透明颤菌血红蛋白基因(vgb)在阿维链霉菌的整合表达 被引量：4

1

作者 张桂敏 周秀芬 邓子新 《中国抗生素杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第3期138-142,共5页

pHZ1276是透明颤菌血红蛋白基因(vgb)的诱导型表达载体,携带有硫链丝菌素诱导的强启动子PtipA和ФC31int,attP基因使载体整合在染色体上。本研究利用组成型启动子ermP1P2替代pHZ1276上的诱导型启动子PtipA构建了组成型表达血红蛋白基因... pHZ1276是透明颤菌血红蛋白基因(vgb)的诱导型表达载体,携带有硫链丝菌素诱导的强启动子PtipA和ФC31int,attP基因使载体整合在染色体上。本研究利用组成型启动子ermP1P2替代pHZ1276上的诱导型启动子PtipA构建了组成型表达血红蛋白基因的质粒pHZ1291。将vgb基因去掉后构建了组成型链霉菌表达载体pHZ1294。将pHZ1276,pHZ1291导入阿维链霉菌(Streptomycesavermitilis)NRRL8165,所得重组子经Southern杂交验证后,蛋白粗提物经Western杂交和CO结合实验表明vgb基因在该菌中表达出了有活性的VHb蛋白。 展开更多

关键词 透明颤菌血红蛋白基因 阿维链霉菌 整合表达

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雪莲凝集素(GNA)基因的载体构建及在水稻中的整合表达 被引量：8

2

作者 傅向东 李德葆 《浙江农业大学学报》 CSCD 北大核心 1997年第6期730-730,共1页

雪莲凝集素（ＧＮＡ）基因的载体构建及在水稻中的整合表达傅向东１李德葆１ＰａｕｌＣｈｒｉｓｔｏｕ２（１浙江农业大学生物技术研究所，杭州３１００２９；２ＪｏｈｎＩｎｎｅｓＣｅｎｔｒｅ，ＮｏｒｗｉｃｈＲｅｓｅａｒｃｈＰａｒ... 雪莲凝集素（ＧＮＡ）基因的载体构建及在水稻中的整合表达傅向东１李德葆１ＰａｕｌＣｈｒｉｓｔｏｕ２（１浙江农业大学生物技术研究所，杭州３１００２９；２ＪｏｈｎＩｎｎｅｓＣｅｎｔｒｅ，ＮｏｒｗｉｃｈＲｅｓｅａｒｃｈＰａｒｋ，ＮｏｒｗｉｃｈＮＲ４７ＵＨ，Ｕ... 展开更多

关键词 雪连凝集素 GNA-基因 水稻 整合表达

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绿色木霉EGⅢ基因的克隆及其在工业酿酒酵母中的整合表达 被引量：1

3

作者 刘泽寰 台艳 +4 位作者 唐根云 全艳彩 王峻梅 肖文娟 龚映雪 《中山大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2009年第6期83-88,共6页

通过RT-PCR从绿色木霉AS3.3711中克隆得到EG Ⅲ基因,序列分析显示该基因编码序列全长为1257 bp,编码418个aa,且自身带有21个aa的信号肽序列,与里氏木霉eg3的同源性为99.6%。将该基因连入酿酒酵母多拷贝整合型表达载体pScIKP中获得重组质... 通过RT-PCR从绿色木霉AS3.3711中克隆得到EG Ⅲ基因,序列分析显示该基因编码序列全长为1257 bp,编码418个aa,且自身带有21个aa的信号肽序列,与里氏木霉eg3的同源性为99.6%。将该基因连入酿酒酵母多拷贝整合型表达载体pScIKP中获得重组质粒,线性化后电转化酿酒酵母工业菌株AS2.489,通过SDS-PAGE蛋白电泳、刚果红染色和酶活测定对转化子进行了分析。结果表明:转化子有明显的重组EG Ⅲ表达带,能够产生CMC水解圈,说明eg3基因已在酿酒酵母中获得了正确的分泌表达,表达EG Ⅲ的重组菌产酶高峰出现时间为60 h,最高酶活接近120 U/mL,重组酶EG Ⅲ的最适温度为60℃,最适pH为6.0,转化子的遗传稳定性达到99.17%,实现了绿色木霉eg3基因在工业酿酒酵母中的稳定高效表达。 展开更多

