时间分辨荧光免疫层析试纸条在油料饼粕黄曲霉毒素B_1检测中的应用 被引量：19

1

作者 李静 李培武 +3 位作者 张奇 丁小霞 张文 张兆威 《中国油料作物学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第2期256-262,共7页

采用黄曲霉毒素时间分辨荧光免疫层析试纸条及配套的时间分辨荧光速测仪,对油料饼粕中黄曲霉毒素B1的快速检测进行了应用研究。该时间分辨荧光免疫分析技术是基于时间分辨荧光免疫层析试纸条和载有Eu（Ⅲ）标记特异性单克隆抗体的样品... 采用黄曲霉毒素时间分辨荧光免疫层析试纸条及配套的时间分辨荧光速测仪,对油料饼粕中黄曲霉毒素B1的快速检测进行了应用研究。该时间分辨荧光免疫分析技术是基于时间分辨荧光免疫层析试纸条和载有Eu（Ⅲ）标记特异性单克隆抗体的样品瓶建立的检测技术。时间分辨荧光速测仪可内置标准曲线,直接输出检测结果。对6种油料饼粕做黄曲霉毒素B1添加回收率实验,回收率在70%~120%之间,批间、批内变异系数〈15%。在实际样品的检测中,时间分辨荧光免疫层析试纸条检测技术与液相色谱-串联质谱法相比,检测结果相对误差〈15%。时间分辨荧光免疫层析试纸条检测技术测定快速、准确,技术稳定、可靠,设备经济、小型,适用于大批量油料饼粕样品的快速检测和风险评估。 展开更多

关键词 油料饼粕 黄曲霉毒素B1 时间分辨荧光免疫层析试纸条 时间分辨荧光速测仪 定量检测

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同时检测玉米中黄曲霉毒素B_(1)和赭曲霉毒素A的时间分辨荧光免疫层析试纸条的研制 被引量：21

2

作者 卢迪莎 王序 +2 位作者 杨金易 罗林 肖治理 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2022年第2期346-354,共9页

研究制备了一种可同时快速定量检测黄曲霉毒素B_(1)(aflatoxin B_(1),AFB_(1))和赭曲霉毒素A(ochratoxin A,OTA)的二联时间分辨荧光免疫层析试纸条。采用铕系时间分辨荧光微球分别标记AFB_(1)和OTA单克隆抗体,优化荧光微球活化pH值、标... 研究制备了一种可同时快速定量检测黄曲霉毒素B_(1)(aflatoxin B_(1),AFB_(1))和赭曲霉毒素A(ochratoxin A,OTA)的二联时间分辨荧光免疫层析试纸条。采用铕系时间分辨荧光微球分别标记AFB_(1)和OTA单克隆抗体,优化荧光微球活化pH值、标记的抗体浓度、荧光探针使用量、检测线包被原浓度、质控线羊抗鼠IgG浓度、样品前处理条件等因素。结果表明:检测AFB_(1)和OTA的IC_(50)分别为1.58、3.91μg/kg,线性范围分别为0.26~9.73、1.14~13.29μg/kg,肉眼检测限分别为3.70、5.55μg/kg;与黄曲霉毒素类似物交叉率为12%~62%,与赭曲霉毒素B交叉率为58%,与其他真菌毒素无明显交叉反应;选择玉米样品进行添加回收实验,2种毒素回收率在92%~103%之间,变异系数小于15%;对实际样品的检测与高效液相色谱法和市售胶体金试纸检测结果一致;且该试纸条可在4℃稳定保存5个月以上,稳定性较好。本研究所制备的时间分辨荧光免疫层析试纸条具有灵敏、准确、快速和简便等特点,非常适用于玉米等食品和农产品中AFB_(1)和OTA的现场快速筛查。 展开更多

关键词 黄曲霉毒素B_(1) 赭曲霉毒素A 时间分辨 荧光免疫层析试纸条

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时间分辨荧光免疫层析技术在动物疫病快速诊断中的应用进展

3

作者 庄金秋 李峰 +2 位作者 梅建国 苗立中 谢金文 《中国动物检疫》 2025年第9期41-48,共8页

时间分辨荧光免疫层析技术(TRFICA)是一种结合时间分辨荧光技术与免疫层析技术的高灵敏度检测方法,它利用镧系稀土元素标记物替代传统胶体金,通过延迟信号采集消除背景荧光干扰,实现快速、精准的定量检测。该技术具有操作简便、成本低... 时间分辨荧光免疫层析技术(TRFICA)是一种结合时间分辨荧光技术与免疫层析技术的高灵敏度检测方法,它利用镧系稀土元素标记物替代传统胶体金,通过延迟信号采集消除背景荧光干扰,实现快速、精准的定量检测。该技术具有操作简便、成本低、特异性强、稳定性好及无污染等优势,被广泛应用于动物疫病诊断、食品安全及医学标志物检测等领域。TRFICA通过其高灵敏度和抗干扰能力,显著提升了检测可靠性,为动物疫病早期预警和防控提供了重要技术支持。本文综述了TRFICA技术的工作原理及其在动物疫病快速诊断中的应用进展,以期为兽医临床诊断、疫病防控提供技术参考。 展开更多

