新型鸭呼肠孤病毒的分离鉴定及细胞适应性研究

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作者 孔冬妮 邓永 +7 位作者 陈孟姣 薛麒 王嘉 杨飞 毛娅卿 刘丹 黄小洁 周明旭 《动物医学进展》 北大核心 2025年第5期48-52,共5页

对广西某鸭场临床疑似由新型鸭呼肠孤病毒(Novel duck reovirus,NDRV)感染的雏鸭进行RT-PCR鉴定、NDRV分离、毒株细胞培养特性、雏鸭致病性、S1基因序列测定和遗传进化分析等研究。结果显示,RT-PCR检测组织病料为NDRV阳性,组织样品处理... 对广西某鸭场临床疑似由新型鸭呼肠孤病毒(Novel duck reovirus,NDRV)感染的雏鸭进行RT-PCR鉴定、NDRV分离、毒株细胞培养特性、雏鸭致病性、S1基因序列测定和遗传进化分析等研究。结果显示,RT-PCR检测组织病料为NDRV阳性,组织样品处理后接种SPF鸭胚,鸭胚出现发育迟缓、死亡,胚体全身及多脏器出血等症状;用鸭胚尿囊液接种雏鸭后出现脾脏坏死的特异性病变。S1基因的同源性与进化树分析结果显示,GX2022株与公布的部分NDRV毒株核苷酸序列相似性为93.7%~98.9%,而与鸭呼肠孤病毒(Muscovy duck reovirus,MDRV)GX2010株、GX110058株、S1133株,与禽呼肠孤病毒(Avian reovirus,ARV)815株、ZJM2000M株同源性很低,在21.8%~28.4%之间。进化树分析显示,该毒株与我国流行的NDRV处在同一个分支上,与MDRV和ARV的距离较远,说明分离到的毒株是新型鸭呼肠孤病毒。毒株接种LMH、CEF、Vero细胞后均产生空泡和细胞崩解等细胞病变。该新型鸭呼肠孤病毒临床感染的致病特征研究,有助于新型鸭呼肠病毒病的防控及疫苗的研发。 展开更多

关键词 新型鸭呼肠孤病毒(NDRV) 分离鉴定 S1基因 遗传进化

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福建省新型鸭呼肠孤病毒生物学特性及基因序列分析

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作者 董慧 陈小丽 +2 位作者 朱小丽 王劭 林锋强 《中国动物检疫》 CAS 2024年第7期17-21,共5页

为了解福建省新型鸭呼肠孤病毒(NDRV)生物学特性和遗传变异状况,从福建省番鸭主要饲养区采集了8份临床发病样品进行病原学检测、病原分离、攻毒试验及S1基因序列分析。结果显示:8份临床样品均为NDRV阳性,接种番鸭胚后均成功分离到病毒;... 为了解福建省新型鸭呼肠孤病毒(NDRV)生物学特性和遗传变异状况,从福建省番鸭主要饲养区采集了8份临床发病样品进行病原学检测、病原分离、攻毒试验及S1基因序列分析。结果显示:8份临床样品均为NDRV阳性,接种番鸭胚后均成功分离到病毒;将NDRV尿囊液毒感染番鸭后3~10 d发病,发病率为20%~40%,死亡率为0~20%,剖检可见肝脏有出血斑及大量白色坏死灶,脾脏肿大坏死,与参考毒株NDRV-NP03相比,部分分离毒株毒力有所下降。S1基因序列分析发现:NDRV分离毒株与省内毒株亲缘关系较近,与省外毒株亲缘关系相对较远;在系统进化树上,8株NDRV分离毒株聚为同一分支,而福建省外毒株聚为另一分支,说明NDRV呈区域性流行特征;σC蛋白氨基酸序列与NP03株相比,存在12个差异位点,可能会导致NDRV感染能力发生改变。 展开更多

关键词 新型鸭呼肠孤病毒 分离鉴定 生物学特性 基因序列 福建

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新型鸭呼肠孤病毒σB蛋白原核表达及间接ELISA抗体检测方法的建立

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作者 王玮珠 王俊丽 +7 位作者 李丽杰 雷白时 孙茂源 张武超 赵卓 赵款 袁万哲 王林 《中国兽药杂志》 2024年第11期1-8,共8页

