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重组日本血吸虫抱雌沟蛋白rGST-SjGCP配伍GEL 02或ISA 201佐剂的免疫效果比较 被引量：1
1
作者 石帅锋 贾静 +4 位作者 郑明政 张倩 洪炀 林矫矫 傅志强 《中国动物传染病学报》 北大核心 2025年第4期63-70,共8页
为评估日本血吸虫抱雌沟蛋白作为疫苗候选抗原的潜力及其与GEL 02和ISA 201佐剂配伍后的免疫应答,本研究通过构建重组质粒pGEX-4T-1/SjGCP并在大肠杆菌(E.coli)中诱导表达,纯化融合蛋白rGST-SjGCP,用Western blot检测其抗原性,再将其分... 为评估日本血吸虫抱雌沟蛋白作为疫苗候选抗原的潜力及其与GEL 02和ISA 201佐剂配伍后的免疫应答,本研究通过构建重组质粒pGEX-4T-1/SjGCP并在大肠杆菌(E.coli)中诱导表达,纯化融合蛋白rGST-SjGCP,用Western blot检测其抗原性,再将其分别与2种佐剂配伍后免疫小鼠评估其免疫效果,用ELISA检测特异性抗体水平。结果显示:重组质粒pGEX-4T-1/SjGCP在大肠杆菌中成功诱导表达,纯化后得到约100 kDa的融合蛋白rGST-SjGCP;rGST-SjGCP分别与GEL 02和ISA 201佐剂配伍后免疫小鼠,均诱导小鼠产生较高水平的特异性IgG抗体,分别是佐剂对照组的7.07倍(P<0.001)和6.86倍(P<0.001),特异性抗体亚型IgG1/IgG2a的比值与佐剂对照组相比分别升高了13.68%(P<0.05)和14.71%(P=0.3468);日本血吸虫感染小鼠血清和融合蛋白rGST-SjGCP免疫小鼠血清均可特异性识别目的蛋白,表明rGST-SjGCP具有良好的抗原性;与PBS组相比,rGST-SjGCP与GEL 02佐剂配伍后在小鼠中诱导了25.87%(P<0.01)的减虫率和27.36%(P<0.05)的肝脏减卵率,rGST-SjGCP与ISA 201佐剂配伍后在小鼠中未诱导产生差异显著的减虫率和肝脏减卵率。结果表明,rGST-SjGCP结合GEL 02佐剂可诱导偏向Th2型免疫应答,具有免疫保护效果。本研究为评价日本血吸虫抱雌沟蛋白作为疫苗候选抗原的潜力及疫苗佐剂的选择提供了依据。 展开更多
关键词 日本血吸虫 抱雌沟蛋白 佐剂 疫苗
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微滴式数字PCR检测日本血吸虫核酸的方法建立及应用的初步评价
2
作者 汤宪时 杨静 +2 位作者 曲国立 许永良 仝德胜 《中国人兽共患病学报》 北大核心 2025年第5期544-552,共9页
目的建立微滴式数字PCR(Droplet Digital PCR,ddPCR)检测日本血吸虫的方法,初步评价其应用价值。方法设计合成用于染料法和探针法的引物和探针,构建含靶标序列的质粒,评价两种方法检测重组质粒、感染性钉螺和混合钉螺DNA的灵敏度,采用... 目的建立微滴式数字PCR(Droplet Digital PCR,ddPCR)检测日本血吸虫的方法,初步评价其应用价值。方法设计合成用于染料法和探针法的引物和探针,构建含靶标序列的质粒,评价两种方法检测重组质粒、感染性钉螺和混合钉螺DNA的灵敏度,采用阴性钉螺、曼氏血吸虫、肝吸虫、曼氏迭宫绦虫基因组DNA以及日本血吸虫虫体基因组DNA评价两种方法的特异性,应用和评价探针法检测以不同毛钉比和孵育时长接触毛蚴的钉螺早期感染情况,检测感染过量尾蚴(200条)小鼠体内童虫在不同组织器官中早期移行分布情况。结果检测质粒梯度稀释产物,绘制ddPCR标准曲线,染料法回归方程为y=-0.8399x+7.0509,相关系数R^(2)=0.9881;探针法回归方程为y=-1.0475x+7.2551,相关系数R^(2)=0.9998。探针法质粒检测下限介于38.94 cp/μL和194.74 cp/μL之间。两种方法均可在浓度不低于0.002 ng/μL感染性钉螺基因组DNA样本中和各组混合钉螺基因组DNA中检出阳性反应。探针法检测阴性钉螺、曼氏血吸虫、肝吸虫、曼氏迭宫绦虫结果与对照组比较无显著差异,而染料法检测阴性钉螺DNA(291 ng/μL)检测值为(20.3±4.39)cp/μL与对照组检测值(1.5±0.1)cp/μL比较有明显差别。探针法检测钉螺早期感染显示,在毛钉比高于5∶1的室温条件下孵育30 s即可检出钉螺体内毛蚴DNA,检测值在短时间(5 min)内达高峰,峰值随毛钉比增高呈相应倍数增高的趋势。探针法检测小鼠早期感染显示,童虫第2 d进入肺部,第4 d进入肝脏,血供丰富的脏器(脾、肾、脑)一直有移行的童虫,心脏和胰腺第9 d有异位寄生的趋势,睾丸检测值前9 d始终处于阴性对照水平。结论ddPCR探针法在检测质粒、感染性钉螺和混合钉螺中比染料法更准确可靠,特异性更强,染料法在钉螺检测中存在非特异反应。探针法有望敏感有效反映钉螺早期感染情况,及童虫在宿主小鼠体内移行和在多组织内的分布情况。 展开更多