关键词 时间分辨荧光 免疫层析 镧系元素 动物疫病诊断

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应用时间分辨荧光免疫层析法快速定量检测玉米及其副产物中的伏马毒素 被引量：2

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作者 肖蕴祺 汪劲能 +1 位作者 邱良祝 施寿荣 《中国饲料》 北大核心 2025年第3期116-122,共7页

实验旨在开发一种可快速定量检测伏马毒素(FB_(1))含量的试纸条,为谷物饲料质量监管、风险评估提供技术支持。实验以玉米及其副产物中FB_(1)为研究对象,基于时间分辨荧光免疫层析技术(TRFIA)开发试纸条。通过将FB_(1)抗体与荧光微球进... 实验旨在开发一种可快速定量检测伏马毒素(FB_(1))含量的试纸条,为谷物饲料质量监管、风险评估提供技术支持。实验以玉米及其副产物中FB_(1)为研究对象,基于时间分辨荧光免疫层析技术(TRFIA)开发试纸条。通过将FB_(1)抗体与荧光微球进行偶联标记,制备FB_(1)荧光免疫层析试纸条,以检测线T信号值与质控线C信号值的比值为纵坐标,标准溶液浓度为横坐标,建立定量标准曲线。通过优化抗体标记过程中混匀转速和复溶液pH,及改变样品垫的处理方式,以提升FB_(1)-TRFIA试纸条的稳定性和精密度。结果显示:FB_(1)-TRFIA试纸条的最低检测限为50.75μg/kg,定量限为100.10μg/kg;组内CV分别为4.83%(FB_(1)1 mg/kg)、2.86%(FB_(1)15 mg/kg)、4.88%(FB_(1)50 mg/kg);组间CV分别为4.90%、3.11%、5.32%,FB_(1)添加回收率为98.33%~102.87%;阳性样本检测结果与LC-MS/MS方法一致;试纸条在4℃和37℃放置14 d,T/C基本不变。本研究建立的FB_(1)-TRFIA试纸条性能良好,适用于玉米及其副产物中FB_(1)含量的快速定量检测。 展开更多

关键词 伏马毒素 时间分辨荧光免疫层析法 玉米 定量快检

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时间分辨荧光免疫层析法快速测定食品中的米酵菌酸

5

作者 陈一基 杨泽豪 +5 位作者 王子煊 曹雪铭 陆奕娜 钟玉心 李向梅 徐振林 《食品与发酵工业》 北大核心 2025年第22期368-375,共8页

米酵菌酸是一种非热敏性的强呼吸性毒素,目前缺乏快速、灵敏、准确的检测方法。该研究将时间分辨荧光微球标记米酵菌酸单克隆抗体,开发适合复杂食品基质的米酵菌酸时间分辨荧光免疫层析检测方法。对探针制备、试纸条制作和样品前处理等... 米酵菌酸是一种非热敏性的强呼吸性毒素,目前缺乏快速、灵敏、准确的检测方法。该研究将时间分辨荧光微球标记米酵菌酸单克隆抗体,开发适合复杂食品基质的米酵菌酸时间分辨荧光免疫层析检测方法。对探针制备、试纸条制作和样品前处理等关键步骤进行了优化。结果表明,在最适条件下,该方法的定性检测限为6.0μg/kg,定量检测限为1.0μg/kg,半抑制浓度为1.5μg/kg。方法特异性较好,与毒黄素等的交叉反应率均小于2.0%;米粉、木耳和银耳等样品的回收率为94.0%~107.9%,变异系数为1.3%~6.5%。与LC-MS/MS检测结果的相关性较高(R^(2)=0.99)。该方法稳定性较好,准确性和灵敏度较高,可以用于食品中米酵菌酸的快速检测以及现场大规模样品的初步筛查。 展开更多

关键词 时间分辨荧光 米酵菌酸 单克隆抗体 快速检测 免疫层析法

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Eu-TRFM免疫层析试纸条检测大肠杆菌O157:H7方法的建立

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作者 冯昭仪 吴娅芳 +4 位作者 王英林 赵思远 程家洛 郭旭东 刘箐 《食品与生物技术学报》 北大核心 2025年第2期163-172,共10页