为建立一种高效、便捷的新型鸭呼肠孤病毒(Novel duck reovirus,NDRV)抗体检测方法,以大肠杆菌表达系统表达的重组σB蛋白作为包被抗原,建立了NDRV抗体的间接ELISA检测方法。对该检测方法的反应条件进行优化,并进行特异性、敏感性和重... 为建立一种高效、便捷的新型鸭呼肠孤病毒(Novel duck reovirus,NDRV)抗体检测方法,以大肠杆菌表达系统表达的重组σB蛋白作为包被抗原,建立了NDRV抗体的间接ELISA检测方法。对该检测方法的反应条件进行优化,并进行特异性、敏感性和重复性试验以及临床样本检测。结果显示建立的间接ELISA检测方法的最佳反应条件为:0.5μg/mL抗原4℃包被过夜,待检血清1∶400稀释37℃孵育60 min,显色时间为15 min,Cut off值为0.432。该方法对新城疫病毒(NDV)、鸭圆环病毒(DuCV)、新型鹅细小病毒(NGPV)和鸭坦布苏病毒(DTMUV)阳性血清均不存在交叉反应,且检测阳性血清的敏感度为1∶6400,批间和批内重复试验的变异系数均小于8%,该检测方法与市售NDRV抗体ELISA检测试剂盒的总符合率为96.88%。本研究成功建立了间接ELISA检测方法,为NDRV抗体检测提供了有效便捷的方法。 展开更多

关键词 新型鸭呼肠孤病毒 σB蛋白 原核表达 间接ELISA

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一株新型鸭呼肠孤病毒的分离及抗体检测的间接ELISA建立

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作者 徐晨晨 马旭杰 +1 位作者 宋素泉 闫丽萍 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第12期5651-5662,共12页

新型鸭呼肠孤病毒(Novel duck reovirus,NDRV)能造成多品种雏鸭肝、脾的出血坏死,并造成免疫抑制,给我国的水禽养殖业造成了严重经济损失,但市场上仍无商品化检测试剂盒。基于此,本研究通过蚀斑纯化从临床病料中成功分离到一株纯净的新... 新型鸭呼肠孤病毒(Novel duck reovirus,NDRV)能造成多品种雏鸭肝、脾的出血坏死,并造成免疫抑制,给我国的水禽养殖业造成了严重经济损失,但市场上仍无商品化检测试剂盒。基于此,本研究通过蚀斑纯化从临床病料中成功分离到一株纯净的新型鸭呼肠孤病毒(命名为E232株),并以原核表达的σC蛋白为包被原建立了能够检测NDRV血清抗体的间接ELISA。遗传进化分析结果显示,E232株属于NDRV,且与其他NDRV毒株的核苷酸同源性为96.4%~98.9%。动物回归试验结果表明,E232株发病率达到100%,发病雏鸭的脾出现严重肿胀、出血、坏死,泄殖腔排毒量和咽部排毒量均在感染后第5天达到高峰。建立的间接ELISA具有良好的特异性,与其他鸭病病原阳性血清均无交叉反应;检测NDRV阳性血清最低检出效价为1∶6400,批内重复变异系数为1.53%~7.24%,批间重复变异系数为1.84%~8.30%,检测236份临床血清样品的阳性率为80.93%。综上,本研究E232株的成功分离,丰富了我国NDRV流行病学信息库;间接ELISA的成功建立,为临床NDRV防控提供了良好的技术手段。 展开更多

关键词 新型鸭呼肠孤病毒 分离鉴定 σC蛋白 间接ELISA

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用荧光定量RT-PCR方法检测新型鸭呼肠孤病毒 被引量：10

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作者 韩宏宇 马秀丽 +4 位作者 黄兵 李建亮 张玉瑶 于可响 崔言顺 《浙江农业学报》 CSCD 北大核心 2015年第8期1331-1336,共6页

根据新型鸭呼肠孤病毒（novel duck reovirus,NDRV）S1基因序列设计1对特异性引物,建立了基于SYBR GreenⅠ的实时荧光定量RT-PCR检测方法。根据含目的基因的质粒拷贝数与定量反应Ct值的关系,绘制了标准曲线。敏感性试验显示,该方法最低... 根据新型鸭呼肠孤病毒（novel duck reovirus,NDRV）S1基因序列设计1对特异性引物,建立了基于SYBR GreenⅠ的实时荧光定量RT-PCR检测方法。根据含目的基因的质粒拷贝数与定量反应Ct值的关系,绘制了标准曲线。敏感性试验显示,该方法最低可检出15个拷贝的病毒c DNA,其病毒最低检出量为0.5TCID50。该方法具有良好的特异性,对鸭坦布苏病毒（DTMUV）、A型鸭甲肝病毒（DHV-1）、C型鸭甲肝病毒（DHV-3）、番鸭呼肠孤病毒（MDRV）、减蛋综合征病毒（EDSV）、鸭新城疫病毒（NDV）、鸭瘟病毒（DPV）、鸭疫里默氏杆菌（RA）的检测结果均为阴性。该方法重复性好,组内变异系数为0.32%~0.91%,组间变异系数为1.03%~1.51%。利用该方法对人工感染雏鸭的粪便排毒情况进行检测,结果发现,攻毒后2~12 d是粪便排毒期,其中3~6 d是排毒高峰期。临床样品检测结果表明,该方法比常规RT-PCR具有更高的敏感性,而且从收到样品到得出检测结果只需4 h。 展开更多