关键词 日本血吸虫 钉螺 小鼠 微滴式数字PCR(ddPCR)
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家畜日本血吸虫抗体检测方法的比较研究 被引量：1
3
作者 甄岳 仪育含 +4 位作者 孙学强 张志 李彦 段笑笑 杨胜男 《中国畜牧业》 2025年第3期47-48,共2页
血吸虫病是由日本血吸虫感染引起的一种人畜共患寄生虫病,在我国具有悠久的流行历史,对人民生命健康和社会生产造成了严重危害。经过近60年的艰苦奋斗,我国于2008年达到全国血吸虫病疫情控制标准,2015年达到传播控制标准,顺利实现了阶... 血吸虫病是由日本血吸虫感染引起的一种人畜共患寄生虫病,在我国具有悠久的流行历史,对人民生命健康和社会生产造成了严重危害。经过近60年的艰苦奋斗,我国于2008年达到全国血吸虫病疫情控制标准,2015年达到传播控制标准,顺利实现了阶段性目标。为进一步开展健康中国建设,提高人民健康水平,中共中央、国务院下发《“健康中国2030”规划纲要》,其中明确提出继续坚持以传染源控制为主的血吸虫病综合防治策略,全国所有流行县在2030年达到消除血吸虫病标准。目前,我国的血吸虫病疫情已处于“低水平、低度感染”的历史低位时期,在此背景下,以粪便毛蚴孵化法为代表的病原学检测方法因操作烦琐,群众依从性显著降低等方面受到限制。血清学诊断方法则因其快速简便而被广泛应用于血吸虫病现场筛查、流行病学调查以及疫情监测等方面。 展开更多
关键词 人民健康水平 血清学诊断方法 人民生命健康 日本血吸虫感染 血吸虫病疫情 传染源控制 流行病学调查 疫情监测
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复方积雪草减轻小鼠日本血吸虫引起的肝纤维化:通过调控TLR4/MyD88通路抑制炎症-纤维化级联反应
4
作者 管丽萍 颜燕 +9 位作者 卢心怡 李智峰 高晖 曹东 侯晨曦 曾靖宇 李欣怡 赵洋 王俊杰 方会龙 《南方医科大学学报》 北大核心 2025年第6期1307-1316,共10页
目的 基于网络药理学和分子对接,联合日本血吸虫(Sj)感染小鼠引起肝纤维化实验验证,探究复方积雪草(CCA)有效成分抗Sj病肝纤维化的作用机制。方法 利用传统中药系统药理学数据库筛选CCA的活性成分及其作用靶点,与Sj病肝纤维化发病机制... 目的 基于网络药理学和分子对接,联合日本血吸虫(Sj)感染小鼠引起肝纤维化实验验证,探究复方积雪草(CCA)有效成分抗Sj病肝纤维化的作用机制。方法 利用传统中药系统药理学数据库筛选CCA的活性成分及其作用靶点,与Sj病肝纤维化发病机制相关的靶点进行比对,获得CCA抗Sj病肝纤维化的潜在作用靶点;采用STRING数据库,构建药物疾病交集靶点的PPI网络,筛选核心靶点;通过Cytoscape 3.9.1构建“药物-成分-靶点-通路-疾病”网络图;运用David数据库进行GO和KEGG富集分析;利用PyMol和AutoDockVina1.1.2对CCA主要活性成分与核心靶点使用分子对接技术进行活性验证。将36只小鼠随机均分为正常对照组(control)、模型组(Sj)、复方积雪草组(Sj+CCA);control组不做任何处理,其余经腹部皮肤感染血吸虫尾蚴建模成功8周后,分别每天灌胃生理盐水和CCA水煎剂,连续8周。采用HE、Masson染色法检测小鼠肝组织病理变化;免疫组化染色检测肝脏Collagen-Ⅰ、Collagen-Ⅲ的表达水平;ELISA法测定小鼠血清中IL-6和TNF-α水平变化;蛋白质印迹法检测肝组织TLR4(TOLL样受体4)、MyD88(髓分化因子88)蛋白表达。结果 筛选得到107种CCA活性成分(OB≥30%,DL≥0.18),791个成分靶点,Sj病肝纤维化靶点集和CCA靶点集进行交集分析后共得到37个关键靶点。其中TNF、TP53、JUN、MMP9、CXCL为核心靶点,涉及的主要信号通路为Lipid and atherosclerosis、IL-17 signaling pathway、Fluid shear stress and atherosclerosis、Chagas disease、Pathways in cancer等。分子对接结果提示,CCA107个活性成分中槲皮素与TNF、TP53、JUN、MMP9有较好的结合活性。在小鼠Sj病肝纤维化模型中,CCA处理能够减轻炎性细胞浸润,减少Collagen-I、Collagen-Ⅲ沉积(P<0.001,P<0.01),改善肝组织结构,降低其炎症因子IL-6、TNF-α的含量(P<0.05),下调TLR4、MyD88蛋白表达(P<0.01)。结论 CCA可能作用于TNF、MMP9、JUN、TP53靶点,调控TLR4/MyD88信号通路,抑制IL-6、TNF-α等促炎因子释放,进而减少HSC活化及胶原纤维产生,降低ECM的沉积,阻断Sj虫卵肉芽肿的形成,发挥抗Sj感染引起的肝纤维化和保肝的作用。 展开更多
