带新霉素抗性的萤光素酶报告载体的构建

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作者 马云云 冯龙 +4 位作者 卫艳萍 李月白 何婷玉 董子明 赵国强 《郑州大学学报（医学版）》 CAS 北大核心 2009年第3期533-536,共4页

目的:构建带新霉素抗性的萤光素酶报告载体。方法:设计扩增新霉素抗性基因neo,克隆入萤光素酶报告载体pGL3,得到pGL3-neo。分别比较pGL3、pGL3-CMV promoter瞬时转染组和经G418筛选的pGL3-neo、pGL3-neo-CMV promoter稳定转染组细胞萤... 目的:构建带新霉素抗性的萤光素酶报告载体。方法:设计扩增新霉素抗性基因neo,克隆入萤光素酶报告载体pGL3,得到pGL3-neo。分别比较pGL3、pGL3-CMV promoter瞬时转染组和经G418筛选的pGL3-neo、pGL3-neo-CMV promoter稳定转染组细胞萤光素酶活性。结果:PCR扩增出neo表达单元;酶切和DNA测序分析鉴定得到带新霉素抗性的萤光素酶报告质粒pGL3-neo。G418筛选可获得稳定转染pGL3-neo细胞株和稳定转染pGL3-neo-CMV promoter的细胞株。荧光检测显示:瞬时转染pGL3组、pGL3-CMVpromoter组及稳定转染pGL3-neo组、pGL3-neo-CMVpromoter组萤光素酶活性值分别为1047±86、1504±107和34819±1479、456109±15791,稳定转染组萤光素酶活性均高于瞬时转染组,P<0.05。结论:成功构建了带新霉素抗性的萤光素酶报告基因载体,使报告基因检测数据的敏感性和可靠性显著提高。 展开更多

关键词 萤光素酶报告载体pGL3 新霉素抗性基因neo 克隆

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不同浓度硫酸新霉素对生物絮团氨氮转化速率及抗生素抗性基因的影响

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作者 杨逸尊 罗国芝 谭洪新 《淡水渔业》 CSCD 北大核心 2023年第4期72-81,共10页

为探究不同浓度硫酸新霉素对于生物絮团处理氨氮及抗生素抗性基因的影响,本实验对生物絮团水质及絮团指标、水体中抗生素含量和生物絮团中6种抗生素抗性基因的含量进行了检测。结果显示:在氨氮转化的速率上,初次加药连续监测显示未添加... 为探究不同浓度硫酸新霉素对于生物絮团处理氨氮及抗生素抗性基因的影响,本实验对生物絮团水质及絮团指标、水体中抗生素含量和生物絮团中6种抗生素抗性基因的含量进行了检测。结果显示:在氨氮转化的速率上,初次加药连续监测显示未添加组(A组)、0.5 mg/L硫酸新霉素组(B组)、1 mg/L硫酸新霉素组(C组)和3 mg/L硫酸新霉素组(D组)的氨氮去除速率分别为(3.88±0.02)mg TAN/(g TSS·h)、(2.22±0.03)mg TAN/(g TSS·h)、(2.17±0.04)mg TAN/(g TSS·h)和(1.72±0.02)mg TAN/(g TSS·h),氨氮去除速率A组>B组>C组>D组。而间隔一个休药期(500℃·d)的第二次加药连续监测显示4个组的氨氮去除速率分别为(2.99±0.08)mg TAN/(g TSS·h)、(2.98±0.03)mg TAN/(g TSS·h)、(2.97±0.08)mg TAN/(g TSS·h)和(5.10±0.03)mg TAN/(g TSS·h),氨氮去除速率D组>A组>B组>C组。对水体抗生素检测发现,两次检测都未能测出水体中硫酸新霉素的存在。对抗生素抗性基因检测发现硫酸新霉素对于aph(3′)-Ia、aph(3′)-Ⅱa、aac(6′)-Ⅰb、aac(3)-Ⅱ这四种基因具有较大的选择和富集的能力。但B组的各抗生素抗性基因的拷贝数均为最低。实验结束后对4个实验组的异养菌菌落数量进行检测,发现了B组的菌群群落数量相较其他3组有明显提升。比较结果表明硫酸新霉素在第一次加药时随着浓度提高,对氨氮转化速率的影响越大。但在第二次加药时,添加的硫酸新霉素浓度对氨氮转化速率无负面影响,而高浓度的硫酸新霉素可以促进生物絮团氨氮的转化,但会显著增加抗生素抗性基因的拷贝数。 展开更多