关键词 新型鸭呼肠孤病毒 SYBR GreenⅠ 实时荧光定量RT-PCR

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新型鸭呼肠孤病毒一步法TaqMan-MGB荧光定量RT-PCR检测方法的建立与应用 被引量：5

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作者 云涛 华炯钢 +3 位作者 叶伟成 倪征 陈柳 张存 《浙江农业学报》 CSCD 北大核心 2020年第4期571-576,共6页

为建立一种快速、敏感和特异性检测新型鸭呼肠孤病毒(novel duck reovirus,NDRV)的方法,本研究根据GenBank数据库中NDRV S3基因保守序列设计1对特异性引物和1条MGB荧光探针,建立了一种检测NDRV的一步法MGB荧光定量RT-PCR方法,对其特异... 为建立一种快速、敏感和特异性检测新型鸭呼肠孤病毒(novel duck reovirus,NDRV)的方法,本研究根据GenBank数据库中NDRV S3基因保守序列设计1对特异性引物和1条MGB荧光探针,建立了一种检测NDRV的一步法MGB荧光定量RT-PCR方法,对其特异性、敏感性和重复性进行检验,并与普通RT-PCR进行比较。结果显示,扩增标准曲线相关系数为0.999,扩增产物的熔解曲线仅出现单特异峰。该方法对经典鸭呼肠孤病毒、H9N2禽流感病毒、鸭坦布苏病毒、A型鸭肝炎病毒、鸭新城疫病毒、鸭瘟病毒及番鸭细小病毒均未检测到信号,对NDRV的最小检出量为10拷贝·μL^-1。组内和组间变异系数均小于2%,重复性好。此外,利用该方法对239份疑似新型呼肠孤病毒病样品进行检测,常规RT-PCR检测时有75份为阳性,一步法TaqMan-MGB荧光定量RT-PCR方法检测时有100份为阳性,而且常规RT-PCR检测出的阳性样品用一步法TaqMan-MGB荧光定量RT-PCR检测时均为阳性,符合率为100%。该检测方法的建立为NDRV早期快速检测及定量分析提供新的方法。 展开更多

关键词 新型鸭呼肠孤病毒 MGB探针 荧光定量RT-PCR 检测方法

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新型鸭呼肠孤病毒σB蛋白的原核表达及其多克隆抗体制备 被引量：7

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作者 梅敏敏 梁国智 +2 位作者 黄雯晶 李晓文 黄淑坚 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2016年第12期3149-3155,共7页

为制备新型鸭呼肠孤病毒(new-type duck reovirus,NDRV)XX株σB蛋白的多克隆抗体,试验经RT-PCR扩增NDRV XX株σB基因编码序列,构建原核表达质粒pET-32a(+)-σB,将其转化至大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞后,经IPTG诱导获得His-σB重组蛋白... 为制备新型鸭呼肠孤病毒(new-type duck reovirus,NDRV)XX株σB蛋白的多克隆抗体,试验经RT-PCR扩增NDRV XX株σB基因编码序列,构建原核表达质粒pET-32a(+)-σB,将其转化至大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞后,经IPTG诱导获得His-σB重组蛋白。SDS-PAGE显示成功表达出约55ku的融合蛋白,主要以包涵体形式存在,其表达时的最佳诱导时间、IPTG诱导浓度分别为3h和0.25mmol/L。经Ni 2+柱亲和层析纯化获得可溶性重组蛋白,将蛋白经Western blotting和蛋白质谱鉴定为高纯度的σB重组蛋白,将纯化后σB重组蛋白按合理免疫程序免疫家兔,获得多抗隆抗体经Western blotting分析显示出特异性的反应。本试验结果为NDRVσB蛋白功能的深入研究及基因工程疫苗的研发奠定了基础。 展开更多

关键词 新型鸭呼肠孤病毒 σB 蛋白 原核表达 多克隆抗体

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新型鸭呼肠孤病毒分离鉴定及其σC基因序列分析 被引量：5

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作者 张薇 武华 +2 位作者 阴雅洁 李松励 侯绍华 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2022年第9期3520-3529,共10页

