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枸杞内生嗜线虫镰刀菌NQ8GII4效应蛋白FnE14152的克隆及其原核表达
1
作者
郭苗苗
闫思远
+1 位作者
张强强
顾沛雯
《核农学报》
北大核心
2025年第9期1896-1905,共10页
为探究枸杞内生嗜线虫镰刀菌NQ8GII4(Fusarium nematophilum)分泌的效应蛋白FnE14152的功能,本研究分析了该蛋白的结构特征,利用逆转录PCR(RT-PCR)法克隆了NQ8GⅡ4菌株效应蛋白编码基因FnE14152,并将该编码基因构建到pET30a载体中,重组...
为探究枸杞内生嗜线虫镰刀菌NQ8GII4(Fusarium nematophilum)分泌的效应蛋白FnE14152的功能,本研究分析了该蛋白的结构特征,利用逆转录PCR(RT-PCR)法克隆了NQ8GⅡ4菌株效应蛋白编码基因FnE14152,并将该编码基因构建到pET30a载体中,重组质粒转化至大肠杆菌(Escherichia coli)BL21(DE3)表达菌株。采用不同浓度的异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)在不同诱导时间及温度下诱导表达重组蛋白,十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)检测上清及沉淀中蛋白的表达。通过镍柱亲和层析法纯化蛋白并进行蛋白质免疫印迹(Western blot)鉴定,进一步将纯化的目的蛋白注射到烟草叶片中。生物信息分析结果表明,该基因编码274个氨基酸,分子量为29.04 kD,等电点为4.58,平均亲水值为-0.043,是偏亲水蛋白质,推测为糖苷水解酶16家族(glycoside hydrolase 16,GH16)转糖基化酶。成功克隆得到长度为774 bp的去信号肽效应蛋白FnE14152基因,将该基因构建到原核表达载体pET30a-14152^(ΔSP),经0.2 mmol·L^(-1)IPTG诱导得到重组蛋白pET30a-14152^(ΔSP);在20℃条件下培养13 h时,上清中的蛋白表达量最高,灰度分析结果极显著。生测试验结果表明重组蛋白注射4 d后可以诱发烟草叶片组织产生细胞坏死反应。本研究获得了枸杞内生嗜线虫镰刀菌NQ8GⅡ4效应蛋白FnE14152,为进一步明确内生真菌效应蛋白诱发植物的免疫机制奠定了基础。
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关键词
枸杞内生嗜线虫镰刀菌
效应蛋白fne14152
原核表达
条件优化
细胞坏死反应
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职称材料
题名
枸杞内生嗜线虫镰刀菌NQ8GII4效应蛋白FnE14152的克隆及其原核表达
1
作者
郭苗苗
闫思远
张强强
顾沛雯
机构
宁夏大学农学院
宁夏大学林业与草业学院
出处
《核农学报》
北大核心
2025年第9期1896-1905,共10页
基金
国家自然科学基金(32260697)。
文摘
为探究枸杞内生嗜线虫镰刀菌NQ8GII4(Fusarium nematophilum)分泌的效应蛋白FnE14152的功能,本研究分析了该蛋白的结构特征,利用逆转录PCR(RT-PCR)法克隆了NQ8GⅡ4菌株效应蛋白编码基因FnE14152,并将该编码基因构建到pET30a载体中,重组质粒转化至大肠杆菌(Escherichia coli)BL21(DE3)表达菌株。采用不同浓度的异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)在不同诱导时间及温度下诱导表达重组蛋白,十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)检测上清及沉淀中蛋白的表达。通过镍柱亲和层析法纯化蛋白并进行蛋白质免疫印迹(Western blot)鉴定,进一步将纯化的目的蛋白注射到烟草叶片中。生物信息分析结果表明,该基因编码274个氨基酸,分子量为29.04 kD,等电点为4.58,平均亲水值为-0.043,是偏亲水蛋白质,推测为糖苷水解酶16家族(glycoside hydrolase 16,GH16)转糖基化酶。成功克隆得到长度为774 bp的去信号肽效应蛋白FnE14152基因,将该基因构建到原核表达载体pET30a-14152^(ΔSP),经0.2 mmol·L^(-1)IPTG诱导得到重组蛋白pET30a-14152^(ΔSP);在20℃条件下培养13 h时,上清中的蛋白表达量最高,灰度分析结果极显著。生测试验结果表明重组蛋白注射4 d后可以诱发烟草叶片组织产生细胞坏死反应。本研究获得了枸杞内生嗜线虫镰刀菌NQ8GⅡ4效应蛋白FnE14152,为进一步明确内生真菌效应蛋白诱发植物的免疫机制奠定了基础。
关键词
枸杞内生嗜线虫镰刀菌
效应蛋白fne14152
原核表达
条件优化
细胞坏死反应
Keywords
endophytic Fusarium nematophilum of Lycium chinense
effector protein
fne
14152
prokaryotic expression
conditional optimization
cell death reaction
分类号
S435.6 [农业科学—农业昆虫与害虫防治]
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1
枸杞内生嗜线虫镰刀菌NQ8GII4效应蛋白FnE14152的克隆及其原核表达
郭苗苗
闫思远
张强强
顾沛雯
《核农学报》
北大核心
2025
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