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基于hNIS基因的辐射正反馈重组杆状病毒体系制备
1
作者
郭睿
李彪
《上海交通大学学报（医学版）》
CAS
CSCD
北大核心
2013年第12期1566-1572,共7页
目的构建含早期生长应答因子1(Egr1)辐射敏感启动子调控的人钠碘同向转运体(hNIS)基因重组杆状病毒,为进一步延长核素在细胞中的滞留时间,提高hNIS介导的恶性肿瘤放射性核素基因靶向治疗疗效提供理论基础。方法空载体pFB取自质粒pFB-CMV...
目的构建含早期生长应答因子1(Egr1)辐射敏感启动子调控的人钠碘同向转运体(hNIS)基因重组杆状病毒,为进一步延长核素在细胞中的滞留时间,提高hNIS介导的恶性肿瘤放射性核素基因靶向治疗疗效提供理论基础。方法空载体pFB取自质粒pFB-CMV-EGFP,Egr1启动子取自质粒PGL3-Egr1-luc,hNIS取自质粒pcDNA3.1-CMV-hNIS,构建重组杆状病毒载体质粒pFB-Egr1-Hnis;同时构建含CMV启动子的质粒pFB-CMV-hNIS作为阳性对照,并将杆状病毒空载体质粒pFB-0作为阴性对照。随后制备各组杆状病毒,扩增收集重组杆状病毒并进行滴度测定。为进一步鉴定病毒功能,一方面通过体外感染U87脑胶质瘤细胞并采用131I刺激,通过免疫荧光检测131I刺激后的hNIS蛋白表达;另一方面通过摄碘实验进一步验证所表达的hNIS蛋白的摄碘功能和特性。结果成功构建重组杆状病毒载体质粒pFB-Egr1-hNIS和pFB-CMV-hNIS;转座成功并提取了重组Bacmid;重组Bacmid转染Sf 9细胞后扩增收集的重组杆状病毒滴度可以达到1×1010pfu/mL。体外感染U87细胞后,免疫荧光检测表明131I刺激后可增加hNIS的表达,感染细胞表达的hNIS蛋白位于细胞膜上,且具有摄碘的功能。结论成功构建了重组杆状病毒载体质粒pFB-Egr1-hNIS及pFB-CMV-hNIS,获得高滴度的重组杆状病毒Bac-Egr1-hNIS、Bac-CMV-hNIS和Bac-0并得到验证;建立了基于hNIS基因的辐射正反馈重组杆状病毒体系,为进一步提高核素靶向治疗疗效奠定了重要的理论基础。
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关键词
人钠碘同向转运体
早期生长应答因子1
重组杆状病毒
正反馈
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职称材料
题名
基于hNIS基因的辐射正反馈重组杆状病毒体系制备
1
作者
郭睿
李彪
机构
上海交通大学医学院附属瑞金医院核医学科
出处
《上海交通大学学报（医学版）》
CAS
CSCD
北大核心
2013年第12期1566-1572,共7页
基金
国家自然科学基金(81101071)
上海市优秀学科带头人计划项目(11XD1403700)
上海高校青年教师培养资助计划(2011)~~
文摘
目的构建含早期生长应答因子1(Egr1)辐射敏感启动子调控的人钠碘同向转运体(hNIS)基因重组杆状病毒,为进一步延长核素在细胞中的滞留时间,提高hNIS介导的恶性肿瘤放射性核素基因靶向治疗疗效提供理论基础。方法空载体pFB取自质粒pFB-CMV-EGFP,Egr1启动子取自质粒PGL3-Egr1-luc,hNIS取自质粒pcDNA3.1-CMV-hNIS,构建重组杆状病毒载体质粒pFB-Egr1-Hnis;同时构建含CMV启动子的质粒pFB-CMV-hNIS作为阳性对照,并将杆状病毒空载体质粒pFB-0作为阴性对照。随后制备各组杆状病毒,扩增收集重组杆状病毒并进行滴度测定。为进一步鉴定病毒功能,一方面通过体外感染U87脑胶质瘤细胞并采用131I刺激,通过免疫荧光检测131I刺激后的hNIS蛋白表达;另一方面通过摄碘实验进一步验证所表达的hNIS蛋白的摄碘功能和特性。结果成功构建重组杆状病毒载体质粒pFB-Egr1-hNIS和pFB-CMV-hNIS;转座成功并提取了重组Bacmid;重组Bacmid转染Sf 9细胞后扩增收集的重组杆状病毒滴度可以达到1×1010pfu/mL。体外感染U87细胞后,免疫荧光检测表明131I刺激后可增加hNIS的表达,感染细胞表达的hNIS蛋白位于细胞膜上,且具有摄碘的功能。结论成功构建了重组杆状病毒载体质粒pFB-Egr1-hNIS及pFB-CMV-hNIS,获得高滴度的重组杆状病毒Bac-Egr1-hNIS、Bac-CMV-hNIS和Bac-0并得到验证;建立了基于hNIS基因的辐射正反馈重组杆状病毒体系,为进一步提高核素靶向治疗疗效奠定了重要的理论基础。
关键词
人钠碘同向转运体
早期生长应答因子1
重组杆状病毒
正反馈
Keywords
human sodium iodide symporter
early growth response-l
recombinant baculovirus
positive feedback
分类号
R373 [医药卫生—病原生物学]
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题名
作者
出处
发文年
被引量
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1
基于hNIS基因的辐射正反馈重组杆状病毒体系制备
郭睿
李彪
《上海交通大学学报（医学版）》
CAS
CSCD
北大核心
2013
0
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