【目的】了解并掌握新型鸭呼肠孤病毒(Novel duck reovirus, NDRV)流行特点及生物学特性,为NDRV的防治提供理论基础和技术支持。【方法】采集河北某鸭场疑似发生鸭呼肠孤病毒感染的组织,无菌处理后接种SPF鸡胚分离病毒,收获第3代尿囊液... 【目的】了解并掌握新型鸭呼肠孤病毒(Novel duck reovirus, NDRV)流行特点及生物学特性,为NDRV的防治提供理论基础和技术支持。【方法】采集河北某鸭场疑似发生鸭呼肠孤病毒感染的组织,无菌处理后接种SPF鸡胚分离病毒,收获第3代尿囊液进行血凝试验,通过PCR、透射电镜观察、间接免疫荧光法(IFA)鉴定病毒,对分离得到的病毒进行体外细胞培养和动物回归试验,并采用Mega 7.0对其σC基因进行遗传进化分析。【结果】分离得到的病毒不能凝集鸡红细胞,可致死鸡胚,死亡鸡胚出血、充血严重;经PCR鉴定,病毒呈NDRV阳性,其他病原(禽呼肠孤病毒、鸭病毒性肝炎、鸭坦布苏病毒、鸭瘟病毒、禽腺病毒血清4型)均呈阴性,将分离得到的病毒命名为BD/CHN/2020株;病毒纯化后,经电镜观察可见直径为60~80 nm、无囊膜的球形病毒粒子,该毒株可在BHK和LMH细胞上稳定增殖并产生细胞融合的细胞病变效应(CPE);IFA结果显示,BD/CHN/2020株接种BHK细胞后在激光共聚焦显微镜下观察可见特异性绿色荧光;BD/CHN/2020株经皮下接种后,发病鸭出现精神沉郁、排白色稀粪等临床症状,剖检可见脾脏出血、肿大、有白色坏死灶等病理变化;序列比对发现,BD/CHN/2020株与NDRV毒株(TH11、091等毒株)在同一分支,与NDRV SY株核苷酸和氨基酸序列相似性最高,均为99.7%,属于NDRV。与灭活疫苗TH11株(KC493571.1)和弱毒疫苗JS01-105P株(V202168)相比,BD/CHN/2020株第93、120、132、158、253、298位氨基酸处发生了位点突变。【结论】成功分离得到1株NDRV BD/CHN/2020株,分离毒株对北京鸭有较强的致病性,与国内疫苗株相比,BD/CHN/2020株的σC蛋白已经发生了氨基酸位点的突变,结果可为新型鸭呼肠孤病毒病的流行病学及疫苗研发奠定基础。 展开更多

关键词 新型鸭呼肠孤病毒(NDRV) 分离鉴定 σC基因

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新型鸭呼肠孤病毒在DF-1细胞系中的增殖特性 被引量：1

9

作者 云涛 华炯钢 +3 位作者 叶伟成 倪征 陈柳 张存 《浙江农业学报》 CSCD 北大核心 2019年第5期716-721,共6页

为了研究新型鸭呼肠孤病毒(new-type duck reovirus,NDRV)在鸡胚成纤维细胞DF-1中的增殖特性,将NDRV JDM10毒株接种到DF-1细胞,连续传代后,通过观察病毒对细胞的致病变效应,测定半数组织感染量(TCID_(50))、RT-PCR检测、间接免疫荧光(I... 为了研究新型鸭呼肠孤病毒(new-type duck reovirus,NDRV)在鸡胚成纤维细胞DF-1中的增殖特性,将NDRV JDM10毒株接种到DF-1细胞,连续传代后,通过观察病毒对细胞的致病变效应,测定半数组织感染量(TCID_(50))、RT-PCR检测、间接免疫荧光(IFA)及Western-blot免疫学检测,探索NDRV对DF-1细胞的作用效果。结果表明,NDRV JDM10毒株在DF-1细胞中能有效增殖,产生明显的致病变效应;RT-PCR检测成功扩增出1条大小为1 001 bp的条带;病毒蛋白在细胞中获得了良好的表达,并与抗NDRVσC单克隆抗体发生特异性反应;NDRV JDM10毒株在感染DF-1细胞后会经历潜伏期、快速增长期、稳定期3个时期,并在72 h病毒效价达到峰值,TCID_(50)为1×10^(-7.90)·(0.1mL)^(-1)。本研究为进一步研究NDRV的致病机理和研制细胞疫苗奠定了基础。 展开更多

关键词 新型鸭呼肠孤病毒(NDRV) 鸡胚成纤维(DF-1)细胞 增殖特性

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新型鸭呼肠孤病毒弱毒株在雏番鸭体内的分布和排毒规律 被引量：1

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作者 华炯钢 叶伟成 +5 位作者 刘可姝 云涛 倪征 陈柳 朱寅初 张存 《浙江农业科学》 2021年第11期2295-2298,共4页

