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新型番鸭细小病毒荧光RPA恒温检测方法的建立
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作者 陈炜 梁齐章 +7 位作者 张佳雪 焦文龙 林永强 刘荣昌 傅秋玲 傅光华 朱婷 黄瑜 《福建农业学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第9期1044-1050,共7页
【目的】建立新型番鸭细小病毒(New-genotype muscovy duck parvovirus,N-MDPV)荧光RPA恒温检测方法,为基层提供可视化快速检测技术手段。【方法】以N-MDPV的VP3基因保守片段为靶点,使用EXO荧光探针特定结合VP3基因保守片段,设计特异的... 【目的】建立新型番鸭细小病毒(New-genotype muscovy duck parvovirus,N-MDPV)荧光RPA恒温检测方法,为基层提供可视化快速检测技术手段。【方法】以N-MDPV的VP3基因保守片段为靶点,使用EXO荧光探针特定结合VP3基因保守片段,设计特异的RPA扩增引物并利用重组酶聚合酶扩增技术扩增目的基因,从而建立一种荧光RPA恒温检测N-MDPV的方法,确定反应体系的最佳反应时间和温度,分析该方法特异性和灵敏性;对收集的病料进行核酸检测,并与传统PCR和病毒分离鉴定方法检测结果进行比较。【结果】建立的荧光RPA恒温检测方法最佳反应温度为39℃,最佳反应时间为30 min;灵敏性高,最低核酸检测限度可达10 fg·μL^(−1);对新型番鸭细小病毒核酸进行特异性扩增,结果显示对鸭腺病毒3型(Duck adenovirus type 3,DAdV-3)、禽腺病毒4型(Fowl adenovirus serotype 4,FAdV-4)、鸭圆环病毒(Duck circovirus,DuCV)、鸭瘟病毒(Duck plague virus,DPV)、鸭病毒性肝炎病毒(Duck hepatitis virus,DHV)、鸭坦布苏病毒(Duck tembusu virus,DTMUV)和新型鸭呼肠孤病毒(Novel duck reovirus,NDRV)的核酸均未有发生交叉反应,特异性良好。利用本研究建立的RPA快检方法、传统PCR方法以及病毒分离鉴定方法对收集的38份鸭组织病料核酸样品进行检测,结果显示阳性率分别为36.8%(14/38)、36.8%(14/38)和31.6%(12/38);RPA检测后呈阳性的样品经PCR方法检测与病毒分离鉴定方法检测均呈现阳性,阳性符合率为100%。【结论】该方法可以很好地应用于缺乏相应检测设备的基层进行新型番鸭细小病毒的大规模临床样本检测,为新型番鸭细小病毒的可视化快速检测提供技术手段。 展开更多
关键词 新型番鸭细小病毒 RPA恒温检测 重组酶聚合酶扩增技术
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新型番鸭细小病毒的发现及其感染的临床表现 被引量:21
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作者 黄瑜 万春和 +7 位作者 傅秋玲 陈红梅 傅光华 陈翠腾 程龙飞 程小兵 施少华 林建生 《福建农业学报》 CAS 北大核心 2015年第5期442-445,共4页
2008年下半年以来,福建省、浙江省、安徽省及江苏省等地部分鸭场或养鸭户的雏半番鸭和台湾白鸭出现低病死率,约于40日龄起脚易断、上喙变短占近30%,至出栏时残次鸭达60%;免疫接种了雏番鸭细小病毒弱毒活疫苗的雏番鸭依然发生类雏番鸭&qu... 2008年下半年以来,福建省、浙江省、安徽省及江苏省等地部分鸭场或养鸭户的雏半番鸭和台湾白鸭出现低病死率,约于40日龄起脚易断、上喙变短占近30%,至出栏时残次鸭达60%;免疫接种了雏番鸭细小病毒弱毒活疫苗的雏番鸭依然发生类雏番鸭"三周病",除出现死亡外,幸存鸭的番鸭翅脚易断、上喙变短,83%感染鸭成为僵鸭,对我国养鸭业造成了较大的直接经济损失。经病原学检测、病毒分离鉴定和实验室感染试验,发现其病原为与原经典的雏番鸭细小病毒(MDPV)在基因组上、感染宿主范围和致病性存在较大差异的番鸭细小病毒,鉴于此,将之暂定名为新型番鸭细小病毒(NMDPV)。 展开更多
