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脂肪源性干细胞诱导分化的施万样细胞中神经生长因子高表达对大鼠背根神经节细胞突起生长的促进作用
1
作者 朱清华 袁博 +5 位作者 王一伦 任淼 李晓飞 王思邈 甄子萱 付秀美 《吉林大学学报(医学版)》 北大核心 2025年第4期984-995,共12页
目的:探讨脂肪源性干细胞(ADSCs)诱导分化的施万样细胞(SCLCs)高表达的神经生长因子(NGF)对大鼠背根神经节(DRG)细胞突起生长的促进作用,并阐明其作用机制。方法:从SD大鼠附睾旁脂肪中提取ADSCs,通过成骨诱导、成脂诱导和成软骨诱导鉴定... 目的:探讨脂肪源性干细胞(ADSCs)诱导分化的施万样细胞(SCLCs)高表达的神经生长因子(NGF)对大鼠背根神经节(DRG)细胞突起生长的促进作用,并阐明其作用机制。方法:从SD大鼠附睾旁脂肪中提取ADSCs,通过成骨诱导、成脂诱导和成软骨诱导鉴定ADSCs的多向分化能力。将ADSCs诱导分化为SCLCs,并通过免疫荧光法和Western blotting法检测ADSCs和SCLCs中胶质纤维酸性蛋白(GFAP)及S100钙结合蛋白β(S100β)表达水平。分离培养大鼠DRG细胞,采用免疫荧光法检测DRG细胞中Ⅲ类β微管蛋白(βⅢ-tubulin)以鉴定DRG细胞。将SCLCs与DRG细胞共培养(共培养组),DRG细胞单独培养作为DRG组。利用甲苯胺蓝染色在光学显微镜下观察并测量共培养组和DRG组细胞的突起长度。采用小干扰RNA(siRNA)转染技术敲低NGF,质粒转染技术过表达NGF,实时荧光定量PCR(RT-qPCR)法检测各组细胞中NGF mRNA表达水平,酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测各组细胞上清中NGF蛋白表达水平。将转染后的SCLCs与DRG细胞共培养,分为对照组、siNC/vector组、NGF敲低组(si-NGF组)和NGF过表达组(oe-NGF组),观察各组DRG细胞突起的长度。结果:原代ADSCs接种24 h后基本贴壁并留有少量脂滴,培养3 d后细胞多为短梭形、纺锤状或多角形,呈旋涡状生长,增长迅速,传代后细胞形态均一,呈长梭形,鱼群状排列。ADSCs经成脂诱导培养基培养14 d后,细胞形态由梭形变为扁圆形,中间可见透亮的圆形脂滴形成,经油红O染色可见细胞质中的脂滴被染成红色。ADSCs经成骨诱导培养基培养28 d后可见细胞呈沙粒样,形态模糊,出现钙化结节,经茜素红染色后可见钙化结节被红染,沉积在细胞外基质。ADSCs经成软骨诱导培养基立体培养28 d后可见小米粒大小的软骨球生成,对软骨球进行冰冻切片,阿利辛蓝染色后显微镜下可见软骨组织中的酸性黏多糖被染色成蓝色。在荧光显微镜下观察纯化后第3代ADSCs,可见被异硫氰酸荧光素(FITC)标记为绿色荧光的CD29蛋白表达阳性、被Cy3标记为红色荧光CD44蛋白表达阳性。免疫荧光法,可见GFAP被FITC标记为绿色荧光,S100β被Cy3标记为红色荧光。Western blotting法,与ADSCs比较,SCLCs高表达S100β和GFAP蛋白。原代提取的DRG细胞常规培养6 h后开始贴壁,培养3 d后细胞胞体发亮呈圆形,胞体发出两条线状突起。荧光显微镜下观察,细胞中神经元特异性标志物βⅢ-tubulin呈阳性表达,表明分离提取的细胞为DRG细胞。与ADSCs比较,SCLCs中NGF蛋白表达水平升高(P<0.05)。与DRG组比较,DRG细胞与SCLCs以1∶2比例接种时,共培养组DRG细胞突起长度最高(P<0.05)。RT-qPCR法,与si-NC组比较,si-NGF-1、si-NGF-2和si-NGF-3组细胞中NGF m RNA表达水平明显降低(P<0.05),且si NGF-1敲低效率最好,后续将采用si-NGF-1进行实验。ELISA法,与si-NC组比较,si-NGF-1、si-NGF-2和si-NGF-3组细胞上清中NGF水平均降低(P<0.05)。与vector组比较,oe-NGF组细胞中NGF m RNA表达水平升高(P<0.05),细胞上清中NGF水平升高(P<0.05)。与对照组和si NC/vector组比较,si NGF组DRG细胞突起长度缩短(P<0.05),oe-NGF组DRG细胞突起长度增加(P<0.01)。结论:ADSCs可以定向分化为SCLCs,且分化后的细胞高表达NGF;敲低或过表达NGF可影响DRG细胞突起的生长。 展开更多