关键词 日本血吸虫病肝纤维化 复方积雪草 网络药理学 分子对接 实验验证
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重组日本血吸虫半胱氨酸蛋白酶抑制剂可通过调节炎症微环境对“二次打击”脓毒症小鼠发挥治疗作用
5
作者 多文娟 王怡祥 +9 位作者 王家兴 许鑫龙 李林献 杨栋臣 申启利 杨立春 刘晓静 金启旺 褚亮 杨小迪 《南方医科大学学报》 北大核心 2025年第1期110-117,共8页
目的探讨重组日本血吸虫半胱氨酸蛋白酶抑制剂(rSj-Cystatin)对“二次打击”脓毒症小鼠的干预作用。方法64只C57BL/6雄性小鼠随机分为假手术组(A组)、蛋白组(B组)、“二次打击”造模组(C组)、蛋白干预组(D组),16只/组。A组和B组小鼠首... 目的探讨重组日本血吸虫半胱氨酸蛋白酶抑制剂(rSj-Cystatin)对“二次打击”脓毒症小鼠的干预作用。方法64只C57BL/6雄性小鼠随机分为假手术组(A组)、蛋白组(B组)、“二次打击”造模组(C组)、蛋白干预组(D组),16只/组。A组和B组小鼠首先腹腔注射PBS(100μL/只),24 h后开腹探查盲肠,但不进行盲肠结扎和穿刺(CLP),术后30 min,分别腹腔注射PBS(100μL/只)或含25μg rSj-Cystatin蛋白的PBS(100μL/只);C组和D组小鼠首先腹腔注射含LPS(5 mg/kg)的PBS(100μL/只),24 h后行CLP手术,术后30 min,分别腹腔注射PBS(100μL/只)或含25μg rSj-Cystatin蛋白的PBS(100μL/只)。每组随机抽取6只,造模12 h后取小鼠血清、脾、肝、肺和肾组织。肝、肺和肾组织HE染色观察其病理损伤并进行评分;酶联免疫吸附实验(ELISA)检验血清和肝、肺、肾组织匀浆中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)、白细胞介素-10(IL-10)和转化生长因子-β(TGF-β)水平以及组织中巨噬细胞极化标志物iNOS和Arg-1水平;流式细胞术检测脾脏CD3+CD4+CD25+Foxp3+T的比例变化;剩余小鼠造模后记录72 h生存率并观察小鼠状态。结果与A、B组(100%)相比,C组(0%)72 h生存率降低,经rSj-Cystatin蛋白治疗后,D组生存率较C组增高(20%)。与A、B两组相比,C组肝、肺、肾组织切片病理损伤加重,血清和组织匀浆中TNF-α、IL-6水平明显升高(P<0.05);经蛋白治疗后,病理损伤程度减轻,血清和组织匀浆中TNF-α、IL-6水平降低(P<0.05),调节因子IL-10、TGF-β水平明显升高(P<0.05),同时CD3+CD4+CD25+Foxp3+T比例升高(P<0.05);与A、B两组相比,C组各器官组织中iNOS水平均升高,而Arg-1水平呈差异性,仅在肾中呈下降趋势(P<0.01);与C组相比,D组iNOS水平下降(P<0.05),Arg-1水平升高(P<0.001)。结论rSj-Cystatin可通过调节炎症微环境进而对“二次打击”脓毒症起到明显的治疗作用。 展开更多
关键词 重组日本血吸虫半胱氨酸蛋白酶抑制剂 脂多糖 盲肠结扎穿刺 脓毒症 免疫调节因子
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家畜日本血吸虫抗体检测试纸条的研制与应用
6
作者 甄岳 张志 +5 位作者 李彦 孙学强 杨胜男 段笑笑 孙荣钊 邴啟政 《中国动物检疫》 2025年第2期95-99,共5页
为建立一种检测家畜日本血吸虫抗体的快速精准方法,将胶体金标记的重组链球菌G蛋白(r-SPG)喷涂到玻璃纤维素膜作为金标垫,将日本血吸虫虫卵可溶性抗原(SEA)和小鼠抗His标签单克隆抗体(His-tag单抗)分别包被到硝酸纤维素膜上作为检测线... 为建立一种检测家畜日本血吸虫抗体的快速精准方法,将胶体金标记的重组链球菌G蛋白(r-SPG)喷涂到玻璃纤维素膜作为金标垫,将日本血吸虫虫卵可溶性抗原(SEA)和小鼠抗His标签单克隆抗体(His-tag单抗)分别包被到硝酸纤维素膜上作为检测线和质控线,制备了胶体金试纸条,然后开展了敏感性、特异性、重复性、符合率和临床应用研究。结果显示:该试纸条的诊断敏感性为96.43%,与土耳其斯坦分体吸虫、羊捻转血矛线虫、大片吸虫的阳性血清无交叉反应,批内、批间重复性良好,可在5~10 min完成检测。用1500份牛羊血清进行临床检测应用,发现试纸条与粪便毛蚴孵化法的总符合率达98.1%。结果表明,本研究制备的抗体检测试纸条敏感性高,特异性及重复性好,可为我国家畜日本血吸虫病防治工作提供有力的技术支持。 展开更多