为了解新型鸭呼肠孤病毒(Novel duck reovirus,NDRV)弱毒株感染雏番鸭后在体内的分布和排毒规律,本研究采用传代致弱的NDRV JDm10-150毒株接种1 d龄雏番鸭,对接毒后6 h~35 d雏番鸭的血液、脑、胸腺、心、肝、脾、肺、肾、胰腺、法氏囊... 为了解新型鸭呼肠孤病毒(Novel duck reovirus,NDRV)弱毒株感染雏番鸭后在体内的分布和排毒规律,本研究采用传代致弱的NDRV JDm10-150毒株接种1 d龄雏番鸭,对接毒后6 h~35 d雏番鸭的血液、脑、胸腺、心、肝、脾、肺、肾、胰腺、法氏囊、盲肠扁桃体、咽拭子和泄殖腔拭子采用qRT-PCR方法检测病毒分布情况。结果显示:接6 h后,在各组织脏器及血清中可检到NDRV核酸,且肝和脾病毒含量最高。随后,各组织脏器及血清中NDRV核酸含量逐渐减少。接毒后9 d,各组织器官及血液均检测不到NDRV核酸或NDRV核酸检测为阴性(Ct>35)。接毒后第13~35 d,除脑和血清外,大部分的组织脏器中均又检测到NDRV核酸,且NDRV核酸含量基本稳定,其中脾脏和法氏囊组织中NDRV核酸含量始终保持较高水平。对不同时间采集的咽拭子和泄殖腔拭子进行检测,发现雏番鸭在接毒后6 h开始向外界排毒,之后通过泄殖腔排毒,直至攻毒后28 d停止排毒。以上检测结果表明,NDRV JDm10弱毒株感染雏番鸭后快速侵入各组织脏器和血液,脾脏和法氏囊为主要侵染和定殖场所,主要通过泄殖腔分泌物向外界排毒。 展开更多

关键词 新型鸭呼肠孤病毒 弱毒株 QRT-PCR 分布 排毒规律

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新型鸭呼肠孤病毒σC蛋白的原核表达及其多克隆抗体制备 被引量：6

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作者 毕庄莉 朱英奇 +4 位作者 陈宗艳 李传峰 孟春春 王桂军 刘光清 《浙江农业学报》 CSCD 北大核心 2014年第4期882-886,共5页

为了解新型鸭呼肠孤病毒(NDRV TH11株)σC蛋白的抗原性,采用RT-PCR方法扩增了NDRV TH11株σC蛋白的编码基因,将其克隆于原核表达载体pET-30a(+)中,转化大肠杆菌BL21(DE3),经IPTG诱导表达His-σC重组蛋白。SDS-PAGE和Western blot分析表... 为了解新型鸭呼肠孤病毒(NDRV TH11株)σC蛋白的抗原性,采用RT-PCR方法扩增了NDRV TH11株σC蛋白的编码基因,将其克隆于原核表达载体pET-30a(+)中,转化大肠杆菌BL21(DE3),经IPTG诱导表达His-σC重组蛋白。SDS-PAGE和Western blot分析表明该重组蛋白获得高效表达,并具有较好的反应原性。以纯化的σC蛋白免疫实验兔制备了抗σC蛋白的多克隆抗体,间接ELISA检测结果显示其效价达1∶20 000以上;间接免疫荧光试验表明,多克隆抗体能够特异性识别NDRV的σC蛋白,显示出σC蛋白具有良好的免疫原性。 展开更多

关键词 新型鸭呼肠孤病毒 σC基因 原核表达 多克隆抗体

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新型鸭呼肠孤病毒QY株σB蛋白基因特征、二级结构预测及其细胞抗原表位分析 被引量：4

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作者 吴阳开 范文胜 +4 位作者 张雪莲 李智丽 郭锦玥 李文锋 黄淑坚 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2019年第10期2851-2859,共9页

本研究旨在对新型鸭呼肠孤病毒(NDRV)QY株σB蛋白的遗传变异规律和结构及功能进行分析。从GenBank数据库中获取QY株和25株参考株的σB蛋白编码序列,通过Mega 6.0软件进行序列比对分析和系统进化树构建;使用Datamonkey软件进行选择压力分... 本研究旨在对新型鸭呼肠孤病毒(NDRV)QY株σB蛋白的遗传变异规律和结构及功能进行分析。从GenBank数据库中获取QY株和25株参考株的σB蛋白编码序列,通过Mega 6.0软件进行序列比对分析和系统进化树构建;使用Datamonkey软件进行选择压力分析;运用生物信息学软件预测QY株σB蛋白二级结构功能及B细胞和T细胞抗原表位。相似性分析结果显示,NDRV QY株与国内其他地区分离的鸭呼肠孤病毒(DRV)氨基酸相似性达到94.9%~98.9%,与禽呼肠孤病毒(ARV)及番鸭呼肠孤病毒(MDRV)的相似性仅为66.5%~68.4%和67.6%~68.4%;选择压力分析显示,σB蛋白承受净化选择压力,但存在一个正向选择位点;σB蛋白属于亲水蛋白,不具有信号肽和跨膜区,含有潜在的O-糖基化位点;结构预测分析显示,σB蛋白具有α-螺旋、β-折叠、β-转角及无规则卷曲等丰富的二级结构;表位分析显示,σB蛋白含有潜在的B细胞和T细胞抗原表位。本研究成功进行了QY株σB蛋白的基因特征和结构功能预测及其细胞表位分析,为深入了解该蛋白的免疫学特性及研发NDRV新型疫苗奠定了基础。 展开更多

关键词 新型鸭呼肠孤病毒(NDRV) σB蛋白 基因特征 二级结构 抗原表位

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新型鸭呼肠孤病毒广东分离株σC蛋白基因序列分析 被引量：4