关键词 内切葡聚糖酶Ⅲ 酿酒酵母 绿色木霉 整合表达

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潮霉素B抗性基因在木醋杆菌中的整合表达 被引量：1

4

作者 闵勇 吴顺清 +6 位作者 朱海云 方北松 万中义 王开梅 吴昊 陈华 杨自文 《湖北农业科学》 北大核心 2010年第12期3064-3066,共3页

以质粒pSET152为出发载体,构建潮霉素B抗性基因的表达载体pSET152-HYG,通过大肠杆菌-木醋杆菌的属间接合转移将pSET152-HYG导入木醋杆菌,在位点特异性重组酶作用下潮霉素抗性基因B整合到木醋杆菌的染色体上。与出发菌株相比,重组菌株传... 以质粒pSET152为出发载体,构建潮霉素B抗性基因的表达载体pSET152-HYG,通过大肠杆菌-木醋杆菌的属间接合转移将pSET152-HYG导入木醋杆菌,在位点特异性重组酶作用下潮霉素抗性基因B整合到木醋杆菌的染色体上。与出发菌株相比,重组菌株传代稳定,潮霉素抗性有了较大的提高,从100μg/mL提高到了400μg/mL以上,而产纤维素能力只略有下降。 展开更多

关键词 潮霉素B抗性基因 接合转移 整合表达 木醋杆菌

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菊苣叶绿体同源片段的克隆及多顺反子定点整合表达载体的构建

5

作者 王玉华 韩晓玲 +1 位作者 黄丛林 贾敬芬 《华北农学报》 CSCD 北大核心 2010年第1期11-17,共7页

利用叶绿体基因组进化中高度保守的特点,根据烟草叶绿体基因组全序列设计合成引物,从菊苣叶绿体基因组中扩增包括rps7-rps12-trnV-16S rDNA基因在内的一段序列(GenBank登录号为GQ199478),并以此作为定点整合外源基因的同源重组片段。以... 利用叶绿体基因组进化中高度保守的特点,根据烟草叶绿体基因组全序列设计合成引物,从菊苣叶绿体基因组中扩增包括rps7-rps12-trnV-16S rDNA基因在内的一段序列(GenBank登录号为GQ199478),并以此作为定点整合外源基因的同源重组片段。以叶绿体基因强启动子prrn驱动选择标记基因aadA及报告基因gfp构建多顺反子表达盒prrn-aadA-gfp-psbA-3,′然后将表达盒克隆进菊苣叶绿体同源片段中,获得菊苣叶绿体定点整合表达载体pJAG,酶切分析证明所构建的载体符合预期设计。该载体的构建为建立菊苣的叶绿体转化体系奠定基础,为进一步通过叶绿体基因工程手段将更多感兴趣的基因导入菊苣进行遗传改良,或以菊苣叶绿体作生物反应器生产动物口服疫苗等搭建技术平台。 展开更多

关键词 菊苣 叶绿体同源片段 多顺反子 定点整合表达载体

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绵羊胚系外源生长激素基因的导入及整合表达 被引量：1

6

作者 岳奎忠 毕忠诚 《黑龙江畜牧科技》 1994年第2期43-46,共4页

绵羊胚系外源生长激素基因的导入及整合表达岳奎忠（黑龙江省畜牧研究所）毕忠诚（黑龙江省齐齐哈尔市梅里斯区畜牧局）重组基因导入动物的技术是８０年代初发展起来的一门新技术。采用此技术，将有益的基因注入动物原核胚的原核中。由... 绵羊胚系外源生长激素基因的导入及整合表达岳奎忠（黑龙江省畜牧研究所）毕忠诚（黑龙江省齐齐哈尔市梅里斯区畜牧局）重组基因导入动物的技术是８０年代初发展起来的一门新技术。采用此技术，将有益的基因注入动物原核胚的原核中。由此所产生的动物体每个细胞都含注入的... 展开更多