关键词 生物絮团 氨氮转化速率 硫酸新霉素 抗生素抗性基因

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结球甘蓝抗虫转基因植株及其后代的抗性表现 被引量：12

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作者 佘建明 蔡小宁 +5 位作者 朱卫民 张初贤 丁万霞 李建斌 李彬 朱祯 《江苏农业学报》 CSCD 2001年第2期73-76,共4页

应用农杆菌介导法将含有豇豆胰蛋白酶抑制剂 (CpTI)基因和新霉素磷酸转移酶 (NPTⅡ )基因的重组质粒导入结球甘蓝栽培品种春甘蓝“鸡心 2 3”和秋甘蓝“黑叶头”。对转基因当代植株 (T0 )及其自交后代 (T1、T2 、T3)群体进行卡那霉素抗... 应用农杆菌介导法将含有豇豆胰蛋白酶抑制剂 (CpTI)基因和新霉素磷酸转移酶 (NPTⅡ )基因的重组质粒导入结球甘蓝栽培品种春甘蓝“鸡心 2 3”和秋甘蓝“黑叶头”。对转基因当代植株 (T0 )及其自交后代 (T1、T2 、T3)群体进行卡那霉素抗性、抗虫性鉴定和分子检测。经PCR DNA分子杂交检测 ,确认抗虫基因———豇豆胰蛋白酶抑制剂基因已整合到受体植株的基因组中 ,并在有性生殖过程中传递给后代。卡那霉素抗性和抗虫性状在T0 代植株上得到表达 ;T1代植株中发生分离 ;T2 代中呈现出 3种不同类型的株系 :抗性纯合、杂合型和敏感性纯合株系 ;从T3 代中获得卡那霉素抗性和抗虫性纯合的株系。试验结果显示 ,卡那霉素抗性和抗虫性状在转基因植株自交后代中的表现基本符合显性单基因的分离规律。在T2 、T3 代抗虫性纯合的株系中 ,鳞翅目小菜蛾、甜菜夜蛾和斜纹夜蛾的 1～ 2龄幼虫校正死亡率为 6 %～ 10 0 % ,从中选出一批校正死亡率达 80 展开更多

关键词 结球甘蓝 转基因植株 豇豆胰蛋白酶抑制剂 新霉素磷酸转移酶 卡那霉素抗性 抗虫性

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波氏假丝酵母启动子的克隆及新霉素基因的表达

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作者 徐柏年 吴江雪 +1 位作者 李文清 罗进贤 《中山大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2001年第1期65-68,76,共5页

报道了波氏假丝酵母（Ｃａｎｄｉｄａ ｂｏｉｄｉｎｉｉ）启动子的克隆，将克隆的启动子与 Ｎｅｏ基因重组构建了 含Ｎｅｏｒ基因的表达载体ＹｅｐＮＰ１８１，转化波氏假丝酵母，实现了Ｎｅｏｒ基因在波氏假丝酵母中的表达，使波氏 假... 报道了波氏假丝酵母（Ｃａｎｄｉｄａ ｂｏｉｄｉｎｉｉ）启动子的克隆，将克隆的启动子与 Ｎｅｏ基因重组构建了 含Ｎｅｏｒ基因的表达载体ＹｅｐＮＰ１８１，转化波氏假丝酵母，实现了Ｎｅｏｒ基因在波氏假丝酵母中的表达，使波氏 假丝酵母转化子能在含Ｇ４１８的抗性培养基上生长从而建立了Ｎｅｏｒ基因──Ｇ４１８选择系统，为外源基因在 波氏假丝酵母中表达创造了条件． 展开更多

关键词 启动子克隆 新霉素抗性基因 波氏假丝酵母 基因表达 工业发酵菌种 G418选择系统 转化子

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杆状病毒早期启动子载体的构建及报道基因的表达 被引量：3

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作者 邓小昭 朱反修 +2 位作者 刁振宇 高健 齐义鹏 《医学研究生学报》 CAS 2001年第3期200-203,,206,,共5页