【目的】建立一种快速、高效且灵敏的大肠杆菌(Escherichia coli,E.coli)O157:H7检测方法。【方法】运用1-乙基-3-(3-二甲基氨基丙基)碳酰二亚胺(EDC)介导法,以时间分辨荧光微球为标记物与抗体进行偶联,使用荧光读取仪定量分析检测大肠... 【目的】建立一种快速、高效且灵敏的大肠杆菌(Escherichia coli,E.coli)O157:H7检测方法。【方法】运用1-乙基-3-(3-二甲基氨基丙基)碳酰二亚胺(EDC)介导法,以时间分辨荧光微球为标记物与抗体进行偶联,使用荧光读取仪定量分析检测大肠杆菌O157:H7。通过对缓冲液的标记pH、时间分辨荧光微球探针添加量、T线抗体质量浓度以及样本与标记抗体的孵育时间进行优化来提高检测灵敏度。【结果】在最优条件下,大肠杆菌O157:H7的检测灵敏度可达3.2×10^(3)CFU/mL,比传统胶体金免疫层析方法提高了10~1000倍,并且与其他8株常见的食源性致病菌不存在交叉反应。另外,该方法在人工污染的饮用水、牛奶和牛肉实际样品检测中均表现出良好的检测性能。【结论】该Eu-TRFM免疫层析试纸条适用于大肠杆菌O157:H7的检测。 展开更多

关键词 大肠杆菌O157:H7 时间分辨荧光微球 免疫层析试纸条 检测

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猪流行性腹泻病毒荧光微球免疫层析抗原检测方法的建立

7

作者 李慧敏 雷铭楷 +3 位作者 阮胜男 李盼盼 李文涛 何启盖 《畜牧兽医学报》 北大核心 2025年第9期4572-4580,共9页

本研究旨在建立一种快速、敏感、可定量检测猪流行性腹泻病毒(porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)N蛋白抗原的荧光微球免疫层析检测方法,为猪流行性腹泻(porcine epidemic diarrhea,PED)的临床快速检测提供技术支持。本研究采用双... 本研究旨在建立一种快速、敏感、可定量检测猪流行性腹泻病毒(porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)N蛋白抗原的荧光微球免疫层析检测方法,为猪流行性腹泻(porcine epidemic diarrhea,PED)的临床快速检测提供技术支持。本研究采用双抗体夹心法,结合荧光微球免疫层析技术,以时间分辨荧光微球(time-resolved fluorescence nanoparticles,TRFNPs)标记PEDV鼠源多克隆抗体制备荧光探针,以PEDV N蛋白单克隆抗体和羊抗鼠IgG抗体分别作检测线(T线)和质控线(C线),组装成荧光微球免疫层析抗原检测试纸条。分别通过检测梯度稀释的培养PEDV病毒液、常见猪病病毒、模拟粪便样品和临床病料验证该方法的敏感度、特异性和临床适用性。结果显示:本方法灵敏度高,最低检测限达103.1 TCID50·mL^(-1),较商品化胶体金试纸条检测灵敏性提高至少10倍。且试纸条T/C值与病毒滴度呈现良好线性关系,可用于PEDV的定量检测。本方法操作简单、耗时短,检测时间为15 min。方法学验证显示,试纸条检测TGEV、PoRV、PDCoV、PRRSV、CSFV、ASFV时不发生交叉反应,特异性良好。试纸条的批内、批间变异系数均小于10%,重复性良好。50份临床样品的检测结果与国标RT-PCR方法总体符合率为96%,方法一致性高。本研究成功建立了基于TRFNPs的PEDV荧光微球免疫层析抗原检测方法,为临床中PEDV的快速检测提供了工具。 展开更多

关键词 猪流行性腹泻病毒 N蛋白 时间分辨荧光微球 免疫层析法 定量检测

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大肠杆菌O157:H7荧光微球免疫层析试纸条的研制 被引量：14

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作者 解泉源 赖卫华 +6 位作者 刘春梅 孙吉昌 邓省亮 刘成伟 魏华 游兴勇 熊勇华 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2013年第16期353-357,共5页

