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建立植入前遗传学检测人胚胎来源的无动物源性干细胞系
1
作者
张丹
王增艳
+3 位作者
麦庆云
蔡炳
曾艳红
周灿权
《中山大学学报（医学版）》
CAS
CSCD
北大核心
2019年第4期510-517,共8页
【目的】在无动物源性的干细胞培养体系中建立植入前遗传学检测(PGT)胚胎来源的人胚胎干细胞系,为医学研究提供疾病模型。【方法】在我们的研究中,对无动物源性的人类包皮成纤维细胞饲养层(XF-HFF)与成分确定的培养基(CDM)构建的无动物...
【目的】在无动物源性的干细胞培养体系中建立植入前遗传学检测(PGT)胚胎来源的人胚胎干细胞系,为医学研究提供疾病模型。【方法】在我们的研究中,对无动物源性的人类包皮成纤维细胞饲养层(XF-HFF)与成分确定的培养基(CDM)构建的无动物源性培养体系进行了评估。在该培养体系中,利用染色体平衡易位患者PGT来源的废弃胚胎建立一个新的人胚干细胞(hESC)细胞系。【结果】新建立的人胚胎干细胞系在无动物源性培养系统中可长期培养传代(>45个代次)。核型分析显示,在传代45代次后,新建立的人胚胎干细胞仍保持一致的核型。XF-HFF/CDM中的hESC仍保持多能性。通过荧光免疫染色检测到SSEA-3、SSEA-4、SSEA-1、TRA-1-60、TRA-1-81等多能标志物的表达;RT-PCR分析显示,在XF-HFF/CDM培养体系上生长的hESC中存在干细胞标记。小鼠体内实验也证实了hESC在体内维持其多能性。【结论】本研究建立了PGT来源的人胚胎干细胞系,为进一步建立携带遗传疾病基因的hESC系并为临床研究和治疗提供疾病模型打下了基础。
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关键词
人胚胎干细胞
无动物源性
胚胎植入前遗传
性
诊断来
源
的
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职称材料
无动物源性成分培养体系快速诱导人胚胎干细胞向视网膜色素上皮细胞的分化
被引量：
1
2
作者
刘秋慧
王菁
+4 位作者
田蓉
王肖
曹迪
卢晶
罗燕
《中华实验眼科杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2016年第6期484-488,共5页
背景 随着视网膜色素上皮（RPE）细胞视网膜下腔移植治疗年龄相关性黄斑变性（AMD）研究的开展,需要优化无动物源性成分（xeno-free）培养体系快速定向诱导人胚胎干细胞（hESCs）向RPE细胞分化以满足日渐增长的科研及临床需要. 目的 建...
背景 随着视网膜色素上皮（RPE）细胞视网膜下腔移植治疗年龄相关性黄斑变性（AMD）研究的开展,需要优化无动物源性成分（xeno-free）培养体系快速定向诱导人胚胎干细胞（hESCs）向RPE细胞分化以满足日渐增长的科研及临床需要. 目的 建立xeno-free培养体系,优化快速诱导hESCs向RPE细胞分化的方法. 方法 将hESCs克隆团接种至Vitronectin XFTM,在培养液中加入50 ng/ml noggin、10 ng/ml DKK-1以及10 ng/ml胰岛素样生长因子-1（IGF-1）培养2d,第2～4天将培养液中noggin质量浓度减至10 ng/ml,并加入5 ng/ml碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）,第4～6天移除培养液中的noggin和bFGF,第8～14天培养液中加入1 μmol/L CHIR99021.倒置显微镜下观察ESCs在分化为RPE细胞过程中的形态变化,免疫荧光染色检测细胞内特异性抗原的表达以对分化细胞进行鉴定,实时荧光定量PCR （qRT-PCR）法检测细胞分化过程中RPE细胞特异性蛋白mRNA的相对表达变化量.结果 分化培养第14天,部分细胞呈多角形并呈现铺路石样排列,且细胞内可见色素颗粒;培养第35天,诱导分化的细胞内表达RPE细胞特异性抗原Mitf及RPE65;培养至第60天,细胞内富含黑色素颗粒且呈规则六边形.与诱导分化前比较,诱导分化第7天和第14天hES-RPE细胞中Mitf mRNA的表达量分别增加了（3.43±2.77）倍和（8.91±2.83）倍,而RPE65 mRNA的表达量分别增加了（14.60±3.94）倍和（87.16±9.32）倍,分化第7天和第14天细胞中的Mitf mRNA和RPE65mRNA的相对表达量均明显高于分化前,差异均有统计学意义（均P＜0.05）. 结论 hESCs可在含尼克酰胺、DKK-1、noggin、IGF-1和CHIR99021的xeno-free优化培养体系中快速分化为RPE细胞.