关键词 绵羊 胚系外源 生长激素 基因导入 整合表达

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耐盐性谷氨酰胺酶在Bacillus subtilis 168中的整合表达 被引量：1

7

作者 徐朝阳 张显 +2 位作者 徐美娟 杨套伟 饶志明 《食品与生物技术学报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第6期22-29,共8页

微生物质粒过表达外源基因,会由于质粒分离稳定性低、种子培养基中需添加抗生素等原因,限制其在工业生产中的应用。为了得到一株可用于工业生产谷氨酰胺酶的菌株,选择食品安全级Bacillus subtilis 168作为宿主,将来源于Micrococcus lute... 微生物质粒过表达外源基因,会由于质粒分离稳定性低、种子培养基中需添加抗生素等原因,限制其在工业生产中的应用。为了得到一株可用于工业生产谷氨酰胺酶的菌株,选择食品安全级Bacillus subtilis 168作为宿主,将来源于Micrococcus luteus K-3的编码耐高浓度盐的谷氨酰胺酶基因(Mglu)插入到其染色体上进行整合表达。选择了2个内源性蛋白酶基因作为整合表达位点,通过lox序列的重组消除抗性基因,得到无抗性基因的重组谷氨酰胺酶表达菌株。遗传稳定性研究表明,在不添加抗生素的条件下,通过连续传代重组菌株并测定发酵酶活,发现重组菌株连续传42代时,酶活基本不变。随后,采用5 L发酵罐对重组菌株进行分批补料发酵,最高酶活达到了41.5 U/mL。本研究对提高谷氨酰胺酶重组菌株遗传稳定性提供了借鉴。 展开更多

关键词 谷氨酰胺酶 Bacillus subtilis 168 整合表达 蛋白酶 遗传稳定性

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粟酒裂殖酵母mae1基因的克隆及其在产朊假丝酵母中的整合表达 被引量：3

8

作者 黄鹭强 张丽萍 +2 位作者 雷秀清 林志钦 郑宝东 《福建农林大学学报（自然科学版）》 CSCD 北大核心 2012年第5期513-517,共5页

以粟酒裂殖酵母基因组DNA为模版,逆转录获得cDNA;以cDNA为模板,采用聚合酶链式反应(PCR)技术扩增,得到苹果酸通透酶(mae1)基因,将其与pMD-18T连接并测序.结果表明cDNA全长为1316 bp,编码438氨基酸,分子质量49ku,与已报道的mae1基因序列... 以粟酒裂殖酵母基因组DNA为模版,逆转录获得cDNA;以cDNA为模板,采用聚合酶链式反应(PCR)技术扩增,得到苹果酸通透酶(mae1)基因,将其与pMD-18T连接并测序.结果表明cDNA全长为1316 bp,编码438氨基酸,分子质量49ku,与已报道的mae1基因序列的同源性达到99%.mae1与整合型表达质粒pSH47连接后,用重组的表达质粒转化产朊假丝酵母,经PCR验证筛选阳性克隆子.通过对转化子的摇瓶筛选,发现重组子的降酸幅度均大于原始菌株,培养40 h降解了48.6%的L-苹果酸,降解率比原始菌株提高了9.8%. 展开更多

关键词 粟酒裂殖酵母 苹果酸通透酶 产朊假丝酵母 整合重组表达

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构建EpoR/LR-F3/HAb18GEF嵌合受体并在HEK293-16工程细胞株中定点整合表达