目的:建立快速、灵敏检测大肠杆菌O157:H7荧光微球免疫层析试纸条法。方法:以羧基化荧光微球作为标记物,共价偶联抗大肠杆菌O157:H7鼠源单克隆抗体,将大肠杆菌O157:H7兔多抗和驴抗鼠抗体喷涂于硝酸纤维素膜分别作为检测线和质控线,以双... 目的:建立快速、灵敏检测大肠杆菌O157:H7荧光微球免疫层析试纸条法。方法:以羧基化荧光微球作为标记物,共价偶联抗大肠杆菌O157:H7鼠源单克隆抗体,将大肠杆菌O157:H7兔多抗和驴抗鼠抗体喷涂于硝酸纤维素膜分别作为检测线和质控线,以双抗体夹心反应模式制备大肠杆菌O157:H7荧光微球免疫层析试纸条。结果:通过优化实验确定偶联缓冲液为0.02mol/L pH5.0磷酸盐缓冲液,抗体偶联微球量为100μg/mg,试纸条可在加样5min后判读结果。制备的荧光微球试纸条对纯培养大肠杆菌O157:H7进行检测,肉眼观察检测限在1.2×104CFU/mL,借助荧光读取仪检测限能提高到6.1×103CFU/mL。试纸条除与金黄色葡萄球菌有微弱交叉反应外,与实验室保存的30株细菌无交叉反应。结论:大肠杆菌O157:H7荧光微球试纸条具有操作简便、快速灵敏、易于量化的特点,为该菌的检测提供了一种新型的手段。 展开更多

关键词 大肠杆菌O157 H7 荧光微球 免疫层析法 试纸条

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猪流行性腹泻病毒时间分辨荧光免疫层析检测方法的建立 被引量：10

9

作者 王华俊 赵雪丽 +5 位作者 闫若潜 谢彩华 刘光辉 马震原 王淑娟 房大学 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2021年第1期40-45,共6页

为建立一种快速、定量检测猪流行性腹泻病毒(PEDV)时间分辨荧光免疫层析检测方法(TRFIA),本研究采用杂交瘤技术制备了抗PEDV N蛋白特异性单克隆抗体(MAb)5E6和1B7,将MAb 5E6与荧光微球偶联包被结合垫,将MAb 1B7和兔抗鼠IgG抗体分别包被... 为建立一种快速、定量检测猪流行性腹泻病毒(PEDV)时间分辨荧光免疫层析检测方法(TRFIA),本研究采用杂交瘤技术制备了抗PEDV N蛋白特异性单克隆抗体(MAb)5E6和1B7,将MAb 5E6与荧光微球偶联包被结合垫,将MAb 1B7和兔抗鼠IgG抗体分别包被硝酸纤维素膜作为检测线和质控线制备PEDV荧光微球免疫层析试纸条。优化了标记MAb 5E6、包被MAb 1B7的反应条件,并对其性能进行评价。结果显示,10μL 1%浓度的荧光微球标记MAb 5E6的量为18μg,MAb 1B7的包被浓度为1.2 mg/mL,最佳检测时间为点样后15 min;该方法与CSFV、PRRSV、TGEV、PDCoV及PRV Batha-K61株等均无交叉反应,特异性强;对PEDV的检测下限为389699.7 TCID50/0.1 mL,敏感性较高;对PEDV检测的线性范围为24940778.9 TCID50/0.1 mL~389699.7 TCID50/0.1 mL,线性范围较宽;批内和批间变异系数分别为8.76%、10.53%,重复性较好;试纸条在4℃和室温至少保存8个月,37℃则可保存10d,稳定性较好。该TRFIA试纸条与PEDV荧光定量PCR(FQ-PCR)平行检测160份疑似发病猪肛门拭子或小肠内容物样品。结果显示,该试纸条检测出76份阳性样品,84份阴性样品;FQ-PCR法检测出81份阳性样品,79份阴性样品,二者的总符合率为90.63%;经SPSS 22统计软件分析结果显示,K值为0.813,二者检测结果的一致性较高。本研究建立了一种简单、快速、灵敏和特异的基于MAb的TRFIA,为PEDV的现场检测提供了一种新方法。 展开更多

关键词 猪流行性腹泻病毒 荧光微球免疫层析 单克隆抗体 试纸条

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基于免疫层析技术的时间分辨荧光免疫分析仪研究 被引量：24

10

作者 任冰强 黄立华 黄惠杰 《仪器仪表学报》 EI CAS CSCD 北大核心 2009年第6期1330-1335,共6页

基于时间分辨荧光免疫分析和免疫层析技术的原理,研制了一种新型的时间分辨荧光免疫分析仪。与现有的时间分辨荧光分析仪不同,它所检测的是以Eu3+离子及其螯合物为标记物的免疫层析试纸条。通过测量免疫反应后试纸条检测带上Eu3+螯合物... 基于时间分辨荧光免疫分析和免疫层析技术的原理,研制了一种新型的时间分辨荧光免疫分析仪。与现有的时间分辨荧光分析仪不同,它所检测的是以Eu3+离子及其螯合物为标记物的免疫层析试纸条。通过测量免疫反应后试纸条检测带上Eu3+螯合物的含量,参照标准浓度曲线就可以定量得到待测样品溶液的浓度。实验表明,仪器的最低检测浓度可达到ng/mL量级,测量的相对标准偏差小于3%,在5～103ng/mL浓度范围内具有良好的线性响应特性,相关系数R2=0.9997。 展开更多

