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谷胱甘肽-S-转移酶-ASPP2融合蛋白的原核表达及纯化 被引量：1
1
作者 南萍 李秉超 +2 位作者 柳雅立 石英 陈德喜 《东北农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第11期65-68,共4页
为表达并初步纯化包含ASPP2活性区域和不包含其活性区域的谷胱甘肽-S-转移酶(GST)-ASPP2融合蛋白。采用PCR扩增两段ASPP2基因短片段,在引物5'端和3'端分别引入BamHⅠ和EcoRⅠ酶切位点,将其克隆进入原核表达载体pGEX-4T-1;异丙... 为表达并初步纯化包含ASPP2活性区域和不包含其活性区域的谷胱甘肽-S-转移酶(GST)-ASPP2融合蛋白。采用PCR扩增两段ASPP2基因短片段,在引物5'端和3'端分别引入BamHⅠ和EcoRⅠ酶切位点,将其克隆进入原核表达载体pGEX-4T-1;异丙基硫代-半乳糖苷(IPTG)诱导重组质粒pGEX-4T-1-ASPP2在大肠杆菌BL21(DE3)中表达同时带有谷胱甘肽-S-转移酶(GST)标签的融合蛋白;超声法裂解大肠杆菌,应用谷胱苷肽琼脂糖树脂纯化可溶的GST-ASPP2融合蛋白;通过SDS-PAGE和Western blot验证GST-ASPP2融合蛋白的表达。结果表明,已成功的构建了GST-ASPP2小片段融合蛋白表达载体,在Western blot分析中,4个蛋白条带均能被鼠抗GST单克隆抗体特异性识别,条带所在位置和GST-ASPP2的分子质量相符。构建了GST-ASPP2重组质粒,在大肠杆菌BL21中高效表达GST-ASPP2融合蛋白,为进一步研究ASPP2全长,N-末端和C-末端生理意义奠定了基础。 展开更多
关键词 ASPP2 谷胱甘肽-s-转移酶 融合蛋白 WESTERN BLOT
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谷胱甘肽-S-转移酶人趋化因子CCL3L1的表达
2
作者 徐斌 石英 +3 位作者 李俊红 张薇 吴昊 陈德喜 《中国医学科学院学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第5期642-646,共5页
目的克隆人趋化因子CCL3L1基因,表达并初步纯化谷胱甘肽-S-转移酶(GST)-CCL3L1融合蛋白。方法从乳腺癌细胞MCF7中提取总RNA,采用RT-PCR扩增CCL3L1cDNA基因,克隆入GST融合表达载体pGEX-4T-1中,重组载体经酶切和测序鉴定后,在BL21大肠杆... 目的克隆人趋化因子CCL3L1基因,表达并初步纯化谷胱甘肽-S-转移酶(GST)-CCL3L1融合蛋白。方法从乳腺癌细胞MCF7中提取总RNA,采用RT-PCR扩增CCL3L1cDNA基因,克隆入GST融合表达载体pGEX-4T-1中,重组载体经酶切和测序鉴定后,在BL21大肠杆菌中用异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达,获得GST-CCL3L1融合蛋白,采用SDS-PAGE和Westernblotting分析表达产物。结果经测序、酶切鉴定证明CCL3L1基因已正确插入到pGEX-4T-1中,经IPTG诱导后,表达出相对分子质量为34000的新生GST-CCL3L1融合蛋白。结论GST-CCL3L1融合蛋白可被成功表达。 展开更多
关键词 趋化因子 CCL3L1 融合蛋白 谷胱甘肽-s-转移酶
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rSj14-3-3和rSj14-3-3/SjGST对日本血吸虫虫卵肉芽肿形成的影响 被引量：3
3
作者 李德发 祖莹 沈继龙 《中国人兽共患病杂志》 CSCD 北大核心 2003年第5期55-57,共3页
