆状病毒感染Sf9细胞进行诱导表达,利用层析柱和离子交换柱对表达产物进行纯化,并通过SDS-PAGE、Western blotting及四极杆静电场轨道阱高分辨质谱仪(Q Exactive)对目的蛋白进行分析验证。结果显示,本试验成功构建杆状病毒质粒MRJP2-Bacmid,转染至Sf9昆虫细胞并获得表达产物。SDS-PAGE和Western blotting验证结果表明,本研究成功利用昆虫细胞-杆状病毒表达系统表达出大小约为52 ku的MRJP2重组蛋白,且纯度较高;质谱分析结果显示,该重组蛋白匹配到蜜蜂蛋白质数据库中MRJP2的特异性肽段为39个,序列覆盖率为61%,且与MRJP2的匹配得分最高,进一步确认该重组蛋白为MRJP2。本研究利用昆虫细胞-杆状病毒表达系统成功表达出MRJP2,为后续该蛋白生物学功能的深入研究奠定了基础。 展开更多

关键词 蜂王浆主蛋白2(MRJP2) 昆虫细胞-杆状病毒表达系统 蛋白纯化

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非洲猪瘟病毒p54蛋白在昆虫细胞中的表达及其免疫原性分析

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作者 敖清莹 钟秋萍 +7 位作者 史馨瑾 魏常青 刘英楠 廖欣欣 谢振华 钱莺娟 郑龙三 陈鸿军 《中国动物传染病学报》 CAS 北大核心 2023年第4期164-169,共6页

非洲猪瘟病毒(ASFV)p54蛋白由晚期基因E183L编码,是主要的结构蛋白之一。为了获得免疫原性强的p54蛋白,本研究将E183L基因克隆至pFastBac1载体中,取1μg重组质粒转座DH10Bac感受态细菌,经三轮蓝白斑筛选后,获得重组Bacmid-p54。将提取的... 非洲猪瘟病毒(ASFV)p54蛋白由晚期基因E183L编码,是主要的结构蛋白之一。为了获得免疫原性强的p54蛋白,本研究将E183L基因克隆至pFastBac1载体中,取1μg重组质粒转座DH10Bac感受态细菌,经三轮蓝白斑筛选后,获得重组Bacmid-p54。将提取的Bacmid-p54质粒DNA转染Sf9细胞,出现明显病变后,收获细胞培养上清,在正常Sf9细胞中传三代,获得的杆状病毒命名为rBac-P54。利用SDS-PAGE检测rBac-P54感染后昆虫细胞的蛋白表达情况,并通过间接免疫荧光(IFA)和Western-blot鉴定p54蛋白的免疫原性。结果显示,在感染的Sf9细胞中,p54蛋白能获得高效表达,并可被ASFV阳性血清特异性识别。这表明杆状病毒系统表达的p54蛋白具有良好的免疫原性,为后续开展非洲猪瘟血清学诊断和p54功能研究奠定基础。 展开更多

关键词 非洲猪瘟病毒 p54蛋白 昆虫细胞表达系统 免疫原性

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亚洲1型口蹄疫病毒衣壳蛋白前体P1-2A基因和蛋白酶3C基因在昆虫细胞中的共表达 被引量：2

14

作者 信爱国 李华春 +5 位作者 廖德芳 李乐 高林 杨永钦 张念祖 陈保善 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第6期500-504,共5页