关键词 传感器技术 标记免疫学 时间分辨荧光免疫分析仪 免疫层析技术

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3种β_2-受体激动剂荧光免疫层析试纸条的制备及特性研究 被引量：9

11

作者 李丹妮 黄华 +2 位作者 张婧 王学生 顾依雯 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2017年第8期2437-2442,共6页

本研究旨在制备性能优异的克伦特罗(clenbuterol,CLB)、莱克多巴胺(ractopamine,RAC)和沙丁胺醇(salbutamol,SAL)荧光免疫层析快速定量检测试纸条,并对该试纸条的检测范围、检测限、准确度、精确度、假阳性、假阴性及其与仪器方法的符... 本研究旨在制备性能优异的克伦特罗(clenbuterol,CLB)、莱克多巴胺(ractopamine,RAC)和沙丁胺醇(salbutamol,SAL)荧光免疫层析快速定量检测试纸条,并对该试纸条的检测范围、检测限、准确度、精确度、假阳性、假阴性及其与仪器方法的符合率进行评价。结果显示,克伦特罗、莱克多巴胺和沙丁胺醇试纸条标准曲线范围分别为0~3.2、0~6.4、0~8.0μg/L;克伦特罗、莱克多巴胺和沙丁胺醇试纸条检测下限分别可达0.2、0.4和0.5μg/L;克伦特罗、莱克多巴胺和沙丁胺醇与其他8种同类药物交叉反应均成阴性,特异性良好;各批添加回收率在60%~120%之间,准确度达到要求;不同克伦特罗、莱克多巴胺和沙丁胺醇浓度下变异系数(CV)均小于15%,符合精密度标准;猪尿中假阳性率和假阴性率均为0;此外与仪器方法的符合率为100%。试纸条适用于猪尿中克伦特罗、沙丁胺醇和莱克多巴胺残留快速检测,具有灵敏度高、稳定性好和特异性强的特点。 展开更多

关键词 克伦特罗 莱克多巴胺 沙丁胺醇 荧光免疫层析法 试纸条 快速检测

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克伦特罗荧光免疫层析试纸条的制备及特性研究 被引量：10

12

作者 李静宇 何小维 +2 位作者 刘晓云 李文美 邓建超 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2015年第10期2606-2611,共6页

本研究旨在制备性能优异的克伦特罗（clenbuterol,CLB）荧光免疫层析快速定量检测试纸条,为实现其产业化应用奠定基础。采用荧光胶乳微粒为标记物,以抗原包被浓度、膜干燥时间、混匀反应时间、反应温度及层析时间为单因素优化制备了CLB... 本研究旨在制备性能优异的克伦特罗（clenbuterol,CLB）荧光免疫层析快速定量检测试纸条,为实现其产业化应用奠定基础。采用荧光胶乳微粒为标记物,以抗原包被浓度、膜干燥时间、混匀反应时间、反应温度及层析时间为单因素优化制备了CLB荧光免疫层析试纸条,并对该试纸条的检测限、特异性、临床准确度及添加回收率、精密度和稳定性进行了评价。最佳制备条件：抗原包被浓度2.0mg/mL,膜干燥时间5d,混匀反应时间1min,反应温度25℃,层析时间15min。评价结果显示,试纸条检测限可达0.35μg/L;CLB与其他8种同类药物交叉反应率均小于0.8%,特异性良好;各批添加回收率在80%-120%之间,准确度达到要求;不同CLB浓度下变异系数（CV）均小于5%,符合精密度标准;此外,稳定性试验验证了该试纸条稳定性良好。 展开更多

关键词 克伦特罗 荧光免疫层析法 试纸条 快速检测

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时间分辨荧光微球免疫层析技术定量检测人血清胃蛋白酶原Ⅰ的实验研究 被引量：4

13

作者 周衍 范俊 +4 位作者 蒋叶华 张珏 张艺 傅利新 黄飚 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第18期1803-1807,共5页