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作者 张思远 卢秀娴 +4 位作者 云骜 梁昭平 潘俊斌 林举攀 叶贺佳 《中国兽药杂志》 2019年第12期1-6,共6页

从广东湛江某肉鸭养殖场发生脚软、关节肿大为临床特征和脾脏肿大、肝脏有坏死灶为病变的樱桃谷鸭病料中分离到一株新型鸭呼肠孤病毒,命名为GD693.对新型鸭呼肠孤病毒GD693株σC蛋白基因进行RT-PCR扩增、克隆和测序,并与参考毒株σC蛋... 从广东湛江某肉鸭养殖场发生脚软、关节肿大为临床特征和脾脏肿大、肝脏有坏死灶为病变的樱桃谷鸭病料中分离到一株新型鸭呼肠孤病毒,命名为GD693.对新型鸭呼肠孤病毒GD693株σC蛋白基因进行RT-PCR扩增、克隆和测序,并与参考毒株σC蛋白基因序列进行比对分析.结果显示:GD693株与新型呼肠孤病毒(NDRV)代表毒株处于进化树的同一大分支,但却处于一个单独的分支,同属于基因2型,具有相近的遗传演化关系;与NDRV代表毒株091株、TH11株的σC蛋白基因序列进行比较分析,存在核苷酸和氨基酸的序列改变,毒株有可能发生变异或毒力增强. 展开更多

关键词 新型鸭呼肠孤病毒 分离鉴定 σC蛋白基因 序列分析

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感染新型鸭呼肠孤病毒雏番鸭和健康雏番鸭的肝蛋白质组学的差异

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作者 朱果真 黄梅清 +3 位作者 陈仕龙 郑敏 程晓霞 陈少莺 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第5期808-814,共7页

应用差异蛋白质组学研究感染新型鸭呼肠孤病毒(NDRV)番鸭后的肝和正常番鸭肝的蛋白质组差异,为深入研究NDRV的致病机制奠定良好理论基础。通过二维双向凝胶电泳技术和MALDI-TOF-TOF质谱仪分析获取NDRV感染组与非感染对照组之间的差异表... 应用差异蛋白质组学研究感染新型鸭呼肠孤病毒(NDRV)番鸭后的肝和正常番鸭肝的蛋白质组差异,为深入研究NDRV的致病机制奠定良好理论基础。通过二维双向凝胶电泳技术和MALDI-TOF-TOF质谱仪分析获取NDRV感染组与非感染对照组之间的差异表达蛋白质,并运用蛋白质搜索鉴定软件Mascot 2.3.02鉴定蛋白质。结果共鉴定出26个差异表达蛋白质。感染组和非感染对照组比较,感染组肝中有9个表达下调的蛋白质和12个表达上调的蛋白质,3个表达蛋白质仅出现在非感染组,2个表达蛋白质仅出现在感染组。NDRV感染组的番鸭肝有肝细胞受损现象。差异蛋白质组学为NDRV分子发病机制的分析提供了一个新途径。 展开更多

关键词 番鸭 肝 差异蛋白质组学 新型鸭呼肠孤病毒

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新型鸭呼肠孤病毒σB蛋白基因密码子的优化及原核表达 被引量：9

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作者 李文锋 梅敏敏 +5 位作者 黄兴国 黄雯晶 李晓文 Saeed El-Ashram 黄淑坚 李智丽 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2018年第10期2700-2706,共7页

试验旨在优化新型鸭呼肠孤病毒(new-type duck reovirus,NDRV)XX株σB蛋白的原核表达系统,并评价sσB蛋白的免疫原性。根据已测得的NDRV-XX的σB蛋白基因序列,在不改变氨基酸序列的前提下,按照大肠杆菌密码子偏好性对σB蛋白全基因进行... 试验旨在优化新型鸭呼肠孤病毒(new-type duck reovirus,NDRV)XX株σB蛋白的原核表达系统,并评价sσB蛋白的免疫原性。根据已测得的NDRV-XX的σB蛋白基因序列,在不改变氨基酸序列的前提下,按照大肠杆菌密码子偏好性对σB蛋白全基因进行优化、合成并连接至pET-32a(+)质粒中,构建原核表达重组质粒pET-32a(+)-sσB,转化大肠杆菌BL21(DE3)菌株,经IPTG诱导表达并优化表达条件。SDS-PAGE结果显示,最佳诱导表达时间、温度及IPTG浓度分别为3h、32℃和0.25mmol/L;可溶性分析结果表明,重组蛋白主要以包涵体形式存在于菌体中。表达菌经超声破碎、变性、复性和Ni 2+柱亲和层析后,得到纯度高于90%的sσB可溶性蛋白,sσB重组蛋白在大肠杆菌BL21(DE3)菌株上的表达量较σB蛋白提升了14.6%,前者占细菌总蛋白量的32.3%。Western blotting结果显示,sσB重组蛋白具备NDRV抗原免疫反应原性。本试验成功构建并优化了NDRV-XX株σB蛋白的原核表达系统,提高了σB蛋白的表达量,并获得具有良好NDRV抗原免疫反应原性的σB重组蛋白,为后续NDRVσB蛋白功能及其应用的深入研究、基因工程疫苗的研发奠定了基础。 展开更多