目的在昆虫细胞中表达亚洲1型口蹄疫病毒(Foot-and-mouth disease virus,FMDV)衣壳蛋白前体P1-2A基因和蛋白酶3C基因,为进一步研究FMDV空衣壳抗原和疫苗奠定基础。方法从质粒pTOP-P1-2A和pTOP-3C中分别扩增出编码亚洲1型口蹄疫病毒衣壳... 目的在昆虫细胞中表达亚洲1型口蹄疫病毒(Foot-and-mouth disease virus,FMDV)衣壳蛋白前体P1-2A基因和蛋白酶3C基因,为进一步研究FMDV空衣壳抗原和疫苗奠定基础。方法从质粒pTOP-P1-2A和pTOP-3C中分别扩增出编码亚洲1型口蹄疫病毒衣壳蛋白前体P1-2A基因和3C蛋白酶基因,构建转移载体pDual-P1-2A-3C并与大肠杆菌(Escherichia coli)DH10Bac中的Bacmid质粒重组,构建重组转座质粒rBacmid-P1-3C。在脂质体介导下将rBacmid-P1-3C转染Sf9昆虫细胞获得重组杆状病毒。在Sf9昆虫细胞中共表达P1-2A和3C蛋白,通过SDS-PAGE、Western blot和Dot-ELISA试验鉴定重组蛋白。结果目的基因在昆虫细胞中得到了正确的表达,表达蛋白与抗亚洲1型FMDV血清发生特异性反应,有良好的抗原性。结论成功在昆虫细胞中表达亚洲1型口蹄疫病毒衣壳蛋白前体P1-2A基因和蛋白酶3C基因。 展开更多

关键词 口蹄疫病毒 衣壳蛋白 昆虫细胞杆状病毒表达系统 表达

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外源基因表达系统的研究进展 被引量：38

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作者 郭广君 吕素芳 王荣富 《科学技术与工程》 2006年第5期582-587,592,共7页

最近20多年来,随着重组DNA技术的迅速发展,对于克隆基因表达问题的研究也日渐深入,并积累了相当丰富的知识。外源基因的表达系统包括原核表达系统和真核表达系统,它们各有优缺点,在选择时应衡量使用。

关键词 原核表达系统 真核表达系统 大肠杆菌表达系统 酵母表达系统 昆虫细胞表达系统 哺乳动物细 胞表达系统

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昆虫细胞培养研究进展 被引量：9

16

作者 李守信 李长友 +3 位作者 郑桂玲 周洪旭 吴文君 李国勋 《西北农业学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第3期41-48,共8页

随着生命科学的迅速发展,细胞工程愈来愈受到人们的重视。以昆虫细胞为对象的细胞培养技术在现代实验生物学上具有重要的价值,已经广泛地应用于医学、农业及生物学的各个领域。本文综述了有关昆虫细胞培养的研究进展,包括昆虫细胞培养... 随着生命科学的迅速发展,细胞工程愈来愈受到人们的重视。以昆虫细胞为对象的细胞培养技术在现代实验生物学上具有重要的价值,已经广泛地应用于医学、农业及生物学的各个领域。本文综述了有关昆虫细胞培养的研究进展,包括昆虫细胞培养基研究开发,昆虫细胞系的建立和组织培养,利用生物反应器大规模培养昆虫细胞,昆虫细胞-杆状病毒表达系统(B acu lov irus express ion vector system,BEV S),构建基因工程细胞系及其稳定性表达,以及昆虫细胞培养的应用前景和研究展望。 展开更多

关键词 昆虫细胞系 昆虫细胞培养 基因表达 组织培养 昆虫细胞-杆状病毒表达系统

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用pFASTBAC-THa系统表达IBV SD株S1基因

17

作者 刘兴友 王春凤 +4 位作者 戴亚斌 陈德胜 李文刚 刘尚高 陈溥言 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2004年第6期14-16,共3页

关键词 pFASTBAC表达系统 昆虫杆状病毒细胞表达系统 传染性支气管炎病毒 SD株 S1基因 基因表达

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人乳头瘤病毒58型衣壳蛋白的表达及其抗体制备 被引量：2

18

作者 王丽娜 宋文龄 +2 位作者 陈伟 姜艳芳 付艳 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第4期283-286,共4页

目的:构建人乳头瘤病毒5 8型(hpv5 8)衣壳蛋白L1的杆状病毒 昆虫细胞表达系统。方法:用杆状病毒 昆虫细胞表达系统大量表达HPV5 8L1蛋白,并用HPV5 8L1病毒相似颗粒(VLP)免疫BALB c小鼠制备特异性抗血清。结果:HPV5 8L1蛋白在SF9细胞中... 目的:构建人乳头瘤病毒5 8型(hpv5 8)衣壳蛋白L1的杆状病毒 昆虫细胞表达系统。方法:用杆状病毒 昆虫细胞表达系统大量表达HPV5 8L1蛋白,并用HPV5 8L1病毒相似颗粒(VLP)免疫BALB c小鼠制备特异性抗血清。结果:HPV5 8L1蛋白在SF9细胞中被高效表达,其相对分子质量为5 5kD ;CsCl超速离心结合蔗糖密度超速离心可纯化此蛋白。在电镜下可见纯化的病毒衣壳蛋白L1形成VLP。用其免疫小鼠制备的相应抗体能与HPV5 8L1特异性结合。结论:成功表达了HPV5 8衣壳蛋白L1,并制备出高滴度的抗体。 展开更多