关键词 施万样细胞 神经生长因子 背根神经节细胞 脂肪源性干细胞 周围神经损伤
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施万样细胞对大鼠脊神经节NGF和BDNF表达的影响 被引量：4
2
作者 付秀美 王荣良 +2 位作者 杨振江 付文亮 王小杰 《中国临床解剖学杂志》 CSCD 北大核心 2017年第1期48-51,共4页
目的观察施万样细胞对坐骨神经损伤(sciatic nerve injury,SNI)大鼠脊神经节NGF和BDNF表达的影响,初步探讨施万样细胞对脊神经节的保护作用。方法先将脂肪源性干细胞(adipose-derived stem cells,ADSCs)诱导分化为施万样细胞并对后者进... 目的观察施万样细胞对坐骨神经损伤(sciatic nerve injury,SNI)大鼠脊神经节NGF和BDNF表达的影响,初步探讨施万样细胞对脊神经节的保护作用。方法先将脂肪源性干细胞(adipose-derived stem cells,ADSCs)诱导分化为施万样细胞并对后者进行鉴定,后将二者分别植入脱细胞神经移植物(ANA)中,构建组织工程神经。大鼠随机分为正常对照组、ADSC组和施万样细胞组。后两组建立SNI模型并用相应的组织工程神经桥接损伤的神经。术后4周采用Western Blot和Real-time PCR检测各组大鼠脊神经节神经生长因子(nerve growth factor,NGF)和脑源性神经营养因子(brainderived neurotrophic factor,BDNF)蛋白和m RNA的表达。结果 ADSCs能够诱导分化为施万样细胞并表达施万细胞标记物S100β和GFAP蛋白。施万样细胞组大鼠脊神经节内NGF和BDNF蛋白及m RNA表达量均高于ADSC组(P<0.05)。结论施万样细胞可上调脊神经节NGF和BDNF的表达,对SNI所致的脊神经节内神经元损伤有保护作用。 展开更多
关键词 施万样细胞 脊神经节 NGF BDNF
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大鼠脂肪源性干细胞来源的施万样细胞的增殖能力 被引量：1
3
作者 付秀美 杨振江 +4 位作者 王荣良 王晶 王小杰 陈志宏 杨振军 《吉林大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2017年第1期36-41,I0002,共7页
目的:通过检测大鼠脂肪源性干细胞(ADSCs)来源的施万样细胞的增殖能力,探讨其在神经修复再生领域的应用及其意义。方法:取大鼠附睾旁脂肪组织进行ADSCs的分离与培养;将第4代ADSCs在β-巯基乙醇(β-ME)、反式维甲酸(ATRA)、血小板衍生因... 目的:通过检测大鼠脂肪源性干细胞(ADSCs)来源的施万样细胞的增殖能力,探讨其在神经修复再生领域的应用及其意义。方法:取大鼠附睾旁脂肪组织进行ADSCs的分离与培养;将第4代ADSCs在β-巯基乙醇(β-ME)、反式维甲酸(ATRA)、血小板衍生因子AA(PDGF-AA)、碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)、腺苷酸环化酶激活剂(Forskolin)和Heregulin-β的联合作用下诱导分化为施万样细胞。采用免疫荧光法、Western blotting法和Real-time PCR法检测施万细胞(SCs)标记物S-100β、P75和胶质纤维酸性蛋白(GFAP)的表达水平;采用MTT法检测施万样细胞的增殖能力,观察其有丝分裂增殖现象。结果:诱导分化后的施万样细胞呈梭形、栅栏样排列。S-100β、P75和GFAP蛋白免疫荧光为Cy3/FITC标记,阳性产物位于细胞浆及其突起。Western blotting和Real-time PCR法检测,施万样细胞中S-100β、P75和GFAP蛋白和mRNA表达水平明显高于ADSCs(P<0.01)。MTT法检测,施万样细胞有较强的有丝分裂增殖能力。结论:ADSCs能够成功被诱导分化为施万样细胞,并表达SCs标记物;施万样细胞有较强的有丝分裂增殖能力,可作为神经组织工程理想的种子细胞。 展开更多
关键词 脂肪源性干细胞 施万样细胞 细胞增殖 有丝分裂