目的研制快速定量检测人血清胃蛋白酶原Ⅰ(pepsinogensⅠ,PGⅠ)试纸,并评价试纸性能。方法以包裹有时间分辨荧光的纳米微球作为标记示踪物,运用免疫层析试纸技术,研制PGⅠ检测试纸;考察试纸的检测线性、灵敏度、精密度、与对比试剂的符... 目的研制快速定量检测人血清胃蛋白酶原Ⅰ(pepsinogensⅠ,PGⅠ)试纸,并评价试纸性能。方法以包裹有时间分辨荧光的纳米微球作为标记示踪物,运用免疫层析试纸技术,研制PGⅠ检测试纸;考察试纸的检测线性、灵敏度、精密度、与对比试剂的符合率。结果试纸定量检测的线性良好,方程为Y=0.027 9+0.004 8X,r=0.997 8;灵敏度为0.27μg/L;批内CV小于10%,批间CV11.03%;与市售PGⅠ试剂平行检测489份血清样本,有良好的相关性(YTRFIA=0.856 6Xstrip+7.545 6,R2=0.989 1,P<0.01)。结论 PGⅠ时间分辨荧光纳米微球免疫层析试纸操作简单、快速、经济、可定量,满足临床检测血清PGⅠ的需求。 展开更多

关键词 胃蛋白酶原Ⅰ 时间分辨荧光纳米微球 免疫层析

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牦牛肉中阿维菌素残留的时间分辨荧光免疫层析检测方法的建立 被引量：6

14

作者 张正英 崔乃元 +4 位作者 高海燕 刘海珍 黄文颖 郝云晴 马立才 《肉类研究》 北大核心 2020年第8期57-62,共6页

为建立定量检测牦牛肉中阿维菌素残留的时间分辨荧光免疫层析方法,以羧基化铕微球作为荧光标记物,与阿维菌素鼠单克隆抗体G10703进行共价偶联后喷涂于释放垫上,将阿维菌素抗原和羊抗鼠免疫球蛋白G分别包被于硝酸纤维素膜上作为检测线(T... 为建立定量检测牦牛肉中阿维菌素残留的时间分辨荧光免疫层析方法,以羧基化铕微球作为荧光标记物,与阿维菌素鼠单克隆抗体G10703进行共价偶联后喷涂于释放垫上,将阿维菌素抗原和羊抗鼠免疫球蛋白G分别包被于硝酸纤维素膜上作为检测线(T)和质控线(C),制备免疫层析试纸条;利用牦牛肉样本阿维菌素添加量和对应的T线与C线荧光信号峰值比值(T/C)拟合得到四参数标准曲线,建立牦牛肉中阿维菌素残留的时间分辨荧光免疫层析检测方法,并对所建立方法的灵敏度、准确度、特异性、精密度和稳定性等进行评价,用液相色谱-串联质谱方法对所建立方法的性能进行确证。结果表明:本方法对牦牛肉中阿维菌素的定量限为1.0μg/kg,加标回收率为86.9%~105.2%,与阿维菌素、伊维菌素、多拉菌素及依普菌素的交叉反应率分别为100.0%、73.1%、42.6%和97.5%,批内变异系数为5.4%~9.5%,批间变异系数为7.5%~11.2%,该方法准确度、精密度、灵敏度均较高,且性能稳定。 展开更多

关键词 牦牛肉 阿维菌素 时间分辨荧光免疫层析

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禽流感病毒荧光免疫层析检测试纸条的研制 被引量：4

15

作者 孙洁 陈兵 +8 位作者 杨春华 吴峰 陈雨 郑晓聪 王津津 陶虹 丁晶 于力 秦智锋 《上海畜牧兽医通讯》 2019年第4期2-7,共6页

禽流感是重要的人兽共患病,建立现场快速灵敏的检测方法是防控其发生和流行的前提和基础。本研究采用不同亚型流感毒株交叉免疫小鼠法来免疫小鼠,通过多个亚型的NP表达蛋白来筛选杂交瘤阳性细胞株,获得分泌针对NP蛋白单克隆抗体的杂交... 禽流感是重要的人兽共患病,建立现场快速灵敏的检测方法是防控其发生和流行的前提和基础。本研究采用不同亚型流感毒株交叉免疫小鼠法来免疫小鼠,通过多个亚型的NP表达蛋白来筛选杂交瘤阳性细胞株,获得分泌针对NP蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞4株。通过抗体的两两配对,基于荧光量子点作为免疫层析抗体的标记探针,借助免疫层析试纸条双抗夹心法原理,筛选出了适用于免疫层析的两株单克隆抗体,研制了禽流感病毒(Avian influenza virus, AIV )荧光免疫层析检测试纸条[A lateral-flow immunoassay strip with quantum dots(QDs)against AIV , AIV -QD-LFIA],并对该试纸条进行了特异性、敏感性、可重复性及可靠性分析。试验结果显示:本研究所建立的 AIV -QD-LFIA试纸条检测禽流感标准抗原H5N1-HK的敏感性达到104 EID50 ,检测标准抗原H9N2-HK的灵敏度为102 EID50 ,比商品化的禽流感病毒抗原检测卡灵敏度高100倍,比国家标准实时荧光RT-PCR(rRT-PCR)灵敏度低约100倍;可特异性地检测出H5亚型、H7亚型、H9亚型、H1亚型、H3亚型等A型流感病毒,与 IBV 、 NDV 等常见禽呼吸道传染病病原无交叉反应,且经过了国家流感中心标准样本盘的样品测试,特异性强;同时该法具有良好重复性,连续4周检测20个样品重复结果均为阳性;小规模田间试验显示该法用于禽流感病毒的普查监测结果可靠。可见本研究所建立的 AIV -QD-LFIA试纸条可满足禽流感病毒快速、高灵敏的检测需求,具有广阔的应用空间。 展开更多