9

作者 赵蒲 张思河 +2 位作者 Jan Tavernier 李郁 陈志南 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2007年第3期213-216,共4页

目的:构建EpoR/LR-F3/HAb18GEF嵌合受体,并在HEK293-16工程细胞株中定点整合表达。方法:用PCR法扩增肝癌相关抗原HAb18G胞外段基因,SacI/NotI双酶切后插入真核表达载体pCEL2f中,构建EpoR/LR-F3/HAb18GEF嵌合受体基因的重组表达载体pCEL2... 目的:构建EpoR/LR-F3/HAb18GEF嵌合受体,并在HEK293-16工程细胞株中定点整合表达。方法:用PCR法扩增肝癌相关抗原HAb18G胞外段基因,SacI/NotI双酶切后插入真核表达载体pCEL2f中,构建EpoR/LR-F3/HAb18GEF嵌合受体基因的重组表达载体pCEL2f/HAb18GEF,并经酶切和测序验证。将此重组表达载体与POG44载体(按1∶9的比例混合后),在阳离子脂质体介导下共转染HEK293-16工程细胞,用潮霉素B筛选定点整合表达EpoR/LR-F3/HAb18GEFcDNA的细胞克隆。用间接免疫荧光染色法、流式细胞术及Zeocin致死试验,检测并验证稳定表达株中EpoR/LR-F3/HAb18GEF嵌合受体的表达。结果:成功地构建pCEL2f/HAb18GEF真核重组表达载体,共转染后EpoR、HAb18GEF均高效表达于转染的HEK293-16细胞的胞膜上。经潮霉素B筛选得到12株可融合高表达EpoR/LR-F3/HAb18GEF的稳定株,其表达EpoR的阳性率为99.93%,平均荧光强度(MFI)为1036.39,表达HAb18GEF的阳性率为99.51%,MFI为652.72,且可被Zeocin致死。结论:成功地建立了表达EpoR/LR-F3/HAb18GEF嵌合受体的HEK293-16工程细胞株,为进一步利用哺乳动物蛋白质-蛋白质相互作用陷阱(MAPPIT)系统筛选HAb18G的作用受体奠定了基础。 展开更多

关键词 定点整合表达 EpoR/LR-F3/HAb18GEF HEK293-16细胞

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海参溶菌酶基因在枯草芽孢杆菌WB600中的整合及表达 被引量：1

10

作者 李丹 李成 +3 位作者 孙璐 邹丹 刘志文 丛丽娜 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第4期139-146,共8页

采用枯草芽孢杆菌WB600(Bacillus subtilis WB600)在体外表达海刺参溶菌酶(Stichopus japonicus lysozyme,SjLys)蛋白。通过构建克隆质粒pMD18-P43-SjLys,将B.subtilis自身强启动子P43序列和已分离得到的SjLys基因(GenBank登录号EF0364... 采用枯草芽孢杆菌WB600(Bacillus subtilis WB600)在体外表达海刺参溶菌酶(Stichopus japonicus lysozyme,SjLys)蛋白。通过构建克隆质粒pMD18-P43-SjLys,将B.subtilis自身强启动子P43序列和已分离得到的SjLys基因(GenBank登录号EF036468)连接(P43-SjLys)。经BamH I/EcoR I酶切,将P43-SjLys片段连接到B.subtilis整合载体pDG1730上,构建整合重组质粒pDG-P43-SjLys。经Xho I酶切处理,线性化的pDG-P43-SjLys质粒转化B.subtilis WB600细胞。P43-SjLys片段通过同源双交换重组整合到B.subtilis WB600染色体上,成功得到具有稳定遗传的基因工程菌B.subtilis WB600/P43-SjLys。经SDS-PAGE和抑菌试验分析表明,培养60 h后,B.subtilis WB600/P43-SjLys能够表达可溶的,对常见的海洋细菌溶壁微球菌和金黄色葡萄球菌具有较强的抑菌活性的SjLys蛋白。首次在B.subtilis表达系统中得到可溶且具有酶活功能的SjLys蛋白,为SjLys的生产提出了一种具有可行性的和潜力的新方法。 展开更多