关键词 新型番鸭细小病毒 番鸭 雏半番鸭 临床感染 上喙变短
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半番鸭共感染鸭圆环病毒和新型番鸭细小病毒的诊断 被引量:5
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作者 张瑞 刘荣昌 黄瑜 《福建畜牧兽医》 2020年第4期65-66,共2页
2020年3月,广东湛江某养鸭场饲养的65日龄半番鸭群发病,根据其流行病学特点、临床症状和剖检病变,结合实验室病原学检测、基因序列测定,确定其为鸭圆环病毒和新型番鸭细小病毒共感染。该文报道这起病例的诊断方法,以期为同行提供参考。
关键词 番鸭 鸭圆环病毒 新型番鸭细小病毒 共感染 诊断
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新型番鸭细小病毒Rep蛋白羧基端亚片段的原核表达及多克隆抗体制备
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作者 胡非凡 梁齐章 黄瑜 《福建农业学报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第8期889-893,共5页
【目的】获得特异性识别新型番鸭细小病毒(New-genotype muscovy duck Parvovirus,N-MDPV)Rep蛋白羧基端亚片段的多克隆抗体。【方法】通过蛋白序列分析,选取N-MDPV Rep羧基端亚片段区域487~627 aa,后全基因合成序列,并在其C末端添加His... 【目的】获得特异性识别新型番鸭细小病毒(New-genotype muscovy duck Parvovirus,N-MDPV)Rep蛋白羧基端亚片段的多克隆抗体。【方法】通过蛋白序列分析,选取N-MDPV Rep羧基端亚片段区域487~627 aa,后全基因合成序列,并在其C末端添加His-tag标签,利用无缝克隆的方法,将该段基因克隆至pET-28a(+)载体,随后转化Rosetta(DE3)大肠杆菌,诱导表达得到重组蛋白。利用镍柱亲和层析技术纯化表达重组蛋白,将纯化的重组蛋白免疫新西兰白兔,制备针对Rep蛋白羧基端亚片段的多克隆抗体。【结果】构建了pET-28a-Rep-487-627原核表达质粒,纯化表达了该重组蛋白。SDS-PAGE结果表明该重组蛋白分子大小约24 kDa,主要以可溶性形式表达。间接免疫荧光和免疫印迹试验表明制备的多克隆抗体能与细胞内过表达的N-MDPV Rep蛋白特异性反应。【结论】制备的Rep多克隆抗体具有良好反应特异性,可识别Rep蛋白的构象表位和线性表位,满足进一步研究的需要。 展开更多
关键词 新型番鸭细小病毒 REP蛋白 间接免疫荧光试验 免疫印迹试验
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一起番鸭感染鸭瘟、新型番鸭细小病毒、鸭圆环病毒的诊断 被引量:5
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作者 严红亚 李珂 +2 位作者 王传禹 张信艳 杨绍昌 《云南畜牧兽医》 2021年第2期16-17,共2页
对昆明郊县的番鸭病例诊断,根据发病情况、临床症状、剖检病变,结合实验室细菌分离培养、病原学检测、基因序列测定等实验方法,确定养殖场该批次番鸭为鸭瘟(DP)、新型番鸭细小病毒(N-MDPV)、鸭圆环病毒(DuCV)感染。
关键词 番鸭 病毒性肠炎 新型番鸭细小病毒 鸭圆环病毒
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一起番鸭感染新型细小病毒的诊断报告 被引量:1