目的 :用苜蓿尺蠖核多角体病毒 (Ac NPV)的 IE1基因启动子构建杆状病毒早期基因启动子载体。　方法 :以 Ac NPV p10基因为侧翼序列 ,并将新霉素抗性基因 (neo)插入 IE1基因启动子下游 ,得到转移载体 p Ac PIneo。将它和野生型 Ac NPV DN... 目的 :用苜蓿尺蠖核多角体病毒 (Ac NPV)的 IE1基因启动子构建杆状病毒早期基因启动子载体。　方法 :以 Ac NPV p10基因为侧翼序列 ,并将新霉素抗性基因 (neo)插入 IE1基因启动子下游 ,得到转移载体 p Ac PIneo。将它和野生型 Ac NPV DNA共转染昆虫细胞 Sf9,由于 neo基因的表达 ,通过 G418的选择和富集作用 ,得到重组病毒 v Ac PIneo的纯培养。　结果 :用酶切和 Southern印迹杂交证明 ,neo基因整合于 Ac NPV基因组的 p10基因位相。　结论 :成功地构建了杆状病毒早期启动子载体 。 展开更多

关键词 昆虫杆状病毒 IE1基因 p10基因 转移载体 新霉素抗性基因

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腺相关病毒末端反向重复顺序折叠结构在真核细胞染色体基因组上的整合作用

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作者 郭葆玉 胡宗林 +2 位作者 徐惠敏 孔宪涛 陆德如 《第二军医大学学报》 CSCD 北大核心 1994年第5期423-427,共5页

腺相关病毒（Ａｄｅｎｏ－ａｓｓｏｃｉａｔｅｄｖｉｒｕｓ，ＡＡＶ）是一类线状单股ＤＮＡ（ＳＳ－ＤＮＡ）的微小病毒。依据Ｃａｖａｌｉｅｒ－Ｓｍｉｔｈ的ＳＳ－ＤＮＡ病毒复制模型原理，将其末端反向重复顺序（ＩＴＲｓ）分离，变... 腺相关病毒（Ａｄｅｎｏ－ａｓｓｏｃｉａｔｅｄｖｉｒｕｓ，ＡＡＶ）是一类线状单股ＤＮＡ（ＳＳ－ＤＮＡ）的微小病毒。依据Ｃａｖａｌｉｅｒ－Ｓｍｉｔｈ的ＳＳ－ＤＮＡ病毒复制模型原理，将其末端反向重复顺序（ＩＴＲｓ）分离，变为折叠十字架结构，再以其发夹中的３＇－ＯＨ为引物合成另一股姊妹染色体ＤＮＡ，然后共价连接到亲代分子上，与辅助病毒Ａｄ２和ＰＡＡＶ／Ａｄ共转染真核生物细胞。Ｓｏｕｔｈｅｒｎ印迹分子杂交结果表明：插入这一折叠结构中由ＳＶ４０早期启动子控制的报告基因－新霉素抗性基因拷贝已整合到细胞基因组染色体上，这种以无细菌ＤＮＡ分子为支架的折叠结构不仅证明了Ｃａｖａｌｉｅｒ－Ｓｍｉｔｈ的理论，而且可望为外源基因导入真核细胞提供新的又一系统。 展开更多

关键词 腺相关病毒 折叠结构 新霉素抗性基因 基因转导

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第一位患者获基因转移治疗

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作者 王璋瑜 《生物技术通报》 CAS CSCD 1990年第1期14-14,共1页

经过管理部门长达数月的审查,外加一次流产的法庭挑战之后。科学家终于在(?)月初将一种外源基因注射到十名癌症患者中的第一位体内,5月22日,国家癌症研究所的A. Rosenberg及R. Michael Blaese和国家心、肺、血液研究所的W. French Ander... 经过管理部门长达数月的审查,外加一次流产的法庭挑战之后。科学家终于在(?)月初将一种外源基因注射到十名癌症患者中的第一位体内,5月22日,国家癌症研究所的A. Rosenberg及R. Michael Blaese和国家心、肺、血液研究所的W. French Anderson将杀伤性T细胞及白细胞介素-2与一种经修饰的小鼠病毒培养在一起。病毒含有新霉素抗性基因,可作为标记来追踪肿瘤滤过性淋巴细胞(TIL)在患者体内的行踪。头一名患者患的是晚期黑色瘤,预计还有90天的生命期。如果实验成功。 展开更多

关键词 新霉素抗性基因 外源基因注射 国家癌症研究所 基因转移治疗 滤过性 病毒培养 血液研究所 黑色瘤 Rosenberg 生命期

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基因标记、转化、表达与检测

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《生物技术通报》 CAS CSCD 1992年第8期39-42,共4页

关键词 基因标记 穿梭载体 转染 新霉素抗性基因 限制性位点 逆病毒载体 工程菌 链霉菌 启动子 报道基因

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基因工程

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《生物技术通报》 CAS CSCD 1991年第6期26-41,共16页