关键词 禽流感病毒 荧光免疫层析检测试纸条 检测

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时间分辨荧光免疫层析法检测酥油中黄曲霉毒素M1的研究 被引量：1

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作者 魏娜 张飞龙 《西藏农业科技》 2019年第4期37-39,共3页

为寻求酥油中黄曲霉毒素M1快速准确检测方法,本研究利用时间分辨荧光免疫层析法测定酥油中黄曲霉毒素M1含量,结果表明:该检测方法样品加标回收率为77. 6%89. 6%,RSD <15%,与免疫亲和柱净化-HPLC法相比,相对误差<12%,该法具有简便... 为寻求酥油中黄曲霉毒素M1快速准确检测方法,本研究利用时间分辨荧光免疫层析法测定酥油中黄曲霉毒素M1含量,结果表明:该检测方法样品加标回收率为77. 6%89. 6%,RSD <15%,与免疫亲和柱净化-HPLC法相比,相对误差<12%,该法具有简便快速、灵敏度高、重现性好等特点,可用于酥油中黄曲霉毒素M1的快速检测。 展开更多

关键词 时间分辨荧光免疫层析法 黄曲霉毒素M1 酥油 快速检测

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牛布鲁菌荧光标记免疫层析试纸条快速检测方法的建立 被引量：5

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作者 刘佳佳 吴彤 +4 位作者 梅琳 韩雪清 吴绍强 林祥梅 王慧煜 《动物医学进展》 北大核心 2018年第10期1-5,共5页

为建立一种快速诊断牛布鲁菌病的方法,以原核表达、纯化的外膜蛋白OMP22作为抗原,以带荧光标记的IgG抗体作为标记物制备免疫层析试纸条,建立一种布鲁菌病快速检测方法,并对该方法的敏感性和特异性进行验证。结果显示,制备的试纸条最低... 为建立一种快速诊断牛布鲁菌病的方法,以原核表达、纯化的外膜蛋白OMP22作为抗原,以带荧光标记的IgG抗体作为标记物制备免疫层析试纸条,建立一种布鲁菌病快速检测方法,并对该方法的敏感性和特异性进行验证。结果显示,制备的试纸条最低可检出1∶100稀释的牛布鲁菌标准阳性血清,且与牛结核、牛蓝舌病、牛病毒性腹泻、牛口蹄疫、牛巴氏杆菌病、牛白血病的血清无交叉反应;试纸条检测结果与商品化ELISA检测试剂盒(IDEXX)的符合率为93.5%。以上结果表明,建立的荧光标记免疫层析试纸条方法能快速检出牛血清中的布鲁菌抗体,具有良好的敏感性和特异性,是一种适合现场初筛的检测方法。 展开更多

关键词 布鲁菌 快速检测 荧光 免疫层析试纸条

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呕吐毒素时间分辨荧光免疫层析法的建立与评价 被引量：6

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作者 张东升 严艺琳 +3 位作者 熊晓辉 董曼佳 游京晶 张一平 《食品工业科技》 CAS CSCD 北大核心 2018年第20期233-239,共7页

构建并评价了呕吐毒素(Deoxynivalenol,DON)时间分辨荧光免疫层析法(TRFIA)。以Eu^(3+)螯合物的纳米微球为荧光探针标记抗DON单抗,采用竞争抑制建立免疫层析定量方法,优化了微球与抗体标记量,检测的环境温度、反应时间、加样体积及缓冲... 构建并评价了呕吐毒素(Deoxynivalenol,DON)时间分辨荧光免疫层析法(TRFIA)。以Eu^(3+)螯合物的纳米微球为荧光探针标记抗DON单抗,采用竞争抑制建立免疫层析定量方法,优化了微球与抗体标记量,检测的环境温度、反应时间、加样体积及缓冲体系;研究了方法的灵敏度、精密度及准确度。结果表明,每100μL荧光微球结合纯单抗50μg,最佳划膜浓度为1.0 mg/m L,最佳测定条件为室温(25±2)℃,10 min,加样体积100μL,PBS (0.01 mol/L,pH7.2)的缓冲体系,方法的灵敏度为0.25 ng/m L,线性范围为0.5~25.0 ng/m L,玉米、小麦阴性样本(加标浓度200、500、1000、2000μg/kg)平均加标回收率为91.4%~109.3%,6种典型样本经TRFIA与免疫亲和净化-高效液相色谱法(IAC-HPLC)同时测定DON含量,相关系数r达0.9754。TRFIA具有灵敏度高、速度快、定量准等技术特点,适用于谷物及制品中DON的快速定量。 展开更多