目的　探讨日本血吸虫信号蛋白 14 - 3- 3基因重组蛋白 (rSj14 - 3- 3)及其与谷胱甘肽S转移酶融合蛋白(rSj14 - 3- 3/SjGST)对宿主肝虫卵肉芽肿形成的影响。 方法　用rSj14 - 3- 3和rSj14 - 3- 3/SjGST免疫雌性BALB/c小鼠 ,末次免疫后 5... 目的　探讨日本血吸虫信号蛋白 14 - 3- 3基因重组蛋白 (rSj14 - 3- 3)及其与谷胱甘肽S转移酶融合蛋白(rSj14 - 3- 3/SjGST)对宿主肝虫卵肉芽肿形成的影响。 方法　用rSj14 - 3- 3和rSj14 - 3- 3/SjGST免疫雌性BALB/c小鼠 ,末次免疫后 5d ,各组小鼠均感染日本血吸虫尾蚴 4 0± 1条 /鼠 ,6周后 ,剖杀 ,取肝组织计数肝表面虫卵结节密度和肝切片上单个虫卵肉芽肿直径大小。结果　免疫组 (14 - 3- 3组和 14 - 3- 3/GST组 )和对照组肝表面虫卵结节数分别为 6 72±1 14、5 89± 1 0 3和 2 1 0 5± 1 2 6 ,前两者比后者分别减少了 6 8 0 8%和 72 0 2 % ;肝肉芽肿平均直径免疫组为 178 12±32 18μm和 14 8 13± 2 9 6 5 μm ,与对照组 2 75 0 0± 38 2 1μm相比分别减少了 35 2 3%和 4 6 13%。结论　重组抗原rSj14 - 3- 3和rSj14 - 3- 3/SjGST对日本血吸虫具有较好的抗病效果。 展开更多
关键词 rSjl4-3-3 rSj14-3-3/sjgst 日本血吸虫 虫卵 肉芽肿形成 谷胱甘肽S转移酶 融合蛋白 基因重组蛋白 疫苗
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日本血吸虫GST蛋白和14-3-3蛋白的研究进展 被引量：1
4
作者 刘文 徐振山 宋礼华 《生物学杂志》 CAS CSCD 2011年第3期80-83,共4页
血吸虫病是严重危害人类健康的人兽共患病之一,在全球范围内,血吸虫病曾在76个国家和地区流行,有超过2亿人感染了血吸虫病。目前,世界上采取了一些人畜同步治疗等综合防治措施,虽取得了一定的成效,但仍面临着成本高、再感染率高等一系... 血吸虫病是严重危害人类健康的人兽共患病之一,在全球范围内,血吸虫病曾在76个国家和地区流行,有超过2亿人感染了血吸虫病。目前,世界上采取了一些人畜同步治疗等综合防治措施,虽取得了一定的成效,但仍面临着成本高、再感染率高等一系列问题。因此,寻找新的治疗药物、疫苗候选分子以及开发高度特异且敏感的标准化免疫诊断试剂是当前日本血吸虫病基础研究的重要内容。主要对WHO提出的最具潜力的疫苗候选分子血吸虫GST蛋白以及参与血吸虫许多生物学功能的14-3-3蛋白的最新研究进展进行一些阐述。 展开更多
关键词 日本血吸虫谷胱甘肽-s-转移酶融合蛋白(sjgst) Sj14-3-3蛋白 日本血吸虫(Schistosoma japonicum)
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可溶性重组日本血吸虫26 kDa GST的优化表达 被引量：10
5
作者 余光清 蒋诗琴 李雍龙 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第8期770-773,共4页
目的探讨在大肠杆菌中表达可溶性重组日本血吸虫谷胱甘肽S-转移酶(rSj26 GST)的优化条件。方法用含有Sj26基因的原核表达载体pGEX-3X转化大肠杆菌BL21(DE3),将影响可溶性rSj26 GST表达的4个因素,即温度、诱导剂IPTG浓度、诱导时细菌的... 目的探讨在大肠杆菌中表达可溶性重组日本血吸虫谷胱甘肽S-转移酶(rSj26 GST)的优化条件。方法用含有Sj26基因的原核表达载体pGEX-3X转化大肠杆菌BL21(DE3),将影响可溶性rSj26 GST表达的4个因素,即温度、诱导剂IPTG浓度、诱导时细菌的密度和诱导时间进行正交设计,确定其优化表达条件并大量表达,采用谷胱甘肽亲和层析法纯化表达的蛋白,测定酶活性,通过Western blot鉴定免疫活性。结果正交设计的直观分析和方差分析结果显示:可溶性rSj26GST最佳表达条件为温度25℃,IPTG的浓度1 mmol/L,诱导前细菌的生长密度0.9,诱导表达时间8 h。可溶性rSj26 GST纯化的产量为16 mg/L,Western blot证实rSj26 GST具有良好免疫原性和免疫反应性。结论通过正交设计确定了可溶性rSj26 GST在大肠杆菌中表达的优化条件。 展开更多
关键词 日本血吸虫 日本血吸虫谷胱甘肽 S-转移酶 蛋白表达 正交设计 大肠杆菌
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日本血吸虫中国大陆株26kD GST基因在大肠杆菌中的高效表达 被引量：5
6
作者 刘金明 林矫矫 +4 位作者 杨冠珍 傅志强 石耀军 蔡幼民 吴祥甫 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 2000年第6期759-763,共5页