关键词 新霉素抗性基因 酿酒酵母 启动子 DNA 电激法 定点诱变 核糖体结合位点 克隆基因 营养缺陷 转化子

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NIH批准在人体内进行外源基因移植

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作者 王璋瑜 《生物技术通报》 CAS CSCD 1989年第6期10-10,共1页

一项关于将外源基因移植到人体中的实验提议已被送交美国政府,以待国家卫生研究院(NIH)重组DNA顾问委员会批准。该委员会迟迟不予决断,只到拥有更多的数据。上述实验尚需NIH主任和食品药物管理局(FDA)的审批。实验内容包括将一个新霉素... 一项关于将外源基因移植到人体中的实验提议已被送交美国政府,以待国家卫生研究院(NIH)重组DNA顾问委员会批准。该委员会迟迟不予决断,只到拥有更多的数据。上述实验尚需NIH主任和食品药物管理局(FDA)的审批。实验内容包括将一个新霉素抗性基因插入到一种已失去侵染性但仍能携带并激活上述基因的病毒中。病毒将被置入分离自癌症患者的肿瘤渗透性淋巴细胞(TIL)中,然后将细胞送回患者体内。上述外源基因并不影响癌细胞,只是起标记作用。 展开更多

关键词 外源基因 NIH 新霉素抗性基因 国家卫生研究院 侵染性 顾问委员会 美国政府 DNA 恶性黑素瘤 抗癌能力

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抗生素和干扰素

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《生物技术通报》 CAS CSCD 1993年第2期37-40,共4页

关键词 发酵液 色谱分离法 预培养 链霉菌 天然产物 延胡索酸盐 新霉素抗性基因 对称膜 脂肽 环醚

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GenPharm International公司转获同源重组技术

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作者 王旭宁 《生物技术通报》 CAS CSCD 1990年第11期25-26,共2页

研究者在上个月宣布的结果表明同源重组将成为基因疗法和培育转基因动物的关键技术,培育这种动物的某家公司已经从大学转获同源重组技术.明确地说,GenPharm Inter-national 公司正从犹他研究基金大学和斯坦福大学转获这项技术.在将外源 ... 研究者在上个月宣布的结果表明同源重组将成为基因疗法和培育转基因动物的关键技术,培育这种动物的某家公司已经从大学转获同源重组技术.明确地说,GenPharm Inter-national 公司正从犹他研究基金大学和斯坦福大学转获这项技术.在将外源 DNA 结合到染色体特定位置方面,同源重组(即基因定靶)比微注射更有效、更专一. 展开更多

关键词 同源重组技术 转基因动物 基因疗法 研究基金 微注射 斯坦福 细胞基因组 新霉素抗性基因 外源 DNA

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动物遗传工程

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《生物技术通报》 CAS CSCD 1993年第3期73-74,共2页

关键词 基因文库 动物遗传 启动子 逆病毒载体 感受态 新霉素抗性基因 多形性 嵌合基因 编码人 生长激素基因

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医药其它

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《生物技术通报》 CAS CSCD 1993年第12期57-65,共9页

954117作 HIV-1蛋白酶抑制剂的新细胞松弛素 L-69B,474的微生物转化[英]/Chen,T.S.…∥J.Nat.Prod.-1993,56(5).-755～761[译自DBA,1993,12(13),93-07457]用 Actinoplane sp.ATCC53771研究了一种新的细胞松弛素 L-696,474(I)的转化。Act... 954117作 HIV-1蛋白酶抑制剂的新细胞松弛素 L-69B,474的微生物转化[英]/Chen,T.S.…∥J.Nat.Prod.-1993,56(5).-755～761[译自DBA,1993,12(13),93-07457]用 Actinoplane sp.ATCC53771研究了一种新的细胞松弛素 L-696,474(I)的转化。Actinoflanes sp.培养子含10g/l 葡萄糖。 展开更多

关键词 逆病毒载体 细胞松弛素 基因克隆 基因转移 抗性细胞 微生物转化 新霉素抗性基因 荧光素酶 蛋白酶抑制剂 包装细胞

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质粒研究与载体构建

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《生物技术通报》 CAS CSCD 1992年第6期34-36,共3页

关键词 重组质粒 载体构建 启动子 新霉素抗性基因 穿梭质粒载体 白喉毒素 限制性位点 基因克隆 虫荧光素酶 野生型

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