关键词 呕吐毒素 时间分辨荧光微球 免疫层析法 评价 检测

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瓜类果斑病菌荧光免疫层析试纸条的研制 被引量：2

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作者 曾海娟 翟绪昭 +2 位作者 孙静娟 王金斌 刘箐 《上海农业学报》 2021年第4期1-6,共6页

为建立检测果斑病菌的新型免疫学检测技术,以异硫氰酸荧光素(Fluorescein isothiocyanate,FITC)作为荧光探针,共价偶联抗瓜类果斑病菌野生型菌株SD01的鼠源单克隆抗体4F,将抗SD01单克隆抗体6D和羊抗鼠二抗喷涂于硝酸纤维素膜(NC膜)上分... 为建立检测果斑病菌的新型免疫学检测技术,以异硫氰酸荧光素(Fluorescein isothiocyanate,FITC)作为荧光探针,共价偶联抗瓜类果斑病菌野生型菌株SD01的鼠源单克隆抗体4F,将抗SD01单克隆抗体6D和羊抗鼠二抗喷涂于硝酸纤维素膜(NC膜)上分别作为检测线和质控线;以双抗体夹心反应模式制备检测果斑病菌的荧光免疫层析试纸条,并对试纸条的灵敏度、特异性及对实际样品的检测性能进行评估。结果表明:制备的荧光试纸条对纯培养果斑病菌SD01的检出限为3.1×10^(6)CFU∕mL;试纸条可检出8种果斑病菌(其中标准株1种,野生株7种),与6株近源的植物病原菌均无交叉反应,表明试纸条具有较高的特异性。在检测实际样品时,8种葫芦科植物的果斑病菌检出限为3.1×10^(6)CFU∕mL,表明汁液中的杂质对试纸条的检测灵敏度无影响,该试纸条适用于实际样品的检测。本研究制备的荧光试纸条操作简便、快速,结果肉眼可见,为果斑病菌的快速检测提供了一种新方法。 展开更多

关键词 瓜类果斑病菌 异硫氰酸荧光素 免疫层析 试纸条

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用于新型冠状病毒快速诊断的荧光免疫层析试纸条的制备及其细胞成像 被引量：1

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作者 黄池宝 杨斌 +3 位作者 康帅 杨丽 吕国岭 余福勋 《精细化工》 EI CAS CSCD 北大核心 2021年第7期1367-1373,共7页

合成了双光子荧光标记探针LP并对其结构进行了表征,通过LP标记SARS-CoV-2的N-蛋白抗原(Ag)获得LP-Ag,并将LP-Ag制成免疫层析试纸条(TPICS)/试剂盒(TPICK)。临床应用研究表明,与核酸法(PCR)/胶体金法比较,TPICS的阳性符合率、阴性符合率... 合成了双光子荧光标记探针LP并对其结构进行了表征,通过LP标记SARS-CoV-2的N-蛋白抗原(Ag)获得LP-Ag,并将LP-Ag制成免疫层析试纸条(TPICS)/试剂盒(TPICK)。临床应用研究表明,与核酸法(PCR)/胶体金法比较,TPICS的阳性符合率、阴性符合率和总符合率分别为98.99%/98.10%、99.55%/99.53%和99.38%/99.06%,其一致性系数Kappa值(K)为0.972/0.975,灵敏度、特异性和准确度分别为98.99%/98.10%、99.55%/99.53%和99.38%/99.06%。检测试剂与参比试剂检测结果一致(K>0.75),无统计学差异。TPICS/TPICK检测所用稀释血样一般为25~50μL(合全血样5~10μL),检测时间在10 min内,既避免了核酸法操作繁琐与检测周期过长的缺点,又克服了胶体金法因吸附官能团脱落而导致的不稳定性,具有良好的应用价值。LP-Ag可用于细胞中SARS-Co V-2成像以鉴定其阴阳性。 展开更多

关键词 COVID-19/SARS-CoV-2 N-蛋白 免疫层析试纸条 双光子荧光 试剂盒 功能材料

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