关键词 日本血吸虫 胶体金 试纸条 抗体检测
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家畜日本血吸虫病检测方法阴性一致性评价
7
作者 黄丽非 李桂花 +6 位作者 蒙云军 黄志威 张色萍 李剑锋 龙春蓓 黄元伟 梁秀华 《中国动物检疫》 2025年第11期108-114,共7页
为系统评估日本血吸虫粪便毛蚴孵化法(MIH)和酶联免疫吸附试验(ELISA)在假定无疫背景下检测结果的一致性,为净化认证提供依据,2025年4—9月选取曾为日本血吸虫病历史流行区的广西天等县作为监测点,对200头耕牛同时采集血清及粪便样品,采... 为系统评估日本血吸虫粪便毛蚴孵化法(MIH)和酶联免疫吸附试验(ELISA)在假定无疫背景下检测结果的一致性,为净化认证提供依据,2025年4—9月选取曾为日本血吸虫病历史流行区的广西天等县作为监测点,对200头耕牛同时采集血清及粪便样品,采用MIH和ELISA进行平行检测,通过计算总符合率和Kappa值来定量分析两种方法的一致性强度,并对血清样品ELISA检测OD值分布进行描述性统计。结果显示:200头耕牛不同类型样品经MIH与ELISA检测,结果均为阴性,总符合率为100%,Kappa值为1.0(P<0.001),两种方法在阴性判定上完全一致;血清学ELISA检测OD值呈正态分布,95%置信区间为0.171~0.379,全部样品S/P值均低于0.2。结果表明:在排除家畜感染日本血吸虫时,MIH(病原学检测金标准)与ELISA(血清学检测方法)的检测结果呈现高度的协同性;联合应用这两种检测方法可显著提升净化状态评估的可靠性,避免单一检测的假阴性风险,建议将双阴性一致性作为日本血吸虫病区域净化认证的核心指标。 展开更多
关键词 日本血吸虫 粪便毛蚴孵化法 酶联免疫吸附试验 一致性 净化认证
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重组日本血吸虫半胱氨酸蛋白酶抑制剂对急性肝损伤小鼠的保护作用及机制
8
作者 鲁玲君 杨小迪 +3 位作者 张华平 梁媛 石秀兰 周鑫 《南方医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第6期1126-1134,共9页
目的 探讨重组日本血吸虫半胱氨酸蛋白酶抑制剂对LPS/D-GalN诱导的急性肝损伤小鼠的保护作用及机制。方法 将72只雄性C57BL/6J小鼠(6~8周龄)随机分为正常对照组、LPS/D-GaIN模型组、LPS/D-GaIN+rSj-Cys治疗组和rSj-Cys对照组(n=18)。LPS... 目的 探讨重组日本血吸虫半胱氨酸蛋白酶抑制剂对LPS/D-GalN诱导的急性肝损伤小鼠的保护作用及机制。方法 将72只雄性C57BL/6J小鼠(6~8周龄)随机分为正常对照组、LPS/D-GaIN模型组、LPS/D-GaIN+rSj-Cys治疗组和rSj-Cys对照组(n=18)。LPS/D-GaIN组和LPS/D-GaIN+rSj-Cys组小鼠均腹腔注射LPS(10μg/kg)和D-GaIN(700 mg/kg)造模;造模后30 min,LPS/D-GaIN+rSj-Cys组及rSj-Cys对照组小鼠均腹腔注射rSj-Cys(1.25 mg/kg),正常对照组小鼠注射等体积PBS。造模6 h后,每组随机挑选8只小鼠处死,收集小鼠血清及肝组织,进行后续检测,每组剩余10只分别在3、6、12、24 h观察其生存情况,并计算生存率。检测血清丙氨酸转移酶(ALT)、天冬氨酸转移酶(AST)水平,苏木精-伊红(HE)染色观察各组小鼠肝脏组织病理形态,采用ELISA检测小鼠血清炎性因子肿瘤坏死因子(TNF-α)和白细胞介素(IL-6)表达,采用免疫组化法检测肝组织巨噬细胞表面标记物CD68表达水平,采用免疫组化和免疫印迹法检测肝组织Bax、Bcl-2蛋白水平,采用TUNEL检测肝细胞凋亡情况,采用免疫印迹法检测肝组织内质网应激相关蛋白表达水平。结果 模型组小鼠12 h生存率为30%,rSj-Cys治疗组小鼠12 h生存率为80%。