关键词 海参溶菌酶 枯草芽孢杆菌 启动子P43 同源重组 整合表达

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rDNA介导的乳酸克鲁维酵母整合型表达载体的构建及初步验证 被引量：1

11

作者 孙海烨 张梁 +3 位作者 李由然 顾正华 丁重阳 石贵阳 《食品与生物技术学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第10期87-97,共11页

构建一个适用于乳酸克鲁维酵母(Kluyveromyces lactis)稳定的整合型表达载体,并通过鼠灰链霉菌(Streptomyces murinus)来源的腺苷酸脱氨酶基因(AMPD)的表达对该载体进行初步验证。以质粒pMD 19T-simple为空骨架,K.lactis GG799来源的18S... 构建一个适用于乳酸克鲁维酵母(Kluyveromyces lactis)稳定的整合型表达载体,并通过鼠灰链霉菌(Streptomyces murinus)来源的腺苷酸脱氨酶基因(AMPD)的表达对该载体进行初步验证。以质粒pMD 19T-simple为空骨架,K.lactis GG799来源的18S rDNA序列为同源重组位点,酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)来源的半乳糖苷酶启动子(pScGAL7)为外源基因调控元件,乙酰胺酶基因(amdS)为筛选标记,AMPD为报告基因,构建重组表达载体pTRGA-amdS。载体经Sac II线性化后,去除了大肠杆菌(Escherichia coli)来源的ori和氨苄青霉素抗性基因(Ampr),将同源重组片段电转化K.lactis GG799得到重组菌,利用实时荧光定量PCR(RT-QPCR)测定重组菌AMPD基因整合拷贝数为1~3,AMP脱氨酶酶活测定结果表明:酶活与拷贝数呈正相关,含3个整合拷贝的重组菌在半乳糖诱导下酶活提高了32.6%,达到(590±13.33)U/mL。在无选择压力下重组菌连续生长58世代稳定性为98.59%。通过载体pTRGA-amdS的构建与应用实现了外源基因在K.lactis中的稳定表达,初步探究了18S rDNA在同源重组中的作用,为K.lactis的进一步分子改造提供参考。 展开更多

关键词 乳酸克鲁维酵母 18S rDNA 整合表达 AMP脱氨酶 RT-QPCR 拷贝数

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论工会利益整合—表达及其特点 被引量：3

12

作者 刘勇 《西北大学学报（哲学社会科学版）》 CSSCI 北大核心 2012年第4期120-124,共5页

以现代社会使用的利益整合和利益表达概念对工会利益整合—表达及其特点进行了界定和分析。工会是维护工人利益的组织,对工人的利益进行整合和表达是工会的重要职能,也是工会存在及其发展的基础。作为工会维护工人利益的必要过程和手段... 以现代社会使用的利益整合和利益表达概念对工会利益整合—表达及其特点进行了界定和分析。工会是维护工人利益的组织,对工人的利益进行整合和表达是工会的重要职能,也是工会存在及其发展的基础。作为工会维护工人利益的必要过程和手段,利益整合与利益表达不仅具有主体的同一性,还具有过程的同一性。作为一种组织行为,工会利益整合—表达具有组织化程度高、组织成员数量多、与政党联系紧密等特点。 展开更多

关键词 工会利益整合-表达 概念 特点

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稳定高效表达木糖还原酶基因工业酿酒酵母的构建及木糖醇发酵的初步研究 被引量：13