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白藜芦醇联合施万细胞样细胞对大鼠坐骨神经损伤的修复作用
4
作者 刘杏 郑玲 +3 位作者 刘雨 易黎明 饶利兵 鞠晓军 《神经解剖学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2024年第4期485-491,共7页
目的:探讨白藜芦醇联合脂肪源性干细胞(ADSCs)分化的施万细胞样细胞(SCLCs)对大鼠坐骨神经损伤的修复作用。方法:ADSCs原代培养并向SCLCs诱导分化,扫描电镜观察细胞形态;Western Blot方法检测S100钙结合蛋白β(S100β)、p75神经营养素受... 目的:探讨白藜芦醇联合脂肪源性干细胞(ADSCs)分化的施万细胞样细胞(SCLCs)对大鼠坐骨神经损伤的修复作用。方法:ADSCs原代培养并向SCLCs诱导分化,扫描电镜观察细胞形态;Western Blot方法检测S100钙结合蛋白β(S100β)、p75神经营养素受体(p75NTR)、胶质纤维酸性蛋白(GFAP)表达。大鼠随机分为对照组(Control)、施万细胞样细胞组(SCLCs)、白藜芦醇组(Res)、白藜芦醇+施万细胞样细胞组(Res+SCLCs),坐骨神经损伤模型造模成功后8周通过足迹实验检测各组坐骨神经功能指数(SFI);von Frey丝刺激针测定机械缩足阈值(MWT);称重法测定胫前肌湿重比率(WR);Western Blot、RT-qPCR方法检测损伤处神经营养素-3(NT-3)、神经生长因子(NGF)、类胰岛素生长因子-1(IGF-1)和脑源性神经营养因子(BDNF)表达情况。结果:ADSCs诱导8 d后细胞两极细长,细胞外成分增多;S100β、p75NTR、GFAP蛋白高表达。给予SCLCs、Res及Res+SCLCs治疗后,治疗组SFI、WR明显优于Control组(P<0.05);Res+SCLCs组、SCLCs组大鼠MWT降低(P<0.05)。Western Blot结果显示:Res+SCLCs组大鼠NT-3、IGF-1、NGF、BDNF蛋白表达高于其余各组(P<0.05);SCLCs组大鼠NT-3、NGF、BDNF蛋白表达高于Control组(P<0.05);Res组大鼠NT-3、NGF蛋白表达高于Control组(P<0.05)。RT-qPCR结果显示:Res+SCLCs组大鼠NT-3、IGF-1、NGF、BDNF mRNA高表达;SCLCs组大鼠NT-3、IGF-1、NGF、BDNF mRNA表达高于Control组(P<0.05);Res组大鼠IGF-1、NGF mRNA表达高于Control组(P<0.05)。结论:Res联合ADSCs分化的SCLCs对大鼠坐骨神经损伤具有良好的修复作用。 展开更多
关键词 坐骨神经 施万细胞样细胞 脂肪源性干细胞 白藜芦醇 分化 大鼠
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大鼠脂肪源性干细胞定向分化为施万细胞样细胞的实验研究 被引量：1
5
作者 汤银娟 张丽华 +6 位作者 刘杰明 董为人 郭家松 王海红 戴翔 陈英华 肖应庆 《南方医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第4期680-684,共5页
目的研究体外培养成年大鼠脂肪源性干细胞(ADSCs)并诱导分化为施万细胞样细胞的潜能。方法分离、培养成年SD大鼠ADSCs,免疫细胞化学法鉴定细胞表面抗原CD44,CD49d和CD106。传6～8代的ADSCs接种在多聚赖氨酸铺板的培养板内,用含5ng/ml血... 目的研究体外培养成年大鼠脂肪源性干细胞(ADSCs)并诱导分化为施万细胞样细胞的潜能。方法分离、培养成年SD大鼠ADSCs,免疫细胞化学法鉴定细胞表面抗原CD44,CD49d和CD106。传6～8代的ADSCs接种在多聚赖氨酸铺板的培养板内,用含5ng/ml血小板源性生长因子,10ng/ml牛碱性成纤维细胞生长因子,14μmol/LForskolin,200ng/mlHeregulin及10%FBS的DMEM/F12培养基诱导分化12d,免疫细胞化学法鉴定细胞表面标记物GFAP,S-100和P75。结果分离纯化的ADSCs呈CD44和CD49d阳性,而CD106表达为阴性;诱导后的细胞呈梭形,并表达施万细胞特异性标志蛋白-GFAP,S-100和P75。结论从大鼠脂肪组织能获得具有增殖和分化潜能的干细胞,这些细胞在特定条件下可定向诱导分化为施万细胞样细胞。 展开更多