模型组小鼠24 h生存率为10%,rSj-Cys治疗组小鼠24 h生存率为60%;与正常对照组相比,LPS/D-GaIN模型组小鼠血清中AST、ALT、IL-6、TNF-α含量均显著上升(P<0.01),病理结构损伤严重,肝脏巨噬细胞标志物CD68表达明显增强(P<0.01),促凋亡蛋白Bax表达显著增加(P<0.01),抗凋亡蛋白Bcl-2表达显著降低(P<0.01),肝细胞凋亡水平显著增加,肝组织内质网应激相关信号通路GRP78、CHOP、NF-κB p-p65的蛋白表达水平显著上调(P<0.05或P<0.01);而LPS/D-GaIN+rSj-Cys治疗组小鼠转氨酶AST、ALT和炎症因子IL-6、TNF-α水平显著下降(P<0.01),肝脏病理损伤程度减轻,肝脏巨噬细胞标志物CD68表达明显降低(P<0.01),Bax表达显著降低(P<0.01),Bcl-2表达显著增强(P<0.01),肝组织内质网应激相关信号通路GRP78、CHOP、NF-κB p-p65的蛋白表达水平下调(P<0.05或P<0.01);rSj-Cys对照组与正常对照组相比,各指标无统计学差异(P>0.05)。结论 rSj-Cys通过抑制内质网应激,减轻炎症和肝细胞凋亡缓解LPS/D-GalN引起的小鼠急性肝损伤。 展开更多
关键词 急性肝损伤 日本血吸虫半胱氨酸蛋白酶抑制剂 内质网应激 炎症 凋亡
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东方田鼠组织/器官体外杀日本血吸虫童虫作用 被引量：23
9
作者 申群喜 胡维新 +1 位作者 许冰 彭兴华 《湖南医科大学学报》 CSCD 北大核心 2002年第3期198-200,共3页
目的 :筛选东方田鼠特异性杀伤日本血吸虫童虫的组织 器官。方法 :将日本血吸虫童虫与东方田鼠心脏、肝脏、肺脏、肾脏、脾脏和肌肉的组织 器官匀浆上清液以及不同浓度东方田鼠血清混合培养 ,以昆明小鼠相应的组织 器官匀浆上清及相... 目的 :筛选东方田鼠特异性杀伤日本血吸虫童虫的组织 器官。方法 :将日本血吸虫童虫与东方田鼠心脏、肝脏、肺脏、肾脏、脾脏和肌肉的组织 器官匀浆上清液以及不同浓度东方田鼠血清混合培养 ,以昆明小鼠相应的组织 器官匀浆上清及相应浓度的血清做为对照 ,观察其杀童虫效应。结果 :东方田鼠各组织 器官与昆明小鼠各组织 器官匀浆的杀伤童虫效应比较差异均无显著性 (P >0 .0 5 ) ;东方田鼠血清较昆明小鼠血清的杀伤效应强 (P =0 .0 0 1) ;东方田鼠各组织 器官匀浆之间杀伤效应差异亦无显著性 (P >0 .0 5 ) ;东方田鼠血清较东方田鼠各组织 器官的杀伤效应强 (P <0 .0 5 ) ;东方田鼠新鲜血清与灭活补体血清的杀伤效应无显著性差异 (P >0 .0 5 ) ,其 4 0 %新鲜血清较2 0 %新鲜血清的杀伤效应强 (P <0 .0 0 1)。结论 :东方田鼠血清较组织 器官的杀伤效应强 ;也较昆明小鼠血清的杀伤效应强 ,东方田鼠 4 0 %血清浓度较 2 0 展开更多
关键词 日本血吸虫病 东方田鼠 日本血吸虫童虫 杀伤效应 抗性分子机制 血清
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可溶性重组日本血吸虫26 kDa GST的优化表达 被引量：10
10
作者 余光清 蒋诗琴 李雍龙 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第8期770-773,共4页
目的探讨在大肠杆菌中表达可溶性重组日本血吸虫谷胱甘肽S-转移酶(rSj26 GST)的优化条件。方法用含有Sj26基因的原核表达载体pGEX-3X转化大肠杆菌BL21(DE3),将影响可溶性rSj26 GST表达的4个因素,即温度、诱导剂IPTG浓度、诱导时细菌的... 目的探讨在大肠杆菌中表达可溶性重组日本血吸虫谷胱甘肽S-转移酶(rSj26 GST)的优化条件。方法用含有Sj26基因的原核表达载体pGEX-3X转化大肠杆菌BL21(DE3),将影响可溶性rSj26 GST表达的4个因素,即温度、诱导剂IPTG浓度、诱导时细菌的密度和诱导时间进行正交设计,确定其优化表达条件并大量表达,采用谷胱甘肽亲和层析法纯化表达的蛋白,测定酶活性,通过Western blot鉴定免疫活性。结果正交设计的直观分析和方差分析结果显示:可溶性rSj26GST最佳表达条件为温度25℃,IPTG的浓度1 mmol/L,诱导前细菌的生长密度0.9,诱导表达时间8 h。可溶性rSj26 GST纯化的产量为16 mg/L,Western blot证实rSj26 GST具有良好免疫原性和免疫反应性。结论通过正交设计确定了可溶性rSj26 GST在大肠杆菌中表达的优化条件。 展开更多
关键词 日本血吸虫 日本血吸虫谷胱甘肽 S-转移酶 蛋白表达 正交设计 大肠杆菌
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日本血吸虫亲免素基因的扩增及序列分析 被引量：3
11
作者 李孜 余新炳 +2 位作者 吴忠道 徐劲 田春林 《中山大学学报（医学科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2004年第5期395-398,共4页