13

作者 李敏 马涛 +2 位作者 生举正 郭亭 鲍晓明 《食品与发酵工业》 CAS CSCD 北大核心 2006年第1期1-5,共5页

将树干毕赤氏酵母(Pichia stipitis)木糖还原酶基因XYL1连接到适用于酿酒酵母工业菌株的多拷贝整合载体pYMIKP中,构建得到表达质粒pYMIKP-XYL1,转化酿酒酵母工业菌株Saccharomyces cerevisiae6508。在G418平板上筛选转化子,得到含高拷... 将树干毕赤氏酵母(Pichia stipitis)木糖还原酶基因XYL1连接到适用于酿酒酵母工业菌株的多拷贝整合载体pYMIKP中,构建得到表达质粒pYMIKP-XYL1,转化酿酒酵母工业菌株Saccharomyces cerevisiae6508。在G418平板上筛选转化子,得到含高拷贝木糖还原酶基因的酿酒酵母重组菌株XGH2,,该菌株的木糖还原酶比活力为0.8 U/mg(蛋白),比出发菌株提高了80倍以上,表明外源基因在工业菌株中实现了高效表达。摇瓶发酵结果显示,重组菌株XGH2木糖消耗为27.9 g/L,木糖消耗率为51%;木糖醇产量为30.2 g/L,木糖醇的转化率大于1.0 g/g木糖。 展开更多

关键词 木糖还原酶 木糖酵 整合表达 酿酒酵母 工业菌株

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一株产朊假丝酵母菌表达体系的研究初报 被引量：6

14

作者 杨红兰 王炜 +3 位作者 包慧芳 崔春生 山其木格 胡爽 《新疆农业科学》 CAS CSCD 2008年第3期462-466,共5页

产朊假丝酵母是一种GRAS生物,已经作为添加剂广泛应用于食品和化妆品行业。它在作为宿主菌的表达系统方面的研究也有报道。但目前国内尚无产朊假丝酵母通用的高效表达体系的报道。简单介绍了其在国内外的研究进展。并以青贮饲料中的一... 产朊假丝酵母是一种GRAS生物,已经作为添加剂广泛应用于食品和化妆品行业。它在作为宿主菌的表达系统方面的研究也有报道。但目前国内尚无产朊假丝酵母通用的高效表达体系的报道。简单介绍了其在国内外的研究进展。并以青贮饲料中的一株产朊假丝酵母为出发菌株,结合项目研究,就构建产朊假丝酵母表达载体的几个元件进行重点评述。研究结果表明:初步构建了一种产朊假丝酵母通用的整合表达载体,对其表达体系的应用进行了初步探索。为微生物青黄贮菌剂的分子改良及应用提供一定的理论基础。 展开更多

关键词 产朊假丝酵母 表达体系 整合表达 同源序列

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稳定表达淀粉酶的啤酒酵母工程菌的构建 被引量：5

15

作者 刘增然 何秀萍 +2 位作者 龙章富 张博润 刘世责 《高技术通讯》 EI CAS CSCD 2004年第7期20-24,共5页

从酵母菌整合载体YIp5出发，借助质粒pBluescriptMl3^-，以酵母的乙酰乳酸合成酶基因(ILV2)为同源重组序列，构建了含α-淀粉酶基因(AMY)的重组整合质粒pMGI3。用pMGI3所含AMY+ILV2嵌合基因片段转化工业啤酒酵母菌J1，AMY基因表达框整... 从酵母菌整合载体YIp5出发，借助质粒pBluescriptMl3^-，以酵母的乙酰乳酸合成酶基因(ILV2)为同源重组序列，构建了含α-淀粉酶基因(AMY)的重组整合质粒pMGI3。用pMGI3所含AMY+ILV2嵌合基因片段转化工业啤酒酵母菌J1，AMY基因表达框整合在酵母染色体的ILV2基因簇上，转化子(JA3)不含细菌载体序列和酵母抗药性选择标记。JA3表达α-淀粉酶活性为4．8Uml^-1，并使麦芽汁发酵液的双乙酰含量降低60％。JA3的遗传稳定性为100％，可以比较安全地用于啤酒生产。 展开更多