关键词 脂肪源性干细胞 体外培养 细胞分化 施万细胞样细胞 免疫细胞化学法
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施万细胞样细胞对大鼠背根神经节细胞突起生长和神经生长因子表达的影响及其机制 被引量：1
6
作者 杜元良 任旺 +4 位作者 刘琳 胡朔丹 刘茗宇 杜鹏飞 付秀美 《吉林大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2022年第3期684-691,共8页
目的:探讨施万细胞样细胞(SCLCs)对大鼠背根神经节(DRG)细胞突起生长和神经生长因子(NGF)表达的影响,阐明SCLCs促进DRG细胞生长的作用及其机制。方法:分离培养脂肪源性干细胞(ADSCs),茜素红染色检测细胞中钙化结节从而观察其分化能力,... 目的:探讨施万细胞样细胞(SCLCs)对大鼠背根神经节(DRG)细胞突起生长和神经生长因子(NGF)表达的影响,阐明SCLCs促进DRG细胞生长的作用及其机制。方法:分离培养脂肪源性干细胞(ADSCs),茜素红染色检测细胞中钙化结节从而观察其分化能力,将其诱导分化为SCLCs,免疫荧光法检测SCLCs中S100蛋白的表达。分离培养DRG细胞,免疫组织化学染色检测DRG细胞中神经元核抗原(NeuN)蛋白的表达。建立SCLCs与DRG细胞共培养体系,将细胞分为单培养组和共培养组。HE染色观察2组DRG细胞的形态结构,计数2组DRG细胞数和DRG细胞突起数,免疫组织化学染色检测2组DRG细胞中NGF蛋白的表达,Western blotting法检测2组DRG细胞中NGF蛋白表达水平。结果:原代ADSCs培养7 d,倒置显微镜下可见数量较多、体积较大、呈长梭形的细胞类似旋涡状或铺路石样排列。茜素红染色,镜下可见钙化结节,即所培养细胞具有分化能力。免疫荧光染色,大多数细胞均呈S100染色阳性,即ADSCs可成功诱导分化为SCLCs。培养72 h后,DRG细胞突起细而长、呈花环样排列,7~8 d后,细胞数量进一步增加,胞体较大,呈圆形,突起细长,相互连接似栅栏样。免疫组织化学染色,几乎所有细胞核均被标记为棕褐色,呈NeuN染色阳性。与单培养组比较,共培养组DRG细胞数及细胞突起数均明显增加(P<0.05),共培养组DRG细胞中NGF蛋白表达水平明显升高(P<0.05)。结论:共培养条件下SCLCs可增加DRG细胞数和细胞突起数,提高DRG细胞中NGF蛋白的表达,发挥促进DRG细胞生长的作用。 展开更多
关键词 施万细胞样细胞 背根神经节细胞 共培养 神经生长因子 神经元核抗原
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大鼠骨髓基质细胞分化为施万细胞样细胞过程中的基因表达变化
7
作者 陈娇 张丹丹 +3 位作者 李军平 牛建国 何仲义 贾桦 《神经解剖学杂志》 CAS CSCD 2021年第3期315-322,共8页
目的:利用转录组测序技术(RNA-seq)检测骨髓基质细胞(BMSCs)分化为施万细胞(SCs)样细胞过程中基因表达谱的变化,筛选与分化相关的差异表达基因,并分析与分化相关的信号通路。方法:体外培养大鼠BMSCs,用三步诱导法对其进行诱导,在复合生... 目的:利用转录组测序技术(RNA-seq)检测骨髓基质细胞(BMSCs)分化为施万细胞(SCs)样细胞过程中基因表达谱的变化,筛选与分化相关的差异表达基因,并分析与分化相关的信号通路。方法:体外培养大鼠BMSCs,用三步诱导法对其进行诱导,在复合生长因子诱导第12 h和7 d收集样本。经Illumina测序平台对BMSCs、诱导培养基(DM)诱导12 h(DM-12 h)和7 d(DM-7 d)的细胞进行生物信息分析,采用Cluster Profiler软件对差异基因集进行GO功能和KEGG代谢通路富集分析。结果:与BMSCs组相比,DM-12 h组有578个基因表达上调,632个基因表达下调;与DM-12 h组相比,DM-7 d组有1165个基因表达上调,872个基因表达下调;与BMSCs组相比,DM-7 d组有629个基因表达上调,529个基因表达下调。经Venn分析,共筛选出140个在各阶段共同表达的差异基因,其中与分化相关的基因主要富集在细胞周期、DNA复制和p53信号通路;并确定Ccne2、Mcm3和Rrm2可作为下一步研究的候选基因。结论:本研究首次基于转录组测序构建BMSCs诱导分化为SCs样细胞的基因表达谱,揭示分化过程中的差异基因,并筛选出Ccne2、Mcm3和Rrm2作为研究目的基因,为阐明BMSCs分化为SCs样细胞的机制提供依据。 展开更多