【目的】研究日本血吸虫亲免素基因编码序列的结构及进行初步的功能预测。【方法】用5'端和3'端锚定PCR从尾蚴文库中扩增,以获取日本血吸虫中国大陆株亲免素基因完整的开放阅读框(openreadingframe,ORF);用生物信息学技术确认... 【目的】研究日本血吸虫亲免素基因编码序列的结构及进行初步的功能预测。【方法】用5'端和3'端锚定PCR从尾蚴文库中扩增,以获取日本血吸虫中国大陆株亲免素基因完整的开放阅读框(openreadingframe,ORF);用生物信息学技术确认其是否为亲免素编码基因并进行结构功能的初步分析和预测。【结果】用5'端和3'端锚定PCR从尾蚴文库中获得了亲免素基因5'端和3'端所缺序列,得到的亲免素基因cDNA的总序列长为1438bp,其ORF长1296bp,编码431个氨基酸。利用生物信息学技术鉴定其为日本血吸虫亲免素基因的完整cDNA序列。并用RT-PCR从日本血吸虫尾蚴mRNA扩增出亲免素基因的ORF。【结论】成功获得了日本血吸虫亲免素编码基因的全长cDNA,为进一步的功能研究打下了基础。 展开更多
关键词 日本血吸虫尾蚴 编码基因 扩增 生物信息学技术 尾蚴 日本血吸虫中国大陆株 PCR 功能预测 文库 序列
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日本血吸虫童虫cDNA文库的免疫学筛选及阳性克隆的初步鉴定 被引量：8
12
作者 江艳 蒋作君 +1 位作者 沈际佳 汪学龙 《中国人兽共患病杂志》 CSCD 北大核心 2002年第6期15-17,共3页
目的　免疫法筛选日本血吸虫 (Schistosomajaponicum ,S j) 15d肝期童虫cDNA表达文库 ,并进行鉴定 ,以获得S j疫苗候选抗原分子。方法　采用紫外线照射致弱尾蚴免疫的兔血清 ,对S j中国大陆株 15d肝期童虫cDNA文库进行免疫学筛选 ,选取... 目的　免疫法筛选日本血吸虫 (Schistosomajaponicum ,S j) 15d肝期童虫cDNA表达文库 ,并进行鉴定 ,以获得S j疫苗候选抗原分子。方法　采用紫外线照射致弱尾蚴免疫的兔血清 ,对S j中国大陆株 15d肝期童虫cDNA文库进行免疫学筛选 ,选取部分阳性克隆进行插入片段的核苷酸序列分析 ,将结果通过Internet送入NCBIGenBank进行同源性比较 ,并将发现的新基因送入GenBank登录。结果　对大约 10 4个噬菌斑进行了初筛 ,共获得 4 9个阳性克隆 ,复筛了其中的 12个克隆 ,获得 8个持续阳性反应克隆。对 6个克隆的核苷酸序列测定及同源性分析表明 ,2个为编码S j线粒体的基因 ,另外 4个为S j未知基因 ,新基因序列已被GenBank接受 ,并获得进入编号。 结论　从S j肝期童虫cDNA文库中筛选到一批S j基因 ,其中部分为未知基因 ,为血吸虫新的疫苗候选分子的研究提供了材料。 展开更多
关键词 日本血吸虫 CDNA文库 免疫学筛选 抗原基因 疫苗 日本血吸虫病
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快速斑点免疫金染色法检测抗日本血吸虫抗体方法的建立与初步应用 被引量：4
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作者 郑葵阳 杜文平 +1 位作者 刘宜升 付琳琳 《中国人兽共患病杂志》 CSCD 北大核心 2003年第3期89-90,94,共3页
目的　建立简便、经济和敏感、特异的快速免疫学诊断方法。方法　将日本血吸虫可溶性虫卵抗原点加于混合纤维素酯微孔滤膜 ,以快速斑点免疫金染色法 (F -Dot-IGS)检测日本血吸虫病患者血清抗体。结果　初步结果显示 ,共检测 5 5例日本... 目的　建立简便、经济和敏感、特异的快速免疫学诊断方法。方法　将日本血吸虫可溶性虫卵抗原点加于混合纤维素酯微孔滤膜 ,以快速斑点免疫金染色法 (F -Dot-IGS)检测日本血吸虫病患者血清抗体。结果　初步结果显示 ,共检测 5 5例日本血吸虫病患者血清抗体 ,阳性率 10 0 % ;检测 4 0例义务献血员血清均为阴性 ;5 0例肝吸虫病患者血清 ,1例出现阳性反应 ,交叉反应率为 2 0 % ;10例肺吸虫病人血清未见交叉反应。结论　本法快速 ,更为简便、经济 ,有较高的敏感性和特异性 ,适于基层。 展开更多
关键词 快速斑点免疫金染色法 检测 日本血吸虫 抗体 免疫学诊断方法 日本血吸虫病
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洱源县家畜日本血吸虫病的防治
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作者 施春美 杨志平 杜杰亮 《四川畜牧兽医》 2024年第10期56-57,60,共3页