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关键词
胚胎干细胞/药物作用
细胞培养技术/方法
细胞分化
视网膜色素上皮
培养液/药物作用
细胞株
人
无动物源性
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职称材料
题名
建立植入前遗传学检测人胚胎来源的无动物源性干细胞系
1
作者
张丹
王增艳
麦庆云
蔡炳
曾艳红
周灿权
机构
中山大学附属第一医院生殖中心//广东省生殖医学重点实验室
出处
《中山大学学报（医学版）》
CAS
CSCD
北大核心
2019年第4期510-517,共8页
基金
广东省生殖医学重点实验室(2012A061400003)
文摘
【目的】在无动物源性的干细胞培养体系中建立植入前遗传学检测(PGT)胚胎来源的人胚胎干细胞系,为医学研究提供疾病模型。【方法】在我们的研究中,对无动物源性的人类包皮成纤维细胞饲养层(XF-HFF)与成分确定的培养基(CDM)构建的无动物源性培养体系进行了评估。在该培养体系中,利用染色体平衡易位患者PGT来源的废弃胚胎建立一个新的人胚干细胞(hESC)细胞系。【结果】新建立的人胚胎干细胞系在无动物源性培养系统中可长期培养传代(>45个代次)。核型分析显示,在传代45代次后,新建立的人胚胎干细胞仍保持一致的核型。XF-HFF/CDM中的hESC仍保持多能性。通过荧光免疫染色检测到SSEA-3、SSEA-4、SSEA-1、TRA-1-60、TRA-1-81等多能标志物的表达;RT-PCR分析显示,在XF-HFF/CDM培养体系上生长的hESC中存在干细胞标记。小鼠体内实验也证实了hESC在体内维持其多能性。【结论】本研究建立了PGT来源的人胚胎干细胞系,为进一步建立携带遗传疾病基因的hESC系并为临床研究和治疗提供疾病模型打下了基础。
关键词
人胚胎干细胞
无动物源性
胚胎植入前遗传
性
诊断来
源
的
Keywords
human embryonic stem cells
xeno-free
PGT-derived
分类号
R329 [医药卫生—人体解剖和组织胚胎学]
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职称材料
题名
无动物源性成分培养体系快速诱导人胚胎干细胞向视网膜色素上皮细胞的分化
被引量：
1
2
作者
刘秋慧
王菁
田蓉
王肖
曹迪
卢晶
罗燕
机构
中山大学中山眼科中心眼科学国家重点实验室
出处
《中华实验眼科杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2016年第6期484-488,共5页
基金
国家重点基础研究发展计划973项目（2013CB967004）
国家自然科学基金项目（81371020）
文摘
背景 随着视网膜色素上皮（RPE）细胞视网膜下腔移植治疗年龄相关性黄斑变性（AMD）研究的开展,需要优化无动物源性成分（xeno-free）培养体系快速定向诱导人胚胎干细胞（hESCs）向RPE细胞分化以满足日渐增长的科研及临床需要. 目的 建立xeno-free培养体系,优化快速诱导hESCs向RPE细胞分化的方法. 方法 将hESCs克隆团接种至Vitronectin XFTM,在培养液中加入50 ng/ml noggin、10 ng/ml DKK-1以及10 ng/ml胰岛素样生长因子-1（IGF-1）培养2d,第2～4天将培养液中noggin质量浓度减至10 ng/ml,并加入5 ng/ml碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）,第4～6天移除培养液中的noggin和bFGF,第8～14天培养液中加入1 μmol/L CHIR99021.倒置显微镜下观察ESCs在分化为RPE细胞过程中的形态变化,免疫荧光染色检测细胞内特异性抗原的表达以对分化细胞进行鉴定,实时荧光定量PCR （qRT-PCR）法检测细胞分化过程中RPE细胞特异性蛋白mRNA的相对表达变化量.结果 分化培养第14天,部分细胞呈多角形并呈现铺路石样排列,且细胞内可见色素颗粒;培养第35天,诱导分化的细胞内表达RPE细胞特异性抗原Mitf及RPE65;培养至第60天,细胞内富含黑色素颗粒且呈规则六边形.与诱导分化前比较,诱导分化第7天和第14天hES-RPE细胞中Mitf mRNA的表达量分别增加了（3.43±2.77）倍和（8.91±2.83）倍,而RPE65 mRNA的表达量分别增加了（14.60±3.94）倍和（87.16±9.32）倍,分化第7天和第14天细胞中的Mitf mRNA和RPE65mRNA的相对表达量均明显高于分化前,差异均有统计学意义（均P＜0.05）. 结论 hESCs可在含尼克酰胺、DKK-1、noggin、IGF-1和CHIR99021的xeno-free优化培养体系中快速分化为RPE细胞.
关键词
胚胎干细胞/药物作用
细胞培养技术/方法
细胞分化
视网膜色素上皮
培养液/药物作用
细胞株
人
无动物源性
Keywords
Embryonic stem cells/drug effect
Cell culture techniques/methods
Cell differentiation
Retinal pigment epithelium
Culture media/drug effects
Cell line
Humans
Xeno-free
分类号
R774.5 [医药卫生—眼科]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
建立植入前遗传学检测人胚胎来源的无动物源性干细胞系
张丹
王增艳
麦庆云
蔡炳
曾艳红
周灿权
《中山大学学报（医学版）》
CAS
CSCD
北大核心
2019
0
在线阅读
下载PDF
职称材料
2
无动物源性成分培养体系快速诱导人胚胎干细胞向视网膜色素上皮细胞的分化
刘秋慧
王菁
田蓉
王肖
曹迪
卢晶
罗燕
《中华实验眼科杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2016
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