关键词 淀粉酶基因 乙酰乳酸合成酶基因 整合表达 啤酒酵母菌 遗传稳定性

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rDNA介导的菊粉酶基因整合载体构建及在K.marxianus中应用 被引量：2

16

作者 袁文杰 陈丽杰 +3 位作者 孔亮 孜力汗 任剑刚 白凤武 《大连理工大学学报》 EI CAS CSCD 北大核心 2013年第2期176-182,共7页

为提高Kluyveromyces marxianus(K.marxianus)发酵菊芋粉生产乙醇过程中的菊粉酶活性,以酿酒酵母rDNA为整合位点,构建菊粉酶基因的整合表达载体pFA6a-rDNA-pgk-inu.经Sph I线性化后,采用电击法转化K.marxianus,使表达载体整合到K.marxia... 为提高Kluyveromyces marxianus(K.marxianus)发酵菊芋粉生产乙醇过程中的菊粉酶活性,以酿酒酵母rDNA为整合位点,构建菊粉酶基因的整合表达载体pFA6a-rDNA-pgk-inu.经Sph I线性化后,采用电击法转化K.marxianus,使表达载体整合到K.marxianus的染色体上.经PCR鉴定的阳性转化子能够分泌菊粉酶且能在无筛选压力下稳定遗传50代.重组菌K/r-2分泌的菊粉酶活力为140U/mL,比出发菌株提高了80%.以粗菊芋粉生料为底物进行了补料发酵,重组菌株的发酵终点乙醇浓度为76.5g/L,比出发菌株提高了5g/L,达到理论转化率的96%.这些研究工作为非粮作物菊芋生产燃料乙醇奠定了基础. 展开更多

关键词 菊粉酶基因 整合表达 KLUYVEROMYCES marxianus 菊芋 乙醇

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转基因植物外源基因的整合分析 被引量：4

17

作者 岳同卿 郎志宏 黄大昉 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第10期1-7,共7页

外源基因表达的不稳定性和多样性是制约转基因作物育种研发进度的关键因素,外源基因的整合情况与外源基因的表达直接相关,充分了解外源基因的整合情况可为构建高效表达载体、获得外源基因稳定一致表达转基因材料提供参考,同时为转基因... 外源基因表达的不稳定性和多样性是制约转基因作物育种研发进度的关键因素,外源基因的整合情况与外源基因的表达直接相关,充分了解外源基因的整合情况可为构建高效表达载体、获得外源基因稳定一致表达转基因材料提供参考,同时为转基因作物的安全利用提供保障。就外源基因整合情况的分析方法、不同转化方法外源基因的整合特点及利用定点整合技术提高外源基因表达稳定一致性的研究进展作一概述。 展开更多

关键词 转基因植物 外源基因整合 定点整合表达稳定一致

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玉米赤霉烯酮降解酶基因zlhy-6在枯草芽孢杆菌中的表达 被引量：4