关键词 新型鸭呼肠孤病毒(NDRV) σB蛋白 密码子优化 原核表达 纯化

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新型鸭呼肠孤病毒研究进展 被引量：5

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作者 马明瑞 陈浩 张斌 《现代盐化工》 2022年第4期24-27,共4页

新型鸭呼肠孤病毒(NDRV)是目前严重危害养禽业发展的一种病原微生物,其引起的禽呼肠孤病毒病是一种以脾脏肿大、出血、坏死为主要特征的免疫抑制病,该病在全球各地的家禽养殖场广泛流行。2017年以来,NDRV在我国各省份相继暴发,传染性和... 新型鸭呼肠孤病毒(NDRV)是目前严重危害养禽业发展的一种病原微生物,其引起的禽呼肠孤病毒病是一种以脾脏肿大、出血、坏死为主要特征的免疫抑制病,该病在全球各地的家禽养殖场广泛流行。2017年以来,NDRV在我国各省份相继暴发,传染性和破坏性也在持续上升,对水禽养殖业造成了巨大威胁。梳理近年来新型鸭呼肠孤病毒病的研究报道,对该病的特征、流行病学、临床症状及各类诊断方法等方面进行总结,全面阐述该病及其诊断方式的研究进展,为该病的相关研究提供参考。 展开更多

关键词 新型鸭呼肠孤病毒 免疫抑制病 研究进展

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新型鸭呼肠孤病毒DH13株σC蛋白的原核表达及其多克隆抗体制备 被引量：4

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作者 李文俊 黄惠兰 +4 位作者 杨惠湖 谢梓民 崔惠仪 黄淑坚 张雪莲 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2020年第9期2953-2959,共7页

试验旨在建立新型鸭呼肠孤病毒(NDRV)σC蛋白的原核表达系统,制备σC蛋白的多克隆抗体,并评估所制备抗体的效价。通过RT-PCR方法扩增获得NDRV DH13株σC基因,连接至pET-30a(+)及pET-32a(+)载体中,构建原核表达质粒,并将其转化大肠杆菌BL... 试验旨在建立新型鸭呼肠孤病毒(NDRV)σC蛋白的原核表达系统,制备σC蛋白的多克隆抗体,并评估所制备抗体的效价。通过RT-PCR方法扩增获得NDRV DH13株σC基因,连接至pET-30a(+)及pET-32a(+)载体中,构建原核表达质粒,并将其转化大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞,经IPTG诱导获得两种σC重组蛋白,经SDS-PAGE分析蛋白表达形式。利用切胶方法纯化不含His标签σC重组蛋白,利用Ni-NTA柱纯化含His标签σC重组蛋白。以纯化的无His标签蛋白为免疫原免疫兔子获得兔抗σC多克隆抗体,Western blotting分别使用抗His标签的单克隆抗体和NDRV-σC蛋白阳性血清两种一抗评估抗体的特异性,间接ELISA(iELISA)检测抗体滴度。SDS-PAGE结果显示获得34和37 ku两种重组蛋白,且均得到高效表达。Western blotting结果显示制备的多克隆抗体具有良好的特异性,所制备的抗体与σC蛋白亲和力较好。间接ELISA检测结果显示其效价达1∶25600。本试验成功构建σC蛋白的原核表达系统,制备的σC蛋白多克隆抗体为深入研究σC蛋白的生物学功能及开展NDRV基因工程疫苗的研发奠定了基础。 展开更多

关键词 新型鸭呼肠孤病毒 σC蛋白 原核表达 多克隆抗体

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一株新型鸭呼肠孤病毒的分离鉴定 被引量：2

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作者 江婷 黄俊霖 +3 位作者 唐华丽 王威威 杨飞燕 韦天超 《广西畜牧兽医》 2021年第6期250-253,共4页

本研究对一例临床疑似由新型鸭呼肠孤病毒(NDRV)感染的雏鸭病例进行RT-PCR鉴定、鸡胚及细胞培养的特性、病毒基因同源性分析等研究。结果显示,从该病例样品中扩增到NDRVσB部分基因片段的特异性条带;组织样品接种鸡胚后引起鸡胚发育迟... 本研究对一例临床疑似由新型鸭呼肠孤病毒(NDRV)感染的雏鸭病例进行RT-PCR鉴定、鸡胚及细胞培养的特性、病毒基因同源性分析等研究。结果显示,从该病例样品中扩增到NDRVσB部分基因片段的特异性条带;组织样品接种鸡胚后引起鸡胚发育迟缓、死亡,胚体全身及多脏器出血;对扩增的病毒分离株GX-Y5的σB基因部分序列的测序分析结果表明,该分离株与NDRV参考毒株的核苷酸序列相似性高,其中与GX-Y7的最高,为99.49%;接种DEF后产生空泡、细胞崩解等细胞病变。综上结果,本研究从临床发病雏鸭中分离鉴定到一株NDRV。 展开更多

