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应用温度梯度凝胶电泳筛选冠心病人β_2-AR的Gln27Glu突变 被引量:1
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作者 谭虹虹 余细勇 +1 位作者 单志新 符永恒 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2003年第11期1552-1552,共1页
关键词 温度梯度凝胶电泳 筛选 冠心病 Β2-AR GLN27GLU 基因突变
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应用温度梯度凝胶电泳检测冠心病人β_2-AR基因多态性
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作者 谭虹虹 余细勇 +3 位作者 单志新 符永恒 邓春玉 郑猛 《中山大学学报(医学科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2005年第B03期29-31,共3页
【目的】建立用于测定β_2肾上腺素受体(β_2-AR)基因多态性的温度梯度凝胶电泳(TGGE)技术,检测 Arg16Gly和 Gln27Glu,以确定冠心病 Beta2AR 基因的多态性。【方法】以经心脏造影确定为冠状动脉阻塞的病人 DNA 标本为模板,选择性 PCR ... 【目的】建立用于测定β_2肾上腺素受体(β_2-AR)基因多态性的温度梯度凝胶电泳(TGGE)技术,检测 Arg16Gly和 Gln27Glu,以确定冠心病 Beta2AR 基因的多态性。【方法】以经心脏造影确定为冠状动脉阻塞的病人 DNA 标本为模板,选择性 PCR 扩增β_2-AR Arg16Gly,Gln27Glu 区域,然后经测序确定,建立并优化 TGGE 技术参数。【结果】建立了分析130bpβ_2-AR Arg16Gly,205 bp Gln27Glu 的 TGGE 技术,可检测出 Arg16Gly,Gln27Glu 的多态性。30例样品中,13例为 Arg16Arg型,5例为 Gly16Gly 型,12例为 Arg16Gly 型;22例为 Gln27Gln 型,1例为 Glu27Glu 型,7例为 Gln27Glu 型。【结论】所建立的PCR-TGGE 技术可用于β_2肾上腺素受体16及27位点基因多态性的分子筛选。 展开更多
关键词 温度梯度凝胶电泳(TGGE) β2肾上腺素受体(β2-AR) 多态性
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肺癌患者全线粒体DNA体细胞性突变检测 被引量:3
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作者 刘玲玲 谭端军 Lee-Jun C.Wong 《中国肺癌杂志》 CAS 2004年第2期125-129,共5页
目的 检测肺癌患者线粒体DNA体细胞性突变并探讨它在肿瘤发生中的作用。方法 利用时相温度梯度凝胶电泳对 16例肺癌患者的肿瘤及相应癌旁组织全线粒体DNA进行突变筛查 ,然后直接测序明确突变并进行分析。结果 在 10例 ( 62 .5 % )患... 目的 检测肺癌患者线粒体DNA体细胞性突变并探讨它在肿瘤发生中的作用。方法 利用时相温度梯度凝胶电泳对 16例肺癌患者的肿瘤及相应癌旁组织全线粒体DNA进行突变筛查 ,然后直接测序明确突变并进行分析。结果 在 10例 ( 62 .5 % )患者中发现 2 9个体细胞性突变 ,其中 2个位于rRNA区( 6.90 % ) ,10个位于mRNA区 ( 3 4.48% ) ,17个位于高变D环区 ( 5 8.62 % )。检测到 2例肿瘤和 3例癌旁组织具有常见的 4977bp缺失突变。除np3 0 3~ 3 0 9位点具有长度不稳定外 ,未发现其它微卫星区域不稳定。结论 肺癌患者的线粒体DNA存在高频率的体细胞性突变。 展开更多
关键词 肺癌 线粒体 DNA突变 体细胞 检测 时相温度梯度凝胶电泳
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土壤微生物分子生态学研究中总DNA的提取 被引量:72
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作者 赵勇 周志华 +3 位作者 李武 刘彬彬 潘迎捷 赵立平 《农业环境科学学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第5期854-860,共7页
建立了一种土壤DNA提取方法。根据DNA产量和纯度2个评价指标,从3种手提土壤DNA方法中优选出方法B为手提DNA方法(Labmethod),它包括样品预处理,细胞裂解,粗DNA纯化,其中细胞裂解组合了玻璃珠击打,SDS裂解,溶菌酶裂解。进一步应用PCR-限... 建立了一种土壤DNA提取方法。根据DNA产量和纯度2个评价指标,从3种手提土壤DNA方法中优选出方法B为手提DNA方法(Labmethod),它包括样品预处理,细胞裂解,粗DNA纯化,其中细胞裂解组合了玻璃珠击打,SDS裂解,溶菌酶裂解。