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鱼源鲁氏耶尔森菌mobBC基因无痕缺失株的构建及其毒性研究
被引量：
1
1
作者
刘韬
魏文燕
+1 位作者
刘家星
汪开毓
《中国预防兽医学报》
CAS
CSCD
北大核心
2019年第9期891-898,共8页
为探究鲁氏耶尔森菌(Yersinia ruckeri)的四型分泌系统(T4SS)中mobBC基因的作用,本研究构建了强毒力Y.ruckeri SC09菌株mobBC基因的无痕缺失株并研究了其生理变化和毒性影响。将mobBC基因上、下游同源臂克隆入自杀载体pLP12并转化供体菌...
为探究鲁氏耶尔森菌(Yersinia ruckeri)的四型分泌系统(T4SS)中mobBC基因的作用,本研究构建了强毒力Y.ruckeri SC09菌株mobBC基因的无痕缺失株并研究了其生理变化和毒性影响。将mobBC基因上、下游同源臂克隆入自杀载体pLP12并转化供体菌β2163,得到pLP12-mobBC/β2163,进一步通过接合转移,将pLP12-mobBC导入受体菌株SC09中。利用抗性筛选和vmi480反向筛选获得无痕缺失株Y.ruckeriΔmobBC,并进行PCR测序鉴定。同时构建回补株Y.ruckeriΔmobBC+p Mob BC。通过电子显微镜观察缺失株形态变化,同时绘制野生型菌株、缺失株和回补株的生长曲线;将缺失株和野生型菌株感染模式小鼠,初步研究mobBC毒性;将野生型菌株、缺失株和回补株感染虹鳟鱼,进一步研究其对水生动物的体内毒性;对虹鳟鱼主要感染组织进行细菌计数并分析菌株在感染组织的分布差异;观察感染缺失株和野生型菌株的虹鳟鱼组织病理学和免疫组织化学差异,进一步分析毒性影响。结果显示,本实验构建了无痕缺失株Y.ruckeriΔmobBC,并回补了mobBC基因。缺失株与野生株超微结构对比变化不显著,但缺失株的生长性能弱于野生株和回补株,且表现出较弱的体内毒性和较轻的组织感染力。这提示mobBC基因可能是Y.ruckeri重要的毒力基因,该基因的缺失能够有效降低Y.ruckeri的增殖力和对宿主的感染力。本文首次研究了水产病原菌Y.ruckeri SC09的mobBC基因的毒性作用,为该病原菌的毒力研究增加了新的基础。
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关键词
鲁氏耶尔森菌
mobBC基因
无痕缺失
体内感染
毒性
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职称材料
Streptomyces albovinaceus DSM 40136的基因编辑改造
2
作者
冯杨萍
周佳鹏
+3 位作者
刘文慧
黎金祖
黄运红
谢运昌
《江西师范大学学报（自然科学版）》
CAS
北大核心
2024年第4期421-425,共5页
该文选择基于Clustered regularly interspaced short palindromic repeat-Cas9(CRISPR-Cas9)系统的链霉菌基因编辑质粒pWHU2653,构建特异性基因消除质粒,定位并消除在基因组上注释的alkylresorcinol生物合成基因簇的核心区段region 2,...
该文选择基于Clustered regularly interspaced short palindromic repeat-Cas9(CRISPR-Cas9)系统的链霉菌基因编辑质粒pWHU2653,构建特异性基因消除质粒,定位并消除在基因组上注释的alkylresorcinol生物合成基因簇的核心区段region 2,并利用质粒携带codA(sm)编码胞嘧啶脱氨酶在含有5-氟胞嘧啶的平板上进行反向筛选,获得质粒丢失的突变克隆,实现基因消除质粒的清除,构建了无痕缺失突变菌株S.albovinaceus DSM 40136△r2.