关键词 新型鸭呼肠孤病毒 分离鉴定 序列相似性分析

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新型鸭呼肠孤病毒DH13株结构蛋白σB的原核表达及免疫原性分析 被引量：1

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作者 杨惠湖 黄惠兰 +6 位作者 袁生 李文俊 姚鑫炎 张玉倩 梁昭平 黄淑坚 张雪莲 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2021年第11期4204-4212,共9页

本研究旨在利用原核表达系统表达新型鸭呼肠孤病毒(NDRV)DH13株重组σB蛋白,并检测其免疫原性,为NDRV基因工程疫苗研制等提供物质材料。采用RT-PCR方法扩增获得NDRVσB基因,构建原核表达重组质粒pET-30a-σB和pET-32a-σB,将2个重组质... 本研究旨在利用原核表达系统表达新型鸭呼肠孤病毒(NDRV)DH13株重组σB蛋白,并检测其免疫原性,为NDRV基因工程疫苗研制等提供物质材料。采用RT-PCR方法扩增获得NDRVσB基因,构建原核表达重组质粒pET-30a-σB和pET-32a-σB,将2个重组质粒转化大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞,利用IPTG诱导获得相应的重组蛋白,通过SDS-PAGE分析重组蛋白的表达形式。纯化无His的σB蛋白,并以此蛋白作为免疫原免疫新西兰白兔,制备兔源多克隆抗体。利用Ni2+柱亲和层析法纯化含His的σB蛋白,以此蛋白作为检测原,通过间接ELISA方法测定兔源多克隆抗体效价;Western blotting鉴定多克隆抗体与重组蛋白的特异性识别能力。结果显示,PCR扩增获得大小约为1100 bp的σB基因片段。SDS-PAGE结果显示,高效表达出了2种重组σB蛋白,大小分别约为41和46 ku,均以包涵体形式存在。间接ELISA结果显示,制备的多克隆抗体效价达1∶204800,能特异性地识别原核表达的重组蛋白,表明重组无His的σB蛋白具有良好的免疫原性。Western blotting特异性鉴定结果显示,含His的σB蛋白和无His的σB蛋白均与制备的兔源多克隆抗体发生特异性反应,表明原核表达得到的重组σB蛋白具备良好的反应原性。本试验利用原核表达系统成功地表达出了重组σB蛋白,并证实了重组NDRVσB蛋白具有良好的免疫原性及反应原性,该结果将有助于后续对NDRVσB蛋白生物学功能的鉴定、NDRV诊断用抗原的制备及NDRV新型疫苗的研制。 展开更多

关键词 新型鸭呼肠孤病毒(NDRV) σB蛋白 原核表达 免疫原性分析

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3种禽类呼肠孤病毒血清学相关性及致细胞病变差异分析 被引量：30

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作者 陈仕龙 陈少莺 +6 位作者 程晓霞 江斌 林锋强 王劭 朱小丽 李兆龙 张世忠 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第4期533-537,共5页

本研究旨在研究3种不同疾病型禽类呼肠孤病毒间的抗原性关系及病毒的培养特性。作者通过血清中和试验测定了禽呼肠孤病毒(ARV S1133株)、番鸭呼肠孤病毒(MDRV 9710株)、新型鸭呼肠孤病毒(NDRV NP01株)3种禽类呼肠孤病毒的血清学相关性,... 本研究旨在研究3种不同疾病型禽类呼肠孤病毒间的抗原性关系及病毒的培养特性。作者通过血清中和试验测定了禽呼肠孤病毒(ARV S1133株)、番鸭呼肠孤病毒(MDRV 9710株)、新型鸭呼肠孤病毒(NDRV NP01株)3种禽类呼肠孤病毒的血清学相关性,统计抗原相关性R值;并应用部分禽胚原代细胞及哺乳动物传代细胞对这3种病毒的培养特性进行了初步研究。结果表明,3种病毒株之间的R值很小,抗原相关性较低;三者具有广泛的细胞亲嗜性,能在多种细胞中增殖,并产生细胞病变,但病毒致细胞病变特征有所差异,ARV和NDRV均以巨融合为主,而MDRV则以细胞圆缩坏死为主。上述结果表明导致禽类不同疾病的ARV、MDRV和NDRV三者之间的抗原相关性较低,病毒的细胞培养特性也不同,细胞病变类型的差别提供了一种初步鉴别禽类呼肠孤病毒的方法。 展开更多

关键词 禽呼肠孤病毒 番鸭呼肠孤病毒 新型鸭呼肠孤病毒 中和试验 抗原性变异 细胞病变

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