进一步应用PCR-限制性片段长度多态性(Restrictionfragmentlengthpolymorphism,RFLP)技术及PCR-温度梯度凝胶电泳(Temperaturegradientgelelectrophoresis,TGGE)技术,结合DNA产量、纯度、片段大小以及所反映的微生物群落结构特性等指标评价了手提方法(Labmethod)得到的总DNA质量,并将这些结果与2种应用较广的商业试剂盒(MoBioUltraCleanSoilDNAKit和Bio101FastDNASPINKit(ForSoil))所得DNA的各种指标进行了比较。结果表明,手提方法(Labmethod)的粗DNA产量低于Bio101Kit的,但高于MoBioKit的。这些方法所得DNA的长度都在21kb左右,Labmethod提取的DNA没有严重被剪切现象,而2种试剂盒提取的DNA都有不同程度的剪切。手提方法得到的DNA经纯化后,应用细菌及真菌特异引物进行PCR扩增,均能获得目的片段,表明该方法能从土壤中同时有效提取细菌和真菌总基因组DNA。并且,手提方法所得DNA的细菌16SrDNA和真菌18SrDNA的PCR-RFLP图谱与两种商业试剂盒的图谱基本相似,但3种方法提取的DNA在细菌16SrDNAV3区和真菌28SrDNA片段的PCR-TGGE图谱上都存在一定差异,主要表现在一些弱势条带的有无或强弱上。这说明手提方法提取的总DNA与2种商业试剂盒一样,在一定程度上能反映微生物群落的多样性和组成。总之,手提DNA方法(Labmethod)所用试剂普通,价格便宜,能在4h以内获得够质够量的土壤DNA用于微生物分子生态学研究,较适合于广大普通实验室进行土壤DNA提取工作。 展开更多
关键词 土壤DNA提取 DNA质量 PCR扩增 限制性片段长度多态性分析 温度梯度凝胶电泳分析
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不同施肥模式对茶园红黄壤细菌群落基因多样性的影响 被引量:10
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作者 林斯 邱珊莲 +3 位作者 邱宏端 陈济琛 王飞 林新坚 《中国土壤与肥料》 CAS CSCD 北大核心 2013年第1期32-37,共6页
运用温度梯度凝胶电泳技术研究不同培肥措施下闽东地区红黄壤茶园定位实验地的土壤细菌群落基因多样性。结果表明,不同培肥措施对细菌丰富度和多样性都有明显的影响,其中单施无机肥降低了土壤细菌群落结构多样性,不利于保持茶园土壤生... 运用温度梯度凝胶电泳技术研究不同培肥措施下闽东地区红黄壤茶园定位实验地的土壤细菌群落基因多样性。结果表明,不同培肥措施对细菌丰富度和多样性都有明显的影响,其中单施无机肥降低了土壤细菌群落结构多样性,不利于保持茶园土壤生态系统的稳定性,而"无机肥+有机肥+豆科绿肥"综合培肥模式对土壤微生物丰富度和基因多样性提高幅度最大。聚类分析表明,不施肥与单施无机肥的细菌群落结构最为相近,而"无机肥+有机肥+豆科绿肥"和"无机肥+豆科绿肥"培肥模式的细菌群落结构与其它施肥处理间的差异性较大,其中"无机肥+有机肥+豆科绿肥"尤为显著,说明套种豆科绿肥对微生物群落结构有显著影响。"无机肥+有机肥+豆科绿肥"培肥模式的茶叶产量和茶叶营养物质累积量最大,这进一步佐证了此培肥模式能促进茶园生态系统生产力。 展开更多
关键词 茶园土 施肥 群落结构 温度梯度凝胶电泳
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DGGE/TGGE技术在土壤微生物分子生态学研究中的应用 被引量:17
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作者 周琳 张晓君 +1 位作者 李国勋 张杰 《生物技术通报》 CAS CSCD 2006年第5期67-71,共5页
传统的微生物生态学研究方法只限于环境样品中极少部分(0.1% ̄1%)可培养的微生物类群,极大程度地限制了对土壤微生物群落结构的研究。综述了以16S rDNA为主要研究对象的DGGE/TGGE(Denaturing gradientgel electrophoresis,DGGE/Temperat... 传统的微生物生态学研究方法只限于环境样品中极少部分(0.1% ̄1%)可培养的微生物类群,极大程度地限制了对土壤微生物群落结构的研究。综述了以16S rDNA为主要研究对象的DGGE/TGGE(Denaturing gradientgel electrophoresis,DGGE/Temperature gradient gel electrophoresis,TGGE)技术原理,以其为主要手段结合PCR扩增、克隆建库、序列测定以及种系分析对土壤微生物的群落结构和多样性研究的最新动态。DGGE/TGGE技术极大地推动了土壤微生物分子生态学的发展,同时也为实际问题的诊断、作物生长跟踪监测等提供了技术支撑,在土壤微生物分子生态学研究和生产实践中起着越来越重要的作用。 展开更多
关键词 变性梯度凝胶电泳 温度梯度凝胶电泳 土壤 16S RDNA 微生物分子生态学
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DGGE/TGGE技术在微生物生态学中的应用 被引量:5
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作者 陈静 马松成 毛华明 《中国畜牧兽医》 CAS 2006年第11期47-50,共4页