洱源县位于云南省大理州,有丰富的光、热资源和良好的气候、土壤、水利条件,是畜牧业大县,由于浅滩、湿地、塘湖多,适合血吸虫和钉螺生长、繁殖,是日本血吸虫病的高发区。1流行特点,1.1区域性该病流行区域在水稻种植区和渔业区,以罗坪... 洱源县位于云南省大理州,有丰富的光、热资源和良好的气候、土壤、水利条件,是畜牧业大县,由于浅滩、湿地、塘湖多,适合血吸虫和钉螺生长、繁殖,是日本血吸虫病的高发区。1流行特点,1.1区域性该病流行区域在水稻种植区和渔业区,以罗坪山为界,分为两个流行区域。东中部为洱海流域,呈倒“Y”字形;西部为黑惠江流域,呈“I”字形。具体流行地带在坝区、山脚和半山腰,有湖泊、河流、浅滩、鱼塘、水田,库塘的水网地带。 展开更多
关键词 日本血吸虫病 水稻种植区 水利条件 流行区域 水网地带 库塘 洱海流域 云南省大理州
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日本血吸虫GST蛋白和14-3-3蛋白的研究进展 被引量：1
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作者 刘文 徐振山 宋礼华 《生物学杂志》 CAS CSCD 2011年第3期80-83,共4页
血吸虫病是严重危害人类健康的人兽共患病之一,在全球范围内,血吸虫病曾在76个国家和地区流行,有超过2亿人感染了血吸虫病。目前,世界上采取了一些人畜同步治疗等综合防治措施,虽取得了一定的成效,但仍面临着成本高、再感染率高等一系... 血吸虫病是严重危害人类健康的人兽共患病之一,在全球范围内,血吸虫病曾在76个国家和地区流行,有超过2亿人感染了血吸虫病。目前,世界上采取了一些人畜同步治疗等综合防治措施,虽取得了一定的成效,但仍面临着成本高、再感染率高等一系列问题。因此,寻找新的治疗药物、疫苗候选分子以及开发高度特异且敏感的标准化免疫诊断试剂是当前日本血吸虫病基础研究的重要内容。主要对WHO提出的最具潜力的疫苗候选分子血吸虫GST蛋白以及参与血吸虫许多生物学功能的14-3-3蛋白的最新研究进展进行一些阐述。 展开更多
关键词 日本血吸虫谷胱甘肽-S-转移酶融合蛋白(SjGST) Sj14-3-3蛋白 日本血吸虫(Schistosoma japonicum)
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粪孵法对自然感染日本血吸虫牛检出率效果的评价 被引量：2
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作者 沈杰 《中国动物传染病学报》 CAS 1995年第1期36-37,25,共3页
粪孵法对自然感染日本血吸虫牛检出率效果的评价沈杰（中国农科院上海家畜寄生虫病研究所）家畜日本血吸虫病的诊断方法，近几十年来，应用时间最长、范围最广的属粪便毛拗孵化法（简称粪孵法），１９７５年农业部批发给全国血防单位作... 粪孵法对自然感染日本血吸虫牛检出率效果的评价沈杰（中国农科院上海家畜寄生虫病研究所）家畜日本血吸虫病的诊断方法，近几十年来，应用时间最长、范围最广的属粪便毛拗孵化法（简称粪孵法），１９７５年农业部批发给全国血防单位作为牛血吸虫病查病推荐方法，１９７９... 展开更多
关键词 日本血吸虫 粪孵法 自然感染 检出率 血吸虫病防治 牛日本血吸虫病 诊断方法 试验结果 假阴性率 假阳性
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抗日本血吸虫(中国大陆株)基因工程苗的研究进展
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作者 施福恢 《畜牧兽医科技信息》 1997年第9期2-3,共2页
我所与英国伦敦大学Taylor教授合作对日本血吸虫病疫苗特别是基因工程苗进行了研究。通过派出去、请进来和会议交流等各种形式,至今我所对目前较有希望成为日本血吸虫候选疫苗已能进行基因克隆和蛋白质表达的如酶类:Sj28GST;肌球蛋白类:... 我所与英国伦敦大学Taylor教授合作对日本血吸虫病疫苗特别是基因工程苗进行了研究。通过派出去、请进来和会议交流等各种形式,至今我所对目前较有希望成为日本血吸虫候选疫苗已能进行基因克隆和蛋白质表达的如酶类:Sj28GST;肌球蛋白类:C-Sjr97kD paramyosin;表膜蛋白类:H-Sj23kD大亲水区等,并进行实验动物绵羊和黄、水牛的保护效果试验,取得了较好的减虫和减卵效果。通过1993年荷兰莱登会议。 展开更多
关键词 日本血吸虫病 中国大陆株 基因工程苗 抗日本血吸虫 基因克隆 家蚕核型多角体病毒 副肌球蛋白 非融合蛋白 GST基因 蛋白类