关键词 骨髓基质细胞 施万细胞样细胞 分化 转录组测序 大鼠
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miR-21通过调节骨髓基质细胞分化促进大鼠坐骨神经的损伤修复
8
作者 魏财鸿 刘玉梅 +2 位作者 王贺颖 李军平 贾桦 《神经解剖学杂志》 北大核心 2025年第4期477-485,共9页
目的:探讨转染miR-21的骨髓基质细胞(BMSCs)对大鼠坐骨神经损伤的修复机制。方法:体外采用miR-21激动剂(agomir-21)或阻断剂(antagomir-21)及各自的空载体分别转染大鼠BMSCs,将其分为Control组、agomir-21组、agomir-NC组、antagomir-2... 目的:探讨转染miR-21的骨髓基质细胞(BMSCs)对大鼠坐骨神经损伤的修复机制。方法:体外采用miR-21激动剂(agomir-21)或阻断剂(antagomir-21)及各自的空载体分别转染大鼠BMSCs,将其分为Control组、agomir-21组、agomir-NC组、antagomir-21组和antagomir-NC组。制备12 mm含脱细胞神经区域的大鼠坐骨神经损伤模型,将各组细胞用Hoechst33342标记后植入脱细胞神经区域。术后14 d,采用足迹实验、腓肠肌湿重比率测定评价神经运动功能恢复情况;应用免疫荧光染色检测再生神经内神经丝蛋白200(NF200)、髓鞘碱性蛋白(MBP)、S100钙结合蛋白β(S100β)及胶质纤维酸性蛋白(GFAP)的表达。结果:与Control组相比,agomir-21组坐骨神经功能指数(SFI)、腓肠肌湿重比显著增加(P<0.05);再生神经纤维密度增高、髓鞘标志蛋白表达增加,且BMSCs分化为施万细胞样细胞(SCLCs)的比率显著增加(P<0.05)。结论:miR-21通过提高BMSCs体内向SCLCs分化,显著促进周围神经再生。 展开更多
关键词 MIR-21 骨髓基质细胞 周围神经损伤 施万细胞样细胞 分化 大鼠
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施万细胞样细胞对大鼠背根神经节细胞突起生长的影响 被引量：3
9
作者 任旺 胡朔丹 +3 位作者 刘琳 刘茗宇 杜鹏飞 付秀美 《神经解剖学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2020年第6期605-611,共7页
目的:通过建立施万细胞样细胞(SC-L)与幼年大鼠背根神经节(DRG)细胞共培养体系,观察DRG细胞突起的生长情况以及检测脑源性神经营养因子(BDNF)的表达。方法:采用0.1%的I型胶原酶分离培养脂肪源性干细胞(ADSCs)并进行鉴定,然后将其诱导分... 目的:通过建立施万细胞样细胞(SC-L)与幼年大鼠背根神经节(DRG)细胞共培养体系,观察DRG细胞突起的生长情况以及检测脑源性神经营养因子(BDNF)的表达。方法:采用0.1%的I型胶原酶分离培养脂肪源性干细胞(ADSCs)并进行鉴定,然后将其诱导分化为SC-L。分离培养DRG细胞,后将其分为单独培养组(DRG)和共培养组(DRG+SC-L)。DRG组将两份等体积的DRG细胞混合,常规培养;DRG+SC-L组将等体积的DRG细胞与SC-L进行共培养处理。7~10 d后采用苏木素-伊红(HE)染色观察两组DRG细胞的形态,免疫荧光和Western Blot技术检测DRG细胞内BDNF蛋白的表达。结果:与DRG组相比,DRG+SC-L组DRG细胞的数量以及突起的数目和长度明显增加、细胞内BDNF蛋白表达量明显升高(P <0.05)。结论:SC-L可增加DRG细胞的数量以及突起的数目和长度,并可提高细胞内BDNF蛋白的表达。 展开更多
关键词 背根神经节细胞 神经突起 脑源性神经营养因子 施万细胞样细胞 脂肪源性干细胞 大鼠
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