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微紫青霉CBHⅠ基因(Cbh1)在体外无细胞系统中的表达 被引量:3
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作者 王景林 高培基 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 1999年第6期885-887,共3页
以含Cbh1的pUC18-181 DNA 为模板,经PCR扩增得到带有T7启动子的Cbh1片段,随后在缺乏糖基化的兔网织红细胞裂解液中得到成功表达,表达量为21.7 μg/m l.得到的CBH Ⅰ虽未经糖基化修饰,却可水... 以含Cbh1的pUC18-181 DNA 为模板,经PCR扩增得到带有T7启动子的Cbh1片段,随后在缺乏糖基化的兔网织红细胞裂解液中得到成功表达,表达量为21.7 μg/m l.得到的CBH Ⅰ虽未经糖基化修饰,却可水解对硝基酚-β-D-纤维二糖苷(pNPC),对pNPC的KM 和Vm ax分别为0.82m m ol/L和0.067 μm ol·m in- 1·μg- 1,但对羧甲基纤维素钠(CMC-Na)无酶活力.这表明,糖基化修饰可能不影响胞外纤维素酶的活力. 展开更多
关键词 微紫青霉 无细胞表达系统 Cbh1 基因表达
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鼠PrP的无细胞表达及其多克隆抗体的制备 被引量:1
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作者 汤鑫 鞠传静 +9 位作者 梁斌斌 李忠义 孟轲音 刘文森 郝镯 栾世慧 张晓晶 李莎 沈景林 万家余 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第4期327-329,332,共4页
目的成功的表达鼠的PrP,制备特异性的兔抗PrP多克隆抗体。方法以BALB/c小鼠肝脏基因组DNA作为模板运用PCR技术成功扩增了PrP23-231,将其克隆到pRSET原核表达载体中,构建重组表达载体pRSET PrP23-231。将该重组载体进行无细胞表达,然后... 目的成功的表达鼠的PrP,制备特异性的兔抗PrP多克隆抗体。方法以BALB/c小鼠肝脏基因组DNA作为模板运用PCR技术成功扩增了PrP23-231,将其克隆到pRSET原核表达载体中,构建重组表达载体pRSET PrP23-231。将该重组载体进行无细胞表达,然后对成功表达的PrP进行纯化,然后用纯化的蛋白免疫新西兰大耳白兔制备其多克隆抗体,并进行Western-blot鉴定。结果通过Western-blot鉴定,有约30kD的目的条带,证明蛋白成功表达,并进行其多克隆抗体的制备并进行Western-blot鉴定,有约30kD的目的条带,证明成功制备了PrP的多克隆抗体。结论成功表达了PrP23-231,并且成功制备了其多克隆抗体,为进一步研究PrP的功能奠定了基础。 展开更多
关键词 朊蛋白 无细胞表达系统 多克隆抗体
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含his标签水通道蛋白AqpZ的体外表达和功能表征 被引量:2
3
作者 王钦沪 杨修亮 +2 位作者 黄磊 蔡谨 徐志南 《化学工程》 CAS CSCD 北大核心 2015年第12期58-61,66,共5页
利用大肠杆菌无细胞表达系统可溶性表达含his标签的水通道蛋白Z(AqpZ),并经镍柱亲和层析纯化,浓缩得到质量浓度为490μg/mL的AqpZ。将纯AqpZ重构到DOPC脂质体中,嵌入率为57%。用停留光谱定量分析了AqpZ的滤水功能,测得其水渗透因子Pf值... 利用大肠杆菌无细胞表达系统可溶性表达含his标签的水通道蛋白Z(AqpZ),并经镍柱亲和层析纯化,浓缩得到质量浓度为490μg/mL的AqpZ。将纯AqpZ重构到DOPC脂质体中,嵌入率为57%。用停留光谱定量分析了AqpZ的滤水功能,测得其水渗透因子Pf值为(258.1±8.9)μm/s,约是对照组未嵌入AqpZ的空脂质体的2.8倍。采用静电吸附、层层自组装的方法制备嵌入AqpZ的仿生纳滤膜。用截留反渗透装置分析其水通量和NaCl截留率,结果表明:与未整合AqpZ的膜相比,嵌入含his标签AqpZ的仿生膜的水通量明显高于对照,且保持较高的截盐率。本研究为进一步研究水通道蛋白和仿生膜打下了坚实的基础。 展开更多
关键词 AqpZ 无细胞表达系统 停留光谱 仿生膜 水通量 截盐率
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无细胞合成策略在生物材料研究中的应用 被引量:1
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作者 吉博涛 钱志刚 夏小霞 《合成生物学》 CSCD 2022年第4期658-675,共18页
生物材料凭借其可再生、可降解及生物相容性好等诸多优点,在生物技术及生物医学应用领域备受关注。基于“自下而上”设计理念的无细胞表达系统,作为细胞合成体系的有益补充,大力加速了生物材料的开发生产及其应用范围,并成为了材料合成... 生物材料凭借其可再生、可降解及生物相容性好等诸多优点,在生物技术及生物医学应用领域备受关注。基于“自下而上”设计理念的无细胞表达系统,作为细胞合成体系的有益补充,大力加速了生物材料的开发生产及其应用范围,并成为了材料合成生物学发展的前沿。本文介绍了无细胞表达系统的独特优势,并列举了其用于生物材料可持续生产的策略、与材料结合后的创新设计、赋予材料功能化和智能化方法,以及通过加速设计-构建-测试(DBT)循环来促进新型生物材料开发的各项应用,而这些例证都充分表明无细胞策略在生物材料设计与合成中的创新优势。尽管无细胞表达系统用于生物材料合成仍然存在诸如成本、翻译后修饰较弱、亟需交叉领域合作等方面的挑战,但相信随着合成生物学的发展及多学科交叉研究的深入,无细胞表达系统将为新型生物材料研发及产业化提供强大的助力,并为共同解决全球环境问题、保护人类生命健康等方面作出不可忽视的贡献。 展开更多
关键词 生物材料 无细胞表达系统 材料智能化和功能化 DBT循环 合成生物学
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无细胞蛋白质芯片的制备及其应用 被引量:2
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作者 狄翠霞 张红 +1 位作者 杨立娜 王小虎 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第1期28-34,共7页
蛋白质芯片是生物技术和功能蛋白组学的关键技术之一.传统的生产蛋白的方法周期长且费用高.无细胞蛋白质合成系统和蛋白芯片的结合,避免了基因的克隆、蛋白的表达、纯化和保存等繁琐过程,使整个无细胞蛋白芯片的制备过程快捷、迅速和高... 蛋白质芯片是生物技术和功能蛋白组学的关键技术之一.传统的生产蛋白的方法周期长且费用高.无细胞蛋白质合成系统和蛋白芯片的结合,避免了基因的克隆、蛋白的表达、纯化和保存等繁琐过程,使整个无细胞蛋白芯片的制备过程快捷、迅速和高效.本文详细综述了无细胞蛋白质合成系统及其分类、无细胞表达系统在制备蛋白质芯片方面的研究进展,并探讨了无细胞蛋白质芯片在蛋白组学研究中的最新应用. 展开更多
关键词 蛋白质芯片 无细胞蛋白质表达系统 体外蛋白质表达
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