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关键词
链霉菌
基因编辑
CRISPR-Cas9
基因(簇)消除
无痕缺失
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职称材料
题名
鱼源鲁氏耶尔森菌mobBC基因无痕缺失株的构建及其毒性研究
被引量：
1
1
作者
刘韬
魏文燕
刘家星
汪开毓
机构
四川农业大学鱼病研究中心
成都市农林科学院
出处
《中国预防兽医学报》
CAS
CSCD
北大核心
2019年第9期891-898,共8页
基金
教育部“长江学者和创新团队发展计划”创新团队项目(IRT0848)
成都市农林科学院科研创新项目(2017-Y2500W-16)
文摘
为探究鲁氏耶尔森菌(Yersinia ruckeri)的四型分泌系统(T4SS)中mobBC基因的作用,本研究构建了强毒力Y.ruckeri SC09菌株mobBC基因的无痕缺失株并研究了其生理变化和毒性影响。将mobBC基因上、下游同源臂克隆入自杀载体pLP12并转化供体菌β2163,得到pLP12-mobBC/β2163,进一步通过接合转移,将pLP12-mobBC导入受体菌株SC09中。利用抗性筛选和vmi480反向筛选获得无痕缺失株Y.ruckeriΔmobBC,并进行PCR测序鉴定。同时构建回补株Y.ruckeriΔmobBC+p Mob BC。通过电子显微镜观察缺失株形态变化,同时绘制野生型菌株、缺失株和回补株的生长曲线;将缺失株和野生型菌株感染模式小鼠,初步研究mobBC毒性;将野生型菌株、缺失株和回补株感染虹鳟鱼,进一步研究其对水生动物的体内毒性;对虹鳟鱼主要感染组织进行细菌计数并分析菌株在感染组织的分布差异;观察感染缺失株和野生型菌株的虹鳟鱼组织病理学和免疫组织化学差异,进一步分析毒性影响。结果显示,本实验构建了无痕缺失株Y.ruckeriΔmobBC,并回补了mobBC基因。缺失株与野生株超微结构对比变化不显著,但缺失株的生长性能弱于野生株和回补株,且表现出较弱的体内毒性和较轻的组织感染力。这提示mobBC基因可能是Y.ruckeri重要的毒力基因,该基因的缺失能够有效降低Y.ruckeri的增殖力和对宿主的感染力。本文首次研究了水产病原菌Y.ruckeri SC09的mobBC基因的毒性作用,为该病原菌的毒力研究增加了新的基础。
关键词
鲁氏耶尔森菌
mobBC基因
无痕缺失
体内感染
毒性
Keywords
Yersinia ruckeri
mobBC gene
unmarked deletion
acute infection
virulence
分类号
S941.41 [农业科学—水产养殖]
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职称材料
题名
Streptomyces albovinaceus DSM 40136的基因编辑改造
2
作者
冯杨萍
周佳鹏
刘文慧
黎金祖
黄运红
谢运昌
机构
江西师范大学生命科学学院
出处
《江西师范大学学报（自然科学版）》
CAS
北大核心
2024年第4期421-425,共5页
基金
国家自然科学基金(32060021)资助项目.
文摘
该文选择基于Clustered regularly interspaced short palindromic repeat-Cas9(CRISPR-Cas9)系统的链霉菌基因编辑质粒pWHU2653,构建特异性基因消除质粒,定位并消除在基因组上注释的alkylresorcinol生物合成基因簇的核心区段region 2,并利用质粒携带codA(sm)编码胞嘧啶脱氨酶在含有5-氟胞嘧啶的平板上进行反向筛选,获得质粒丢失的突变克隆,实现基因消除质粒的清除,构建了无痕缺失突变菌株S.albovinaceus DSM 40136△r2.
关键词
链霉菌
基因编辑
CRISPR-Cas9
基因(簇)消除
无痕缺失
Keywords
Streptomycete
gene editing
CRISPR-Cas9
gene(cluster)elimination
in frame deletion
分类号
Q939.96 [生物学—微生物学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
鱼源鲁氏耶尔森菌mobBC基因无痕缺失株的构建及其毒性研究
刘韬
魏文燕
刘家星
汪开毓
《中国预防兽医学报》
CAS
CSCD
北大核心
2019
1
在线阅读
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职称材料
2
Streptomyces albovinaceus DSM 40136的基因编辑改造
冯杨萍
周佳鹏
刘文慧
黎金祖
黄运红
谢运昌
《江西师范大学学报（自然科学版）》
CAS
北大核心
2024
0
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