变性梯度凝胶电泳(deaturing grad ien t ge l e lectrophores is,DGGE)和温度梯度凝胶电泳(tem perature grad ien t ge le lectrophores is,TGGE)可以直接分离PCR扩增片段,作为一种分子指纹技术而逐渐被人们应用于微生态研究中。通过D... 变性梯度凝胶电泳(deaturing grad ien t ge l e lectrophores is,DGGE)和温度梯度凝胶电泳(tem perature grad ien t ge le lectrophores is,TGGE)可以直接分离PCR扩增片段,作为一种分子指纹技术而逐渐被人们应用于微生态研究中。通过DGGE/TGGE对微生物组成的遗传特性进行表征,不但省去了菌种分离耗时耗力的工作量,更可鉴定出根据传统方法无法分离出来的菌种。作者重点描述了DGGE/TGGE的基本原理以及在胃肠道微生态研究中的应用。 展开更多
关键词 变性梯度凝胶电泳 温度梯度凝胶电泳 胃肠道微生态 多样性
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TISTD反应器中的菌群结构及生态变化 被引量:2
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作者 叶姜瑜 丁维 +1 位作者 何强 孙兴福 《土木建筑与环境工程》 CSCD 北大核心 2011年第1期147-152,共6页
以两相一体式污泥浓缩消化反应器(Two-phase Integrated Sludge Thickening andDigestion reactor,TISTD)为对象,研究了反应器稳定运行期间菌群结构及反应器负荷改变时其内部生态结构的变化。在以30%的投配率稳定运行时,从产酸相和产甲... 以两相一体式污泥浓缩消化反应器(Two-phase Integrated Sludge Thickening andDigestion reactor,TISTD)为对象,研究了反应器稳定运行期间菌群结构及反应器负荷改变时其内部生态结构的变化。在以30%的投配率稳定运行时,从产酸相和产甲烷相分别取样、培养和分离出20株优势菌属。选取其中6株进行了16S rDNA序列分析,分属于芽孢杆菌属、产甲烷螺菌属和产甲烷球菌属。在投配率分别为10%、20%、30%以及启动期和系统崩溃期5个时期采取10组样品,对其污泥进行DNA提取、纯化和16S rDNA PCR扩增及温度梯度凝胶电泳(Temperature gradientgel electrophoresis,TGGE)电泳检测等。结果表明:中温下反应器中微生物菌群呈多样性分布,生态系统复杂稳定,维持了反应器的正常功能;反应器不同负荷时期污泥DNA提取及扩增效果良好;TGGE图谱分析表明,投配率20%、30%时的群落结构相似度最高,污泥中生物含量丰富,支撑了TISTD在污泥浓缩下良好的消化效果。 展开更多
关键词 TISTD 菌群结构 温度梯度凝胶电泳 多样性 16SrDNA 生态系统
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反向杂交法检测基因突变的研究进展 被引量:1
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作者 李文哲 《实用医学杂志》 CAS 2008年第2期322-324,共3页
基因突变的检测是分子生物学、遗传学、诊断学、肿瘤学研究的热点,其检测方法也随着生命学科的发展而迅速发展。基因突变的检测技术种类繁多,如单链构象多态性(SSCP)、温度梯度凝胶电泳等。其中反向杂交法由于其具有操作简单、可重... 基因突变的检测是分子生物学、遗传学、诊断学、肿瘤学研究的热点,其检测方法也随着生命学科的发展而迅速发展。基因突变的检测技术种类繁多,如单链构象多态性(SSCP)、温度梯度凝胶电泳等。其中反向杂交法由于其具有操作简单、可重复性好、灵敏度高、一次可检测多个突变的特点.在临床诊断中具有很高的开发价值。本文对反向杂交法在基因突变检测方面的应用进行了总结。 展开更多
关键词 基因突变检测 反向杂交法 检测技术 温度梯度凝胶电泳 单链构象多态性 分子生物学 可重复性 临床诊断
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MTHFR基因C677T点突变的PCR-TGGE检测技术的建立
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作者 莫雪华 李月琴 +3 位作者 谢卫兵 王彤歌 吴军民 周天鸿 《暨南大学学报(自然科学与医学版)》 CAS CSCD 2002年第1期99-103,共5页
目的 :建立检测MTHFRC6 77T点突变的PCR -TGGE技术 .方法 :以中国人群外周血基因组DNA为模板 ,用聚合酶链反应扩增该基因外显子 4 ,用温度梯度凝胶电泳 (TGGE)分析检测PCR产物 ,对电泳结果异常者进行DNA测序 .结果 :垂直型TGGE与平行型T... 目的 :建立检测MTHFRC6 77T点突变的PCR -TGGE技术 .方法 :以中国人群外周血基因组DNA为模板 ,用聚合酶链反应扩增该基因外显子 4 ,用温度梯度凝胶电泳 (TGGE)分析检测PCR产物 ,对电泳结果异常者进行DNA测序 .结果 :垂直型TGGE与平行型TGGE均发现该外显子存在杂合性突变 ,经DNA测序证实为C6 77T点突变 .结论 :该技术具有快速、分辨能力高和重复性好的特点 ,是一种有效的检测核酸序列变异和点突变的技术 . 展开更多
关键词 MTHFR基因 C677T点突变 PCR-TGGE检测技术 温度梯度凝胶电泳 基因突变 分子生物学 中国人
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