18

作者 符浩东 张晨曦 +2 位作者 李奕霏 郑永权 刘阳 《核农学报》 CAS CSCD 北大核心 2022年第5期885-894,共10页

玉米赤霉烯酮(ZEN)是具有雌激素作用的次生代谢产物,可以被来源于Gliocladium roseum的内酯水解酶降解为无毒物质。为了实现玉米赤霉烯酮降解酶基因zlhy-6在枯草芽孢杆菌中的表达,获得不含抗生素抗性基因的食品级重组枯草芽孢杆菌,本研... 玉米赤霉烯酮(ZEN)是具有雌激素作用的次生代谢产物,可以被来源于Gliocladium roseum的内酯水解酶降解为无毒物质。为了实现玉米赤霉烯酮降解酶基因zlhy-6在枯草芽孢杆菌中的表达,获得不含抗生素抗性基因的食品级重组枯草芽孢杆菌,本研究采用一步克隆及重叠延伸PCR的方法构建了单启动子和包含HpaⅡ和P43双启动子的表达质粒,将质粒转化到枯草芽孢杆菌中,获得重组菌株168/pMA5-zlhy-6和168/pMA5-P43-zlhy。然后构建了重组整合载体amy-p43-zlhy,将zlhy-6基因整合到枯草芽孢杆菌168的基因组中。通过Cre/lox系统敲除抗生素抗性基因,获得整合了P43-zlhy表达盒的食品级重组枯草芽孢杆菌BZ-zlhy。将构建的3个重组菌株在37℃、pH值7.5条件下培养36 h,结果显示,双启动子表达载体重组菌株的最高酶活性为2.2 U·mL^(-1),是单启动子菌株的1.2倍。双启动子重组菌株表达的降解酶对ZEN(4μg·mL^(-1),30 min)的降解率为65.1%。重组菌株枯草芽孢杆菌BZ-zlhy表达水平最低(0.4 U·mL^(-1))。本研究实现了玉米赤霉烯酮降解酶在枯草芽孢杆菌中表达,同时构建了不含抗生素抗性基因的食品级重组枯草芽孢杆菌,为玉米赤霉烯酮降解酶的工业化生产奠定了基础,也为解决粮食储藏和饲料生产中的ZEN污染提供了思路。 展开更多

关键词 玉米赤霉烯酮 枯草芽孢杆菌 降解酶 整合表达 串联启动子

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高温α-淀粉酶高表达的研究 被引量：2

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作者 黄春敏 沈微 王正祥 《微生物学杂志》 CAS CSCD 2010年第5期36-40,共5页

为了进一步提高工业上重要的地衣芽胞杆菌高温α-淀粉酶（BLA）的发酵生产性能,以高温α-淀粉酶基因（amyL）为目的基因,构建地衣芽胞杆菌高温α-淀粉酶基因产生菌的整合表达通用性质粒pB li16 s-amyL-EryR,采用原生质体转化法将此整合... 为了进一步提高工业上重要的地衣芽胞杆菌高温α-淀粉酶（BLA）的发酵生产性能,以高温α-淀粉酶基因（amyL）为目的基因,构建地衣芽胞杆菌高温α-淀粉酶基因产生菌的整合表达通用性质粒pB li16 s-amyL-EryR,采用原生质体转化法将此整合型表达质粒导入B.licheniformis CBBD302,在整合表达质粒中的16SrDNA序列的介导下实现了同源整合。挑选20株阳性转化子,分别通过提高培养基中红霉素的使用浓度,增加染色体上目的基因amyL的拷贝数,由此获得的重组菌的BLA生产水平提高了56.37%-80.29%。 展开更多

关键词 高温Α-淀粉酶 地衣芽胞杆菌 基因倍增 整合表达

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重组卡介苗的应用研究及进展 被引量：1

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作者 罗文武 刘姣 +2 位作者 朱元东 刘贵军 于高水 《山东畜牧兽医》 2016年第4期47-49,共3页

卡介苗（Bacillus Calmette-Guerin Vaccine,BCG）是牛结核分枝杆菌的突变株。上世纪二十年代卡介苗（Bacillus Calmette-Guerin Vaccine,BCG）被用于接种新生儿来预防结核病。在其安全性被确定后,卡介苗被在全世界范围内推广应用,是目... 卡介苗（Bacillus Calmette-Guerin Vaccine,BCG）是牛结核分枝杆菌的突变株。上世纪二十年代卡介苗（Bacillus Calmette-Guerin Vaccine,BCG）被用于接种新生儿来预防结核病。在其安全性被确定后,卡介苗被在全世界范围内推广应用,是目前官方承认的预防结核病最安全有效的疫苗[2],是WHO推荐的,出生时预防接种的疫苗之一。 展开更多

关键词 Calmette Guerin VACCINE 免疫原性 外源基因 细胞免疫应答 融合蛋白 穿梭表达载体 整合表达 免疫佐剂

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