用大肠杆菌高效表达日本血吸虫中国大陆株 2 6k D GST基因 (Sj2 6)并观察表达产物诱导的免疫保护效果 .将 Sj2 6基因亚克隆至 p ET2 8b(+)中构建重组表达质粒 Sj2 6/ p ET,转化大肠杆菌 BL 2 1 (DE3) .Sj2 6在诱导条件下及未诱导条件下... 用大肠杆菌高效表达日本血吸虫中国大陆株 2 6k D GST基因 (Sj2 6)并观察表达产物诱导的免疫保护效果 .将 Sj2 6基因亚克隆至 p ET2 8b(+)中构建重组表达质粒 Sj2 6/ p ET,转化大肠杆菌 BL 2 1 (DE3) .Sj2 6在诱导条件下及未诱导条件下均获得高效表达 .表达产物 (r Sj2 6GST)以包含体形式表达 ,分子量为 2 8k D左右 ,能用 6× His亲和层析柱纯化 ,纯化产量为 55～ 60 mg/ L大肠杆菌培养物 .免疫印迹及 ELSA实验证实 r Sj2 6GST具有良好抗原性 .用 r Sj2 6GST不加佐剂直接背部皮下免疫昆明系小鼠 ,获得了 1 9.6% (P<0 .0 5)的减虫率及 31 .9% (P<0 .0 5)的成熟虫体减虫率 ;且免疫组检获的虫体中未成熟虫体的比例为 32 % (66/ 2 0 6) ,明显高于对照组的 1 9.6% (56/2 85) (P<0 .0 1 ) ,说明 r Sj2 6GST免疫不仅可诱导抗日本血吸虫的部分攻击感染作用 ,而且能抑制部分虫体的发育 . 展开更多
关键词 日本血吸虫 谷胱甘肽-s-转移酶 基因表达 免疫
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日本血吸虫rSj14-3-3疫苗和rSj26 GST疫苗联合免疫保护作用研究 被引量：5
7
作者 蒋就喜 房修罗 +1 位作者 沈继龙 胡婷婷 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第9期825-829,834,共6页
目的观察日本血吸虫重组信号蛋白14-3-3(rSj14-3-3)疫苗和重组M r2600谷胱甘肽S转移酶(rSj26GST)疫苗联合免疫对小鼠的保护作用。方法将含有Sj14-3-3和Sj26GST编码基因的菌株E.coliBL21/p ET28a涂布LB/Kana/IPTG/X-gal平板,培养、收集... 目的观察日本血吸虫重组信号蛋白14-3-3(rSj14-3-3)疫苗和重组M r2600谷胱甘肽S转移酶(rSj26GST)疫苗联合免疫对小鼠的保护作用。方法将含有Sj14-3-3和Sj26GST编码基因的菌株E.coliBL21/p ET28a涂布LB/Kana/IPTG/X-gal平板,培养、收集细菌、超声碎菌、分离、纯化,分别取5μL进行SDS-PAGE,观察纯化结果,采用BCA法测定重组蛋白的浓度。联合免疫组BALB/c小鼠分别在第0、2、4周用rSj14-3-3疫苗rSj26GST疫苗联合免疫;而单独免疫的rSj14-3-3组及rSj26GST组,与上组同步各自免疫3次。末次免疫后2周进行感染攻击,45d后剖杀,计数成虫及肝内虫卵。同时设PBS对照组。计算各组间的减虫率和减卵率,以及虫卵肉芽肿的大小。结果联合免疫组的减虫率为38.38%,显著高于rSj14-3-3(16.98%)和rSj26GST组(26.80%)(P<0.01)。联合免疫组以及rSj14-3-3、rSj26GST组减卵率分别为48.81%、25.27%、41.41%;联合免疫组rSj14-3-3和rSj26GST组,肝组织中每条雌虫平均产卵数显著低于PBS对照组(P<0.01)。联合组小鼠虫卵肉芽肿的直径为(173.9±35.0μm),显著小于对照组(267.7±28.6μm)(P<0.01),联合组亦明显低于rSj14-3-3和rSj26GST组(P<0.01)。结论联合免疫组的保护作用优于rSj14-3-3和rSj26GST单独免疫组。且联合免疫疫苗具有一定的抗虫卵肉芽肿及抗肝纤维化作用。 展开更多
关键词 日本血吸虫 信号蛋白14-3-3 谷胱甘肽S转移酶 重组蛋白 联合免疫
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日本血吸虫重组28GST T细胞表位谱的预测及鉴定 被引量：4
8
作者 李光富 张兆松 +4 位作者 王勇 王新军 朱翔 季旻珺 吴观陵 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2004年第3期352-355,共4页