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日本血吸虫细胞培养方法初探 被引量：43
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作者 董惠芬 蒋明森 +2 位作者 李瑛 杨明义 周述龙 《水生生物学报》 CAS CSCD 北大核心 1995年第4期382-383,共2页
日本血吸虫细胞培养方法初探董惠芬，蒋明森，李瑛，杨明义，周述龙（湖北医科大学寄生虫学教研室，武汉４３００７１）关键词日本血吸虫，细胞培养，培养方法ＰＲＥＬＩＭＩＮＡＲＹＳＴＵＤＩＥＳＯＮＴＨＥＣＵＬＴＵＲＡＬＭＥＴＨ... 日本血吸虫细胞培养方法初探董惠芬，蒋明森，李瑛，杨明义，周述龙（湖北医科大学寄生虫学教研室，武汉４３００７１）关键词日本血吸虫，细胞培养，培养方法ＰＲＥＬＩＭＩＮＡＲＹＳＴＵＤＩＥＳＯＮＴＨＥＣＵＬＴＵＲＡＬＭＥＴＨＯＤＳＯＦＣＥＬＬＳＦＲＯＭＳＣＨ... 展开更多
关键词 日本血吸虫 细胞培养 培养方法
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东方田鼠感染血清免疫筛选日本血吸虫成虫cDNA文库 被引量：21
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作者 王庆林 易新元 +4 位作者 曾宪芳 周金春 罗新松 何永康 彭兴华 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2001年第5期547-551,共5页
东方田鼠 (Microtusfortis ,Mf)对日本血吸虫 (Schistosomajaponicum ,Sj)感染具有抗性 .为探讨Mf感染Sj后是否产生针对虫体某些特异抗原分子的免疫应答 ,用Mf感染血清对Sj成虫cDNA文库进行免疫筛选 .经初筛和复筛 ,共筛选出 12个阳性克... 东方田鼠 (Microtusfortis ,Mf)对日本血吸虫 (Schistosomajaponicum ,Sj)感染具有抗性 .为探讨Mf感染Sj后是否产生针对虫体某些特异抗原分子的免疫应答 ,用Mf感染血清对Sj成虫cDNA文库进行免疫筛选 .经初筛和复筛 ,共筛选出 12个阳性克隆 .这些阳性克隆经辅助噬菌体自动剪切后PCR扩增显示 ,插入的SjcDNA片段大小在 3 0 0bp至 1 8kb之间 ,其中 1 8kb片段 5个 ,1kb片段 1个 ,3 0 0bp片段6个 .经DNA测序分析 ,鉴定出 3个未曾报道过的Sj新基因 ,分别命名为Sj Mf1、Sj Mf2和Sj胞质氨基肽酶 ,并在GenBank登记注册 .结果说明 ,Mf感染血清可识别Sj的特异性抗原分子 ,这些抗原分子的免疫保护作用值得进一步研究 . 展开更多
关键词 日本血吸虫 东方田鼠 CDNA文库 免疫筛选 序列分析 感染血清
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日本血吸虫感染小鼠肝肉芽肿与Th1/Th2细胞因子水平的动态变化 被引量：21
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作者 夏超明 龚唯 +4 位作者 骆伟 周卫芳 李允鹤 查锡良 熊思东 《复旦学报（医学版）》 EI CAS CSCD 北大核心 2001年第1期39-41,46,共4页
目的　观察小鼠感染日本血吸虫后急、慢性期肝肉芽肿病变与Th1/Th2细胞因子的动态变化 ,探讨Th1/Th2在肉芽肿形成及调节中的作用。方法　采用石蜡切片 ,HE染色后观察感染小鼠肉芽肿病变 ,用ELISA双抗夹心法测定小鼠感染后 0、4、6、8和... 目的　观察小鼠感染日本血吸虫后急、慢性期肝肉芽肿病变与Th1/Th2细胞因子的动态变化 ,探讨Th1/Th2在肉芽肿形成及调节中的作用。方法　采用石蜡切片 ,HE染色后观察感染小鼠肉芽肿病变 ,用ELISA双抗夹心法测定小鼠感染后 0、4、6、8和 12周血清及脾淋巴细胞IL 2、IFNγ 和IL 4水平的动态变化。结果　小鼠感染后 6周出现明显肝肉芽肿病变 ,8周肉芽肿反应达高峰 ;12周则明显缩小 ;感染小鼠血清及脾淋巴细胞的Th1细胞因子IL 2和IFNγ 在感染后 4～ 6周开始上升 ,8周达高峰 ,随后下降 ;而Th2细胞因子IL 4在感染后 8周时迅速上升且随感染时间延长而明显升高。结论　Th1细胞因子IL 2和IFNγ 与血吸虫卵肉芽肿的诱导和形成密切相关 ,而Th2细胞因子IL 4可抑制Th1细胞因子在血吸虫病慢性期虫卵肉芽肿自发性免疫调节中起重要作用。 展开更多
关键词 日本血吸虫 肝肉芽肿病变 TH1/TH2细胞因子 小鼠
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