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作者 王艺萍 刘荣昌 黄瑜 《福建畜牧兽医》 2019年第2期44-45,共2页
2018年11月,江西省南城县某鸭场饲养的30日龄番鸭群发病,发病率约为50%,病死率约为10%,感染后耐过鸭呈现典型的"短喙-侏儒综合征"症状。经实验室检查,确诊引起该场鸭群发病的病原为新型番鸭细小病毒,该文主要报道该起病例的... 2018年11月,江西省南城县某鸭场饲养的30日龄番鸭群发病,发病率约为50%,病死率约为10%,感染后耐过鸭呈现典型的"短喙-侏儒综合征"症状。经实验室检查,确诊引起该场鸭群发病的病原为新型番鸭细小病毒,该文主要报道该起病例的诊断情况。 展开更多
关键词 番鸭 新型番鸭细小病毒 诊断
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检测水禽源细小病毒的胶体金试纸条的研制 被引量:4
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作者 程龙飞 张长弓 +8 位作者 傅秋玲 何琼 贾志娟 陈慧敏 傅光华 万春和 林群群 刘荣昌 黄瑜 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第9期722-726,共5页
为建立水禽源细小病毒的快速检测方法,本研究采用纯化的小鹅瘟病毒(GPV)免疫BALB/c小鼠,取免疫小鼠脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞进行融合,筛选到21株能够稳定分泌抗GPV的单克隆抗体(MAb),将1株MAb纯化后与胶体金结合,喷涂金标垫,与另一株纯... 为建立水禽源细小病毒的快速检测方法,本研究采用纯化的小鹅瘟病毒(GPV)免疫BALB/c小鼠,取免疫小鼠脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞进行融合,筛选到21株能够稳定分泌抗GPV的单克隆抗体(MAb),将1株MAb纯化后与胶体金结合,喷涂金标垫,与另一株纯化的MAb配对,制成检测水禽源细小病毒的胶体金试纸条。特异性试验表明,鹅细小病毒、番鸭细小病毒和新型番鸭细小病毒的检测结果均为阳性,猪细小病毒、1型鸭甲肝病毒、坦布苏病毒、产蛋下降综合征病毒、H9N2亚型禽流感病毒、番鸭呼肠孤病毒和新城疫病毒等的检测结果均为阴性。该方法对鹅细小病毒、番鸭细小病毒和新型番鸭细小病毒的最低检出量分别为10^(4.7) ELD50/mL、10^(4.7)ELD50/mL和10^(5.7) ELD50/mL。重复性试验良好。对临床粪便样品的检测,该方法比PCR方法简单快速,但是存在漏检的情况。上述结果表明,本实验建立的方法可用于水禽源细小病毒病的初步快速筛查。 展开更多
关键词 细小病毒 番鸭细小病毒 新型番鸭细小病毒 胶体金试纸条 单克隆抗体
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一例番鸭短喙与侏儒综合征的诊断
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作者 付环茹 赵敏 万春和 《福建畜牧兽医》 2023年第4期110-111,共2页
2023年1月,福建漳州某番鸭养殖场番鸭(约65日龄)生长迟缓,临床表现为短喙与侏儒综合征,剖检主要脏器无明显病理变化。对该病例进行常规实验室病原核酸检测发现,该病例为新型番鸭细小病毒与鸭圆环病毒共感染。现将该病例的诊断情况做一... 2023年1月,福建漳州某番鸭养殖场番鸭(约65日龄)生长迟缓,临床表现为短喙与侏儒综合征,剖检主要脏器无明显病理变化。对该病例进行常规实验室病原核酸检测发现,该病例为新型番鸭细小病毒与鸭圆环病毒共感染。现将该病例的诊断情况做一简要报道,供同行参考。 展开更多
关键词 番鸭 短喙与侏儒综合征 新型番鸭细小病毒 鸭圆环病毒
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