目的 :用软件预测日本血吸虫重组 2 8GST抗原分子T细胞表位谱 ,并鉴定其Th1型细胞表位。方法 :用软件预测重组2 8GSTT细胞表位谱 ,并筛选几种较好的T细胞表位 ,人工合成表位肽或用基因工程制备重组表位肽融合蛋白。体外刺激经照射的尾... 目的 :用软件预测日本血吸虫重组 2 8GST抗原分子T细胞表位谱 ,并鉴定其Th1型细胞表位。方法 :用软件预测重组2 8GSTT细胞表位谱 ,并筛选几种较好的T细胞表位 ,人工合成表位肽或用基因工程制备重组表位肽融合蛋白。体外刺激经照射的尾蚴感染并用 2 8GST加强免疫的C5 7BL/ 6小鼠 (H 2 b)脾细胞 ,通过淋巴细胞增殖试验、ELISA及流式细胞术等 ,分析各种表位的免疫刺激作用 ,鉴定Th1型细胞表位。结果 :在 9个候选的表位中 ,P6 (73～ 86aa)是刺激作用最强的Th1型细胞表位。结论 :重组 2 展开更多
关键词 日本血吸虫 表位 谷胱甘肽-s-转移酶(GsT)
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β-内酰胺酶抑制短肽SIPIS04-01的表达、纯化与抑制作用测定 被引量：2
9
作者 孙伟 龚家玮 +1 位作者 朱春宝 朱宝泉 《中国抗生素杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第3期129-133,共5页
通过酵母双杂交系统从一个随机DNA片段文库中筛选到一个编码能与β-内酰胺酶结合的短肽SIPIS04-01的DNA序列,将它克隆到pGEX-4T-1的多克隆位点中,得到重组质粒pYG205。当用适量的IPTG诱导后,携带pYG205的E.coliDH5α能表达短肽SIPIS04-0... 通过酵母双杂交系统从一个随机DNA片段文库中筛选到一个编码能与β-内酰胺酶结合的短肽SIPIS04-01的DNA序列,将它克隆到pGEX-4T-1的多克隆位点中,得到重组质粒pYG205。当用适量的IPTG诱导后,携带pYG205的E.coliDH5α能表达短肽SIPIS04-01-GST融合蛋白。利用谷胱甘肽Sepharose4B亲和层析介质分离纯化短肽SIPIS04-01-GST融合蛋白,经凝血酶切割并分离纯化后,体外试验表明短肽SIPIS04-01具有抑制β-内酰胺酶的作用。 展开更多
关键词 Β-内酰胺酶 β-内酰胺酶结合肽 谷胱甘肽-s-转移酶融合蛋白
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Sj28GST基因克隆和高效表达产物的纯化 被引量：4
10
作者 李光富 张兆松 +6 位作者 王新军 李春玲 王勇 季旻 刘丰 蔡晓萍 朱翔 《中国人兽共患病杂志》 CSCD 北大核心 2004年第1期15-18,共4页
目的　从日本血吸虫中国大陆株成虫cDNA文库中克隆 2 8kDa谷胱甘肽 -S -转移酶 (Sj2 8GST)基因 ,获得用于疫苗和T细胞表位研究的高纯度重组融合蛋白 2 8GST -TRX。方法　应用引物特异性PCR技术 ,从日本血吸虫中国大陆株成虫cDNA文库中扩... 目的　从日本血吸虫中国大陆株成虫cDNA文库中克隆 2 8kDa谷胱甘肽 -S -转移酶 (Sj2 8GST)基因 ,获得用于疫苗和T细胞表位研究的高纯度重组融合蛋白 2 8GST -TRX。方法　应用引物特异性PCR技术 ,从日本血吸虫中国大陆株成虫cDNA文库中扩增Sj2 8GST基因 ,经琼脂糖凝胶电泳结合碱基序列分析鉴定后 ,采用定向克隆技术构建Sj2 8GST -TRX融合蛋白重组表达载体并诱导其在大肠杆菌BL2 1(DE3)的表达 ,用Western -blotting测定以融合蛋白方式表达的Sj2 8GST的免疫原性 ,通过包涵体纯化结合Ni+柱亲和层析获得高纯度重组融合蛋白。结果　Sj2 8GSTPCR产物为约 6 4 0bp ,其碱基序列 (6 33bp)和推导的氨基酸序列 (2 11aa)与GenBank报道一致 ;获得了Sj2 8GST -TRX重组质粒 ;2 8GST -TRX融合蛋白在大肠杆菌以包涵体形式高效表达 ;在分子量为约 4 3kDa处有一能与羊抗Sj2 8GST抗体产生特异性反应的含 2 8GST融合蛋白条带 ;包涵体纯化法结合Ni+ 亲和层析可获得高纯度的重组融合蛋白。结论　获得到了日本血吸虫中国大陆株 2 8GST分子的全长基因和高纯度重组 2 8GST -TRX融合蛋白 ,该融合蛋白具有天然Sj2 8GST免疫原性。 展开更多
关键词 Sj28GST 基因克隆 高效表达产物 纯化 日本血吸虫 28kDa谷胱甘肽-s-转移酶
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