关键词 人乳头瘤病毒58型 主要衣壳蛋白L1 杆状病毒.昆虫细胞表达系统 病毒相似颗粒

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组蛋白去甲基化酶JARID1B的表达纯化及酶活力分析 被引量：1

19

作者 郭雪 刘意 +1 位作者 杨慧蓉 徐彦辉 《复旦学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2012年第4期342-347,共6页

目的筛选能够大量表达、方便纯化且具有酶活性的组蛋白去甲基化酶JARID1B(jumonji AT-richinteractive domain 1B)的截短体。方法通过Bac-to-Bac系统制备含目的基因的杆粒(bacmid),转染Sf9昆虫细胞获得重组病毒基因组,并感染Hi5昆虫细... 目的筛选能够大量表达、方便纯化且具有酶活性的组蛋白去甲基化酶JARID1B(jumonji AT-richinteractive domain 1B)的截短体。方法通过Bac-to-Bac系统制备含目的基因的杆粒(bacmid),转染Sf9昆虫细胞获得重组病毒基因组,并感染Hi5昆虫细胞表达目的蛋白,用Ni-NTA亲和层析,离子交换层析和分子筛纯化目的蛋白。利用基质辅助激光解析电离飞行时间质谱技术(matrix-assisted laser desorption ionization time offlight mass spectrometer,MALDI-TOF)分析截短体的酶活力。结果去除C-端两个PHD结构域的截短体JARID1B1-825能够在昆虫细胞Hi5中得以大量表达(1L细胞含10mg蛋白),经Ni-NTA亲和层析,阴离子交换层析和分子筛三步纯化,获得纯度大于90%的目的蛋白,MALDI-TOF质谱分析显示JARID1B1-825仍拥有去组蛋白甲基化修饰的酶活性。结论筛选到了能够大量表达、方便纯化且具有酶活性的JARID1B的截短体,对其后续的功能研究和药物开发具有重要的意义。 展开更多

关键词 组蛋白去甲基化酶 JARID1B 昆虫细胞表达系统 蛋白表达纯化

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表达纯化糖原合成酶激酶3β的两种方法比较 被引量：1

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作者 许少飞 徐杰 黎明涛 《南方医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第3期397-402,共6页

目的建立一套高纯度、高活性表达糖原合成酶激酶3β的技术。方法分别采用大肠杆菌和杆状病毒昆虫细胞蛋白表达系统表达糖原合成酶激酶3β,通过His和GST标签两步纯化目的蛋白,SDS-PAGE观察目的蛋白的纯度,激酶反应观察目的蛋白的活性。... 目的建立一套高纯度、高活性表达糖原合成酶激酶3β的技术。方法分别采用大肠杆菌和杆状病毒昆虫细胞蛋白表达系统表达糖原合成酶激酶3β,通过His和GST标签两步纯化目的蛋白,SDS-PAGE观察目的蛋白的纯度,激酶反应观察目的蛋白的活性。结果大肠杆菌表达纯化的糖原合成酶激酶3β占纯化后总蛋白的量为54%,昆虫细胞表达纯化的糖原合成酶激酶3β占纯化后总蛋白的量为96%;昆虫细胞来源的目的蛋白比大肠杆菌来源的目的蛋白活性高一倍左右。结论相比大肠杆菌表达的糖原合成酶激酶3β,昆虫细胞表达的目的蛋白具有更高的纯度和活性。 展开更多

关键词 糖原合成酶激酶3Β 大肠杆菌表达系统 杆状病毒昆虫细胞表达系统

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