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小反刍兽疫病毒双抗原夹心时间分辨荧光免疫测定方法的建立 被引量:11
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作者 孙雨 宋晓晖 +7 位作者 董浩 赵柏林 曲萍 蒋菲 杨天意 张晨 杨林 王传彬 《动物医学进展》 北大核心 2019年第4期1-8,共8页
通过优化大肠埃希菌密码子、优化表达条件等方法,在大肠埃希菌表达系统中成功获得了可溶性的N蛋白与NH融合蛋白。进一步基于纯化的可溶性N蛋白与NH融合蛋白建立了小反刍兽疫病毒双抗原夹心时间分辨荧光免疫测定方法。该方法敏感性高,特... 通过优化大肠埃希菌密码子、优化表达条件等方法,在大肠埃希菌表达系统中成功获得了可溶性的N蛋白与NH融合蛋白。进一步基于纯化的可溶性N蛋白与NH融合蛋白建立了小反刍兽疫病毒双抗原夹心时间分辨荧光免疫测定方法。该方法敏感性高,特异性强,能够特异性的检测羊血清中的小反刍兽疫病毒抗体,与其他相关疫病病原无交叉反应;重复性试验组内与组间变异系数均小于10%。对292份临床血清样品进行检测,与法国IDVET竞争ELISA试剂盒比较,阳性样品符合率为92.47%,阴性样品符合率为97.26%,总的符合率为94.86%。该方法与传统的ELISA方法相比,具有敏感性、特异性相当,操作简单、快速,具有较高的推广应用价值。 展开更多
关键词 小反刍兽疫病毒 N活性蛋白 NH融合蛋白 可溶性表达与纯化 时间分辨荧光免疫测定方法
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组织因子途径抑制物-2的时间分辨荧光免疫测定方法的建立及评价 被引量:1
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作者 蒋芳林 刘静 +3 位作者 王慧君 张进 罗心平 马端 《复旦学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2011年第1期54-59,共6页
目的建立测定血液中组织因子途径抑制物-2(tissue factor pathway-2,TFPI-2)含量的时间分辨荧光免疫测定方法(time-resolved fluorescence immunoassay,TRFIA)。方法以兔抗人TFPI-2多克隆抗体作为固相抗体,单克隆抗体3C8作为第一抗... 目的建立测定血液中组织因子途径抑制物-2(tissue factor pathway-2,TFPI-2)含量的时间分辨荧光免疫测定方法(time-resolved fluorescence immunoassay,TRFIA)。方法以兔抗人TFPI-2多克隆抗体作为固相抗体,单克隆抗体3C8作为第一抗体,原核表达的人TFPI-2作为标准品,Eu3+标记的羊抗鼠单克隆抗体作为检测抗体,采用双抗体夹心法建立TFPI-2 TRFIA分析系统,并与酶联免疫吸附法(ELISA)进行比较。结果自制TFPI-2 TRFIA试剂标准曲线的线性范围为0.1~50 ng/mL,灵敏度为0.048 ng/mL,批内和批间变异系数均≤8.39%。应用该方法测定56例冠状动脉粥样硬化性心脏病(coronary atherosclerotic heart disease,CHD)患者及24例正常体检者血浆中的TFPI-2分别为(10.58±7.12)和(8.53±2.32)ng/mL。结论我们建立的TFPI-2 TRFIA分析方法与ELISA相比灵敏度更好,定量检测结果能够敏感准确地反映血液内TFPI-2的浓度变化,特异性和稳定性均符合要求。 展开更多
关键词 组织因子途径抑制物-2 时间分辨荧光免疫测定 酶联免疫吸附法 冠状动脉粥样硬化性心脏病
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时间分辨荧光免疫分析螯合剂的制备及标记方法 被引量:3
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作者 赵劼 马庆杰 +3 位作者 赵伟 潘立华 徐文贵 孙文伟 《吉林大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2003年第6期810-812,共3页
目的 :制备时间分辨荧光免疫分析双功能螯合剂 4,7-二 (氯磺酸基苯基 ) - 1 ,1 0 -菲咯啉 -2 ,9-二羧酸 ( BCPDA)。方法 :合成物 BCPDA的结构由熔点、元素分析、红外光谱和核磁共振谱确证 ;采用标记曲线法测定标记物中蛋白质的含量 ;应... 目的 :制备时间分辨荧光免疫分析双功能螯合剂 4,7-二 (氯磺酸基苯基 ) - 1 ,1 0 -菲咯啉 -2 ,9-二羧酸 ( BCPDA)。方法 :合成物 BCPDA的结构由熔点、元素分析、红外光谱和核磁共振谱确证 ;采用标记曲线法测定标记物中蛋白质的含量 ;应用荧光分光光度计测定 Eu3 + - BCPDA的荧光强度 ;采用放免法测定标记蛋白质的活性。结果 :BCPDA与 Eu3 + 结合后可测量到的最低浓度为1× 1 0 -1 5mol· L-1 标记蛋白质的相对生物活性高于 80 %。结论 :成功地制备时间分辨荧光免疫分析双功能螯合剂 BCPDA,并建立 Eu3 + - 展开更多
关键词 荧光免疫测定 螯合剂 化学合成 光谱法 时间分辨
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时间分辨荧光免疫分析方法的光谱研究 被引量:4
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作者 郭周义 田振 贾雅丽 《光谱学与光谱分析》 SCIE EI CAS CSCD 北大核心 2004年第5期596-599,共4页
时间分辨荧光免疫分析法是用三价稀土离子及其螯合剂作为示踪物 ,标记蛋白质、激素、抗体、核酸探针或生物活性细胞 ,待反应体系 (如 :抗原抗体免疫反应、生物素亲合反应、核酸探针杂交反应、靶细胞与效应细胞的杀伤反应等 )发生后 ,用... 时间分辨荧光免疫分析法是用三价稀土离子及其螯合剂作为示踪物 ,标记蛋白质、激素、抗体、核酸探针或生物活性细胞 ,待反应体系 (如 :抗原抗体免疫反应、生物素亲合反应、核酸探针杂交反应、靶细胞与效应细胞的杀伤反应等 )发生后 ,用时间分辨荧光技术测定反应体系中分析物的浓度 ,达到定量分析的目的。它之所以能够继放射性同位素标记、酶标记、化学发光、电化学发光后成为一种更新、更灵敏的检测方法 ,主要取决于它所用标记物三价稀土离子螯合物独一无二的物理及化学性质。主要报导了对使用的长寿命荧光团Eu3 + 螯合物的光谱研究结果 ,时间分辨技术及荧光增强技术的原理。实验表明 :选择 336~ 337nm的激发波长 ,有利于Eu3 + 的配位二酮体的激发及能量转移。 展开更多
关键词 时间分辨荧光免疫分析方法 定量分析 铕离子螯合物 荧光增强技术 时间分辨光谱技术
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